CC BY
760 А Ветеринария
www.agroyug.ru
DOI 10.24412/cl-33489-2023-7-60-62 УДК 579.61
Закрепина Е. Н., кандидат ветеринарных наук, доцент, e-mail: [email protected]
Носкова В. И., кандидат технических наук, доцент, e-mail: [email protected]
Муллагалиева О. А., ветеринарный врач, e-mail: [email protected]
ФГБОУ ВО «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»
ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНЫХ СВОЙСТВ ПРОБИОНТОВ ПРЕПАРАТА «LIFE 9» В ОТНОШЕНИИ УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ
Аннотация. В работе представлены результаты изучения свойств микроорганизмов-пробионтов препарата «Life 9». Выявлено снижение активности роста условно-патогенного St. аureus при совместном культивировании с пробиотическим микроорганизмом. При этом антагонистическое действие пробио-тика на E. соН на среде МПА не установлено. Однако, совместное культивирование E. соИ и пробиотика на стерильном обезжиренном молоке показало сохранение способности обоих микроорганизмов проявлять признаки роста с выделением молочной кислоты и коагуляцией белка.
Ключевые слова: микробиологическое исследование, микрооргпнизмы-пробионты, пробиотический препарат, Life 9, лактобактерии, бифидобактерии, условно-патогенные микроорганизмы, антагонистическая активность, антимикробное действие.
Abstract. The paper presents the results of studying the properties of microorganisms-probionts of the drug "Life 9. A decrease in the growth activity of conditionally pathogenic St. aigeis was revealed when co-cultured with a probiotic microorganism. At the same time, the antagonistic effect of the probiotic on E. coli on the MPA medium has not been established. However, the joint cultivation of E. coli and probiotic on sterile skimmed milk showed the preservation of the ability of both microorganisms to show signs of growth with the release of lactic acid and protein coagulation.
Keywords: microbiological study, microorganisms-probionts, probiotic preparation, Life 9, lactobacilli, bifidobacteria, opportunistic microorganisms, antagonistic activity, antimicrobial action.
Поддержание нормального соотношения между полезной и условно-патогенной микрофлорой макроорганизма является актуальным вопросом современного животноводства. Ранее для этого применяли кормовые антибиотики. При этом погибали полезные бактерии, а также возникала проблема антибиотикорезистентности микроорганизмов. Использование пробиотиков позволяет благополучно решить проблему. Скармливание пробиотиков и пребиотиков способствует лучшему усвоению питательных веществ рационов, оптимизации метаболического статуса, повышению общей резистентности, иммунологической реактивности и улучшению продуктивных качеств животных и птицы. Однако эффективность различных пробиотических препаратов неодинакова и зависит от видов и штаммов микроорганизмов, входящих в их состав. При этом появление новых пробиотиков требует детального изучения их свойств [11]. Пробиотики обладают им-муномодулирующим действием, антагонистической активностью и улучшают барьерную функцию слизистой оболочки кишечника. Бактерии-пробионты за счет бактерицидного или бактериостатического действия по отношению к нежелательной микрофлоре проявляют антагонизм. Они продуцируют сероводород, перекись водорода и различные кислоты, которые обуславливают снижение рН в просвете кишечника, и выделяют антимикробные вещества (бактериоцины) [1]. Основой для производства пробиотических препаратов и премиксов являются производственные штаммы микроорганизмов. Их выделяют из различных источников человеческого,
животного и микробного происхождения, получают с использованием живых биологических систем, тканей организмов и их производных, применяя средства биотехнологии [1, 3]. Именно свойства используемых при производстве штаммов определяет эффективность пробиотиков [2].
Пробиотики, пребиотики и синбиотики применяют не только в профилактических целях, но и для терапии заболеваний. Доказано, что использование пробиотиков способствует повышению бактерицидной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов и фагоцитарного индекса, а в молоке и молозиве животных увеличивается количество иммуноглобулинов [11]. Препарат Life 9 является пробиотиком третьего поколения (симбиотиком), т.к. в его состав входит 17 миллиардов живых культур из девяти штаммов полезных бактерий (лактобактерий, бифидобактерий и других микроорганизмов): Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium lactis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus thermophilus, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum. [4].
Объект исследования - пробиотическая добавка «Life 9».
Предмет исследования - микроорганизмы-про-бионты (Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium lactis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus thermophilus, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum), входящие в состав добавки,
ЭФФЕКТИВНОЕ ЖИВОТНОВОДСТВО
F AM SUN
Aikgrp4rd hnyfiip^wJir
генеральный партнер спецвыпуска свиноводство
условно-патогенные микроорганизмы (Escherichia coli, Staphylococcus aureus) [5].
