CC BY
10УДК 316.211/.232:576.8.077.3
ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ТОЛЛ-ПОДОБНОГО РЕЦЕПТОРА-2 (TLR2) В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
Е. В. Тырнова1, Г. М. Алешина2, Ю. К. Янов1, В. Н. Кокряков2
1 ФГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи»
Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
(Директор - засл. врач РФ, член-корр. РАН, проф. Ю. К. Янов)
2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины» СЗО РАН,
Санкт-Петербург, Россия
(Директор - засл. деят. науки РФ, акад. РАН, проф. Г. А. Софронов)
STUDYING OF TOLLLIKE RECEPTOR 2 GENE EXPRESSION IN THE UPPER AIRWAY MUCOSA
E. V. Tyrnova1, G. M. Aleshina2, Y. K. Yanov1, V. N. Kokryakov2
1 St. Petersburg Research Institute of Ear, Nose, Throat and Speech, St. Petersburg, Russia
2 Research Institute of Experimental Medicine, North-Western Branch RAS, St. Petersburg, Russia
Цель работы: оценить экспрессию гена толл-подобного рецептора-2 (TLR2) в поверхностном эпителии слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Исследовали 49 образцов операционного материала: слизистую оболочку носа, верхнечелюстных пазух (нижние носовые раковины, полипы), среднего уха, небные миндалины при хроническом декомпенсированном тонзиллите и гипертрофии, аденоиды. Оценку экспрессии генов TLR2 и бета-актина по уровню синтеза соответствующих матричных рибонуклеиновых кислот (мРНК) проводили методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Экспрессия гена TLR2 детектирована во всех исследованных образцах респираторного и тонзиллярного эпителия. В эпителии аденоидов и небных миндалин экспрессия гена TLR2 ниже, чем в слизистой оболочке носа и околоносовых пазух и барабанной полости (p < 0,05; тест Манна-Уитни). Ослабленные реакции врожденного иммунитета на патогены через сигнальный путь TLR2 на эпителиальных клетках верхних дыхательных путей могут представлять собой необходимый механизм хронических воспалительных заболеваний.
Ключевые слова: аденоиды, небные миндалины, нижние носовые раковины, отосклероз, полиме-разная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени, полипы носа и верхнечелюстных пазух, слизистая оболочка среднего уха, толл-подобный рецептор 2, хронический средний отит.
Библиография: 26 источников.
The aim of this study was to investigate the TLR2 gene expression in the surface epithelium of the upper airway mucosa. 49 surgical samples of nasal and maxillary sinuses mucosa (inferior turbinate mucosa, polyps), middle ear mucosa, palatine tonsils in chronic decompensated tonsillitis, hypertrophic adenoids and tonsils were investigated. Estimation of TLR2 and beta-actin gene expression by levels of the corresponding messenger ribonucleic acid (mRNA) synthesis was performed by real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of TLR2 gene was detected in the all tissue specimens. TLR2 gene expression in adenoids and tonsillar epithelium was significantly lower compared with sinonasal and tympanic cavity mucosa (p < 0,05; Mann-Whitney test). These findings suggest that impaired innate immune responses to pathogens via TLR2 on the upper airway epithelial cells may represent a critical mechanism in the chronic inflammatory diseases.
Key words: adenoids, chronic otitis media, inferior turbinate, middle ear mucosa, nasal and maxillary sinuses polyps, otosclerosis, real-time polymerase chain reaction, toll-like receptor 2 (TLR2), tonsils.
Bibliography: 26 sources.
Иммунную систему подразделяют на врожденный и адаптивный блоки, каждый из которых обладает значимой ролью и выполняет незаменимые функции в защите организма от чужеродных агентов, таких как бактерии, грибы и вирусы. Значительным прогрессом в понимании ранних этапов распознавания микробов и последующего развития иммунных реакций стала идентификация толл-подобных рецепторов (TLRs) в качестве
ключевых молекул системы врожденного иммунитета [5]. Семейство TLRs у человека и позвоночных животных распознает консервативные структуры, обнаруживаемые одновременно у обширных групп патогенов, и инициирует эффек-торные реакции врожденного иммунитета.
Реакции врожденного иммунитета обеспечивают неотложную защиту от инфекционных агентов [1]. Представители семейства TLR играют
центральную роль в этой защите благодаря своей способности распознавать консервативные молекулярные структуры патогенов, отсутствующие у высших эукариот, так называемые патоген-ассо-циированные молекулярные паттерны (PAMPs) [14].
Распознавание PAMPs рецепторами TLRs приводит в действие сигнальные пути, которые ведут к активации транскрипционных факторов NF-kB, IRF3 и членов семейства MAP киназ [18]. Эта активация инициирует не только реакции врожденного иммунитета, но и через дендритные клетки запускает реакции адаптивного иммунитета (инструктирующая адаптивный иммунитет функция врожденного иммунитета) [1, 14].
