CC BY
25
DOI 10.31588/2413-4201-1883-235-3-124-130
УДК 619:615.35.015
ИЗУЧЕНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ ВИТАМИНО-ФЕРМЕНТНОГО КОМПЛЕКСА НА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Манохин А.А. - аспирант, Носков С.Б. - д.в.н., профессор, Резниченко А.А. - к.в.н., Наумова С.В. - к.с/х.н., доцент
ФГБОУ ВО «Белгородский государственный аграрный университет»
Ключевые слова: витаминно-ферментный комплекс, ферменты, острая токсичность, хроническая токсичность, безвредность
Key words: vitamin-enzyme complex, enzymes, acute toxicity, chronic toxicity, safety
Обогащение кормовых рационов ферментными препаратами снижает отход молодняка, значительно повышает усвоение кормов и снижает их затраты на единицу продукции, позволяет частично заменить дорогостоящие и дефицитные корма животного происхождения более дешевыми растительными, а также повысить продуктивность животных при одновременном улучшении качества получаемой продукции [1, 3]. Применение ферментов позволяет использовать в кормлении молодняка свиней дешевые корма и получать при этом более высокие привесы [2, 4].
Следует отметить, что целесообразность использования ферментных препаратов в кормлении свиней научно обоснована. Однако исследования ученых направлены как на усовершенствование существующих, так и на создание новых форм витаминно-ферментных комплексов. [6, 7]. Поэтому разработка новых вариантов и поиск путей модернизации уже существующих ферментных добавок остаётся актуальной и сегодня. [5].
С учётом вышеизложенногро, нами совместно с сотрудниками ЗАО «Петро-хим» (Белгород) была разработана новая витаминно-ферментная добавка. Её состав: пепсин - 1,5 мг, панкреаза - 1,5 МЕ; витамины, на 1г: А- 500 МЕ; Е- 0,74 мг; В1-0,17 мг; В2-0,17 мг; D3- 44МЕ; В6- 0,18мг; РР- 2мг; фолиевая кислота- 0,06 мг; панто-теновая кислота- 0,75 мг; биотин- 0,002 мг; В12- 0,36 мкг; С- 9,2 мг; лимонная кислота - 20 мг; остальное - сахароза.
Однако, для внедрения данной кормовой добавки в практику животноводства
необходимо проведение её доклинических исследований.
Важным аспектом повышения качества препаратов является их оценка с точки зрения безопасности для животных на практике. Решение этой проблемы возможно лишь путем резкой интенсификации токсикологических исследований с использованием новых методов, позволяющих точно и быстро прогнозировать токсичность и опасность новых химических веществ и лекарственных средств. [8].
Целью нашей работы было изучение безвредности витаминно-ферментного комплекса на лабораторных животных.
Материал и методы исследований. Острую токсичность изучали при пе-роральном введении препарата общепринятым методом [10].
Показателями определения острой токсичности служили: внешний вид животных, состояние кожного покрова, поведение (возбуждение или угнетение, подвижность, изменение походки, реакция на внешние раздражители, выделения из глаз, рта, мышечные подергивания, тремор, судороги, параличи, парезы и т.д.).
Во время клинических наблюдений учитывали потребление корма, изменение массы тела, морфологическую и биохимическую картину крови. О токсичности препарата судили по клинической картине, количеству погибших животных и по результатам патологоанатомического вскрытия.
Хроническую токсичность определяли на белых крысах. Влияние препарата на детоксицирующую функцию печени
изучали на модели гексеналового сна. Гексенал вводили внутрибрюшинно в десятикратной условно-терапевтической дозе дозе 80 мг/кг массы тела в форме 1%-ного раствора, при этом регистрировали продолжительность гексеналового сна, которую в контрольной группе принимали за 100%.
Местнораздражающее действие препарата изучали кроликах породы шиншилла (2 группы по 8 животных в каждой). Кроликам витамино-ферментный комплекс вводили в конъюнктивальный мешок в разведениях 1:10 и 1:100. За состоянием конъюнктивы наблюдали в течение 6 ч. Контролем служил интактный глаз противоположной стороны [9].
