CC BY
6Научные статьи
31. Ohm J. Instrument zur Totischen Operation. Klin. Mbl. Augenheilk, 1921, 847 p.
32. The timing of antibiotic administration in the management of infant dacryocystitis. D. E. Baskin [et al.]. J. AAPOS, 2008, Vol. 12, N 5, pp. 456-459.
Tulebayev Rais K. - Doctor of Medical Science, professor, Head of otolaryngology diseases department of Medical University Astana, the Republic of Kazakhstan. 010000, Astana, Beybitshlik St., 49, e-mail: rais007@yandex.ru
Baimenov Amanzhol Zh. - Candidate of Medical Science, professor, associate professor of otolaryngology diseases department of Medical University Astana, the Republic of Kazakhstan. 010000, Astana, Beybitshlik St., 49, e-mail: baiaman05@rambler.ru
УДК 616.211/.232:576.8.077.3
ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА БЕТА-ДЕФЕНСИНА-3 ЧЕЛОВЕКА В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
Е. В. Тырнова1, Г. М. Алешина2, Ю. К. Янов1, В. Н. Кокряков2
1 ФГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи»
Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
(Директор - засл. врач РФ, член-корр. РАН, проф. Ю. К. Янов)
2ФГБУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины» СЗО РАМН,
Санкт-Петербург, Россия
(Директор - засл. деятель науки РФ, акад. РАН, проф. Г. А. Софронов)
INVESTIGATION OF HUMAN BETA-DEFENSIN-3 GENE EXPRESSION IN THE UPPER AIRWAY MUCOSA
E. V. Tyrnova1, G. M. Aleshina2, Y. K. Yanov1, V. N. Kokryakov2
1 St. Petersburg Research Institute of Ear, Nose, Throat and Speech, St. Petersburg, Russia
2 Research Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russia
Цель работы: оценить экспрессию гена антимикробного пептида бета-дефенсина-3 человека (hBD-3) в поверхностном эпителии слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Исследовали 49 образцов операционного материала: слизистая оболочка носа, верхнечелюстных пазух (нижние носовые раковины, полипы), среднего уха, небные миндалины при хроническом декомпенсированном тонзиллите и гипертрофии, аденоиды. Оценку экспрессии генов hBD-3 и бета-актина по уровню синтеза соответствующих матричных рибонуклеиновых кислот (мРНК) проводили методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Экспрессия гена hBD-3 детектирована во всех образцах эпителия небных миндалин, большинстве образцов эпителия аденоидов, но лишь в единичных образцах слизистой оболочки среднего уха, достоверные различия экспрессии гена hBD-3 в этих тканях не обнаружены (р > 0,05; тест Манна-Уитни). В слизистой оболочке носа и верхнечелюстных пазух экспрессия гена hBD-3 ниже порога чувствительности метода. Низкие уровни экспрессии бета-дефенсинов в эпителии могут способствовать развитию предрасположенности к колонизации респираторными патогенами.
Ключевые слова: аденоиды, бета-дефенсин-3 человека, небные миндалины, нижние носовые раковины, отосклероз, полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени, полипы носа и верхнечелюстных пазух, слизистая оболочка среднего уха, хронический средний отит.
Библиография: 30 источников.
The aim of this study was to investigate the human beta-defensin-3 (hBD-3) gene expression in the surface epithelium of the upper airway mucosa. 49 surgical samples of nasal and maxillary sinuses mucosa (inferior turbinate mucosa, polyps), middle ear mucosa, palatine tonsils in chronic decompensated tonsillitis, hypertrophic adenoids and tonsils were investigated. Estimation of hBD-3 and beta-actin gene expression by levels of the corresponding messenger ribonucleic acid (mRNA) synthesis was performed by real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of hBD-3 gene was detected in the all tonsillar epithelium
specimens, the most samples of adenoids epithelium, but it was absent in the most cases of the middle ear mucosa, at levels that did not differ significantly (р > 0,05; Mann-Whitney). hBD-3 mRNA was below detection level in sinonasal mucosa, polyps or inferior turbinate mucosa of controls. These findings suggest that lower mucosal epithelial expression of hBD-3 may represent a biological factor that contributes to the predisposition to be colonized with the respiratory pathogens.
Key words: adenoids, chronic otitis media, inferior turbinate, human beta-defensin-3 (hBD-3), middle ear mucosa, nasal and maxillary sinuses polyps, otosclerosis, real-time polymerase chain reaction, tonsils. Bibliography: 30 sources.
Эпителий верхних дыхательных путей вырабатывает антимикробные пептиды (дефенсины, кате-лицидины), которые препятствуют колонизации и инвазии тканей макроорганизма широким кругом патогенов. Впервые бета-дефенсин-3 человека (hBD-3) был одновременно выделен из псориатических чешуек и идентифицирован молекулярно-генетиче-ским методом биоинформатики [9, 17, 19].