К настоящему времени идентифицировано 10 членов семейства TLR, все они являются трансмембранными белками с внеклеточным доменом, включающим множественные повторы, обогащенные аминокислотой лейцином и консервативным цитоплазматическим доменом. Общий для всех членов семейства TLR ци-топлазматический домен является структурным гомологом внутриклеточного домена рецептора интерлейкина-1 и получил наименование Toll/ IL-1 рецептор (TIR) домен [6]. Каждый TLR специализирован на распознавании специфических PAMPs.
Установлено, что TLR-2 активируют бактериальные липопротеины, пептидогликаны, протео-гликаны и липотейхоевые кислоты - компоненты клеточной стенки грамположительных бактерий [4, 11, 20, 21]. Также описано, что рецептор распознает растворимый фактор из стрептококков группы B, выделенный при сепсисе у новорожденных и детей раннего возраста [19]. Активированный бактериальными липопротеинами TLR-2 выступает в качестве костимулирующего рецептора-CD4+ T-клеток человека [22]. Сигнальную функцию TLR-2 выполняет в составе гетеродимерных комплексов с TLR-1 или TLR-6 [24].
Мутации в генах некоторых TLRs, в частности TLR-2, приводят к повышенной восприимчивости к некоторым инфекционным заболеваниям. Показано, что точечные мутации TLR-2 Arg753Gln и Arg677Trp ассоциированы со сниженным ответом моноцитов и клеточных линий на введение микобактерий. Тяжелая форма язвенного колита ассоциирована с точечной мутацией R753Q в гене TLR-2 [7]. Функциональные исследования генетики TLR-2 путем генотипирования (анализ Taqman и плавление высокого разрешения) двух однонуклеотидных полиморфизмов гена TLR-2 (597T>C и 1350T>C) выявили, что гаплотип C-C положительно ассоциирован с аллергическим ринитом (p = 0,048), т. е. полиморфизмы гена TLR-2 могут быть подвержены развитию аллергического ринита [13].
Считают, что четко определенные паттерны экспрессии TLRs в различных типах клеток подразумевают, что каждый тип клеток обладает определенным характером реагирования на микробную стимуляцию [26]. Эпителиальные клетки верхних дыхательных путей должны поддерживать надежную систему защиты слизистой оболочки от различных патогенных стимулов [8]. Экспрессия TLRs рецепторов в качестве одного из специфических механизмов распознавания микроорганизмов эпителиальными клетками позволяет инициировать защитные реакции иммунной системы слизистых оболочек без предшествующего повреждения эпителиального барьера [1, 12]. Спектр связывающей способности TLR-2 обеспечивает реактивность по отношению к респираторным патогенам Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes и S. pneumoniae, т. е. грам-положительным бактериям, колонизирующим поверхность слизистой оболочки верхних дыхательных путей и имеющим большое клиническое значение при заболеваниях ЛОРорганов [2, 12].
Цель исследования. Оценить экспрессию гена толл-подобного рецептора-2 (TLR-2) на основе определения мРНК в слизистой оболочке верхних дыхательных путей больных хроническими воспалительными заболеваниями носа и околоносовых пазух, носоглотки и среднего уха.
Пациенты и методы исследования. Материалом для исследования служили образцы слизистой оболочки верхних дыхательных путей (табл.), полученные во время планового хирургического вмешательства в условиях общей анестезии. Образцы немедленно помещали в стабилизирующий раствор RNAlater. Исследованы три вида тканей: аденоиды, небные миндалины, слизистая оболочка носа, верхнечелюстных пазух, среднего уха.
Исследовано 49 образцов операционного материала от 45 больных. Контрольной тканью служили нижние носовые раковины больных с искривлением перегородки носа. Хирургическое лечение проведено больным в период вне обострения заболевания.
Общую РНК выделяли согласно протоколу Gen Elute Mammalian Total RNA Miniprep Kit и On-Column DNase I Digestion Set из поверхностного эпителия исследуемых образцов ткани. Синтез первой цепи комплементарной ДНК (кДНК) проводили с использованием обратной транскриптазы M-MLV в присутствии oligo(dT) и dNTPs. Амплификацию проводили с использованием специфических праймеров [12] (прямой 5 '-ggccagcaaattacctgtgtg-3', обратный 5'-aggcggacatcctgaacct-3') и реактивов iQTM SYBR Green Supermix методом ПЦР в режиме реального времени (40 циклов) с помощью системы детекции продуктов ПЦР CFX96 Touch™ и программного обеспечения CFX Manager™ версия 2.1.
