CC BY
11УДК 616.211 + 616.315.1:576.8.077.3
ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА БЕТА-ДЕФЕНСИНА-2 ЧЕЛОВЕКА В СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ НОСОГЛОТКИ
Е. В. Тырнова1, Г. М. Алешина2, Ю. К. Янов1, В. Н. Кокряков2 INVESTIGATION OF HUMAN BETA-DEFENSIN-2 GENE EXPRESSION ON THE MUCOSAL SURFACE OF THE NASOPHARYNX
E. V. Tyrnova, G. M. Aleshina, Y. K. Yanov, V. N. Kokryakov
1 ФГБУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт уха, горла, носа и речи»
Минздрава России, Россия
(Директор - засл. врач РФ, член-корр. РАМН, проф. Ю. К. Янов)
2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины» СЗО РАМН,
Санкт-Петербург, Россия
(Директор - засл. деят. науки РФ, акад. РАМН, проф. Г. А. Софронов)
Целью работы явилась оценка экспрессии гена антимикробного пептида бета-дефенсина-2 человека (hBD-2) в эпителии слизистой оболочки носоглотки. Исследован операционный материал от больных гипертрофией аденоидов и миндалин (n = 4), хроническим декомпенсированным тонзиллитом (n = 4), гипертрофией аденоидов (n = 4), заболеваниями носа и околоносовых пазух (n = 16) (полипы носа и верхнечелюстных пазух, гипертрофический ринит, нижние носовые раковины в качестве контроля). Оценку экспрессии матричной РНК (мРНК) hBD-2, а также мРНК бета-2-микроглобулина проводили методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. В слизистой оболочки нижних носовых раковин контрольной группы и полипов верхнечелюстной пазухи экспрессия гена hBD-2 не детектирована. В носовых полипах и нижних носовых раковинах при гипертрофическом рините очень низкая экспрессия выявлена в 25% образцов. Экспрессия гена hBD-2 детектирована во всех образцах небных миндалин и аденоидов, достоверные различия экспрессии мРНК hBD-2 в этих тканях не обнаружены (р > 0,05; тест Манна-Уитни). Можно предположить, что экспрессия hBD-2 непосредственно в областях нарушенной клеточной регуляции может обострять про-грессирование болезни.
Ключевые слова: аденоиды, бета-дефенсин-2 человека, небные миндалины, нижние носовые раковины, полипы носа и верхнечелюстных пазух, полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Библиография: 27 источников.
The aim of the present study was to evaluate the human beta-defensin-2 (hBD-2) gene expression in the surface epithelium of the nasopharyngeal mucosa. Surgical samples from patients with hypertrophic adenoids and tonsils (n = 4), chronic decompensated tonsillitis (n = 4), hypertrophic adenoids (n = 4), and sinonasal disease (n = 16) (nasal polyps, sinus maxillaries polyps, inferior turbinate mucosa of hypertrophic rhinitis, inferior turbinate mucosa as control) were investigated. Total RNA was extracted and analysed by real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for hBD-2, as well as beta-2-microglobulin messenger ribonucleic acid (mRNA). The data obtained were analysed for significant differences using the Mann-Whitney-U test. The expression of hBD-2 gene was not detected in control inferior turbinate and sinus maxillaries polyps. There was only negligible hBD-2 mRNA expression in 25% nasal polyps and hypertrophic inferior turbinate. hBD-2 mRNA was detected in all adenoids and tonsils mucosal tissues samples, at levels that did not differ significantly (р > 0,05; Mann-Whitney). Expression of hBD-2 in proximity to areas of cellular dysregulation may inadvertently exacerbate disease progression.
Key words: adenoids, human beta-defensin-2, inferior turbinate, nasal and sinus maxillaries polyps, realtime polymerase chain reaction, tonsils.
Bibliography: 27 sources.
Быстро накапливаются сведения об обширной роли бета-дефенсинов человека [human beta-defensins (hBDs)] в хемоаттракции, опосредованных врожденным иммунитетом реакциях, участии в ангиогенезе и заживлении ран, которые свидетельствуют, что исследованные биологические эффекты бета-дефенсинов простираются далеко за пределы механизмов их антимикробного действия [2, 7, 23, 27]. Спектр функций, который в настоящее время приписывают регуляции бе-
та-дефенсинов, идентифицирует эти молекулы в качестве важных клеточных регуляторов, экспрессия которых является решающей для надлежащего иммунного надзора [2, 27].