Первичная структура hBD-3 включает остатки 45 аминокислот, из которых 33% являются гидрофобными, заряд молекулы +11 [29]. Молекула hBD-3, подобно всем бета-дефенсинам [1, 21], содержит шесть остатков цистеина, которые образуют три характерных внутримолекулярных дисульфидных мостика в положениях 1-5, 2-4, 3-6. В растворах hBD-3 образует гомодимеры [27].
hBD-3 экспрессируется эпителиальными клетками, выстилающими ткани, обращенные к внешней среде, включая кератиноциты [9, 17, 19]. В отличие от дефенсинов hBD-1 и hBD-2 показана значительная экспрессия hBD-3 в неэпителиальных тканях, таких как лейкоциты, сердце и скелетные мышцы, а также в плаценте, пищеводе, трахее, слизистой оболочке ротовой полости и кожной ткани [9, 16, 17].
Некоторые соединения бактериального и вирусного происхождения, наряду с провоспалительными цитокинами, могут индуцировать продукцию этого пептида клетками барьерных эпителиев. В первичных кератиноцитах и эпителиальных клетках трахеи выработку hBD-3 индуцируют TNF-альфа и инакти-вированные температурой Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus [19]. В эксплантатах легких эмбриона и десневых кератиноцитах секрецию hBD-3 индуцирует ^-1бета [9]. Однако в культивируемых кератиноцитах клеточной линии HaCaT экспрессию пептида hBD-3 индуцирует IFN-гамма, а не TNF-альфа [17]. Биопленки Fusobacterium nucleatum стимулировали продукцию hBD-3 в базальных слоях клеток десневого эпителия и дентоэпителиального соединения органотипичной дентоэпителиальной культуры по направлению к поверхностным слоям кератиноцитов (иммуногистохимия) [3]. В клетках нормального эпителия ротовой полости фенотипы X4 и R5 ВИЧ-1 индуцируют экспрессию мРНК hBD-3 [24]. В первичной культуре эпителиальных клеток дыхательных путей заражение некоторыми сероти-пами риновируса человека также индуцирует экспрессию мРНК hBD-3 [22].
Прямая антимикробная активность дефенси-нов in vitro является дозозависимой и обычно наблюдается в микромолярном диапазоне концентраций [21]. Подобно hBD-1 и hBD-2, бета-дефенсин-3
человека обладает микробоцидной активностью в отношении грамотрицательных бактерий (P.. aeruginosa, Escherichia coli), дрожжей Candida albicans и Malassezia furfur и некоторых паразитов [17, 19, 21], показана способность hBD-3 убивать респираторный патоген нетипируемый Haemophilus influenzae [26]. Кроме того, hBD-3 убивает грамположитель-ные бактерии, такие как Streptococcus pyogenes и S. aureus, включая мультирезистентные штаммы S. aureus, и даже ванкомицин-резистентный Enterococcus faecium [16]. hBD-3 подавляет заражение ВИЧ-1 инфекцией культур нормальных эпителиальных клеток ротовой полости [24].
Прямую микробоцидную активность hBD-3 in vitro, в отличие от других изоформ дефенсинов человека, не подавляют физиологические концентрации соли, повышенные концентрации двухвалентных катионов и сывороточные белки [19].
Предполагают, что генетически детерминированные вариации экспрессии молекул врожденного иммунитета объясняют различия предрасположенности к колонизации S. aureus. Показана ассоциация точечных мутаций промотора гена DEFB1 в положениях -52 G > A (rs1799946), -44 C > G (rs1800972) и -20 G > A (rs11362) с ослабленной экспрессией мРНК hBD-1 и hBD-3 в кератиноцитах кожи и персистиру-ющим носительством S. aureus в полости носа [18]. По мнению авторов, однонуклеотидные полиморфизмы DEFB1 способствуют стойкой колонизации носовой полости S. aureus путем изменения экспрессии бета-дефенсинов в кератиноцитах кожи [18].
Особенно значимым для дефенсинов источником генетических мутаций считают вариабельность числа копий гена. Этот тип мутаций объясняет различия в популяции по количеству полных копий генов. Кластер генов бета-дефенсинов, который включает как DEFB103 (кодирующий hBD-3), так и DEFB4 (кодирующий hBD-2), варьирует в общей популяции от 2 до 12 копий [4, 7].
В наномолярных концентрациях hBD-3 обладает хемотаксическими свойствами в отношении моноцитов/макрофагов [17, 20] и посредством рецептора хемокинов CCR6 в отношении CD4+/ CD45RA+ T лимфоцитов и незрелых дендритных клеток [20], что обеспечивает связь между врожденным и адаптивным блоками иммунной системы. hBD-3 является мощным индуктором активации, миграции и поляризации дендритных клеток. hBD-3 способен индуцировать созревание и обеспечивать поляризацию дендритных клеток, подобных клеткам Лангерганса, в направлении Th1, поддерживающем неаллергенные иммунные реакции [12].
Стимулированные hBD-3 дендритные клетки, подобные клеткам Лангерганса, индуцируют сильную пролиферацию и секрецию №^гамма наивными Т-лимфоцитами. hBD-3 также индуцирует феноти-пическое созревание первичных мигрирующих в кожу дендритных клеток, происходящих из эксплантатов кожи человека [12].
