CC BY
0DOI 10.53980/24131997_2022_3_36
А.В. Щёкотова, канд. техн. наук, доц., e-mail: anna-krivonosova@yandex.ru Д.В. Атласова, магистрант, e-mail: atlasova.dv.l@indox.ru Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления, г. Улан-Удэ
УДК 579.674
ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ И БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРОБИОТИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ
В статье представлены данные по изучению биологических и биотехнологических свойств отдельных штаммов пробиотических микроорганизмов (лактобактерий и бифидобактерий) с целью создания новых эффективных консорциумов. Подбор штаммов для совместного культивирования проводили по принципу биосовместимости с применением капельной методики. Выявлены особенности межбактериальных взаимодействий как с представителями своего рода, так и с другими микроорганизмами. Изучен биотехнологический потенциал пробиотических микроорганизмов с учетом протео-литической активности и адгезивной способности штаммов. Выделена группы микроорганизмов (Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus plantarum 8РАЗ, Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactobacillus paracasei к-406), перспективных в отношении совместного культивирования. Полученные данные могут быть использованы при создании новых функциональных продуктов и биологически активных добавок.
Ключевые слова: пробиотические микроорганизмы, полиштаммовый консорциум, биосовместимость, протеолитическая активность, адгезивные свойства.
A.V. Sh^yokotova, Cand. Sc. Engineering, Assoc. Prof.
D.V. Atlasova, master's student
STUDY OF BIOLOGICAL RELATIONSHIPS AND BIOCHEMICAL PROPERTIES OF PROBIOTIC MICROORGANISMS
The article presents data on the study of biological and biotechnological properties of individual strains of probiotic microorganisms (lactobacilli and bifidobacteria) in order to create new effective consortia. Selection of strains for co-cultivation is carried out according to the principle of biocompatibility using a drip technique. The research reveals features of inter-bacterial interactions with both representatives of its kind and with other microorganisms. The article studies the biotechnological potential ofprobiotic microorganisms taking into account the proteolytic activity and adhesive ability of strains. Groups of microorganisms (Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus plantarum 8RAZ, Lactobacillus fermentum 44/1 and Lactobacillus paracasei k-406) promising for co-cultivation were isolated. The obtained data can be used in the creation of new functional products and biologically active additives.
Key words: probiotic microorganisms, poly-strain consortium, biocompatibility, proteolytic activity, adhesive properties.
Введение
Пандемия COVID-19 повысила внимание к питанию, связанному с иммунитетом. Большинство потребителей предпочитают продукты с доказанными лечебно-профилактическими свойствами. Значительно возрос спрос на пробиотические молочные продукты из-за растущей осведомленности населения об их прямой связи с пользой для здоровья пищеварительной системы [1]. Здоровая микрофлора кишечника является одной из важнейших факторов благополучия человека [2-6]. В связи с этим производство пробиотических пищевых продуктов на основе наиболее значимых представителях микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека остается актуальным.
В 2015 г. на съезде Федерации европейских микробиологических обществ (FEMS) была
выдвинута теория о создании и использовании для профилактики ряда болезней препаратов и продуктов, содержащих поликомпонентные пробиотические консорциумы [7]. Поиск штаммов пробиотических культур, способных активно развиваться при совместном культивировании, повышая свои биологические, пробиотические и технологические свойства, является актуальным и востребованным направлением микробиологии. Одной из основных причин низкой эффективности пробиотических продуктов питания на основе поликомпонентных микробных консорциумов является неэффективный подбор видового состава микроорганизмов без учета их биосовместимости, кинетики роста и биотехнологического потенциала каждого штамма. Это приводит к снижению количества живых клеток бактерий и утрате функциональных свойств [8].