Антимикробная активность hBD-2 показана в отношении клинических изолятов наиболее распространенных респираторных патогенов грамотрицательных Moraxella catarrhalis (штамм 035E) и нетипируемого Haemophilus influenza (штамм 12), грамположительного Streptococcus
pneumoniae (штаммы 3 и 6B) [4]. Прямая антимикробная активность hBD-2 является дозозави-симой и обычно наблюдается в микромолярном диапазоне концентраций [18]. hBD-2 вызывает ультраструктурные повреждения мембран бактерий даже в низких концентрациях (4 и 10 мкг) [4]. Отмечено, что в респираторном эпителии местная продукция hBD-2 и его секреция в пе-рицилиарную жидкость ниже, чем в защитном слое (покрытии) слизистой, вероятно, вследствие более высоких концентраций этих молекул на поверхности слизистой оболочки, защищаемой мукоцилиарной системой [4]. Показано синерги-ческое действие hBD-2 и лизоцима в отношении S. pneumoniae 6B [4]. Эти данные согласуются с представлениями о том, что секретируемые респираторным эпителием слизистых оболочек антимикробные пептиды и белки составляют молекулярную основу противоинфекционной защиты верхних дыхательных путей [2].
Известно, что прямую микробоцидную активность hBD-2 подавляют физиологические концентрации соли (например, 150 ммоль NaCl), повышенные концентрации двухвалентных катионов, присутствие белков плазмы и анионных полисахаридов [2, 7]. Доказано, что микробоцидная активность дефенсинов ограничена обособленными участками с низкими концентрациями соли и сывороточных белков, например, в фагосомах нейтрофилов, на поверхности эпителия и кожи [18, 27]. При оценке антимикробной активности hBD-2 в отношении респираторных патогенов показано, что 100 ммоль соли блокировали эффект ингибирования роста бактерий S. pneumoniae 3 и 6B, но высокие концентрации соли не подавляли активность hBD-2 против NTHi и M. catarrhalis, хотя имело место снижение этого эффекта [4]. Зависимость резистентности к солевой инактивации от концентрации дефенсинов позволила предположить, что молекулы hBD-2 активны in vivo в условиях, когда высокие местные концентрации пептида в жидкости околоклеточных пространств достаточны для преодоления ингибиру-ющего эффекта физиологических концентраций NaCl [4].
Решающей функцией врожденного иммунитета отдельных пептидов иммунной защиты организма считают содействие мобилизации иммунных клеток в очаги инфекции, которое непосредственно вносит вклад в очищение от инфекции. Показано, что hBD-2 в диапазоне концентраций от низких до умеренных физиологических опосредованно способствует хемотаксису иммунных клеток путем индукции продукции хемокинов, таких как MCP-1/CCL2, MIP-^ета / CCL4, RANTES/CCL5, MIP-3 альфа /CCL20, Gro-альфа/CXCL! и IL-8/CXCL8, как иммунными, так и структурными клетками, такими как эпите-
лиальные клетки и десневые фибробласты [7]. В некоторых моделях инфекций (пневмонии) и сепсиса у крыс показано, что hBD-2 способен модулировать иммунные реакции для разрешения индуцированного патогеном (Pseudomonas aeruginosa) воспаления [20]. Хемотаксические эффекты дефенсинов реализуются в условиях физиологических концентраций соли и в присутствии плазменных белков [17].
Формируется представление о том, что секре-тируемые специфическими клетками организма для защиты от внедрения бактерий, грибков или вирусов антимикробные пептиды обладают способностью служить в качестве хемокинов, когда секретируются в наномолярных концентрациях, и в качестве регуляторов клеточной зрелости и фенотипических изменений, когда присутствуют в низких микромолярных концентрациях [27].