Цель исследования. Оценить экспрессию гена бета-дефенсина-3 человека на основе определения мРНК в слизистой оболочке верхних дыхательных путей больных хроническими воспалительными заболеваниями носа и околоносовых пазух, носоглотки и среднего уха.
Пациенты и методы исследования. Материалом для исследования служили образцы слизистой оболочки верхних дыхательных путей (табл. 1), полученные во время планового хирургического вмешательства в условиях общей анестезии. Образцы немедленно помещали в стабилизирующий раствор RNAlater. Исследованы три вида тканей: аденоиды, небные миндалины, слизистая оболочка носа, верхнечелюстных пазух, среднего уха.
Исследовано 49 образцов операционного материала от 45 больных. В качестве контрольной ткани служили нижние носовые раковины больных с искривлением перегородки носа. Хирургическое ле-
чение больных проведено в период вне обострения заболевания.
Общую РНК выделяли согласно протоколу Gen Elute Mammalian Total RNA Miniprep Kit и On-Column DNase I Digestion Set из поверхностного эпителия исследуемых образцов ткани. Синтез первой цепи комплементарной ДНК (кДНК) проводили с использованием обратной транскриптазы M-MLV в присутствии oligo(dT) и dNTPs. Амплификацию проводили с использованием специфических прай-меров [13] (прямой 5 '-tatcttctgtttgctttgctcttcc-3', обратный 5 '-cctctgactctgcaataatatttctgtaat-3') и реактивов iQ™ SYBR Green Supermix методом ПЦР в режиме реального времени (40 циклов) с помощью системы детекции продуктов ПЦР CFX96 Touch™ и программного обеспечения CFX Manager™, версия 2.1. Уровень экспрессии мРНК стандартизировали относительно экспрессии гена бета-актина (прямой праймер 5'-gggtcagaaggattcctatg-3', обратный - 5'-gggtcagaaggattcctatg-3'). Относительную экспрессию генов рассчитывали как 2_ЛСт, где дельта Ст - разность пороговых циклов целевого гена и бета-актина, и оценивали в условных единицах.
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы GraphPad Prism 5 методами описательной статистики с использованием непа-
Т а б л и ц а 1
Характеристика образцов слизистой оболочки верхних дыхательных путей
Операционный материал -слизистая оболочка Количество Сведения о пациентах Операция
Пол, м/ж Возраст, лет Диагноз, показания к операции
Нижние носовые раковины (контроль) 4 3м/1ж 19-26 Искривление перегородки носа Септум-операция
Гипертрофические нижние носовые раковины 4 2м/2ж 25-49 Искривление перегородки носа, гипертрофический ринит Септум-операция и конхотомия
Носовые хоанальные полипы 4 3м/1ж 24-58 Хронический полипозный рино-синусит Полипэктомия
Полипы верхнечелюстной пазухи 4 4м/0ж 34-46
Аденоиды 6 3м/3ж 6-8 Обструктивная гипертрофия аденоидов, приводящая к назальной обструкции Аденоидэктомия
Аденоиды ГНМ 4 3м/1ж 3-11 Обструктивная гипертрофия аденоидов и гипертрофия небных миндалин, приводящие к затруднению носового дыхания и развитию секреторного отита Аденоидэктомия и тонзиллэктомия
Небные миндалины ГНМ 4
Небные миндалины ХТ 4 3м/1ж 18-44 Хронический декомпенсирован-ный тонзиллит Тонзиллэктомия
Слизистая оболочка барабанной полости 4 3м/1ж 12-63 Хронический туботимпаналь-ный средний отит, центральная перфорация Тимпанопластика
Слизистая оболочка барабанной полости при тимпаносклерозе 4 3м/1ж 16-64 Хронический туботимпаналь-ный средний отит, тимпано-склероз Тимпанопластика
Слизистая оболочка барабанной полости при холестеатоме 4 3м/1ж 14-58 Хронический гнойный эпи-антральный средний отит, холестеатома Санирующая операция и тимпано-пластика
Слизистая оболочка суперструктур стремени 3 3м/- 29-56 Отосклероз, тугоухость Стапедопластика
раметрических критериев различия (тест Манна-Уитни). Значения p < 0,05 рассматривали как статистически значимые.
Результаты исследования и обсуждение. Экспрессия гена hBD-3 детектирована во всех образцах эпителия небных миндалин, в большинстве образцов ткани аденоидов, но лишь в единичных образцах слизистой оболочки среднего уха (рис., табл. 2). В слизистой оболочке носа и верхнечелюстных пазух, включая контрольную ткань нижних носовых раковин больных с искривлением перегородки носа, экспрессия гена hBD-3 оказалась ниже порога чувствительности метода. Исследованные группы тканей, в которых экспрессия гена hBD-3 отсутствовала во всех образцах, не приведены в табл. 2. Наблюдалась заметная вариация экспрессии мРНК hBD-3 между пациентами обследованных групп, но статистически достоверные различия экспрессии в исследованных тканях при различных нозологических формах не обнаружены.
