CC BY
37
DOI: 10.37489/0235-2990-2019-64-11-12-31-34
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Изучение эффективности Ридостина® при экспериментальной форме тяжёлого острого респираторного синдрома
С. Я. ЛОГИНОВА', В .Н. ЩУКИНА', *С. В. БОРИСЕВИЧ', Р. А. ХАМИТОВ2, В. А. МАКСИМОВ'
1 ФГБУ 48 ЦНИИ МО РФ Федеральное государственное бюджетное учреждение «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации, Сергиев Посад
2 ООО «Международный биотехнологический центр «Генериум»
Studying the Effectiveness of Ridostin® in the Experimental Form of Severe Acute Respiratory Syndrome
S. YA. LOGINOVA1, V. N. SHCHUKINA1, *S. V. BORISEVICH1, R. A. HAMITOV2, V. A. MAKSIMOV1
1 48 Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad
2 OOO International Biotechnology Center «Generium», Moscow
Проведены исследования по изучению эффективности высокомолекулярного индуктора интерферона Ридостина® в отношении экспериментальной формы тяжёлого острого респираторного синдрома у сирийских хомяков. Показано, что Ридо-стин® эффективен при применении его по профилактической схеме и схеме экстренной профилактики. Коэффициент лечебного действия составил 47,5 и 55,0%, соответственно. При этом был отмечен статистически высокий уровень достоверных отличий тяжести течения заболевания у животных, принимавших препарат по схеме экстренной профилактики и контрольных животных (р<0,05).
Ключевые слова: Pudocmm®, тяжёлый острый респираторный синдром, профилактика, коэффициент лечебного действия.
Studies have been carried out on the effectiveness of the high molecular weight interferon inducer Ridostin® in relation to the experimental form of severe acute respiratory syndrome in Syrian hamsters. It is shown that Ridostin® is effective when used according to the prophylaxis regimen and post-exposure prophylaxis regimen. The coefficient of therapeutic effect was 47.5 and 55.0%, respectively. At the same time, there was a statistically high level of significant differences in the severity of the disease in animals treated with the medication according to the post-exposure prophylaxis regimen and control animals (P<0.05).
Keywords: Ridostin®, severe acute respiratory syndrome, prevention, coefficient of therapeutic action.
Введение
В ноябре 2002 г. в Южном Китае возникла вспышка тяжёлого острого респираторного синдрома (ТОРС), которая затронула 30 стран [1—5]. В последние годы вымвили новыш коронавирус — возбудитель заболевания ближневосточного респираторного синдрома (MERS) [6—7]. Актуальность поиска эффективных средств защиты в отношении этого заболевания несомненна.
Цель работы — оценка противовирусной эффективности высокомолекулярного индуктора интерферона Ридостина® в отношении возбудителя тяжёлого острого респираторного синдрома.
Материал и методы
Вирусы. В работе использовали вирус тяжёлого острого респираторного синдрома, штамм СоД, выщеленныш специалистами ВЦ НИИМ из носоглоточного смыва больного ТОРС из Благовещенска [7]. Хранился при температуре минус (70±10,0)°С в лиофилизированном виде.
© Коллектив авторов, 2019
*Адрес для корреспонденции: 141306, г. Сергиев Посад-6. 48 ЦНИИ
Культура клеток. Использована перевиваемая культура клеток почек зелёных мартышек — Vero E6. В качестве среды поддержания использовали полусинтетическую среду (ПС-4) на растворе Хенкса, содержащую 2% сыворотки крупного рогатого скота, соответственно. Перед применением препараты растворяли в физиологическом растворе. ИИФ вводили внутримышечно по схемам профилактики, лечебно-профилактической, лечебной.
Исследуемый препарат. Ридостин® (инъекционный) — дрожжевая дс РНК, производства ЗАО «ВЕКТОР-МЕДИКА», Кольцово, Россия, серия 51204.
Лабораторные животные. Использованы сирийские хомяки массой 40—60 г. Животных заражали перорально в дозе 5,0gB01E. Сразу после инфицирования животным всех групп вводили линкомицин в дозе 103 ед. внутримышечно [8]. Наблюдение за инфицированными животными проводили в течение 21 сут., контролировали клинические признаки заболевания, гибель животных. На 2-, 4-, 6- и 10-е сутки у инфицированных животных тотально отбирали кровь для проведения гематологических и биохимических исследований.