Воспаление включает в себя элементы механизмов врожденного иммунитета, расстройство регуляции которых способствует прогрессирующему повреждению тканей и органов, ассоциированному с патогенезом широкого круга хронических воспалительных заболеваний, таких как астма, хронические обструктивные заболевания легких, ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника и атеросклероз. Этиология и молекулярные механизмы этих разнообразных хронических воспалительных заболеваний не вполне ясны. Общим элементом патогенеза хронических воспалительных заболеваний является нарушение регуляции баланса ци-токинов и хемокинов. Сообщают об измененной экспрессии различных пептидов иммунной защиты при иммуноопосредованных хронических воспалительных заболеваниях. Продукция пептида hBD-2 клетками эпителия подавлена при болезни Крона и аллергическом воспалении дыхательных путей, но повышена при псориазе, оказывая про-воспалительный эффект на кератиноциты очага поражения [7, 23, 27]. Патогенетическая терапия должна сочетать подавление усиленных воспалительных реакций без нейтрализации медиаторов иммунитета, необходимых для разрешения инфекций и неоплазий.
Цель исследования. Оценить экспрессию гена бета-дефенсина-2 человека на основе определения мРНК в слизистой оболочке носоглотки больных гипертрофией аденоидов и небных миндалин, хроническим декомпенсированным тонзиллитом, заболеваниями носа и околоносовых пазух.
Пациенты и методы. Материалом для исследования служили образцы слизистой оболочки верхних дыхательных путей, полученные во время планового хирургического вмешательства в условиях общей анестезии. Образцы тканей немедленно помещали в стабилизирующий раствор
RNAlater. Исследованы три вида тканей: аденоиды, небные миндалины, слизистая оболочка носа (нижние носовые раковины, полипы носа и верхнечелюстных пазух).
Материал получен от 28 больных, в том числе:
- небные миндалины больных хроническим декомпенсированным тонзиллитом (3 мужчин, 1 женщина, возраст 18-44 лет), подвергнутых тонзиллэктомии по причине хронического де-компенсированного тонзиллита (мало или существенно увеличенные миндалины, анамнез хронического тонзиллита);
- небные миндалины и аденоиды больных обструктивной гипертрофией аденоидов и гипертрофией небных миндалин (3 мальчика, 1 девочка, возраст 3-11 лет), подвергнутых аденоидэк-томии и тонзиллэктомии по причине увеличения аденоидов и небных миндалин, приводящего к затруднению носового дыхания и развитию секреторного отита;
- аденоиды больных обструктивной гипертрофией аденоидов (2 мальчика, 2 девочки, возраст 6-8 лет), подвергнутых аденоидэктомии по причине увеличения аденоидов, приводящего к назальной обструкции [1];
- носовые полипы больных хроническим по-липозным риносинуситом (3 мужчин, 1 женщина, возраст 24-58 лет), подвергнутых полипэктомии;
- полипы верхнечелюстной пазухи больных хроническим полипозным риносинуситом (4 мужчин, возраст 34-46 лет), подвергнутых по-липэктомии;
- нижние носовые раковины больных с искривлением носовой перегородки и гипертрофическим ринитом (2 мужчин, 2 женщины, возраст 25-49 лет), подвергнутых септум-операции и кон-хотомии;
- в качестве контрольной ткани служили нижние носовые раковины больных с искривлением носовой перегородки (3 мужчин, 1 женщина, возраст 19-26 лет), подвергнутых септум-операции;
- всего 32 образца ткани.
Хирургическое лечение было проведено больным в период вне обострения заболевания.
Обшую РНК выделяли согласно протоколу Gen Elute Mammalian Total RNA Miniprep Kit и On-Column DNase I Digestion Set из поверхностного эпителия исследуемых образцов ткани. Синтез первой цепи комплементарной ДНК (кДНК) из молекул РНК проводили с использованием обратной транскриптазы M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) в присутствии oligo(dT) и dNTPs. Амплификацию проводили с использованием специфических праймеров [12] и реактивов iQ™ SYBR Green Supermix методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией накопления продуктов реакции в режиме реального времени (45 циклов) с помощью детектирующего ампли-фикатора MiniOpticon и программного обеспечения Opticon Monitor™ версия 3.1. Уровень экспрессии мРНК стандартизировали относительно экспрессии гена бета-2-микроглобулина (таблица). Относительную экспрессию генов рассчитывали как 2"Аст, где ДСт - разность пороговых циклов гена-мишени и гена внутреннего контроля (housekeeping gene), и оценивали в условных единицах.
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы GraphPad Prism 5 методами описательной статистики с использованием непараметрических критериев различия (тест Манна-Уитни). Значения p < 0,05 рассматривали как статистически значимые.