Цель: изучить антимикробные свойства микроор-ганизмов-пробионтов препарата «Life 9» в отношении условно-патогенных культур микроорганизмов.
Задачи:
1. Выделить чистую культуры микроорганиз-мов-пробионтов.
2. Провести совместное культивирование пробио-тической культуры и условно-патогенных микроорганизмов (Staphylococcus aureus, Escherichia coli).
3. Оценить результаты исследования.
Материалы и методы. Для исследования использована пробиотическая добавка «Life 9» американской компании «Young Living» (рис.1).
Результаты исследования. При посеве на скошенный МПА смогли выделить чистую культуру бактерий-пробионтов, которые и были использованы в дальнейшей работе.
Результаты посева на МПА: На рисунке 3 представлен результат совместного посева пробиотика и E. coli, заметных отличий роста чистой культуры E. coli и смеси ее с пробиотиком не наблюдается.
iiii
П<Щ W
Ч!
К ш
Рисунок 3. Выросшие культуры: слева -справа - E. coli с пробиотиком.
E. coli,
Рисунок 1. Пищевая добавка «Life 9».
Чистые культуры пробиотических микроорганизмов выделяли используя пятикратные разведения капсулы препарата стерильным физиологическим раствором. Проводили посевы на простые и специальные питательные среды (МПА, молочный агар, среду Сабуро); культивировали в термостате при 37Со в течение 24-96 ч. В результате на скошенном МПА смогли выделить чистую культуру молочнокислых микроорганизмов.
Для исследования антагонистической активности выращенной культуры пробиотиков были использован метод сплошного газона [6, 7]. Изучали рост чистой культуры пробиотика в присутствии тест-штаммов St.aureus и E. coli при совместном культивировании. Культуры, которые не были подавлены ростом тест-штаммами St.aureus и E.coli, считаются антагонистичными в отношении данного вида микроорганизма [8, 9].
Рисунок 2. Микропрепарат чистой культуры микроорганизмов пробионтов (окраска по Граму).
После культивирования провели визуальную оценку состояния молока и микроскопию мазков (рис. 2).
Рисунок 4. Выросшие культуры: слева - St.aureus, справа - St.aureus с пробиотиком.
При учете признаков роста на второй чашке Петри (рис. 4) (совместный посев пробиотика и St. aureus) наблюдаются заметные отличия: на половине, засеянной чистой культурой St. aureus рост обильнее, чем на половине, засеянной смесью с пробиотиком.
Результаты посева в стерильное обезжиренное молоко.
Для изучения биохимической активности и антимикробных свойств микроорганизмов-пробионтов провели посев на специальную питательную среду стерильное обезжиренное молоко (СОМ). После культивирования отмечены следующие признаки: St.aureus не изменяет консистенцию среды (жидкая, однородная), не вызывает образования сгустка, запаха диацетила и ацетоина (кисломолочного) не ощущается; E.coli изменяет консистенцию СОМ (вверху пробирки собирается хлопьевидная масса, пузырьки по объему сгустка), вызывает образование неоднородного сгустка и отделение сыворотки, запаха диацетила и ацетоина (кисломолочного) не ощущается. При совместном выращивании бактерий-пробионтов и St.aureus наблюдается отсутствие сгустка, консистенция СОМ жидкая, однородная, без осадка и хлопьев, запаха диацетила и ацетоина
62 А Ветеринария
www.agroyug.ru
(кисломолочного) не ощущается, в то время, как совместное культивирование бактерий-пробионтов и E.coli вызывает образование плотного сгустка (держит форму), отделение сыворотки, в верху пробирки - газообразование в виде столбика, запаха диацетила и ацетоина (кисломолочного) не ощущается. Рост микроорганизмов-пробионтов на СОМ характеризуется образованием плотного сгустка с легким отделением сыворотки на поверхности и появлением выраженного кисломолочного вкуса и запаха [10].
Заключение. В результате проведенного исследования обнаружен антагонизм бактерий, входящих в состав пробиотической пищевой добавки «Life 9», по отношению к условно-патогенному грамположительному микроорганизму St. аureus. Кроме того, установлено, что при совместном культивировании с пробиотическим микроорганизмом условно-патогенная грамотрицательная E. ^li сохраняет свою биохимическую (сахаролитическую) активность. Опыт дифференцированного применения про-биотических препаратов неоспоримо свидетельствует о том, что их использование наиболее физиологично. Более того, использование пробиотических препаратов показало их явное клини-ко-микробиологическое преимущество перед антибиотиками, усугубляющих дисбиотические явления кишечника.