Токсичность исследуемых препаратов оценивали на не-инфицированных сирийских хомяках.
Оценка противовирусной эффективности Ридостина® осуществлена в соответствии с требованиями Фармакологического государственного комитета РФ [9].
Основными критериями оценки эффективности являлись показатели снижения уровня накопления вируса в лёгких (A lg) и уровня лейкоцитоза, нормализация биохимичес-
ких показателей крови (АлАТ, АсАТ, КФК, ЛДГ, мочевины и креатинина) и лейкограммы [10].
Результаты исследования
Эффективность высокомолекулярного индуктора интерферона Ридостина® оценивали по комплексу клинико-вирусологических показателей (биохимических, вирусологических, гематологических).
Данные вирусологического обследования сирийских хомяков, инфицированных перо-рально вирусом ТОРС, штамм СоД в дозе 5,0 ^ БОЕ и получавших внутримышечно Ридостин® в дозе 5 мг/кг, показывают, что препарат эффективно подавляет репродукцию вируса в лёгких на пике инфекции (4-е сутки после инфицирования сирийских хомяков) при применении по профилактической схеме. Коэффициент инги-бирования вируса ТОРС в ткани лёгких при введении препарата составил 99,2%.
Патологоанатомические исследования показали, что применение Ридостина® снижало тяжесть поражения лёгких. Обширность кровоизлияний и отёчность ткани лёгкого на 4-е и 6-е сутки была выражена в меньшей степени, чем у животных, инфицированных вирусом ТОРС. На 10-е сутки после инфицирования у животных, которым вводили внутримышечно препарат, отёки в лёгких отсутствовали, точечные кровоизлияния отмечали в единичных случаях в области лёгких, расположенной ближе к входам в бронхи.
Среди методов, дающих возможность объективной оценки течения патологического процесса в организме, видное место занимает лабораторное исследование крови.
Была проведена оценка влияния исследуемого препарата на динамику изменения суммарного пула лейкоцитов и лейкоцитарной формулы крови сирийских хомяков, перорально инфицированных вирусом ТОРС.
У инфицированных животных на протяжении всего срока наблюдения выявлен повышенный уровень лейкоцитов (12,0—12,8 х 103/мкл) по сравнению с интактными животными (6,0—6,6х103/мкл). Введение Ридостина® сопровождалось небольшим лейкоцитозом только на 2- и 4-е сутки наблюдения (8,0—8,4х 103/мкл). Следует отметить, что по степени выраженности лейкоцитоза можно судить о реактивности организма при воспалительных процессах. Выраженный лейкоцитоз свидетельствует, как правило, о хорошей реактивной способности организма. Однако и при значительных лейкоцитозах не всегда прогноз может быть благоприятным, так как состояние жизненно важных органов и систем может быть неудовлетворительным. Поэтому наряду с определением количества лейкоцитов уделяют большое внимание соотношению различных групп клеток в лейкоцитарном пуле — лейкоцитарной
формуле крови. Для крови здоровых животных характерно наличие в ней более или менее зрелых форменных элементов. Сдвиг влево, когда в крови появляются молодые формы нейтрофилов, свидетельствует о неблагоприятных изменениях. Таким образом, анализ лейкограммы является ценнейшим методом клинического исследования. В лейкограм-ме нередко обнаруживаются такие изменения, которые возникают задолго до проявления клинических признаков заболевания и указывают на серьёзные сдвиги в течении развивающегося патологического процесса в организме.
Анализ лейкограммы крови сирийских хомяков, перорально инфицированных вирусом ТОРС, показывает, что с развитием инфекции у животных наблюдается относительный нейтро-филез (причём, происходит увеличение как сег-ментоядерных, так и палочкоядерных форм).
Отмечено появление на пике инфекции молодых форм нейтрофилов. Индекс сдвига (ИС) для интактных сирийских хомяков составил 0,11, для инфицированных (на пике инфекции) — 0,24. Таким образом, происходит сдвиг лейко-граммы влево, что характерно для многих тяжёлых инфекций, когда увеличение количества нейтрофилов происходит в основном за счёт увеличения количества палочкоядерных и юных форм. Кроме того, отмечали с 4-х суток снижение относительного количества лимфоцитов.