Результаты и обсуждение. Индуцибельная экспрессия гена бета-дефенсина-2 человека в исследованных образцах варьировала в зависимости от типа ткани и нозологической формы (рисунок). В покровном эпителии слизистой оболочки нижних носовых раковин контрольной группы и полипов верхнечелюстной пазухи экспрессия hBD-2 не детектирована. В носовых полипах и нижних носовых раковинах при гипертрофическом рините очень низкая экспрессия выявлена в 25% образцов. Экспрессия гена hBD-2 детектирована во всех случаях в тканях с высоким бактериальным обсеменением (небные миндалины при хроническом декомпенсированном тонзиллите и гипертрофии небных миндалин, гипертрофиро-
Показатель Последовательность оснований
Бета-дефенсин-2 человека: sense antisense 5'TGATGCCTCTTCCAGGTGTTT3' 5' GGATGACATATGGCTCCACTCTT 3'
Бета-2-микроглобулин человека: sense antisense 5' CCAGCAGAGAATGGAAAGTC 3' 5' GATGCTGCTTACATGTCTCG 3'
Т а б л и ц а
Последовательность праймеров, использованных для ПЦР амплификации
ÍS
В а
й 2,0-1 X
1,5
Рис. Относительная экспрессия мРНК бета-дефен-сина-2 человека в поверхностном эпителии нижних носовых раковин, аденоидов, небных миндалин (гипертрофия небных миндалин - ГНМ, хронический де-компенсированный тонзиллит - ХТ), полипах носа и верхнечелюстных пазух.
ванные аденоиды). Статистически достоверные различия экспрессии мРНК hBD-2 в ткани аденоидов, небных миндалин при хроническом деком-пенсированном тонзиллите и гипертрофии небных миндалин не обнаружены.
Хирургическое лечение проводили в стадии ремиссии заболевания. Полученные данные свидетельствуют о том, что во время хирургического вмешательства нормальный бактериальный триггерный (пусковой) механизм в слизистой оболочке носа и околоносовых пазух недостаточен для стимуляции экспрессии и продукции hBD-2 или, что другие защитные механизмы принимают на себя эту задачу [12]. Вероятно, интенсивное механическое очищение (клиренс) носа способствует уменьшению времени контакта с микроорганизмами окружающей среды. Это может означать, что индукция hBD-2 нуждается в более интенсивном и продолжительном триггер-ном действии микроорганизмов.
Обычно hBD-2 экспрессируется на низких уровнях в физиологических условиях и индуцируется в ответ на микробные и провоспалитель-ные стимулы [2, 27]. Базальные уровни бета-де-фенсинов присутствуют в эпителиальных клетках при отсутствии индуцирующих стимулов [23]. Низкие базальные уровни hBD-2 могут играть роль в поддержании невоспалительных окружающих условий до разворачивания иммунных реакций, возможно, благодаря нейтрализации эффектов непрерывной низкоуровневой экспо-
зиции комменсальных и патогенных микробных антигенов [23].
Индуцибельный характер экспрессии hBD-2 в эпителии верхних дыхательных путей подтвержден экспериментально. Показано, что введение бактериальных лизатов индуцирует выработку hBD-2 в слизистой оболочке носа [13]. Заражение риновирусом человека индуцирует эпителиальную экспрессию hBD-2 как in vitro, так и in vivo. Заражение первичной культуры устойчивых линий эпителиальных клеток человека, экспрессиру-ющих промотор hBD-2, некоторыми серотипами риновируса человека индуцировало экспрессию гена и синтез пептида hBD-2, индукция hBD-2 была зависима от вирусной репликации, но независимой от эпителиальной продукции IL-1. Заражение здоровых людей риновирусом HRV-16 индуцировало экспрессию мРНК hBD-2 в соскобах эпителия носа, повышение мРНК коррелировало с титром вируса и повышенными уровнями пептида hBD-2 в носовом лаваже [21].
В культурах первичных эпителиальных клеток околоносовых пазух контрольных лиц и подвергнутых хирургическому вмешательству на пазухах больных хроническим риносинуситом с носовыми полипами стимуляция агонистами (веществами, обладающими сродством к рецептору) TLR9 вызывала 1,5-9-кратное повышение экспрессии мРНК hBD-2 и IL-8 (ПЦР) [24]. В культуре первичных клеток эпителия средней носовой раковины больных хроническим риносину-ситом комбинация экстракта сигаретного дыма и двуспиральной РНК индуцировала преувеличенную (1120 против 12,5; p = 0,05) экспрессию мРНК hBD-2 по сравнению со здоровым контролем [6]. В то же время компонент табачного дыма акролеин дозозависимым способом угнетает экспрессию мРНК и продукцию пептидов hBD-2 и особенно IL-8 в культуре первичных эпителиальных клеток околоносовых пазух больных хроническим риносинуситом [26].