ЛИТЕРАТУРА
1. Антимикробные свойства пробиотиков. -официальный сайт ООО «Про-™oHmKC»:https://propionix.m/antimikrobnyye-veshchestva sinteziruyemyye-probiotikami.
2. Явников Н.В. Отбор штаммов молочнокислых бактерий для создания пробиотической кормовой добавки. Ветеринария и кормление. - 2020, № 5. - С. 55-57.
3. Life 9 Probiotic Supplement Young Living Essential Oils. - Текст: электронный. - URL: https://www.youngliving.com/us/en/product/life-9.
4. 4. Life 9 - пробиотическая добавка. - Текст: электронный. - URL: https:// www.youngliving.com/ru_RU/products/life-9.
5. Глобальные практические рекомендации Всемирной Гастроэнтерологической Организации. Пробиотики и пребиотики. - Текст: электронный. - URL: https://www.worldgastroenterology.org/UserFiles/file/guidelines/ probiotics-and-prebiotics-russian-2017.pdf.
6. Садуллоева Т.И., Чичерина В.Р.Определение антагонистической активности пробиотических штаммов микроорганизмов // Материалы IX Международной студенческой научной конференции «Студенческий научный форум» - Текст: электронный. - URL: https://scienceforum.ru/2017/ article/2017039197.
7. Колычев, Н. М. Ветеринарная микробиология и микология: учебник / Н. М. Колычев, Р. Г. Госманов. - 3-е изд., стер. - Санкт-Петербург: Лань, 2019. - 624 с. - Текст: электронный // Лань: электронно-библиотечная система. - URL: https://e.lanbook.com/book/125742.
8. Госманов, Р. Г. Практикум по ветеринарной микробиологии и микологии: учебное пособие / Р. Г. Госманов, Н. М. Колычев, А. А. Барсков.
- Санкт-Петербург: Лань, 2022. - 384 с. - Текст: электронный // Лань: электронно-библиотечная система. - URL: https://e.lanbook.com/book/211544.
9. Афонюшкин В.Н., Юшков Ю.Г., Шкред О.В. Способ определения антагонистически активных штаммов бактерий. Патент на изобретение RU 2328734 C1, 10.07.2008. Заявка № 2006133049/15 от 14.09.2006.
10. Рябцева, С. А. Микробиология молока и молочных продуктов: учебное пособие для вузов / С. А. Рябцева, В. И. Ганина, Н. М. Панова. - 4-е, стер.
- Санкт-Петербург: Лань, 2021. - 192 с. - Текст: электронный // Лань: электронно-библиотечная система. - URL: https://e.lanbook.com/book/162387 .
11. Пробиотики и пребиотики в промышленном свиноводстве и птицеводстве: монография / Д. С. Учасов, В. С. Буяров, Н. И. Ярован, И. В. Червоно-ва. - Орел : ОрелГАУ, 2014. - 164 с. - ISBN 978-5-93382-214-1. - Текст : электронный // Лань : электронно-библиотечная система. - URL: https://e. lanbook.com/book/71432.
ский
СХПК «Племзавод Майский» - один из крупнейших производителей сельскохозяйственной продукции в Вологодской области.
www.pzmay.ru
Общее поголовье крупного рогатого скота в СХПК «ПЗ Майский» - более 4300 голов, в т.ч. 1800 коров
Годовое производство молока на предприятии -более 17 тыс. тонн, с товарностью 95%.
Все молоко-сырье соответствует требованиям высшего сорта Технического регламента на молоко и молочную продукцию (ТР ТС 033/2013) и весь объем реализуется на ПК «Вологодский молочный комбинат».
Уровень продуктивности коров ежегодно растет и составляет в среднем по предприятию 9964 кг на голову, а в разрезе пород: айрширская - 8500 кг, голштинская - 10800 кг.
ЙИЖЯ
С 1998 года хозяйство входит в племенную структуру Вологодской области и имеет статус племенного завода по двум породам молочного скота - айрширская и голштинская.
1 СХПК «Племзавод Майский» ежегодно реализует более 200 голов племенных нетелей и бычков айрширской и голштинской породы.
| Предприятие с 2015 года занимается откормом бычков молочной породы.
' Ежегодно с откорма реализуется более 400 голов в живом весе 440 кг в возрасте 12 месяцев.
}
.1 Г1
Председатель Баушев Александр Валентинович Приемная: 8(8172) 52-42-85, [email protected] Отдел животноводства: 8(8172) 52-42-88 [email protected]