Изучение биологических межштаммовых взаимодействий пробиотических культур является основой при подборе микроорганизмов для совместного культивирования. В литературе описаны механизмы антагонизма пробиотических бактерий как по отношению к патогенным и условно-патогенным микрооорганизмам, так и к представителям своего рода [8, 9]. В консорциуме бактерии выделяют различные продукты метаболизма и конкурируют как за субстрат, так и с микрофлорой желудочно-кишечного тракта человека [8, 9]. Опубликованы работы [8], в которых указывается, что биосовместимость культур в составе консорциумов влияет на уровень накоплении биомассы (на численность бактериальных клеток штаммов при совместном культивировании). В связи с этим подбор пробиотических культур в поликомпонентный консорциум должен проводится с учетом актуальных данных о биосовместимости штаммов, входящих в его состав.
Другим немаловажным аспектом является исследование биотехнологического потенциала каждого штамма, которого планируется включить в микробный консорциум. Среди важнейших характеристик можно выделить кислотообразующую способность, протеолитическую активностью, адгезивные свойства. Использование пробиотических культур с различной протеолитической активностью позволит получать ферментированные белки молока с различными биологически активными свойствами [10]. Оценка адгезивных способностей штаммов позволит сделать вывод об их способности прикрепляться к стенкам желудочно-кишечного тракта и более длительное время задерживаться в организме, проявляя свои пробиотические свойства [11]. При создании полиштаммовых заквасок необходимо учитывать кинетику роста каждого штамма консорциума, в том числе продолжительность экспоненциальной фазы роста. С помощью этих данных можно определить время инокуляции питательной среды в случае постепенного внесения монокультуры. Такой подход повышает биологические свойства консорциума [8].
Таким образом, на стадии подбора культур для создания комплексных полиштаммовых добавок с пробиотическими свойствами необходимо оценивать биосовместимость штаммов и их биотехнологический потенциал с целью повышения общей активности консорциума.
Цель исследований - изучить биологические межштаммовые взаимодействия пробиотических культур, а также протеолитическую активность и адгезивную способность штаммов, с перспективой создания новых эффективных консорциумов, которые можно использовать при получении заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов и биологически активных добавок.
Объекты и методы исследований
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи: исследовать биологические межштаммовые взаимодействия пробиотических культур при совместном культивировании и отобрать сочетаемые штаммы; оценить биотехнологический потенциал культур и выявить штаммы с высокими протеолитическими и адгезивными свойствами; изучить кислотообразующую способность и динамику роста отобранных культур в монозаквасках и в микробном консорциуме для установления оптимальных условий культивирования.
Объектами исследований были 7 штаммов молочнокислых микроорганизмов: Lactobacillus paracasei к-406, Lactobacillus fermentum 44/1, Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus rhamnosus 12L, Lactobacillus casei МДП-1, Lactobacillus plantarum 8РАЗ, Lactobacillus acidophilus 100АШ и 2 штамма бифидобактерии: Bifidobacterium breve DSM 20091, Bifidobacterium longum subsp. infantis, полученные из Национального биоресурсного центра Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика.
Биосовместимость культур определяли методом прямого совместного культивирования на поверхности плотной питательной среды (капельная методика) [8, 9, 12, 13]. Метод заключается в поочередном нанесении на поверхность питательной среды (MRS) двух капель тестируемых культур. Биосовместимость оценивали в месте наложения капель: если культуры полностью сливались - они считались совместимыми, если одна из культур росла поверх другой, подавляя ее рост, это расценивали как антагонизм [8, 13, 14].
Исследование уровня протеолитической активности внутриклеточных и внеклеточных ферментов у лактобактерий проводили с использованием желатина и протеолитической среды с молочным буфером [15]. Активность эндоферментов оценивали по характеру разжижения желатина в первый и последующие дни после внесения культур методом «укол в столбик». Внеклеточную экзоферментативную активность бактерий проверяли по размеру образовавшихся светлых участков (пептонизации белков молока) вокруг культур [15, 16].
Адгезивные свойства изучали согласно методики В.И. Брилиса на формализированных эритроцитах [17]. Результат оценивали по индексу адгезивности микроорганизмов (ИАМ). Микроорганизмы считаются неадгезивными при ИАМ<1,75, низкоадгезивными - от 1,76 до 2,5, среднеадгезивными - от 2,51 до 4,0 и высокоадгезивными при ИАМ выше 4,0 [17].