В культуре эпителиальных клеток носа, полученных из носовых полипов и нижних носовых раковин, Pseudomonas aeruginosa индуцировал время- и дозозависимую экспрессию гена hBD-2 (полуколичественная ПЦР). Нестимулированные эпителиальные клетки носа были способны экс-прессировать мРНК hBD-2 конститутивно, тогда как в фибробластах носа экспрессия мРНК hBD-2 отсутствовала. Экспрессия гена hBD-2 в носовых полипах была ниже, чем в носовых раковинах. Предложена гипотеза, согласно которой hBD-2, вероятно, опосредует особую, раннюю стартовую стратегию антимикробной защиты слизистой оболочки носа. Персистенцию Pseudomonas aeruginosa при хроническом синусите связывают с ослабленной экспрессией гена hBD-2 в слизистой оболочке носа [11].
Стимуляция экспрессии гена hBD-2 показана в отношении как микробных факторов, так и провоспалительных цитокинов [10]. В образцах эпителия нижних носовых раковин, полученных путем прямой браш-биопсии у здоровых лиц, экспрессия мРНК hBD-2 относительно экспрессии гена внутреннего контроля была довольно низкой (медиана 18,1%), кратковременная вариабельность (интервал 1 неделя) также была низкой (меньше 15%). У больных муковисцидозом экспрессия мРНК hBD-2 в носовом эпителии была сопоставима со здоровыми лицами (медиана 5,8%), постоянно протекающее (продолжающееся) воспаление при муковисцидозе не связано с повышенным синтезом hBD-2. Высказано предположение о том, что, если эпителий хронически подвергается экспозиции (воздействию) воспалительных стимулов, он теряет способность к стимулирующей регуляции синтеза дефенсинов. Кроме того, воспалительные стимулы могут быть не единственными индукторами экспрессии де-фенсинов [10]. При простуде экспрессия мРНК hBD-2 резко возрастала (медиана 71,4%) и снижалась до нормального уровня через 3 недели [10].
ВИЧ-инфекция не влияет на экспрессию hBD-2 в эпителиальных клетках носа, уровни мРНК hBD-2 в носовом эпителии достоверно не различались между ВИЧ-инфицированными и не-инфицированными больными [9]. В эпителиальных клетках носа ВИЧ-негативных больных, страдающих респираторными инфекциями, уровни бета-дефенсинов были снижены [9].
При аллергическом рините показана сниженная тонзиллярная экспрессия бета-дефенсинов человека 1, 2 и 3 (ПЦР и иммуногистохимия). hBD-1-3 присутствовали в ткани миндалин, включая эпителиальные, CD4(+)-, CD8( + )- и CD19(+)-клетки. Экспрессия hBD-1-3 была сниженной в аллергических миндалинах по сравнению со здоровыми. Культивирование эпителиальных клеток дыхательных путей в присутствии аллергических медиаторов Ш-4, Ш-5 и гистамина снижало секрецию бета-дефенсинов [иммуноферментный анализ (ИФА)], в культивированных миндалинах и лимфоцитах эти эффекты отсутствовали. Сниженная тонзиллярная экспрессия hBD-1-3 и сниженная экспрессия hBD-1-3 в эпителиальных клетках дыхательных путей в присутствии аллергических медиаторов свидетельствуют об ослабленной антимикробной защите и повышенной восприимчивости к инфекциям дыхательных путей при аллергическом рините [22].
В образцах браш-биопсии клеток слизистой оболочки из нижнего носового хода детей с гипертрофией аденоидных вегетаций 2-3-й степени в половине случаев (54,5%) наблюдалось снижение экспрессии противомикробного пептида hBD-2 в 8,3 раза по сравнению со здоровы-
ми детьми (ПЦР в реальном времени). При этом показатель экспрессии гена противомикробного пептида hBD-2 у 81,5% детей с гипертрофией аденоидных вегетаций 2-3-й степени и сопутствующим аллергическим ринитом не отличался от показателя здоровых детей, а у 18,5% пациентов отмечалась гиперэкспрессия гена hBD-2. Сделано заключение о выявленном дефиците врожденных механизмов защиты от патогенов на уровне слизистой оболочки полости носа у 54,5% пациентов с гипертрофией аденоидных вегетаций [3].