Аллергизирующее действие выявляли на морских свинках методом накожных аппликаций препарата в разных разведениях и нативном виде. До сенсибилизации (исходные данные), перед введением разрешающей дозы и после неё учитывали массу тела, реакцию специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ) в цитратной крови по Флексу. Положительной считали пробу, в которой агломерация (склеивание) лейкоцитов превышала контрольные данные не менее чем на 30%.
Результаты исследований. При изучении острой токсичности было сформировано по 2 группы белых крыс (контрольная и опытная) обоих полов массой 180-190 г по 10 гол в каждой. Животным опытной группы витаминно-ферментный комплекс применяли перо-рально однократно в дозе 25,0 г/кг массы тела в виде 100% эмульсии из расчёта 5 мл/гол (максимальная доза по объёму желудка). Наблюдение проводили в течение 14 суток. При этом не удалось установить конкретной величины ЛД50
потому, что введение в желудок крыс максимального объёма препарата не вызвало каких-либо отклонений в поведении животных и отправлении естественных надобностей (дефекация, диурез).
Ни в одной из опытных групп от изучаемых доз препарата не зарегистрировано гибели животных. Не отмечалось изменений со стороны шёрстного покрова, слизистых оболочек, состояния ушных раковин.
На 14-е сутки животных выводили из эксперимента путём декапитации под эфирным наркозом, проводили оценку относительной массы внутренних органов и их макроскопию. При этом в них не выявлено каких-либо патологических изменений, а их абсолютная и относительная масса мало чем отличалась от таковых показателей в контрольной группе.
Таким образом, витаминно-ферментный комплекс при пероральном введении в максимально допустимой дозе не оказывал отрицательного влияния на организм животных и не вызывал патологических изменений в их внутренних органах.
Для изучения хронической токсичности было сформировано четыре группах белых крыс по 6 гол в каждой.
Первая группа была контрольной, второй, третьей и четвёртой опытным группам витамино-ферментный комплекс вводили перорально в дозах 1,0; 5,0 и 10,0 г/кг массы тела (терапевтическая доза, пяти- и десятикратная от терапевтической) ежедневно, однократно в течение 3 месяцев. Животным контрольной группы вводили тем же путём воду в объёме 5 мл.
На рисунке 1 представлена динамика массы тела подопытных крыс.
lili
Исходные данные Через 1 мес. Через 2 мес. Через 3 мес.
Рисунок 1 - Динамика массы тела крыс при длительном введении витаминно-ферментного комплекса, г.
Из представленных данных видно, что через месяц с начала применения ви-таминно-ферментного комплекса в опытных группах масса животных мало отличалась от контрольной, однако после второго и третьего месяца его применения живая масса опытных животных была выше контрольной от применения всех
изучаемых доз.
Таким образом, можно утверждать, что изучаемый нами препарат оказывает положительное влияние на организм лабораторных животных.
В течение всего времени наблюдения проводился контроль за составом крови крыс (табл. 1).
Показатели, ед. изм. Группы
1 - контрольная 2-опытная 3-опытная 4-опытная
Доза препарата, г/кг массы тела
- 1,0 5,0 10,0
Гемоглобин, г/л 68,9±2,56 69,7±2,38 70,0±2,47 69,9±2,34
Эритроциты, 10121л 6,5±0,42 5,9±0,34 6,0±0,45 6,7±0,36
Лейкоциты, 10У1л 10,1±0,48 9,8±0,47 9,7±0,35 10,2±0,24
Биохимические показатели крови крыс
Общий белок, г/л 62,9±1,42 62,7±1,23 63,4±1,16 63,6±1,33
ALT, ед/л 95,4±4,57 97,3±5,16 96,0±4,21 97,5±4,21
AST, ед/л 242,3±6,02 243,0±6,18 236,9±6,14 238,7±7,73
Билирубин, ммоль/л 21,2±0,43 20,9±0,54 20,8±0,43 21,7±0,39
Глюкоза, ммоль/л 3,3±0,22 3,5±0,27 3,4±0,36 3,6±0,45
Таблица 1- Морфологический и биохимический состав крови крыс в конце экспериментального периода
При этом установлено, что применение витаминно-ферментного комплекса не оказало существенного влияния на морфологический и биохимический состав крови подопытных животных. Установлено, что длительное применение препарата не вызывало изменений числа эритроцитов и лейкоцитов и гемоглобина. Не было также зарегистрировано отрицатель-
Из представленных в таблице данных видно, что средняя продолжительность гексеналового сна крыс контрольной и опытных групп различались незначительно, и эти изменения не имели статистически достоверных различий. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии отрицательного влияния витаминно-ферментного комплекса на детоксици-рующую функцию печени, так как препарат не задерживал и не ускорял окисление гексенала, которое, по общепризнанным представлениям, совершается в печени.