При применении Ридостина® по профилактической схеме было отмечено угнетение грану-лопоэза и увеличение количества лимфоцитов (ИС=0,38) с нарастанием лимфоцитоза к 10-м суткам наблюдения. При экстренной профилактике ТОРС у сирийских хомяков высокомолекулярными ИИФ отмечена активизация грануло-цитарной фракции лейкоцитов, при этом значение ИС составляло 0,82—1,43 (на 4-е сутки после инфицирования). На 6—10 сутки этот показатель снизился, но был достоверно выше значения у группы интактных животных.
Исследования по изучению влияния Ридостина® на биохимические показатели крови инфицированных сирийских хомяков показали, что наибольшую активность в процессе нормализации показателей КФК выявил препарат, вводимый по профилактической схеме (табл. 1). У животных, которым вводили Ридостин®, уровень КФК оставался достоверно ниже, чем у инфицированных животных, не получавших препарат. На 6-й день после заражения у группы животных, получавших Ридостин® по профилактической схеме, этот показатель соответствовал норме.
Уровень активности ЛДГ был значительно ниже по сравнению с группой контроля дозы вируса во время всего срока наблюдения.
Применение Ридостина® по профилактической схеме снижает активность аминотрансфераз
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Таблица 1. Влияние Ридостина® на динамику изменения активности креатинфосфокиназы и лактатдегидро-геназы в сыворотке крови сирийских хомяков, перорально инфицированных вирусом ТОРС, штамм СоД
Схема введения препарата Показатель Значение показателей после инфицирования
2-е сутки 4-е сутки 6-е сутки 10-е сутки
-24, -1 Креатинфосфокиназа, Х+стх, мккат/л 0,64+0,04 0,70+0,02 0,50+0,04 0,55+0,05
+2,+72, + 144,+216 0,86+0,02 0,92+0,02 0,59+0,03 0,56+0,03
Контроль (инфицированные) 1,27+0,04 2,12+0,03 1,16+0,05 1,22+0,02
Контроль (интактные) 0,44+0,03 0,39+0,02 0,48+0,01 0,50+0,04
-24, -1 Лактатдегидрогеназа, Х+стх ,МЕ/л 652+12 501+7 472+14 512+6
+2,+72, + 144,+216 574+14 512+8 491+11 607+11
Контроль (инфицированные) 1915+56 1447+54 1805+55 1803+15
Контроль (интактные) 405+32 402+15 409+13 399+18
Таблица 2. Влияние Ридостина® на динамику изменения активности аланинаминотрансферазы и аспартат-аминотрансферазы в сыворотке крови сирийских хомяков, перорально инфицированных вирусом ТОРС, штамм СоД
Схема введения препарата Показатель Значение показателей после инфицирования
2-е сутки 4-е сутки 6-е сутки 10-е сутки
-24, —1 Аланинаминотрансфераза, Х+стх, мкМ/(ч.л) 0,91+0,03 0,80+0,04 0,72+0,04 0,82+0,06
+2,+72, + 144,+216 1,02+0,04 0,82+0,06 0,88+0,02 0,80+0,04
Контроль (инфицированные) 1,44+0,18 2,53+0,05 2,01+0,03 2,32+0,04
Контроль (интактные) 0,65+0,08 0,66+0,08 0,69+0,05 0,70+0,02
—24, —1 Аспартатаминотрансфераза, Х+стх, мкМ/(ч.л) 0,88+0,04 0,72+0,04 1,01+0,03 1,12+0,04
+2,+72, + 144,+216 0,86+0,02 0,79+0,03 1,12+0,04 1,25+0,02
Контроль (инфицированные) 2,14+0,09 2,62+0,04 1,85+0,06 2,23+0,07
Контроль (интактные) 0,71+0,09 0,73+0,09 0,71+0,06 0,74+0,02
Таблица 3. Влияние Ридостина® на динамику изменения креатинина и мочевины в сыворотке крови сирийских хомяков, перорально инфицированных вирусом ТОРС, штамм СоД
Схема введения препарата Показатель Значение показателей после инфицирования
2-е сутки 4-е сутки 6-е сутки 10-е сутки
-24, -1 Креатинин, Х+стх, мкМ/л 175,1+1,1 162,4+0,6 152,4+0,6 180,1+0,6
+2,+72, + 144,+216 176,3+0,7 156,8+0,8 148,8+0,4 180,4+0,4
Контроль (инфицированные) 210,0+1,0 255,7+1,0 247,9+0,3 213,5+0,5
Контроль (интактные) 181,2+0,8 184,5+0,4 180,2+0,2 180,5+0,5
-24, -1 Мочевина, Х+стх, мМ/л 4,3+0,3 7,2+0,4 6,8+0,4 7,0+0,2
+2,+72, + 144,+216 5,8+0,4 8,1+0,4 7,4+0,2 7,0+0,4
Контроль (инфицированные) 8,5+0,2 9,1+0,6 10,8+0,3 11,8+0,4
Контроль (интактные) 5,9+0,1 5,4+0,3 5,6+0,1 5,7+0,1
более чем в 3 раза по сравнению с группой животных, не получавших лечение (табл. 2). Уровень АлАТ после повышения на 2-е сутки уже на 4—6 сут. не отличался от уровня этого показателя у интакт-ных животных. На пике инфекции (4-е сутки) коэффициент де Ритиса у леченых Ридостином® сирийских хомяков составлял 0,90—0,96. Таким образом, препарат эффективно противодействовал поражению гепатоцитов.