Титруемую кислотность определяли методом титрования по ГОСТ 3624-92 [18]. Количество клеток лактобактерий и бифидобактерий определяли методом предельных разведений по ГОСТ Р 56139-2014 на соответствующих питательных средах (МRS-агар и ГМК-1) [19].
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программы Statistica 6. Использовали непараметрический критерий Манна - Уитни (для сравнения независимых выборок). Значимыми считали различия, если вероятность ошибки р<0,05.
Результаты и их обсуждение
При оценке характера межштаммовых взаимоотношений необходимо учитывать, что исследуемые культуры в процессе прироста бактериальной популяции способны продуцировать бактериоцины. Именно способность к выработке бактериоцинов определяет степень антагонистической активности штамма и обусловливает характер межбактериальных взаимодействий [9]. Данные о межвидовых взаимоотношениях исследуемых культур представлены в таблице 1.
Таблица 1
Межштаммовые взаимодействия лакто- и бифидобактерий при их совместном культивировании
а а -о > 7
a 5 ^
8 О « ^
а а
а V -о ^
u I а а о
го
Йд
Оо
а ^ -
ср'
а
а Е^ •8 ^
.fe
к
-О -S
-
Lactobacillus paracasei к-406
+
Lactobacillus fermentum 44/1
Lactobacillus curvatus LCR-111-1
Lactobacillus rhamnosus 12L
Lactobacillus casei МДП-1
Lactobacillus plantarum 8РАЗ
Lactobacillus acidophilus 100АШ
Bifidobacterium breve DSM 20091
+
+
+
+
+
+
+
+
±
+
+
+
+
+
+
+
+
±
+
+
+
+
+
+
±
+
+
±
+
+
+
+
+
+
Продолже ние таблицы 1
Объект исследования Lactobacillus paracasei к-406 Lactobacillus fermentum 44/1 Lactobacillus curvatus LCR-111-1 Lactobacillus rhamnosus 12L Lactobacillus casei МДП-1 Lactobacillus plantarum 8РАЗ Lactobacillus acidophilus 100АШ Bifidobacterium breve DSM 20091 Bifidobacterium longum subsp. infantis
Bifidobacterium longum subsp. infantis
Примечание: «+» - штаммы совместимы, «-» - штаммы несовместимы, «±» - наблюдается антагонизм («выход наверх» одной из культур)
Полученные результаты (см. табл. 1) показывают, что большинство исследуемых лакто- и бифидобактерий можно совместно культивировать в подобранных парах, а также получать многокомпонентные пробиотические консорциумы.
В паре Lactobacillus casei МДП-1 и Lactobacillus fermentum 44/1 наблюдалась сильная антагонистическая активность (см. табл. 1). Сильный антагонизм между этими бактериями ограничивает их применение для совместного культивирования. Умеренный антагонизм наблюдался в парах: Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactobacillus rhamnosus 12L; Lactobacillus casei МДП-1 и Lactobacillus plantarum 8РАЗ; Lactobacillus curvatus LCR-111-1 с Bifidobacterium breve DSM 20091, а также Lactobacillus casei МДП-1 и Bifidobacterium longum subsp. infantis. Внутриродовой антагонизм между Lactobacillus fermentum и Lactobacillus rhamnosus, а также Lactobacillus casei и Lactobacillus plantarum, возможно, объясняется более быстрым потреблением одной из культур питательных компонентов и «метаболическим давлением», связанным с негативным действием культуры антагониста на метаболизм другого штамма лактобактерий [20]. Антагонистическая активность лактобацил по отношению к би-фидобактериям в исследуемых парах возможно объясняется тем, что в процессе жизнедеятельности лактобактерий в питательной среде MRS накапливают определенные экзометабо-литы (бактериоцины), которые при данных условиях ингибирует рост Bifidobacterium breve и Bifidobacterium infantis. Штамм Lactobacillus casei МДП-1 показал самые слабые антагонистические свойства (его развитие при совместном культивировании подавлялось тремя другими штаммами). Данное обстоятельство ограничивает использование Lactobacillus casei МДП-1 в составе полиштаммовых микробных консорциумах из-за низкой устойчивости к действию бактерицидов родственных бактерий и возможной гибели этого микроорганизма.