Т а б л и ц а
Характеристика образцов слизистой оболочки верхних дыхательных путей
№ группы Операционный материал - слизистая оболочка Количество, пол м/ж Сведения о пациентах
Возраст (годы) Диагноз, показания к операции Операция
1 Нижние носовые раковины (контроль) 4 3м/1ж 19-26 Искривление перегородки носа Септум-операция
2 Гипертрофические нижние носовые раковины 4 2м/2ж 25-49 Искривление перегородки носа, гипертрофический ринит Септум-операция и конхотомия
3 Носовые хоаналь-ные полипы 4 3м/1ж 24-58 Хронический полипоз-ный риносинусит Полипэктомия
4 Полипы верхнечелюстной пазухи 4 4м/0ж 34-46
5 Аденоиды 6 3м/3ж 6-8 Обструктивная гипертрофия аденоидов, приводящая к назальной обструкции Аденоидэктомия
6 Аденоиды ГНМ 4 3м/1ж 3-11 Обструктивная гипертрофия аденоидов и гипертрофия небных миндалин (ГНМ), приводящие к затруднению носового дыхания и развитию секреторного отита Аденоидэктомия и тонзилэктомия
7 Небные миндалины ГНМ 4
8 Небные миндалины ХТ 4 3м/1ж 18-44 Хронический декомпен-сированный тонзиллит (ХТ) Тонзиллэктомия
9 Слизистая оболочка барабанной полости 4 3м/1ж 12-63 Хронический туботимпа-нальный средний отит, центральная перфорация Тимпанопластика
10 Слизистая оболочка барабанной полости при тимпано-склерозе 4 3м/1ж 16-64 Хронический туботимпа-нальный средний отит, тимпаносклероз
11 Слизистая оболочка барабанной полости при холестеато-ме 4 3м/1ж 14-58 Хронический гнойный эпиантральный средний отит, холестеатома Санирующая операция и тимпанопласти-ка
12 Слизистая оболочка суперструктур стремени 3 3м/0ж 29-56 Отосклероз, тугоухость Стапедопластика
Уровень экспрессии мРНК стандартизировали относительно экспрессии гена бета-актина (прямой праймер 5'-gggtcagaaggattcctatg-3', обратный -5'-gggtcagaaggattcctatg-3'). Относительную экспрессию генов рассчитывали как 2-ДСт, где дельта CT - разность пороговых циклов целевого гена и бета-актина, и оценивали в условных единицах.
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы GraphPad Prism 5 мето-
дами описательной статистики с использованием непараметрических критериев различия (тест Манна-Уитни). Значения р < 0,05 рассматривали как статистически значимые.
Результаты и обсуждение. Экспрессия гена И^2 детектирована во всех исследованных образцах респираторного и тонзиллярного эпителия (табл., рис.). Обнаружены достоверные различия экспрессии гена И^2 в исследованных тканях,
Й J Ей £ Л
<и ft В
0,010 -|
0,008
0,006
0,004
0,002
0
JpL
I
i
^ ^ s&fr л, ф А & & л
é3
V1> <>
////
У
t
Рис. Относительная экспрессия мРНК толл-подобного рецептора-2 в поверхностном эпителии слизистой оболочки верхних дыхательных путей (достоверность различий приведена в тексте статьи).
обусловленные, скорее всего, анатомо-функцио-нальными областями (нос и околоносовые пазухи, аденоиды, небные миндалины, среднее ухо), а не характером патологического процесса. Самая низкая экспрессия гена TLR-2 выявлена в эпителии аденоидов ГНМ (группа 6) по сравнению с контрольной тканью, слизистой оболочкой носа и околоносовых пазух (группы 1, 2, 4) и барабанной полости (группы 9, 11, 12) (р < 0,05 во всех случаях). В ткани аденоидов (группа 5) экспрессия гена TLR-2 снижена по сравнению с гипертрофическим ринитом (р < 0,05) и слизистой оболочкой среднего уха (группы 9, 11, 12) (р < 0,01, р < 0,05, р < 0,05 соответственно). В ткани небных миндалин ХТ (группа 8) экспрессия гена TLR-2 снижена по сравнению с гипертрофическим ринитом (группа 2) и слизистой оболочкой барабанной полости (группы 9, 12) (р < 0,05 во всех случаях). В эпителии небных миндалин ГНМ (группа 7) экспрессия гена И^2 снижена по сравнению со слизистой оболочкой барабанной полости (группа 9) (р < 0,05). В пределах анатомических областей «нос и околоносовые пазухи» и «барабанная полость» достоверные различия экспрессии гена TLR-2 при различных патологических процессах отсутствовали. В пределах лим-фоэпителиального глоточного кольца достоверные различия экспрессии гена TLR-2 обнаружены в эпителии аденоидов ГНМ (однослойный многорядный мерцательный эпителий респираторного типа с мерцательными и бокаловидными клетками) по сравнению с небными миндалинами ГНМ (многослойный плоский неороговевающий эпителий) (р < 0,05).
Полученные нами результаты хорошо согласуются с данными литературы.