Индуцибельные бета-дефенсины человека всегда экспрессированы в нормальном эпителии ротовой полости, но эту способность не разделяют другие барьерные слизистые оболочки [24].
Показана экспрессия гена hBD-3 (полуколичественная ПЦР) во всех образцах небных миндалин больных рецидивирующим острым тонзиллитом и лиц, подлежавших тонзиллэктомии вследствие нарушения сна. Иммуногистохимически определена локализация hBD-3 в эпителии крипт и поверхности миндалин. Пониженное содержание пептида hBD-3 в поверхностном эпителии миндалин больных рецидивирующим острым тонзиллитом по сравнению с контрольной группой может повышать восприимчивость этих больных к инфекции [10].
Концентрации пептида hBD-3 в ткани небных миндалин, оцениваемые количественно методом ИФА, не различались при разных патологических состояниях: гипертрофия миндалин, острый тонзиллит, хронический тонзиллит, паратонзиллярный абсцесс. Иммунофлюоресцентное окрашивание ткани небных миндалин показало сопутствующую локализацию hBD-1-3 и стрептококка группы А. Тем не менее наличие hBD-1-3 в миндалинах не предотвращает хронизацию тонзиллита [15]. При паратонзиллярном абсцессе достоверно усиленная по сравнению с контролем экспрессия пептида hBD-3 иммуногистохимически локализована в поверхностном эпителии, криптах, эпителии крипт, лимфоцитарной «шапке», лимфоидных фолликулах, герминативных центрах и структуре абсцесса [14].
В ткани аденоидов при их обструктивной гипертрофии, слизистой оболочке носа и околоносовых пазух больных хроническим синуситом, полипами носа, нижних носовых раковинах контрольной группы экспрессия мРНК hBD-3 ниже порога чувствительности метода (ПЦР в реальном времени). По-видимому, при заболеваниях околоносовых пазух больных хроническим риносинуситом или по-липозом носа пусковые (триггерные) механизмы окружающей среды недостаточны для того, чтобы вызвать экспрессию или продукцию hBD-3 [13]. По сравнению с аденоидами, слизистой оболочкой носа и околоносовых пазух высокая экспрессия мРНК hBD-3 детектирована в ткани небных миндалин ф < 0,001) без достоверных различий между идио-патической гипертрофической тонзиллярной болезнью и рецидивирующим тонзиллитом. Глубокие крипты, избыточная нагрузка микроорганизмами и бактериальное многообразие в миндалинах могут
с ее -с
X ^
Е к К
с X
Ес
0,0006
0,0004
0,0002
0,0000
/V /
/V / / / «р *
,/ /
/ / / у у # #у „//
«г
У -У Ж & & <#
.«г
# ^ ^
/ / / ///
#
с/
А
¿V
#
Рис. Относительная экспрессия мРНК бета-дефенсина-3 человека в поверхностном эпителии слизистой оболочки верхних дыхательных путей.
Т а б л и ц а 2
Частота детекции экспрессии гена бета-дефенсина-3 человека в поверхностном эпителии слизистой
оболочки верхних дыхательных путей
Образцы слизистой оболочки верхних дыхательных путей Частота детекции экспрессии гена hBD-3
абс. %
Аденоиды при гипертрофии аденоидов 5 из 6 83,33
Аденоиды при гипертрофии аденоидов и небных миндалин (ГНМ) 3 из 4 75,0
Небные миндалины при гипертрофии аденоидов и ГНМ 4 из 4 100
Небные миндалины при хроническом декомпенсированном тонзиллите 4 из 4 100
Слизистая оболочка барабанной полости при холестеатоме 2 из 4 50
объяснять более выраженное наличие индуцибель-ного антимикробного пептида в этой ткани [13].
Методом иммуногистохимии в качестве клеточного источника hBD-3 определен эпителий слизистой оболочки носа [5]. В биоптатах носовых раковин [псевдомногослойный (многорядный) эпителий] здоровых добровольцев методом имму-ногистохимии пептид hBD-3 обнаружен в эпителии, стромальных клетках и подслизистых железах. В плоском эпителии преддверия носа местным клеточным источником пептида являются слои выстилающих просвет клеток. В носовых секретах количественно (ИФА) продукция hBD-3 детектирована только в 30% случаев [8]. В слизистой оболочке носовых полипов в качестве источников происхождения hBD-3 методом иммуногистохимии идентифицированы эпителиальные клетки, подслизистые железы и клетки соединительной ткани [6]. Концентрации пептида hBD-3 (ИФА) в носовых секретах больных хроническим риносинуситом с носовыми полипами и здоровых лиц независимо от колонизации S. aureus не различались [6].