Практический и научный интерес представляет изучение протеолитической активности пробиотических культур. Исследование уровня протеолитической активности начинали с изучения внутриклеточных и внеклеточных ферментов. Результаты исследования представлены в таблице 2.
Таблица 2
Внеклеточная и внутриклеточная протеолитическая активность разных штаммов пробиотических культур
Пробиотические штаммы Протеолити (зоны просветления на с ческая активность реде, мм/форма разжижжения)
внеклеточная (разложение молочного белка) внутриклеточная (разжижение желатина)
Lactobacillus paracasei к-406 +++ (27±4 мм) +++ (воронкообразное)
Lactobacillus fermentum 44/1 +++ (10±2 мм) +++ (воронкообразное)
Lactobacillus curvatus LCR-111-1 +++ (15±3 мм) +++ (воронкообразное)
Lactobacillus rhamnosus 12L +++ (25±5 мм) +++ (воронкообразное)
Продолжение таблицы 2
Пробиотические штаммы Протеолити (зоны просветления на с ческая активность реде, мм/форма разжижжения)
внеклеточная (разложение молочного белка) внутриклеточная (разжижение желатина)
Lactobacillus casei МДП-1 +++ (25±2 мм) +++ (воронкообразное)
Lactobacillus plantarum 8РАЗ +++ (17±4 мм) +++ (воронкообразное)
Lactobacillus acidophilus 100АШ +++ (15±4 мм) ++- (воронкообразное)
Bifidobacterium breve DSM 20091 ++- (6±1 мм) -
Bifidobacterium longum subsp. infantis +- - (3±1 мм) -
Примечание: протеолитическая активность «+++» - сильная зона (разложение молочного белка более 10 мм); «++-» - средняя зона (разложение молочного белка 5-9 мм); «+—» - слабая (зона разложение молочного белка 1-4 мм); «---» - отсутствует.
Из данных таблицы 2 видно, что исследуемые штаммы лактобактерий показали высокую протеолитическую активность внутриклеточных ферментов. Исследуемые штаммы лак-тобактерий разложили желатин в первые сутки культивирования, столбик разжижения имел форму воронки. Это указывает на то, что исследуемые культуры обладают большим количеством бактериальных протеиназ, связанных с клеточной стенкой. Именно благодаря этим внутриклеточным пептидазам олигопептиды посредством специфического пептидного транспорта будут поглощаться клеткой и гидролизоваться на короткоцепочечные пептиды и аминокислоты. Исследуемые штаммы бифидобактерий не разжижают желатин. Отсутствие жела-тиназы в исследуемых образцах указывает на то, что в данных культурах отсутствуют проте-иназы, связанные с клеточной стенкой. Данный факт подтверждают литературные данные.
По способности пептонизировать молочный белок штаммы Lactobacillus paracasei к-406, Lactobacillus casei МДП-1 и Lactobacillus rhamnosus показали более высокие показатели протеолиза (зона просветления составила 25-27 мм), у остальных штаммов Lactobacillus зоны просветления составили 10-17 мм, что также соответствует высокой протеолитической активности. Бифидобактерии уступают лактобактериям в этом эксперименте (см. табл. 2). По способности лизировать казеин штамм Bifidobacterium breve DSM 20091 показал более высокий показатель протеолиза: зона просветления составила 6 мм, что соответствует средней степени протеолитической активности. Штамм Bifidobacterium longum subsp. infantis проявил слабую протеолитическую активность (зона просветления казеина составила только 3 мм).
По совокупности результатов исследования протеолитической активности внутриклеточных и внеклеточных ферментов лактобактерий и бифидобактерий очевидна перспективность использования культур Lactobacillus для производства ферментированных кисломолочных продуктов.
Результаты исследований адгезивных свойств пробиотических культур представлены в таблице 3.