Показана выработка hBD-2 слизистой оболочкой верхнечелюстных пазух. Иммуногисто-химически определена локализация пептида hBD-2 в цитоплазме эпителиальных клеток нормальной верхнечелюстной пазухи больных без объективных признаков, субъективных симптомов или рентгенологических данных заболевания пазух. Пептид hBD-2 чаще выявляется (вестерн блот) в промывной жидкости (лаваже) верхнечелюстных пазух у больных с воспаленными пазухами (67%), чем в нормальном контроле (10%) [19]. Повышенный уровень экспрессии hBD-2 при острых инфекциях позволил рассматривать его в качестве одного из острофазовых белков [5].
Ротовая полость представляет собой особую окружающую среду, в которой имеет место непрерывное взаимодействие между бактериями, грибками и вирусами и эпителиальным барьером. hBD2 постоянно экспрессирован в слизистой ротовой полости здоровых людей [16]. В клетках эпителия ротовой полости hBD-2 индуцируют бактерии-комменсалы, полагают, что тем самым сообщество бактерий-комменсалов «тренирует» систему механизмов врожденного иммунитета эпителия ротовой полости [8].
Количественно определяли экспрессию мРНК hBD-2 в небных миндалинах контроля и подвергнутых тонзиллэктомии больных рецидивирующим острым тонзиллитом. Экспрессия мРНК hBD-2 заметно варьировала у разных пациентов, но статистически достоверные различия отсутствовали [25]. Провокационные пробы со Streptococcus pyogenes на модели эпителия миндалин in vitro (клетки HaCaT) и поддерживаемых in vitro эксплантатов миндалин, иссеченных у контрольных пациентов, и подвергнутых тон-зиллэктомии больных рецидивирующим острым тонзиллитом, показали в клетках эпителия миндалин HaCaT ослабленную экспрессию мРНК hBD-2 (р < 0,05), согласующуюся со сниженной защитой эпителиального барьера. В эксплантатах миндалин наблюдали подобную тенденцию [25].
В ткани небных миндалин определяли концентрацию пептида hBD-2 (ИФА) при различных патологических состояниях: гипертрофия миндалин, острый тонзиллит, хронический тонзиллит, паратонзиллярный абсцесс. Статистически
достоверные различия концентраций hBD2 между четырьмя группами не отмечены. Иммунофлюоресцентное окрашивание показало совместную локализацию hBD-2 и стрептококка группы А, тем не менее наличие hBD-2 в миндалинах не предотвращает хронизацию тонзиллита [15]. В структурах паратонзиллярного абсцесса методом иммуногистохимии детектирована достоверно усиленная экспрессия пептида hBD-2 по сравнению с контрольными образцами [14].
Заключение
Предполагают, что осуществляемый посредством функционирования антимикробных пептидов эпителиального происхождения иммунный надзор поддерживает естественную микробиоту в стабильном состоянии в различных физиологических нишах, таких как кожа, кишечник, ротовая полость [27]. Варьирующие, в том числе наследственные, изменения уровня экспрессии гена DEFB4, кодирующего дефенсин hBD-2, могут приводить к различной восприимчивости к инфекциям и (или) прогрессированию
инфекционных заболеваний [17]. Полагают, что экспрессия бета-дефенсинов непосредственно в областях нарушенной клеточной регуляции может обострять прогрессирование болезни [27]. Экспрессируемые на низких уровнях дефенсины могут быть вовлечены в иммунные реакции разрешения воспаления [23].
Экспрессия мРНК индуцибельного hBD-2 в покровном эпителии тканей с высоким бактериальным обсеменением (небные миндалины при хроническом декомпенсированном тонзиллите и гипертрофии небных миндалин, гипертрофированные аденоиды) может представлять собой реакцию на комменсальные и патогенные микроорганизмы в очаге проникновения патогена вследствие провоспалительных реакций, включающих хемоаттракцию макрофагов и других иммунных клеток, что приводит к поддержанию хронического воспаления.