Полагают, что способность TLRs распознавать PAMPs и активировать синтез провоспалительных цитокинов имеет большое значение для иммунных реакций адаптивного типа в структуре небных миндалин. Миндалины выдерживают хронически высокую антигенную нагрузку и постоянно подвергаются воздействию бактерий, вирусов и грибков, а также поступающих с воздухом и пищей разнообразных по структуре веществ. При исследовании ex vivo (тонзиллэктомия) тонзил-лярных T-клеток методами количественной ПЦР, проточной цитометрии и иммуногистохимии детектировано значительное число транскриптов TLR-2. Экспрессия мРНК TLR-2 в CD8+ T-клетках небных миндалин детей, страдающих рецидивирующим стрептококковым тонзиллитом (бета-гемолитические стрептококки групп A, C и G), повышена по сравнению с гиперплазией миндалин (p < 0,05) [17].
В очищенных тонзиллярных B-клетках показаны довольно высокий уровень белка TLR-2 (имму-ногистохимия и проточная цитометрия) и слабая экспрессия мРНК TLR-2 (ПЦР в реальном времени), которая не зависит от стадии дифференциров-ки B-лимфоцитов: CD19+ CD38- CD27- (наивные), CD19+ IgD- CD27- (клетки зародышевого центра) и CD19+ CD38-CD27+ (клетки памяти) (p > 0,05). Тонзиллярная инфекция (S. pyogenes групп A, C и G) по сравнению с гиперплазией миндалин существенно не меняла экспрессию мРНК TLR-2 в выделенных ex vivo субпопуляциях B-клеток (p > 0,05). Оценка экспрессии мРНК TLR-2 B-лимфоцитов
небных миндалин и периферической крови показала, что конститутивные уровни TLRs не регулируются в процессе дифференцировки B-клеток. Опосредованная через сигнальный путь TLR-1/ TLR-2-стимуляция лигандом Pam3CSK4 очищенных тонзиллярных CD19+ B-клеток приводила к выработке IL-6 и индуцировала экспрессию ко-стимулирующей молекулы HLA-DR II класса [3]. По мнению авторов, хронический тонзиллит не влияет на профиль TLRs в B-клетках, а отчетливая экспрессия TLRs позволяет B-клеткам прямо реагировать на родственные PAMPs, что подчеркивает роль TLRs в прямой активации клеток адаптивного иммунитета [3].
В первичных эпителиальных клетках миндалин и линиях эпителия миндалин UT-SCC-60A и UT-SCC-60B методами полуколичественной ПЦР, ПЦР в реальном времени и проточной ци-тометрии детектированы мРНК и белок TLR-2. Стимуляция культур клеток лигандами Pam3Cys и Poly I:C приводила к секреции провоспалитель-ных цитокинов. Реакции эпителиальных клеток миндалин на лиганды TLR свидетельствуют о том, что TLR-2 и TLR-3 являются функциональными в этой ткани, т. е. защитная роль эпителия небных миндалин включает функцию отбора проб антигенов [15].
Все 10 известных рецепторов TLRs экспрес-сированы в широком диапазоне интенсивности в ткани аденоидов (ПЦР в реальном времени) и небных миндалин (ПЦР по конечной точке), полученных у пациентов путем аденотонзиллэктомии [16], что согласуется со сведениями литературы о способности аденоидов и небных миндалин вырабатывать провоспалительные и противовирусные цитокины и хемокины.
В операционном материале больных обструк-тивной гипертрофией аденоидов, болезнями носа и околоносовых пазух (хронический синусит, полипы носа, в качестве контроля нижние носовые раковины), тонзиллярной болезнью [идиопати-ческий гипертрофический тонзиллит и рецидивирующий (хронический) тонзиллит)] детектирована постоянная экспрессия мРНК TLR-2 (ПЦР в реальном времени) в исследованных тканях. Экспрессия мРНК TLR-2 в аденоидах ниже, чем во всех образцах ткани миндалин (p = 0,04), другие различия экспрессии мРНК TLR-2 в небных миндалинах и слизистой оболочке носа и околоносовых пазух при различных патологических состояниях не выявлены [12]. Полученные данные свидетельствуют об активном участии эпителия верхних дыхательных путей и лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой, во врожденной иммунной защите организма [12].
Эпителий слизистой оболочки носа рассматривают в качестве первой линии защиты от внедрения патогенов. В эпителиальных клетках
слизистой оболочки носа больных хроническим синуситом экспрессия мРНК TLR-2 (гибридизация in situ) выше, чем у здоровых взрослых (p < 0,0005) [25], т. е. респираторный эпителий носовой полости служит не только физическим барьером, но и участвует в реализации механизмов иммунной защиты организма от микробной и вирусной инфекции.