Таблица 3
Адгезивная способность пробиотических культур
Пробиотические штаммы СПА КУЭ, % ИАМ Адгезивные свойства
Lactobacillus paracasei к-406 2,8±0,06 85±0,3 3,3±0,02 среднеадгезивные
Lactobacillusfermentum 44/1 3,0±0,02 71±0,7 4,2±0,04 высокоадгезивные
Lactobacillus curvatus LCR-111-1 4,2±0,08 87±0,6 4,8±0,02 высокоадгезивные
Продолжение таблицы 3
Пробиотические штаммы СПА КУЭ, % ИАМ Адгезивные свойства
Lactobacillus rhamnosus 12L 3,1±0,04 89±0,2 3,5±0,06 среднеадгезивные
Lactobacillus casei МДП-1 3,3±0,01 92±0,1 3,6±0,01 среднеадгезивные
Lactobacillus plantarum 8РАЗ 4,1±0,02 89±0,3 4,6±0,05 высокоадгезивные
Lactobacillus acidophilus 100АШ 2,6±0,05 84±0,5 3,1±0,07 среднеадгезивные
Bifidobacterium breve DSM 20091 3,8±0,07 81±0,2 4,7±0,02 высокоадгезивные
Bifidobacterium longum subsp. infantis 4,0±0,02 95±0,2 4,2±0,01 высокоадгезивные
Результаты, представленные в таблице 3, свидетельствуют о разной адгезивной способности пробиотических культур. Высокую степень адгезии проявили штаммы Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus plantarum 8РАЗ и Bifidobacterium breve DSM 20091. Близкие по значению результаты показали Lactobacillus fermentum 44/1 и Bifidobacterium longum subsp. infantis. Остальные штаммы проявили среднюю степень адгезии.
По совокупности результатов исследования биосовместимости, протеолитической активности внутриклеточных и внеклеточных ферментов, а также адгезивной способности изучаемых штаммов пробиотических бактерий были отобраны следующие штаммы для составления консорциума: Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus plantarum 8РАЗ, Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactobacillus paracasei к-406.
Для отобранных штаммов и поликомпонентного консорциума из выбранных культур проводилось изучение кислотообразующей способности и динамики роста на среде MRS (рис. 1, 2). Доза вносимой комбинированной закваски составляла 5 % от объема молока. Культивирование проводили при температуре 37 С в течение 24 ч. Контролем служили результаты изучаемых показателей по каждой монокультуре.
10
12
14
16
18
20
24
Время, ч
Lactobacillus curvatus Lactobacillus plantarum Lactobacillus paracasei Lactobacillus fermentum
Рисунок 1 - Активность кислотообразования заквасок на основе различных культур Lactobacillus и их консорциума (разброс данных представлен стандартным отклонением для средних значений
в трех независимых экспериментах)
2
4
6
8
Анализ результатов, представленных на рисунке 1, позволил сделать вывод о том, что лаг-фазы исследуемых культур практически совпадают (продолжаются первые 3-4 ч), в связи с этим полиштаммовый консорциум из выбранных культур можно составлять при одновременном смешивании четырех обобранных штаммов Lactobacillus в соотношении 1:1:1:1. Исследование показало, что в нарастание кислотности молока при добавлении микробного консорциума происходит значительно быстрее по сравнению с монокультурами. Уже через 1012 ч культивирования кислотность закваски, состоящей из консорциума лактобактерий достигает (120-130) Т, тогда как в монокультурах такая кислотность наблюдалась через (14-20) ч. Это указывает на синергетический эффект между отобранными культурами. Наиболее высоким содержанием жизнеспособных клеток лактобактерий также наблюдалось в комбинированной закваске уже через 12 ч культивирования - 3*109 КОЕ/см3 (рис. 2), тогда как в монозаквасках через этот же промежуток времени количество жизнеспособных клеток составляло порядка (107-108) КОЕ/см3.