Работа частично поддержана грантами РФФИ № 12-04-01498 и № 12-04-01573.
ЛИТЕРАТУРА
1. Дроздова М. В., Преображенская Ю. С., Тырнова Е. В. Экссудативный средний отит у детей с хроническим лимфопролиферативным синдромом // Рос. оторинолар. - 2011. - № 4. - С. 62-68.
2. Кокряков В. Н. Очерки о врожденном иммунитете. - СПб.: Наука, 2006. - 261 с.
3. Роль компонентов врожденного иммунитета в защите слизистой оболочки полости носа в норме и при гипертрофии аденоидных вегетаций / Л. В. Ковальчук [и др.] // Вестн. оторинолар. - 2011. - № 6. - С. 73-75.
4. Antimicrobial activity of innate immune molecules against Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis and nontypeable Haemophilus influenza / H. Y. Lee [et al.] // BMC Infect. Dis. - 2004. - Vol. 5. - P. 4-12.
5. Antimicrobial peptides: properties and applicability / W. V. Hof [et al.] // Biol. Chem. - 2001. - Vol. 382. - P. 597619.
6. Cigarette smoke combined with Toll-like receptor 3 signaling triggers exaggerated epithelial re-gulated upon activation, normal T-cell expressed and secreted/CCL5 expression in chronic rhi-nosinusitis / M. Yamin [et al.] // J. Allergy Clin. Immunol. - 2008. - Vol. 122, N 6. - P. 1145-1153.
7. Choi K.-Y., Chow L. N. Y., Mookherjee N. Cationic Host Defence Peptides: Multifaceted Role in Immune Modulation and Inflammation // J. Innate Immun. - 2012. - Vol. 4. - P. 361-370.
8. Dale B. A., Fredericks L. P. Antimicrobial peptides in the oral environment: expression and function in health and disease // Curr. Issues Mol. Biol. - 2005. - Vol. 7, N 2. - P. 119-133.
9. Expression of beta-defensin 1 and 2 in nasal epithelial cells and alveolar macrophages from HIV-infected patients / S. Alp [et al.] // Eur. J. Med. Res. - 2005. - Vol. 10, N 1. - P. 1-6.
10. Expression of human beta defensin (HBD-1 and HBD-2) mRNA in nasal epithelia of adult cystic fibrosis patients, healthy individuals, and individuals with acute cold / N. Dauletbaev [et al.] // Respiration. - 2002. - Vol. 69, N 1. -P. 46-51.
11. hBD-2 gene expression in nasal mucosa / J. E. Meyer [et al.] // Laryngorhinootologie. - 2000. - Vol. 79, N 7. - P. 400403.
12. Human beta-defensins and toll-like receptors in the upper airway / S. Claeys [et al.] // Allergy. - 2003. - Vol. 58, N 8. - P. 748-753.
13. Human p-defensin-2 induction in nasal mucosa after administration of bacterial lysates / E. Guaní-Guerra [et al.] // Arch. Med. Res. - 2011. - Vol. 42, N 3. - P. 189-194.
14. Human beta-defensins-at the front line of the peritonsillar abscess / M. Schwaab [et al.] // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2009. - Vol. 28, N 7. - P. 745-755.
15. Human beta-defensins in different states of diseases of the tonsilla palatine / M. Schwaab [et al.] // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. - 2010. - Vol. 267, N 5. - P. 821-830.
16. Human p-defensins suppress human immunodeficiency virus infection: potential role in mucosal protection / L. Sun [et al.] // J. Virol. - 2005. - Vol. 79. - P. 14318-14329.
17. Klotman M. E., Chang T. L. Defensins in innate antiviral immunity // www.nature.com/reviews/immunol. - 2006. -Vol. 6. - P. 447-456.
18. Multiple roles of antimicrobial defensins, cathelicidins, and eosinophil-derived neurotoxin in host defense / D. Yang [et al.] // Annu. Rev. Immunol. - 2004. - Vol. 22. - P. 181-215.
Научные статьи
19. Production of beta-defensin antimicrobial peptides by maxillary sinus mucosa / D. G. Carothers [et al.] // Am. J. Rhinol. - 2001. - Vol. 15, N 3. - P. 175-179.
20. Protection against Pseudomonas aeruginosa pneumonia and sepsis-induced lung injury by overexpression of beta-defensin-2 in rats / Q. Shu [et al.] // Shock. - 2006. - Vol. 26. - P. 365-371.