В мазках эпителиальных клеток, полученных путем соскоба со средней трети нижней носовой раковины больных хроническим риносинуситом и здоровых взрослых добровольцев, методом гибридизации in situ детектирована экспрессия мРНК TLR-2 во всех исследованных образцах эпителия носа. Экспрессия гена TLR-2 при хроническом риносинусите повышена по сравнению с нормальным контролем (p < 0,0005), что свидетельствует о стимуляции экспрессии в условиях инфекции [9].
В срезах ткани носовых раковин больных пер-систирующим аллергическим и идиопатическим неаллергическим ринитом, слизистой оболочки носа здоровых лиц и ткани миндалин методом им-муногистохимии определена локализация белка TLR-2 в эпителии выстилки и подслизистых желез, различия между группами ринита и контроля отсутствовали [23]. Сниженная экспрессия мРНК TLR-2 (ПЦР в реальном времени) в аллергической слизистой оболочке носа по сравнению с контролем (p = 0,02) подтверждает концепцию, согласно которой усиленный ген TLR-2 предохраняет от развития аллергии, осуществляя поляризацию 1Ъ0-клеток в сторону 1Ъ1-неаллергического фенотипа [23].
В мембранах эпителиальных и железистых клеток операционных образцов тканей больных хроническим риносинуситом, носовых полипов и нормальных нижних носовых раковин больных, подвергнутых септум-операции, методами ПЦР и иммуногистохимии детектированы мРНК и белок TLR-2 во всех исследованных образцах. Экспрессия мРНК и белка TLR-2 в тканях при хроническом риносинусите повышена по сравнению с носовыми полипами и контрольной тканью (p < 0,05). В тканях носовых полипов и нижних носовых раковин содержание мРНК и белка TLR-2 не различается (p > 0,05) [10].
В слизистой туботимпанума, носоглотки и ротовой полости крыс методом ПЦР в реальном времени были выявлены транскрипты TLR-2. Экспрессия TLR-2 в среднем ухе крыс больше, чем в других анатомических областях, что на уровне белка подтверждено методом иммуноблот. Различие экспрессии TLR-2 в различных отделах туботимпанума и верхнего воздуховодно-пище-варительного тракта при их нормальной физиологии считают свидетельством функциональной модуляции врожденной иммунной системы в специфических анатомических областях [8].
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что эпителиальные клетки слизистой оболочки носа, верхнечелюстных пазух, барабанной полости, аденоидов, небных миндалин экспрессируют мРНК TLR-2 в норме и при различных патологических состояниях.
Экспрессия толл-подобного рецептора-2 во всех исследованных тканях подтверждает важную роль врожденных механизмов иммунной защиты слизистой оболочки верхних дыхательных путей.
Уровень экспрессии гена TLR-2 снижен в эпителии лимфоэпителиального глоточного кольца
по сравнению с анатомо-функциональными областями «нос и околоносовые пазухи» и «барабанная полость».
Ослабленные реакции врожденного иммунитета на патогены, запускаемые сигнальным путем через TLR-2 на эпителиальных клетках верхних дыхательных путей, могут представлять собой один из факторов риска развития хронических воспалительных заболеваний носа и околоносовых пазух, носоглотки и среднего уха.
Работа частично поддержана грантами РФФИ № 12-04-01498 и № 12-04-01573.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кокряков В. Н. Очерки о врожденном иммунитете. - СПб.: Наука, 2006. - 261 с.
2. Мальцева Г. С., Уханова М. А., Тырнова Е. В. Клиническое значение определения ревматоидного фактора, С-реактивного белка, антистрептолизина-О у больных с хроническим тонзиллитом // Рос. оторинолар. -2010. - № 4. - С. 45-51.
3. A distinct Toll-like receptor repertoire in human tonsillar B cells, directly activated by Pam3CSK4, R-837 and CpG-2006 stimulation / A. Mansson [et al.] // Immunology. - 2006. - Vol. 118. - P. 539-548.
4. Akira S., Takeda K., Kaisho T. Toll-like receptors: critical proteins linking innate and acquired immunity // Nat. Immunol. - 2001. - Vol. 2. - P. 675-680.
5. Beutler B. Inferences, questions and possibilities in Toll-like receptor signaling // Nature. - 2004. - Vol. 430, N 6996. -P. 257-263.
6. Bowie A.,O'Neill L. A.The interleukin-1receptor/toll-like receptor superfamily: signal generators for pro-inflammatory interleukins and microbial products // Jurn. Leukoc. Biol. - 2000. - Vol. 67. - P. 508-514.
7. Colitis-associated variant of TLR2 causes impaired mucosal repair because of TFF3 deficiency / D. K. Podolsky [et al.] // Gastroenterology. - 2009. - Vol. 137, N 1. - P. 209-220.
8. Differentia! expression of toll-like receptors 2 and 4 in rat middle ear / J. J. Song [et al.] // Int. Jurn. Pediatr. Otorhinolaryngol. - 2009. - Vol. 73, N 6. - P. 821-824.