Колонизацию слизистой оболочки носа S. aureus считают фактором риска рецидивирования грану-ломатоза Вегенера. Функциональный анализ стимулированных S. aureus культур первичных клеток эпителия носа показал повышение концентраций hBD-3 в супернатантах (ИФА) больных грануломато-зом Вегенера (p = 0,001) и здоровых лиц контрольной группы (p = 0,001). При этом содержание пептида hBD-3 и функциональный диапазон hBD-3-ответа в супернатантах первичных культур клеток носового эпителия больных грануломатозом Вегенера снижены по сравнению со здоровым контролем (p = 0,032, p = 0,016 соответственно). Нарушение регуляции функционального ответа на поступление микроорганизмов может служить одной из причин высокой частоты колонизации S. aureus слизистой оболочки носовой полости при грануломатозе Вегенера [5].
Инфекции дыхательных путей считают причиной обострений аллергии и астмы. Показана (ПЦР в реальном времени и иммуногистохимия) сниженная тонзиллярная экспрессия hBD-1-3 эпителиальными клетками и тонзиллярными лимфоцитами CD4+, CD8+ и CD19+ при аллергическом рините по сравнению со здоровыми миндалинами неаллер-
гического контроля. Стимуляция культур эпителиальных клеток дыхательных путей аллергическими медиаторами (IL-4, IL-5, гистамин) снижала секрецию hBD-1-3 (ИФА), в культивированных миндалинах и выделенных тонзиллярных лимфоцитах этот эффект отсутствовал. Пониженные уровни экспрессии мРНК и пептидов hBD-1-3 в небных миндалинах больных аллергическим ринитом и уменьшение продукции hBD-1-3 эпителиальными клетками дыхательных путей в присутствии аллергических медиаторов свидетельствуют об ослабленной антимикробной защите при аллергическом рините, а также о вероятном повышении восприимчивости к инфекциям дыхательных путей [23]. В срезах ткани носовых раковин взрослых больных персистиру-ющим аллергическим и идиопатическим ринитом показаны (ПЦР в реальном времени) ослабленная экспрессия генов hBD-1-3 по сравнению со здоровой слизистой оболочкой носа и усиленная экспрессия мРНК hBD-1-3 в ткани небных миндалин, но различия между группами хронического аллергического и неаллергического ринита и контрольных пациентов статистически недостоверны [28].
В туботимпануме при экспериментальном среднем отите у мышей наблюдали (полуколичественная ПЦР и иммуноблот) стимуляцию экспрессии mBD-3, тогда как нормальный туботимпанум не экс-прессировал мРНК и пептид mBD-3 [11]. Повышение экспрессии mBD-3 при экспериментальном среднем отите свидетельствует об участии пептида в качестве либо защитного, либо патогенетического фактора при развитии среднего отита. У шиншиллы заражение среднего уха респираторно-синцитиаль-ным вирусом снижает экспрессию бета-дефенсина-1 (соответствует hBD-3) в слизистой оболочке верхних дыхательных путей на уровнях мРНК и белка, что приводит к усиленной колонизации нетипиру-емых H. influenza. Лечение животных либо реком-бинантным бета-дефенсином-1 шиншиллы, либо рекомбинантным hBD-3 отменяло этот процесс [25].
Заключение. Таким образом, в слизистой оболочке верхних дыхательных путей экспрессия ин-дуцибельного гена hBD-3 детектирована в первую очередь при аденотонзиллярной патологии, этиологически и патогенетически основанной на хроническом воспалении. Рецидивирующее или хрони-
ческое воспаление аденоидов и небных миндалин, запускаемое персистирующей бактериальной инфекцией, главным образом S. aureus, Haemophilus sp. и Streptococcus sp. [2, 30], которые сохраняются в организме преимущественно внутриклеточно или внутри биопленок слизистых оболочек, приводит к хронической активации клеточно-опосредован-ных и гуморальных иммунных реакций, заканчивающейся гипертрофией лимфоидной ткани.
Дефицит экспрессии пептидов иммунной защиты способствует повышенной восприимчивости че-
ловека и животных к бактериальным инфекциям. Поскольку известно о роли hBD-3 в предупреждении бактериальной, грибковой и вирусной адгезии и инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей, низкие эпителиальные уровни экспрессии бета-дефенсинов могут представлять собой фактор риска, способствующий развитию предрасположенности к колонизации респираторными патогенами.
Работа частично поддержана грантами РФФИ № 12-04-01498 и № 12-04-01573.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кокряков В. Н. Очерки о врожденном иммунитете. - СПб.: Наука, 2006. - 261 с.
2. Мальцева Г. С., Уханова М. А., Тырнова Е. В. Клиническое значение определения ревматоидного фактора, С-реактивного белка, антистрептолизина-О у больных с хроническим тонзиллитом // Рос. оторинолар. -2010. - № 4. - С. 45-51.
3. A novel organotypic dento-epithelial culture model: effect of Fusobacterium nucleatum bio-film on b-defensin-2, -3, and LL-37 expression / U. K. Gursoy [at al.] // Jurn. Periodontol. - 2012. - Vol. 83, N 2. - P. 242-247.
4. Abu Bakar S., Hollox E. J., Armour J. A. Allelic recombination between distinct genomic lo-cations generates copy number diversity in human beta-defensins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2009. - Vol. 106, N 3. - P. 853-858.