При применении Ридостина® по всем изученным схемам не отмечено сколько-нибудь значительного увеличения концентрации креатинина в сыворотке крови сирийских хомяков по сравнению с интактными животными. На пике инфекции уровень его был в 1,5 раза ниже, чем у инфицированных животных, не получавших препарат.
Применение профилактической схемы Ридос-тина® также способствовало нормализации уровня мочевины в крови экспериментальных животных на 6—10 сутки после инфицирования, в то же время по схеме экстренной профилактики — уровень мочевины оставался достоверно выше по сравнению с интактными животными.
Для анализа влияния исследуемого препарата на тяжесть течения заболевания ТОРС у экспериментальных животных провели рейтинговую оценку степени выраженности следующих показателей: уровень накопления вируса в лёгких; степень патологоанатомических изменений внутренних органов; количество лейкоцитов; изменения в лейкоцитарной формуле крови; изменения ферментативной активности КФК, ЛДГ, АсАТ, АлАТ; изменение концентрации мочевины и креатинина. Максимальная выраженность каждого из указанных признаков на пике инфекции (4—6 сутки) оценивалась в 4 балла.
По указанным признакам рассчитывали значения критерия знаков и соответствующие уровни значимости влияния исследуемых препаратов на течение инфекционного процесса в течение всего срока наблюдения (табл. 4).
Высокомолекулярный индуктор интерферона Ридостин® эффективно снижает тяжесть заболевания у сирийских хомяков, перорально инфицированных вирусом ТОРС в дозе 5,0 ^ БОЕ, при введении его по профилактической
Таблица 4. Влияние Ридостина® на тяжесть течения инфекционного процесса у сирийских хомяков, перо-рально инфицированных вирусом ТОРС, штамм СоД
Препарат Схема Анализ тяжести течения инфекционного процесса
применения на пике инфекции в течении всего срока наблюдения
препарата сумма баллов индекс тяжести заболевания коэффициент лечебного действия,% значение критерия знаков уровень значимости лечебной эффективности препарата, р
Ридостин®, 5мг/кг -24ч, -1ч 21 0,525 47,5 7/10 доо
+2,+72,+144,+216 ч 18 0,450 55,0 9/10 0,05
Контроль (инфицированные) — 40 1,000 — 0/10 —
Примечание. доо - достоверные отличия отсутствуют
схеме и схеме экстренной профилактики. Коэффициент лечебного действия составил 47,5 и 55,0%, соответственно.
При этом был отмечен статистически высокий уровень достоверных отличий тяжести тече-
ния заболевания у животных, принимавших препарат по схеме экстренной профилактики и контрольных животных (^<0,05).
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
ЛИТЕРАТУРА
1. Онищенко Г.Г., Васильев Н.Т., Максимов В.А. и др. Выделение и идентификация возбудителя тяжёлого острого респираторного заболевания от больного атипичной пневмонией. ЖМЭИ. — 2003. — № 5. — С. 109-112. / Onishhenko G.G., Vasil'ev N.T., Maksimov VA. i dr. Vy'delenie i identifikaciya vozbuditelya tyazhelogo ostrogo respira-tornogo zabolevaniya ot bofnogo atipichnoj pnevmoniej. ZhME'I 2003; 5: 109-112. [in Russian]
2. Синопальников А.И., Воробьев А.В., Белоцерковская Ю.Г., Андреева ИВ. Тяжёлый острый респираторный синдром (ТОРС, SARS). Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2003. — № 5 (3). — С. 225-242. / Sinopalnikov A.I., Vorobev A.V., Belocerkovskaya Yu.G., Andreeva I.V. Tyazhely'j ostryj respiratorny'j sindrom (TORS, SARS). Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrob-naya ximioterapiya 2003; 5 (3): 225-242.