9. Dong Z., Yang Z., Wang C. Expression of TLR2 and TLR4 messenger RNA in the epithelial cells of the nasal airway // Am. Jurn. Rhinol. - 2005. - Vol. 19, N 3. - P. 236-239.
10. Expression difference of toll-like receptors among chronic rhinosinusitis and nasal polyps / X. J. You [et al.] // Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi. - 2007. - Vol. 42, N 5. - P. 345-349.
11. Heine H., Lien E. Toll-like receptors and their function in innate and adaptive immunity // Int. Arch. Allergy Immunol. - 2003. - Vol. 130. - P. 180-192.
12. Human beta-defensins and toll-like receptors in the upper airway / S. Claeys [et al.] // Allergy. - 2003. - Vol. 58, N 8. - P. 748-753.
13. Identification of polymorphisms in the Toll-like receptor gene and the association with allergic rhinitis / I. Kang [et al.] // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. - 2010. - Vol. 267, N 3. - P. 385-389.
14. Janeway C. A. Jr., Medzhitov R. Innate immune recognition // Annu. Rev. Immunol. - 2002. - Vol. 20. - P. 197-216.
15. Lange M. J., Lasiter J. C., Misfeldt M. L. Toll-like receptors in tonsillar epithelial cells // Int. Jurn. Pediatr. Otorhinolaryngol. - 2009. - Vol. 73, N 4. - P. 613-621.
16. Lesmeister M. J., Bothwell M. R., Misfeldt M. L. Toll-like receptor expression in the human nasopharyngeal tonsil (adenoid) and palantine tonsils: a preliminary report // Int. Jurn. Pediatr. Otorhinolaryngol. - 2006. - Vol. 70, N 6. - P. 987-992.
17. Mansson A., Adner M., Cardell L.O. Toll-like receptors in cellular subsets of human tonsil T cells: altered expression during recurrent tonsillitis // Respir. Res. - 2006. - Vol. 7. - P. 36.
18. Medzhitov R. Toll-like receptors and innate immunity // Nat. Rev. Immunol. - 2001. - Vol. 1. - P. 135-145.
19. Novel engagement of CD14 and multiple toll-like receptors by group B streptococci / P. Henneke [et al.] // Jurn. Immunol. - 2001. - Vol. 167. - P. 7069-7076.
20. Peptidoglycan- and lipoteichoic acid-induced cell activation is mediated by toll-like receptor 2 / R. Schwandner [et al.] // Jurn. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274. - P. 17406-17409.
21. Takeda K., Akira S. Toll receptors and pathogen resistance // Cell Microbiol. - 2003. - Vol. 5. - P. 143-153.
22. TLR2 is expressed on activated T cells as a costimulatory receptor / M. Komai-Koma [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. - Vol. 101. - P. 3029-3034.
23. Vanhinsbergh L. J., Powe D. G., Jones N. S. Reduction of TLR2 gene expression in allergic and nonallergic rhinitis // Ann. Allergy Asthma Immunol. - 2007. - Vol. 99, N 6. - P. 509-516.
24. Wang C. S., Dong Z. [Expression of toll-like receptor mRNA in epithelial cell of nasal mucosa] // Zhonghua Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. - 2003. - Vol. 38, N 4. - P. 243-246.
25. Wagner H. Interactions between bacterial CpG-DNA and TLR9 bridge innate and adaptive immunity // Curr. Opin. Microbiol. - 2002. - Vol. 5. - P. 62-69.
Российская оториноларингология № 6 (73) 2014
26. Zarember K. A., Godowski P. J. Tissue expression of human Toll-like receptors and differential regulation of Toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines // Jurn. Immunol. - 2002. -Vol. 168. - P. 554-561.
Тырнова Елена Валентиновна - канд. мед. наук, ст. н. с. лабораторно-диагностического отдела Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи. Россия, 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9; тел. 8-812317-84-43, e-mail: 7101755@mail.ru, tyrnovaev@mail.ru
Алешина Галина Матвеевна - канд. биол. наук, ст. н. с. отдела общей патологии и патологической физиологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. Россия, 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И. П. Павлова, д. 12; тел. 8-812-234-07-64, e-mail: galina_aleshina@mail.ru
Янов Юрий Константинович - засл. врач РФ, член-корреспондент РАН, докт. мед. наук, профессор, директор Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи. Россия, 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9. тел. 8-812-316-22-56, e-mail: 3162256@mail.ru
Кокряков Владимир Николаевич - докт. биол. наук, профессор, руководитель лаборатории общей патологии отдела общей патологии и патологической физиологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. Россия, 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И. П. Павлова, д. 12; тел. 8-812-234-07-64, e-mail: kokryak@yandex.ru
Russian otorhinolaryngology [Rossijskaja otorinolaringologija]. 2014. N 6. P. 86-93.