5. Antimicrobial peptides in nasal secretion and mucosa with respect to S. aureus colonisation in Wegener's granulomatosis / Y. Hui [et al.] // Clin. Exp. Rheumatol. - 2011. - Vol. 29, N 1, suppl. 64. - P. 49-56.
6. Antimicrobial peptides in nasal secretion and mucosa with respect to Staphylococcus aureus colonization in chronic rhinosinusitis with nasal polyps / M. L. Thienhaus [et al.] // Rhinology. - 2011. - Vol. 49, N 5. - P. 554-561.
7. Defensins and the dynamic genome: what we can learn from structural variation at human chromosome band 8p23.1 / E. J. Hollox [et al.] // Genome Res. - 2008. - Vol. 18, N 11. - P. 1686-1697.
8. Differential expression pattern of antimicrobial peptides in nasal mucosa and secretion / M. Laudien [et al.] // Rhinology. - 2011. - Vol. 49, N 1. - P. 107-111.
9. Discovery of new human p-defensins using a genomics-based approach / H. P. Jia [et al.] // Gene. - 2001. - Vol. 263. -P. 211-218.
10. Expression and immunolocalisation of antimicrobial peptides within human palatine tonsils / S. L. Ball [et al.] // Jurn. Laryngol. Otol. - 2007. - Vol. 121, N 10. - P. 973-978.
11. Expression of beta-defensins in the tubotympanum of experimental otitis media / D. Jin Shin [et al.] // Acta Otolaryngol. - 2006. - Vol. 126, N 10. - P. 1040-1045.
12. Human beta-defensin 3 induces maturation of human Langerhans cell-like dendritic cells: an antimicrobial peptide that functions as an endogenous adjuvant / L. K. Ferris [et al.] // Jurn. In-vest. Dermatol. - 2013. - Vol. 133, N 2. -P. 460-468.
13. Human beta-defensins and toll-like receptors in the upper airway / S. Claeys [et al.] // Allergy. - 2003. - Vol. 58, N 8. - P. 748-753.
14. Human beta-defensins--at the front line of the peritonsillar abscess / M. Schwaab [et al.] // Eur. Jurn. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2009. - Vol. 28, N 7. - P. 745-755.
15. Human beta-defensins in different states of diseases of the tonsilla palatine / M. Schwaab [et al.] // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. - 2010. - Vol. 267, N 5. - P. 821-830.
16. Human defensins / J. J. Schneider fct al.] // Jurn. Mol. Med. (Berl). - 2005. - Vol. 83, N 8. - P. 587-595.
17. Identification of a novel, multifunctional p-defensin (human p-defensin 3) with specific an-timicrobial activity: its interaction with plasma membranes of Xenopus oocytes and the in-duction of macrophage chemoattraction / J. R. C. Garcia [et al.] // Cell Tissue Res. - 2001. - Vol. 306. - P. 257-264.
18. Impaired p-defensin expression in human skin links DEFB1 promoter polymorphisms with persistent Staphylococcus aureus nasal carriage / D. Nurjadi [et al.] // Jurn. Infect. Dis. - 2013. - Vol. 207, N 4. - P. 666-674.
19. Isolation and characterization of human p-defensin-3, a novel human inducible peptide anti-biotics / J. Harder [et al.] // Jurn. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276. - P. 5707-5713.
20. Mammalian defensins in immunity: more than just microbicidal / D. Yang [et al.] // Trends Immunol. - 2002. -Vol. 23. - P. 291-296.
21. Multiple roles of antimicrobial defensins, cathelicidins, and eosinophil-derived neurotoxin in host defense / D. Yang [et al.] // Annu. Rev. Immunol. - 2004. - Vol. 22. - P. 181-215.
22. Proud D., Sanders S.P., Wiehler S. Human rhinovirus infection induces airway epithelial cell production of human beta-defensin 2 both in vitro and in vivo // Jurn. Immunol. - 2004. - Vol. 172, N 7. - P. 4637-4645.
23. Reduced tonsillar expression of human p-defensin 1, 2 and 3 in allergic rhinitis / J. Bogefors [et al.] // FEMS Immunol. Med. Microbiol. - 2012. - Vol. 65, N 3. - P. 431-438.
24. Role of human beta-defensins in HIV infection / A. Weinberg [et al.] // Adv. Dent. Res. - 2006. - Vol. 19, N 1. -P. 42-48.
25. RSV-induced dysregulation of expression of a mucosal beta-defensin augments colonization of the upper airway by nontypeable Haemophilus influenzae / G. McGillivary [et al.] // Cell Microbiol. - 2009. - Vol. 11, N 9. - P. 13991408.
26. Susceptibility of nontypeable Haemophilus influenzae to human betadefensins is influenced by lipooligosaccharide acylation / T. D. Starner [et al.] // Infect. Immun. - 2002. - Vol. 70, N 9. - P. 5287-5289.
27. The solution structures of the human p-defensins lead to a better understanding of the potent bactericidal activity of HBD3 against Staphylococcus aureus / D. J. Schibli [et al.] // Jurn. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277. - P. 8279-8289.