10
w 9 О * 8
н 7
X 6
ю 5
г\ 5
с 4
ад
.....Illllllllllllllll
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 24
I Lactobacillus curvatus
I Lactobacillus paracasei
l Комбинированный консорциум
Lactobacillus plantarum Lactobacillus fermentum
Время, ч
Рисунок 2 - Количественный учет Lactobacillus в монозаквасках и в микробном консорциуме (разброс данных представлен стандартным отклонением для средних значений в трех независимых экспериментах)
Таким образом, в результате проведённых исследований подобраны оптимальные условия культивирования консорциума из выбранных культур лактобактерий: соотношение культур - 1:1:1:1, температура культивирования - 37°С, продолжительность - 12 ч. При выбранных условиях наблюдаются сбалансированный рост пробиотических микроорганизмов и установление симбиотических отношений между ними.
Заключение
Результаты исследований подтвердили, что для повышения биологических и технологических свойств полиштаммовых консорциумов необходимо учитывать биологическую совместимость входящих в консорциум штаммов и их биотехнологический потенциал. Полученные результаты коррелируют с данными, представленными другими исследователями [8, 9, 12-14]. Тщательный скрининг пробиотических штаммов на предмет их биологической и технологической пригодности позволяет отобрать штаммы с наилучшими производственными, функциональными и технологическими характеристиками.
3
В результате проведенных исследований были изучены биологические межштаммо-вые взаимодействия пробиотических культур вида Lactobacillus и Bifidobacterium, определены их протеолитическая активность и адгезивная способность с целью создания эффективного полиштаммового консорциума. На основе проведенных экспериментов были отобраны следующие пробиотические штаммы для составления консорциума: Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus plantarum 8РАЗ, Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactobacillus paracasei к-406. Отмечено, что взаимоотношения отобранных пробиотических бактерий относятся к синергид-ным. При совместном культивировании выбранных культур на питательной среде «капельным методом» наблюдалось полное слияние «капель», что соответствует высокому уровню биосовместимости. Высокий уровень биосовместимости, протеолитической и адгезивной активности отобранных штаммов определил целесообразность их использования в составе закваски для совместного культивирования. Lactobacillus curvatus LCR-111-1, Lactobacillus plantarum 8РАЗ, Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactobacillus paracasei к-406 имеют одну оптимальную температуру культивирования (37 С), схожую динамику роста и высокую устойчивость к действию бактериоцинов друг друга. Совместное культивирование отобранных штаммов приводит к сокращению ферментационного цикла и количественному увеличению жизнеспособных клеток Lactobacillus по сравнению с монозаквасками. Проявление синергизма пробиотиче-скими культурами, их высокая протеолитическая и адгезивная активность делают возможным рекомендовать подобранный консорциум для применения в функциональных продуктах питания и пробиотических биологически активных добавках.
Благодарности
Научно-исследовательская работа проведена за счет средств гранта «Молодые ученые ВСГУТУ - 2022» Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления».
Библиография
1. Probiotics Market by Application (Functional Food & Beverages (Dairy Products, Non-dairy Beverages, Infant Formula, Cereals), Dietary Supplements, Feed), Ingredient (Bacteria, Yeast), Form (Dry, Liquid), End User, & Region - Global Forecast to 2026. URL: https://www.marketsandmarkets.com/Market-Reports/probiotic-market-advanced-technologies-and-global-market-69.html (дата обращения: 15.07.2022).
2. Markowiak P., Slizewska K. Effects of probiotics, prebiotics, and synbiotics on human health // Nutrients, 2017. - Т. 9 (9). - Р. 1021.
3. Markowiak-Kopec P, Slizewska K. The Effect of Probiotics on the Production of Short-Chain Fatty Acids by Human Intestinal Microbiome // Nutrients, 2020. - Т. 12 (4). - Р. 1107.
4. Яруллина Д.Р., Фахруллин Р.Ф. Бактерии рода Lactobacillus: общая характеристика и методы работы с ними: учеб.-метод. пособие. - Казань: Изд-во Казанского университета, 2014. - 51 с.
5. Tamang J., Shin D., Jung S., Chae S. Functional Properties of Microorganisms in Fermented // Foods. Front. Microbiol., 2016. - № 7. - Р. 578.