Tyrnova E. V., Aleshina G. M., Yanov Y. K., Kokryakov V. N. Izuchenie jekspressii gena toll-podobnogo receptora-2 (TLR2) v slizistoj obolochke verhnih dyhatel'nyh putej [Studying of tolllike receptor 2 gene expression in the upper airway mucosa]
Tyrnova Elena V. - Candidate of Medicine, senior research assistant of Laboratory and Diagnostic Department, Saint-Petersburg ENT Research Institute. Russia. 190013, Saint-Petersburg, Bronnitskaya str., 9; phone: 8-812-317-84-43, e-mail: 7101755@mail.ru, tyrnovaev@mail.ru
Aleshina Galina M. - Candidate of Biology, senior reserch assistant of Department of General Pathology and Physiopathology, Institute of Experimental Medicine of the North-West Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Russia. 197376, Saint-Petersburg, Akad. I. P. Pavlova str., 12; phone: 8-812-234-07-64, e-mail: galina_aleshina@mail.ru
Yanov Yuri K. - Honoured Doctor RF, corresponding member of RAS, Doctor of Medical Sciences, professor, Director of ENT Research Institute. Russia. 190013, Saint-Petersburg, Bronnitskaya str., 9; phone: 8(812) 316-2256, e-mail: spbniilor@gmail.com
Kokryakov Vladimir N. - Doctor of Biology, professor, Head of laboratory of General Pathology, Department of General Pathology and Physiopathology, Institute of Experimental Medicine of the North-West Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Russia. 197376, Saint-Petersburg, Akad. I. P. Pavlova str., 12; phone: 8-812-234-07-64, e-mail: kokryak@yandex.ru
References
1. Kokrjakov V. N. Ocherki o vrozhdennom immunitete. SPb.: Nauka, 2006, 261 p.
2. Mal'ceva G. S., Uhanova M. A., Tyrnova E. V. Klinicheskoe znachenie opredelenija revmatoidnogo faktora, S-reaktivnogo belka, antistreptolizina-O u bol'nyh s hronicheskim tonzillitom. Rossijskaja otorinolaringologija, 2010, N 4, pp. 45-51.
3. A distinct Toll-like receptor repertoire in human tonsillar B cells, directly activated by Pam3CSK4, R-837 and CpG-2006 stimulation. A. Mansson [et al.]. Immunology, 2006, vol. 118, pp. 539-548.
4. Akira S., Takeda K., Kaisho T. Toll-like receptors: critical proteins linking innate and acquired immunity. Nat. Immunol., 2001, vol. 2, pp. 675-680.
5. Beutler B. Inferences, questions and possibilities in Toll-like receptor signaling. Nature, 2004, vol. 430, N 6996, pp. 257-263.
6. Bowie A.,O'Neill L. A.The interleukin-1receptor/toll-like receptor superfamily: signal generators for pro-inflammatory interleukins and microbial products. J. Leukoc. Biol., 2000, vol. 67, pp. 508-514.
7. Colitis-associated variant of TLR2 causes impaired mucosal repair because of TFF3 deficiency. D. K. Podolsky [et al.]. Gastroenterology, 2009, vol. 137, N 1, pp. 209-220.
8. Differential expression of toll-like receptors 2 and 4 in rat middle ear. J. J. Song [et al.]. Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol., 2009, vol. 73, N 6, pp. 821-824.
9. Dong Z., Yang Z., Wang C. Expression of TLR2 and TLR4 messenger RNA in the epithelial cells of the nasal airway. Am. J. Rhinol., 2005, vol. 19, N 3, pp. 236-239.
10. [Expression difference of toll-like receptors among chronic rhinosinusitis and nasal polyps]. X. J. You [et al.]. Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi., 2007, vol. 42, N 5, pp. 345-349.
11. Heine H., Lien E. Toll-like receptors and their function in innate and adaptive immunity. Int. Arch. Allergy Immunol., 2003, vol. 130, pp. 180-192.
12. Human beta-defensins and toll-like receptors in the upper airway. S. Claeys [et al.]. Allergy, 2003, vol. 58, N 8, pp. 748-753.
13. Identification of polymorphisms in the Toll-like receptor gene and the association with allergic rhinitis. I. Kang [et al.]. Eur. Arch. Otorhinolaryngol., 2010, Vol. 267, N 3, pp. 385-389.
14. Janeway C. A. Jr., Medzhitov R. Innate immune recognition. Annu. Rev. Immunol., 2002, Vol. 20, pp. 197-216.
15. Lange M. J., Lasiter J. C., Misfeldt M. L. Toll-like receptors in tonsillar epithelial cells. Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol., 2009, vol. 73, N 4, pp. 613-621.
16. Lesmeister M. J., Bothwell M. R., Misfeldt M. L. Toll-like receptor expression in the human nasopharyngeal tonsil (adenoid) and palantine tonsils: a preliminary report. Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol., 2006, vol. 70, N 6, pp. 987-992.