3. Ksiazek T.G., Erdman D., Goldsmith C.S. et al. A novel Coronavirus associated with severe acute respiratory syndrome. New Engl J Med 2003; 348 (20): 1947-1958.
4. Lee N., Hui D., Wu A. et al. A major outbreak of severe acute respiratory syndrome on Hong Kong. New Engl J Med 2003; 348 (20): 1986-1994.
5. Peiris J.S., Lai S.T., Poon L.L. et al. Coronavirus as a possible cause of severe acute respiratory syndrome. Lancet 2003; 361: 1319-1325.
6. Жуматов K.X., Кыдырманов А.И. Ближневосточный респираторный синдром (mers-middleeastrespiratorysyndrome): новая корона-вирусная инфекция человека и животных. Biotechnology. Theory and Practice/Биотехнология. Теория и практика. — 2015. — № 3. — С. 4-10. / Zhumatov K.X., Ky'dy'rmanovA.I. Blizhnevostochny'j respira-
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Логинова Светлана Яковлевна — д. б. н., ведущий научный сотрудник, ФГБУ «48 ЦНИИ» МО РФ, Москва
Щукина Вероника Николаевна — к. б. н., научный сотрудник, ФГБУ «48 ЦНИИ» МО РФ, Москва
Борисевич Сергей Владимирович — д. б. н., профессор, член-корр. РАН РФ, начальник института, ФГБУ «48 ЦНИИ» МО РФ, Москва
torny'j sindrom (mers-middleeastrespiratorysyndrome): novaya koron-avirusnaya infekciya cheloveka i zhivotny'x. Biotechnology. Theory and Practice/Biotexnologiya. Teoriya i praktika. 2015; 3: 4—10. [in Russian]
7. Сыромятникова С.И., ПисцовM.H., СтепановH.H., Борисевич С.В., Меркулов В.А., Марков В.И., Онищенко Г.Г., Васильев Н.Т., Максимов В.А. Штамм СоД вируса тяжёлого острого респираторного синдрома рода Coronavirus, предназначенный для разработки средств и методов биологической защиты. Патент РФ № 2263144, 27.10.2005. / Syromyatnikova S.I., Pisczov M.N., Stepanov N.N., Borisevich S.V., Merkulov V.A., Markov V.I., Onishhenko G.G., Vasil'ev N.T., Maksimov V.A. Shtamm SoD virusa tyazhelogo ostrogo respira-tornogo sindroma roda Coronavirus, prednaznachenny'j dlya razrabotki sredstv i metodov biologicheskoj zashhity'. Patent RF № 2263144, 27.10.2005.
8. Zhao Z., Zhang F., Xu M. et al. Description and clinical treatment of an early outbreak of severe acute respiratory syndrome (SARS) in Guangzhou, PR Chine. J Med Microbiol 2003; 52: 715-720.
9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть 2. М.: Минздрав РФ, 2013. / Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskix issledovanij lekarstvenny'x sredstv. Chast' 2. M.: Minzdrav RF, 2013. [in Russian]
10. Логинова С.Я., Фалдина В Н., Сыромятникова С.И., Борисевич С.В., Хамитов Р.А., Максимов В.А. Способ моделирования тяжёлого острого респираторного синдрома у экспериментальных животных. Патент РФ №2280288, 20.07.2006. / Loginova S.Ya., Faldina V.N, Syromyatnikova S.I., Borisevich S.V., Xamitov R.A., Maksimov V.A. Sposob modelirovaniya tyazhelogo ostrogo respiratornogo sindroma u e'ksperimental'ny'x zhivotny'x. Patent RF №2280288, 20.07.2006.
Хамитов Равиль Авгатович — д. м. н., профессор, генеральный директор ООО МБЦ «Генериум», Москва Максимов Владимир Алексеевич — д. м. н., профессор, ведущий научный сотрудник, ФГБУ «48 ЦНИИ» МО РФ, Москва