После окончания эксперимента всех крыс декапитировали под эфирным наркозом и определяли абсолютную массу внутренних органов, проводили их визуальное и макроскопическое изучение.
В результате проведённых исследований установлено, что абсолютная масса внутренних органов крыс, потреблявших различные дозы витаминно-ферментного комплекса, находилась в пределах физиологической нормы и ничем не отличалась от данных контрольной группы. При макроскопическом исследовании не выявлено никаких структурных изменений внутренних органов. У подопытных крыс головной мозг имел гладкий рельеф, тонкие
ных изменений в состоянии белкового, углеводного и липидного обмена. Транса-миназная активность сыворотки крови оставалась в пределах физиологической нормы. Влияние витаминно-ферментного комплекса на детоксицирующую функцию печени выявилось на модели гексенало-вого сна. Полученные на этот счёт данные представлены в табл. 2.
прозрачные оболочки. На разрезе вещество мозга серовато-белого цвета. В сердце эпикард гладкий, блестящий, венечные сосуды полнокровны, миокард буровато-красного цвета. Селезенка покрыта гладкой полупрозрачной капсулой, на разрезе темно-вишневого цвета, эластичная. Желудок наполнен пищевой массой, слизистая оболочка серовато-розового цвета. Поджелудочная железа имеет дольчатое строение, на разрезе серовато-желтоватого цвета. Легкие полнокровны, серовато-розовые. Каких-либо различий с животными контрольной группы не обнаружено. В легких просвет альвеол свободный, межальвеолярные перегородки сохранены. Стенки бронхов чистые, тонкие.
Исследование местнораздражаю-щего действия проводили на кроликах.
При этом было создано 2 группы животных по 8 голов в каждой. Кроликам опытных групп витаминно-ферментный комплекс вносили в конъюнктивальный мешок, в разведениях 1:10 и 1:100 (разведение производили физиологическим раствором). Через 6 ч и через сутки проводили осмотр глаза. При осмотре не было обнаружено изменений со стороны конъюнк-
Таблица 2 - Длительность гексеналового сна у крыс, мин
Время исследования Пол Контроль Доза витаминно-ферментного комплекса, г/ кг массы тела
1,0 5,0 10,0
Исходные данные самцы 46,2±2,1 47,4±2,2 46,3±3,1 44,2±3,7
самки 47,2±2,5 48,3±2,4 47,8±3,1 47,0±2,3
Через 1 мес. самцы 46,5±2,2 45,6±3,3 44,9±2,3 45,8±3,1
самки 48,0±3,4 47,8±2,3 46,7±3,5 45,5±3,7
Через 3 мес. самцы 47,9±3,6 46,6±2,8 46,5±3,3 46,7±3,2
самки 47,1±2,4 47,7±2,2 48,3±3,2 47,7±3,1
тивы и просвета зрачка. Следовательно, изучаемый препарат не обладает местно-раздражающим действием.
Исследование сенсибилизирующего действия витаминно-ферментного комплекса изучалось на морских свинках путём 20 повторных накожных аппликаций по 5 раз в неделю. Было сформировано 3 группы животных по 8 голов в каждой: одна контрольная и две опытные. Белые участки кожного покрова морских свинок выстригали на участках боковой поверхности туловища размером 2*2 см .