17. Mansson A., Adner M., Cardell L.O. Toll-like receptors in cellular subsets of human tonsil T cells: altered expression during recurrent tonsillitis. Respir. Res., 2006, vol. 7, p. 36.
18. Medzhitov R. Toll-like receptors and innate immunity. Nat. Rev. Immunol., 2001, Vol. 1, pp. 135-145.
19. Novel engagement of CD14 and multiple toll-like receptors by group B streptococci. P. Henneke [et al.]. J. Immunol., 2001, vol. 167, pp. 7069-7076.
20. Peptidoglycan- and lipoteichoic acid-induced cell activation is mediated by toll-like receptor 2. R. Schwandner [et al.]. J. Biol. Chem., 1999, vol. 274, pp. 17406-17409.
21. Takeda K., Akira S. Toll receptors and pathogen resistance. Cell Microbiol., 2003, vol. 5, pp. 143-153.
Научные статьи
22. TLR2 is expressed on activated T cells as a costimulatory receptor. M. Komai-Koma [et al.]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, vol. 101, pp. 3029-3034.
23. Vanhinsbergh L. J., Powe D. G., Jones N. S. Reduction of TLR2 gene expression in allergic and nonallergic rhinitis. Ann. Allergy Asthma Immunol., 2007, vol. 99, N 6, pp. 509-516.
24. Wang C. S., Dong Z. [Expression of toll-like receptor mRNA in epithelial cell of nasal mucosa]. Zhonghua Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi, 2003, vol. 38, N 4, pp. 243-246.
25. Wagner H. Interactions between bacterial CpG-DNA and TLR9 bridge innate and adaptive immunity. Curr. Opin. Microbiol., 2002, vol. 5, pp. 62-69.
26. Zarember K. A., Godowski P. J. Tissue expression of human Toll-like receptors and differential regulation of Toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines. J. Immunol., 2002, vol. 168, pp. 554-561.
УДК 612.822:616.833:616-057.001.8
СООТНОШЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СОСТОЯНИЯ СТВОЛОМОЗГОВЫХ ОТДЕЛОВ СЛУХОВОГО АНАЛИЗАТОРА У БОЛЬНЫХ C АКУТРАВМОЙ И РАБОЧИХ «ШУМОВЫХ» ПРОИЗВОДСТВ
Т. А. Шидловская, Л. Г. Петрук
ГУ «Институт отоларингологии им. проф. А. И. Коломийченко» НАМН Украины, г. Киев, Украина
(Директор - акад. НАМН Украины, проф. Д. И. Заболотный)
RATIO OF THE STATE OF THE MEDULLA PART OF ACOUSTIC ANALYZER IN PATIENTS WITH ACOUSTIC TRAUMA AND IN „NOISY" PRODUCTION WORKERS
T. А. Shydlovska, L. G. Petruk
Prof. A. I. Kolomiichenko Institute of Otolarhingology NAMS of Ukraine, Kiev, Ukraine
В статье представлен сравнительный анализ временных показателей коротколатентных слуховых вызванных потенциалов (КСВП) у 84 больных с акутравмой и 15 рабочих шумовых производств с сенсо-невральными нарушениями слуха. В качестве контрольной группы обследовано 15 здоровых нормально слышащих человек.
Регистрацию коротколатентных слуховых вызванных потенциалов проводили с помощью анализирующих систем МК-6 фирмы Amplaid и Eclipse фирмы Interacoustics.
В обеих исследуемых группах больных по данным КСВП было выявлено достоверное удлинение ЛПП V волны: в группе больных с акутравмой и у рабочих шумовых профессий он составлял соответственно 5,81 ± 0,06 и 5,68 ± 0,02 мс. Причем увеличение ЛПП этой волны в группе с акутравмой было более выраженным и достоверно отличалось от значения у рабочих шумовых профессий. Также у больных с акутравмой удлиненным был и ЛПП IV волны КСВП, который составил 5,12 ± 0,03 мс и был достоверно увеличенным по сравнению с показателями в контрольной группе (р < 0,01) и группе сравнения (р < 0,05). Обнаруженное также достоверное увеличение до 4,14 ± 0,05 мс межпикового интервала (МПИ) I-V у больных с акутравмой достоверно превышает контрольные значения и показатели у рабочих. Таким образом, при акутравме наблюдаются изменения в функционировании стволомозговых структур слухового анализатора, о чем свидетельствуют удлиненные ЛПП IV и V волн, а также МПИ IV КСВП. Причем, в случае акутравмы нарушения в стволомозговых структурах регистрируются у большинства больных (61,9% случаев) сразу после воздействия кратковременного интенсивного шумового фактора. Полученные данные способствуют углублению нашего понимания процессов, происходящих в центральных отделах слухового анализатора при акутравме.
Ключевые слова: сенсоневральная тугоухость, вызванные слуховые потенциалы, межпиковый интервал, акутравма.
Библиография: 15 источников.