28. Vanhinsbergh L. J., Powe D. G., Jones N. S. Reduction of TLR2 gene expression in allergic and nonallergic rhinitis // Ann. Allergy Asthma Immunol. - 2007. - Vol. 99, N 6. - P. 509-516.
29. Wang G. Structural studies of antimicrobial peptides provide insight into their mechanisms of action Chapter 9 P.141-168 // Antimicrobial peptides: discovery, design and novel thera-peutic strategies (Series: Advances in molecular and cellular microbiology; 18.) / Ed. G. Wang. Chippenham UK, CPI Antony Rowe, CAB International, 2010. - 230 p.
30. Zautner A. E. Adenotonsillar disease // Recent Pat. Inflamm. Allergy Drug Discov. - 2012. - Vol. 6, N 2. - P. 121-129.
Тырнова Елена Валентиновна - канд. мед. наук, ст. н. с. лабораторно-диагностического отдела Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи. Россия, 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9. тел. 8-812317-84-43, e-mail: 7101755@mail.ru, tyrnovaev@mail.ru
Алешина Галина Матвеевна - канд. биол. наук, ст. н. с. отдела общей патологии и патологической физиологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. Россия, 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И. П. Павлова, д. 12. тел. 8-812-234-07-64, e-mail: galina_aleshina@mail.ru
Янов Юрий Константинович - засл. врач РФ, член-корреспондент РАН, докт. мед. наук, профессор, директор Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи. Россия, 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9. тел. 8-812-316-22-56, e-mail: 3162256@mail.ru
Кокряков Владимир Николаевич - докт. биол. наук, профессор, руководитель лаборатории общей патологии отдела общей патологии и патологической физиологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАН. Россия, 197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И. П. Павлова, д. 12; тел. 8-812-234-07-64, e-mail: kokryak@yandex.ru
References
1. Kokryakov V. N. Ocherki o vrozhdennom immunitete. SPb.: Nauka, 2006, 261 p.
2. Mal'tseva G. S., Ukhanova M. A., Tyrnova E. V. Klinicheskoe znachenie opredeleniya rev-matoidnogo faktora, S-reaktivnogo belka, antistreptolizina-O u bol'nykh s khronicheskim tonzillitom. Rossiiskaya otorinolaringologiya, 2010, N 4, pp. 45-51.
3. A novel organotypic dento-epithelial culture model: effect of Fusobacterium nucleatum bio-film on b-defensin-2, -3, and LL-37 expression. U. K. Gursoy fct al.]. J. Periodontal., 2012, vol. 83, N 2, pp. 242-247.
4. Abu Bakar S., Hollox E. J., Armour J. A. Allelic recombination between distinct genomic lo-cations generates copy number diversity in human beta-defensins. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2009, vol. 106, N 3, pp. 853-858.
5. Antimicrobial peptides in nasal secretion and mucosa with respect to S. aureus colonisation in Wegener's granulomatosis. Y. Hui [et al.]. Clin. Exp. Rheumatol., 2011, vol. 29, N 1, suppl. 64, pp. 49-56.
6. Antimicrobial peptides in nasal secretion and mucosa with respect to Staphylococcus aureus colonization in chronic rhinosinusitis with nasal polyps. M. L. Thienhaus [et al.]. Rhinology, 2011, vol. 49, N 5, pp. 554-561.
7. Defensins and the dynamic genome: what we can learn from structural variation at human chromosome band 8p23.1. E. J. Hollox [et al.]. Genome Res., 2008, vol. 18, N 11, pp. 1686-1697.
8. Differential expression pattern of antimicrobial peptides in nasal mucosa and secretion. M. Laudien [et al.]. Rhinology, 2011, vol. 49, N 1. - pp. 107-111.
9. Discovery of new human p-defensins using a genomics-based approach. H. P. Jia [et al.]. Gene, 2001, vol. 263, pp. 211-218.
10. Expression and immunolocalisation of antimicrobial peptides within human palatine tonsils. S. L. Ball [et al.]. J. Laryngol. Otol., 2007, vol. 121, N 10, pp. 973-978.
11. Expression of beta-defensins in the tubotympanum of experimental otitis media. D. Jin Shin [et al.]. Acta Otolaryngol., 2006, vol. 126, N 10, pp. 1040-1045.
12. Human beta-defensin 3 induces maturation of human Langerhans cell-like dendritic cells: an antimicrobial peptide that functions as an endogenous adjuvant. L. K. Ferris [et al.]. J. In-vest. Dermatol., 2013, Vol. 133, N 2, pp. 460-468.
13. Human beta-defensins and toll-like receptors in the upper airway. S. Claeys [et al.]. Allergy, 2003, vol. 58, N 8, pp. 748-753.
14. Human beta-defensins-at the front line of the peritonsillar abscess. M. Schwaab [et al.]. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 2009, vol. 28, N 7, pp. 745-755.