Опытным животным на
выстриженные участки наносили по три капли испытуемого препарата в разведении 1:10 и 1:100. Контрольным животным наносили дистиллированную воду. Пробы аккуратно втирали в поверхность кожи стеклянной палочкой. Реакцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки кожных проб. После 10 и 20 накожных аппликаций каких-либо видимых изменений в виде гиперемии, инфильтрации, шелушения не возникало. В течение всего эксперимента морские
Таблица 3 комплекс, С
свинки были подвижными и активными. Масса тела животных к концу опыта соответствовала возрастной физиологической норме
Через 24 часа после последней аппликации на интактный участок противоположной стороны наносили испытуемый препарат в разрешающей дозе (0,2 мл ин-тактного препарата на свинку)
Результаты исследования показали, что нанесение разрешающих доз вита-минно-ферментного комплекса не выявило у морских свинок состояние аллергизации. При аппликации разрешающих доз не наблюдалось таких проявлений как почесывание, чихание, заметное беспокойство, при этом отсутствовала эритема, инфильтрация, изъязвление, некроз ткани на месте нанесения препарата.
Как видно из приведённых в таблице 3 данных, температура тела морских свинок оставалась в стабильных пределах физиологических значений. Её естественные колебания не достигали пределов статистической значимости с исходным состоянием.
- Температура тела морских свинок, получавших витаминно-ферментный
Разведения витаминно-
Показатели Контроль ферментного комплекса
1:10 1:100
Исходные данные 36,6±0,4 36,7±0,3 36,8±0,7
До введения разрешающей дозы 36,9±0,6 36,5±0,8 36, 8±0,6
После введения разрешающей дозы 36,7±0,5 36,8±0,4 36,7±0,9
Результаты проведения РСАЛ (реакция специфической агломерации лейкоцитов) представлены в табл. 4.
Таблица 4 - Реакция специфической агломерации лейкоцитов, %
Показатели Контроль Разведения витаминно-ферментного комплекса
1:10 1:100
Исходные данные 19,2±0,91 18,9±1,24 19,0±1,26
До введения разрешающей дозы 18,7±0,81 18,9±0,92 18,6±1,15
После введения разрешающей дозы 19,2±1,20 18,7±1,33 19,4±1,51
Из представленных в таблице данных видно, что максимальные колебания процента агломерирующих лейкоцитов на фоне применения изучаемого препарата
были в пределах 18,6-19,4. Незначительные изменения показателя агломерации являются статистически недостоверными. Как известно, положительной РСАЛ счи-
таются случаи увеличения процента склеившихся лейкоцитов за 1 ч после применения разрешающей дозы на 1/3 и более по сравнению с состоянием до применения этой дозы препарата. Всё это даёт основание считать, что изучаемый препарат не оказывает аллергизирующего действия на организм животных.
Заключение. Таким образом, проведённые исследования показали, что ви-таминно-ферментный комплекс является малотоксичным соединением. Он в изучаемых дозах при длительном применении не оказывает отрицательного влияния на функцию печени, морфологические и биохимические показатели крови лабораторных животных. Препарат не обладает ме-стнораздражающим и аллергизирующим действием, благодаря чему его можно давать животным на протяжении всего периода их выращивания без каких-либо ограничений.
ЛИТЕРАТУРА:
1. ГОСТ 31926-2013 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Методы определения безвредности.
2. ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009. Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследования общетоксического действия. Введ. 2009-10-20. - М.: Стандар-тинформ, 2010. - 27 с.
3. Кононенко, С.И. Эффективность использования ферментных препаратов в комбикормах для свиней / С.И. Ко-ноненко // Проблемы биологии продуктивных животных. - 2009. - № 1. - С. 86-91
4. Куприянов, С.В. Использование премикса и ферментного препарата в
кормлении молодняка мясных свиней / С.В. Куприянов, Б.Т. Абилов // Зоотехния. - 2007. - № 11. - С. 15-17
5. Манохин, А.А. Влияние витаминно-ферментных препаратов на физиологическое состояние поросят / А.А. Манохин, Л.В. Резниченко, В.Н. Карайче-цев // Journal of research and practice -scientific notes - Kazan 2017, Volume 232 (IV) - С. 108-112
6. Манохин, А.А. Влияние витамино-ферментного комплекса на качество мяса свиней / А.А. Манохин, Л.В. Резниченко, С.Б. Носков // Инновации в АПК: проблемы и перспективы. - 2017. -№ 4 (16). - С 130-134
7. Методические рекомендации по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998)
8. Резниченко, Л.В. Применение новых витаминно-ферментных комплексов в животноводстве / Л.В. Резниченко, А.А. Манохин, Н.Г. Савушкина // Материалы международной научно-производственной конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки РСФСР, доктора ветеринарных наук, профессора Кабыша А.А.: Сб. науч.тр. - Троицк: Южно-уральский ГАУ, 2017 - С. 337-344
9. Савушкина, Н.Г. Применение витаминно-ферментных комплексов в бройлерном птицеводстве / Н.Г. Савуш-кина, Л.В. Резниченко // Материалы XX1 Международной научно-производственной конференции «Проблемы и решения современной аграрной экономики». - 2017 -Т.1. - С 264-266
ИЗУЧЕНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ ВИТАМИНО-ФЕРМЕНТНОГО КОМПЛЕКСА НА
ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Манохин А.А., Носков С.Б., Резниченко А.А., Наумова С.В.