6. Ettinger G., MacDonald K., Reid G., Burton J.P. The influence of the human microbiome and probiotics on cardiovascular health // Gut Microbes, 2014. - Т. 5. - P. 719-728.
7. Просеков А.Ю., Остроумов Л.А. Инновационный менеджмент биотехнологий заквасочных культур // Техника и технология пищевых производств, 2016. - Т. 43 (4). - C. 64-69.
8. Волкова Г.С., Куксова Е.В., Серба Е.М. Изучение биологических межштаммовых взаимодействий и ростовых свойств производственных штаммов молочнокислых бактерий // Актуальные вопросы молочной промышленности, межотраслевые технологии и системы управления качеством. -2020. - № 1 (1). - C. 104-109.
9. СоловьеваИ.В., Точилина А.Г., НовиковаН.А. и др. Изучение Биологических свойств новых штаммов рода Lactobacillus // Вестник Нижегородсткого ун-та им. Н.И. Лобачевского, 2010. - № 2 (2). - С.462-468.
10. Madureira A.R. Invited review: physiological properties of bioactive peptides obtained from whey protein // J. Dairy Sci. - 2010. - Т. 93 (2). - P. 437-455.
11. Головин М.А., Ганина В.И., Машенцева Н.Г. Холестеринредуцирующие пробиотические бактерии в молочной продукции // Молочная промышленность. - 2014. - № 5. - C. 46-47.
12. Глушанова Н.А., Блинов А.И. Биосовместимость пробиотических и резидентных лактоба-цилл: тез. VII Славяно-Балтийского научного форума «Санкт-Петербург - Гастро-2005» // Гастронте-рология Санкт-Петербург, 2005. - № 1. - C. 31-36.
13. Бегунова А.В., Рожкова И.В., Зверева Е.А. и др. Молочнокислые и пропионовокислые бактерии: формирование сообщества для получения функциональных продуктов с бифидогенными и гипотензивными свойствами // Прикладная биохимия и микробиология. - 2019. - № 55 (6). - C. 566-577.
- DOI 10.1134/S0555109919060047.
14. Волкова Г.С., Куксова Е.В., Серба Е.М., Мартыненко Н.Н. Изучение и оценка биологических свойств пробиотических штаммов рода Lactobacillus, перспективных для производства биологически активных добавок к пище // Вопросы питания. - 2018. - Т. 87 (5). - C. 54-55. - DOI 10.24411/00428833-2018-10139.
15. Хамагаева И.С., Жеребятьева О.А., Щёкотова А.В. Протеолитическая активность лакто-бактерий // Молочная промышленность. - 2016. - № 11. - C. 29-31.
16. Щёкотова А.В., Хамагаева И.С. Белковые концентраты, обогащенные пробиотическими культурами и эссенциальными микро- и макролементами: монография. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГУТУ, 2017. - 264 с.
17. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П. и др. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов // Лабораторное дело. - 1986. - №4. - C. 210-214.
18. ГОСТ 3624-92 Молоко и молочные продукты. Титриметрические методы определения кислотности. - URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/10071 (дата обращения: 01.08.2022).
19. ГОСТ Р 56139-2014 Продукты пищевые функциональные. Методы определения и подсчета пробиотических микроорганизмов. - URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/58168/ (дата обращения: 01.08.2022).
20. Семенов А.В. Антагонизм как результат межмикробных отношений // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. - 2013. - № 1. - С. 8.
Bibliography
1. Probiotics Market by Application (Functional Food & Beverages (Dairy Products, Non-dairy Beverages, Infant Formula, Cereals), Dietary Supplements, Feed), Ingredient (Bacteria, Yeast), Form (Dry, Liquid), End User, & Region - Global Forecast to 2026. URL:https://www.marketsandmarkets.com/Market-Re-ports/probiotic-market-advanced-technologies-and-global-market-69.html (date of application: 15.07.2022)
2. Markowiak P., Slizewska K. Effects of probiotics, prebiotics, and synbiotics on human health // Nutrients. - 2017. - Vol 9 (9). - P. 1021.