15. Human beta-defensins in different states of diseases of the tonsilla palatine. M. Schwaab [et al.]. Eur. Arch. Otorhinolaryngol., 2010, vol. 267, N 5, pp. 821-830.
16. Human defensins. J. J. Schneider fct al.]. J. Mol. Med. (Berl), 2005, vol. 83, N 8, pp. 587-595.
17. Identification of a novel, multifunctional p-defensin (human p-defensin 3) with specific an-timicrobial activity: its interaction with plasma membranes of Xenopus oocytes and the in-duction of macrophage chemoattraction. J. R. C. Garcia [et al.]. Cell Tissue Res., 2001, vol. 306, pp. 257-264.
18. Impaired p-defensin expression in human skin links DEFB1 promoter polymorphisms with persistent Staphylococcus aureus nasal carriage. D. Nurjadi [et al.]. J. Infect. Dis., 2013, vol. 207, N 4, pp. 666-674.
19. Isolation and characterization of human p-defensin-3, a novel human inducible peptide anti-biotics. J. Harder [et al.]. J. Biol. Chem., 2001, vol. 276, pp. 5707-5713.
20. Mammalian defensins in immunity: more than just microbicidal. D. Yang [et al.]. Trends Immunol., 2002, vol. 23, pp. 291-296.
21. Multiple roles of antimicrobial defensins, cathelicidins, and eosinophil-derived neurotoxin in host defense. D. Yang [et al.].Annu. Rev. Immunol., 2004, vol. 22, pp. 181-215.
22. Proud D., Sanders S.P., Wiehler S. Human rhinovirus infection induces airway epithelial cell production of human beta-defensin 2 both in vitro and in vivo. J. Immunol., 2004, vol. 172, N 7, pp. 4637-4645.
Российская оториноларингология № 2 (75) 2015
23. Reduced tonsillar expression of human ß-defensin 1, 2 and 3 in allergic rhinitis. J. Bogefors [et al.]. FEMSImmunol. Med. Microbiol., 2012, vol. 65, N 3, pp. 431-438.
24. Role of human beta-defensins in HIV infection. A. Weinberg [et al.]. Adv. Dent. Res., 2006, vol. 19, N 1, pp. 42-48.
25. RSV-induced dysregulation of expression of a mucosal beta-defensin augments colonization of the upper airway by nontypeable Haemophilus influenzae. G. McGillivary [et al.]. Cell Microbiol., 2009, vol. 11, N 9, pp. 1399-1408.
26. Susceptibility of nontypeable Haemophilus influenzae to human betadefensins is influenced by lipooligosaccharide acylation. T. D. Starner [et al.]. Infect. Immun., 2002, vol. 70, N 9, pp. 5287-5289.
27. The solution structures of the human ß-defensins lead to a better understanding of the potent bactericidal activity of HBD3 against Staphylococcus aureus. D. J. Schibli [et al.]. J. Biol. Chem., 2002, vol. 277, pp. 8279-8289.
28. Vanhinsbergh L. J., Powe D. G., Jones N. S. Reduction of TLR2 gene expression in allergic and nonallergic rhinitis. Ann. Allergy Asthma Immunol., 2007, vol. 99, N 6, pp. 509-516.
29. Wang G. Structural studies of antimicrobial peptides provide insight into their mechanisms of action Chapter 9, pp. 141-168. Antimicrobial peptides: discovery, design and novel thera-peutic strategies (Series: Advances in molecular and cellular microbiology; 18.) Ed. G. Wang. Chippenham UK, CPI Antony Rowe, CAB International, 2010, 230 p.
30. Zautner A. E. Adenotonsillar disease. Recent Pat. Inflamm. Allergy Drug Discov., 2012, vol. 6, N 2, pp. 121-129.
Tyrnova Elena V. - PhD, senior researcher, Department of Laboratory diagnostic, St. Petersburg Research Institute of Ear, Nose, Throat and Speech. 190013 Russia, St. Petersburg, Bronnitskaya str., 9, ph. 8-812-317-84-43, e-mail: 7101755@mail.ru, tyrnovaev@ mail.ru
Aleshina Galina M. - PhD, senior researcher, Department of General pathology and pathological physiology, Re-search Institute of Experimental Medicine, North-Western Branch RAS. 197376 Russia, St. Petersburg, akad. Pavlov str., 12, ph. 8-812-234-07-64, e-mail: galina_aleshina@mail.ru
Yanov Yuriy K. - Honored Doctor of RF, Corresponding Member of RAS, Professor, Dr.Sci., MD, Di-rector of St. Petersburg Research Institute of Ear, Nose, Throat and Speech. 190013 Russia, St. Petersburg, Bronnitskaya str., 9, ph. 8-812-316-22-56, e-mail: 3162256@ mail.ru
Kokryakov Vladimir N. - Professor, Dr. Sci., PhD, Head of Laboratory of General pathology, Department of General pathology and pathological physiology, Research Institute of Experimental Medicine. 197376 Russia, St. Petersburg, akad. Pavlov str., 12, ph. 8-812234-07-64, e-mail:kokryak@yandex.ru