21. Proud D., Sanders S. P., Wiehler S. Human rhinovirus infection induces airway epithelial cell production of human beta-defensin 2 both in vitro and in vivo // J. Immunol. - 2004. - Vol. 172, N 7. - P. 4637-4645.
22. Reduced tonsillar expression of human p-defensin 1, 2 and 3 in allergic rhinitis / J. Bogefors [et al.] // FEMS Immunol. Med. Microbiol. - 2012. - Vol. 65, N 3. - P. 431-438.
23. Semple F., Dorin J. R. P-Defensins: Multifunctional modulators of infection, inflammation and more? // J. Innate Immun. - 2012. - Vol. 4. - P. 337-348.
24. Sinonasal epithelial cell expression of toll-like receptor 9 is decreased in chronic rhinosinusitis with polyps / M. Jr. Ramanathan [et al.] // Am. J. Rhinol. - 2007. - Vol. 21, N 1. - P. 110-116.
25. Streptococcus pyogenes infection of tonsil explants is associated with a human p-defensin 1 response from control but not recurrent acute tonsillitis patients / S. Bell [et al.] // Mol. Oral Microbiol. - 2012. - Vol. 27, N 3. - P. 160-171.
26. The cigarette smoke component acrolein inhibits expression of the innate immune components IL-8 and human beta-defensin 2 by sinonasal epithelial cells / W. K. Lee [et al.] // Am. J. Rhinol. - 2007. - Vol. 21, N 6. - P. 658-663.
27. The Yin and Yang of human beta-defensins in health and disease / A. Weinberg [et al.] // www.frontiersin.org Frontiers in Chemoattractants. - 2012. - Vol. 3. - Article 294. - 9 p.
Тырнова Елена Валентиновна - канд. мед. наук, ст. н. с. лабораторно-диагностического отдела Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи. 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9, тел.: 8-812-317-84-43, e-mail: 7101755@mail.ru, tyrnovaev@mail.ru
Алешина Галина Матвеевна - канд. биол. наук, ст. н. с. отдела общей патологии и патологической физиологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. 197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. И. П. Павлова, д. 12; тел.: 8-812-234-07-64, e-mail: galina_aleshina@mail.ru
Янов Юрий Константинович - засл. врач РФ, член-корр. РАМН, докт. мед. наук, профессор, директор Санкт-Петербургского НИИ уха, горла, носа и речи. 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9; тел.: 8-812-316-22-56, e-mail: 3162256@mail.ru
Кокряков Владимир Николаевич - докт. биол. наук, профессор, руководитель лаборатории общей патологии отдела общей патологии и патологической физиологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. 197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. И. П. Павлова, д. 12; тел.: 8-812-234-07-64, e-mail: kokryak@yandex.ru
УДК 616.28-089.5
ПРОВОДНИКОВОЕ ОБЕЗБОЛИВАНИЕ И ЛЕЧЕБНЫЕ БЛОКАДЫ В ОТИАТРИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
С. В. Филимонов, В. Г. Бородулин
BLOCK REGIONAL ANAESTHESIA AND THERAPEUTIC BLOCKADES IN OTOLOGICAL PRACTICE
S. V. Filimonov, V. G. Borodulin
ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет
им. акад. И. П. Павлова», Россия
(Зав. каф. оториноларингологии - проф. С. А. Карпищенко)
В статье описаны показания и существующие методики блокад области уха. Рассматриваются методы обезболивания оперативных вмешательств на ухе. Обсуждаются преимущества и недостатки отдельных блокад. Авторы приходят к выводу, что меатотимпанальная блокада является эффективной и наименее травматичной методикой введения лекарственных веществ в среднее ухо.
Ключевые слова: местная анестезия, меатотимпанальная блокада, проводниковая анестезия уха, транстимпанальное введение.
Библиография: 10 источников.
This article is dedicated to the indications and the existing methods of blockades in region of ear. The methods of anaesthesia for ear surgery are considered. The advantages and the disadvantages of the certain blockades are described. The authors" observations make them to decide the meatotymanic blockade is effective and less traumatic method of drug introduction into the middle ear.
Key words: local anesthesia, meatotymanic blockade, ear block regional anaesthesia, transtympanic injection.
Bibliography: 10 sources.