3. Markowiak-Kopec P, Slizewska K. The Effect of Probiotics on the Production of Short-Chain Fatty Acids by Human Intestinal Microbiome // Nutrients, 2020. - Vol. 12 (4). - P. 1107.
4. Yarullina D.R., Fakhrullin R.F. Lactobacillus bacteria: general characteristics and methods of handling them: Educational and methodical manual. - Kazan: Kazan University, 2014. - 51 p.
5. Tamang J., Shin D., Jung S., Chae S. Functional Properties of Microorganisms in Fermented // Foods. Front. Microbiol., 2016. - No. 7. - P. 578.
6. Ettinger G., MacDonaldK., Reid G., Burton J.P. The influence of the human microbiome and probiotics on cardiovascular health // Gut Microbes. - 2014. - Vol. 5. - P. 719-728.
7. ProsekovA.Yu., OstroumovL.A Innovative management of fermentation crop biotechnology //Food Processing: Techniques and Technology. - 2016. - Vol.43 (4). - P. 64-69.
8. Volkova G.S., Kuksova E.V., Serba E.M. Study of biological interstrain interactions and growth properties of production strains // Topical issues of dairy industry, intersectoral technologies and quality management systems. - 2020. - No 1 (1). - P. 104-109.
9. SolovyovaI.V., TochilinaA.G., NovikovaN.A. et al. The study of biological properties of new strains of the genus Lactobacillus // Bulletin of the Nizhny Novgorod University named after N.I. Lobachevsky, 2010.
- No. 2 (2). - P. 462-468.
10. Madureira A.R. Invited review: physiological properties of bioactive peptides obtained from whey protein // Journal of Dairy Science., 2010. - Vol. 93 (2). - P. 437-455.
11. Golovin M.A., Ganina V.I., Mashentseva N.G. Cholesterol-reducing probiotic bacteria in dairy products // Dairy industry. - 2014. - No. 5. - P. 46-47.
12. GlushanovaN.A., BlinovA.I. Biocompatibility ofprobiotic and resident lactobacilli. Theses ofthe VII Slavic-Baltic Scientific Forum "St. Petersburg - Gastro-2005" // Gastroenterology St. Petersburg. - 2005. - No. 1. - P. 31-36
13. Begunova A.V., Rozhkova I.V., Zvereva E.A. et al. Lactic acid and propionic acid bacteria: the formation of a community for the production of functional products with bifidogenic and hypotensive properties // Applied Biochemistry and Microbiology. - 2019. - No 55 (6). - P. 566-577. DOI 10.1134/S0555109919060047.
14. Volkova G.S., Kuksova E.V., Serba E.M., Martynenko N.N. Study and evaluation of biological properties of probiotic strains of the genus Lactobacillus, promising for the production of biologically active food additives // Nutrition Issues. - 2018. - Vol. 87 (5). - P. 54-55. DOI 10.24411/0042-8833-2018-10139.
15. Khamagaeva I.S., Zherebyatyeva O.A., Shchekotova A.V. Proteolytic activity of lactobacilli // Dairy industry. - 2016. - No. 11. - P. 29-31.
16. Shchekotova A.V., Khamagaeva I.S. Protein concentrates enriched with probiotic cultures and essential micro- and macroelements: monograph. - Ulan-Ude: Publishing House of ESSTU, 2017. - 264 p.
17. Brilis V.I., Brilene T.A., Lentsner H.P. et al. Methodology for studying the adhesive process of microorganisms // Laboratory business. - 1986. - No. 4. - P. 210-214.
18. State standard 3624-92 Milk and dairy products. Titrimetric methods for determining acidity. URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/10071 (date of application: 01.08.2022).
19. State standard 56139-2014 Functional food products. Methods of determination and counting of probiotic microorganisms. URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/58168 / (date of request: 01.08.2022).
20. SemenovA.V. Antagonism as a result of intermicrobial relations // Bulletin of the Orenburg Scientific Center of the Ural Branch of the Russian Academy of Sciences, 2013. - No. 1. - P. 8.