Резюме
Изучена безвредность нового витаминно-ферментного комплекса на белых крысах, кроликах и морских свинках. В результате проведённых исследований установлено, что витаминно-ферментный комплекс является малотоксичными соединением. Данный комплекс в изучаемых дозах при длительном применении не оказывает отрицательного влияния на функцию печени, почек, физико-химические показатели крови лабораторных животных. Он
не обладает местнораздражающим и аллергизирующим действием, благодаря чему его можно давать животным на протяжении всего периода их выращивания без каких-либо ограничений.
INVESTIGATION OF THE SAFETY OF VITAMIN-ENZYME COMPLEX ON
LABORATORY ANIMALS
Manokhin A.A., Noskov, S.B., Reznichenko A. A., Naumova S.V.
Summary
The harmlessness of the new vitamin-enzyme complex was studied on white rats, rabbits and guinea pigs. As a result of the conducted studies it was established that the vitamin-enzyme complex is a low-toxic compound. This complex does not have a negative effect on the function of the liver, kidneys, physicochemical parameters of blood of laboratory animals with prolonged use in the studied doses It does not have a local irritating and allergic effect, so that it can be given to animals throughout their growing period without any restrictions.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-235-3-130-137 УДК 616- 092.19:612:396.32:636.2
КИСЛОТНО-ОСНОВНОЙ ГОМЕОСТАЗ У ГОЛШТИНИЗИРОВАННОЙ ПОПУЛЯЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ ЖИВОТНОВОДСТВА САРАТОВСКОЙ
ОБЛАСТИ
Маркова Д. С. - аспирант, ПБайзульдинов С.З., Калюжный И. И. -д.в н., профессор,
□ □Алехин Ю.Н. - д.в.н., старший сотрудник
ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»
□ директор АО «ПЗ «Трудовой», □ ПГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук»
Ключевые слова: кислотно-основной гомеостаз, голштинская порода крупный рогатый скот, метаболизм, стресс, адаптация, биохимические параметры сыворотки крови, переходный период.
Key words: acid-basic homeostasis, Holstein breed of cattle, metabolic, stress, adaptation, biochemical parameters of blood, transitional period.
Биохимические нарушения, имеющие место у высокопродуктивного скота, использующегося в различных регионах Российской федерации, имеют разностороннее освещение во многих публикациях [4,5,6,7]. Эта сторона лабораторно-клини-ческого исследования является одним из инструментов контроля ветеринарно-зоо-технических проблем , связанных с адаптацией импортного скота, в том числе голштинской породы, определяющей основное направление селекции высокопродуктивных коров черно-пестрой породы в промышленных предприятиях нашей страны [1,2,3,5,8]. Импорт крупного рога-
того скота осуществляется в основные природно-экономические районы федеральных округов РФ: Центрального, Северо-Западного, Приволжского, Южного, Уральского, Сибирского [1,2,3].
К настоящему времени выяснены закономерности, сопровождающие адаптацию крупного рогатого скота основных молочных пород, позволившим сформулировать аксиоматическое заключение [6,7,8,9,10], имеющее основополагающее значение в деле сохранения здоровья высокопродуктивного поголовья: нарушения обмена веществ являются одним из основных факторов, препятствующих
