CC BY
39
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ «ЯНТАРНАЯ КИСЛОТА», «ЯНТАРОС» И «ЯНТАРОС ПЛЮС» НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ СОСТАВ КРОВИ НОРОК
Шабиев Л.Ф., Гарипов Т.В., Гасанов А.С.
Резюме
Применение препаратов «Янтарная кислота», «Янтарос» и «Янтарос плюс» в указанных дозах у норок стимулирует гемопоэз, способствует нормализации лейкопоэза, белкового и минерального обменов.
«YANTARNAYA KISLOTA» (SUCCINIC ACID), «YANTAROS», AND «YANTAROS PLUS» ON MORPHOLOGICAL CONTENT OF MINKS’ BLOOD
Chabiev L.F., Garipov T.V., Gasanov A.S.
Summary
The treatment of preparations «Succinic acid», «Yantaros» and «Yantaros plus» in indicated doses to minks has stimulated the process of hemopoesis, leycopoesis, protein and mineral methabolism.
УДК 619:616.98:578.833.31
ИЗГОТОВЛЕНИЕ И ИСПЫТАНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ И ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ КОНЪЮГАТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА КЧС МЕТОДАМИ ИФА И МФА В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
Юсупова Г.Р., Кабиров Г.Ф., Юсупов Р.Х.*, Ильясова Г.Х.*
ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
ФГБУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной
безопасности»*
Ключевые слова: классическая чума свиней, иммуноферментный анализ, метод флуоресцирующих антител, донор.
Key words: classic swine fever, immune and enzyme analysis, fluorescent antibodies method, donor.
Классическая чума свиней вызывается одним из семейств Togaviridae большой группы РНК - содержащих вирусов, имеющих липидную оболочку. Возбудитель КЧС относится к роду Pestivirus (Н.К. Мищенко, 1987; Е.А.Непоклонов, 2000; В. А. Сергеев, 1993).
По вирулентности различают А-, В-, С- варианты вируса КЧС (Н.В.Фомина, Р.В. Белоусова и др., 1991; Т.З. Байбиков, А.М. Рахманов, 2008).
Многие полевые изоляты вируса КЧС имеют низкую вирулентность и приводят к хроническому заболеванию или абортам, рождению мертвых поросят или гибели новорожденных, что затрудняет диагностику заболевания.
Для диагностики КЧС рекомендованы и используются ИФА и метод иммунофлуоресценции (В.В. Куринов, 2003; А.В. Иванов и др., 2007; Г.Р. Юсупова, 2009).
Целью настоящей работы явилось усовершенствование ИФА и МФА методов на основе использования в качестве специфического иммуноглобулина гипериммунные сыворотки мелкого рогатого скота.
Материалы и методы. В качестве доноров гипериммунной сыворотки использовали баранов.
Основанием для выбора баранов-доноров для испытания в качестве биологической модели обусловлено генетической невосприимчивостью их к вирусным инфекциям свиней, обеспечивающей тем самым чистоту иммунного фона. Кроме того, бараны в качестве доноров в лабораторных и биофабричных условиях экономичны при содержании и удобны в работе по сравнению с другими сельскохозяйственными животными. Следует отметить, что бараны-доноры могут быть многократно использованы для взятия крови в течение ряда лет без существенных изменений клиникофизиологического статуса организма их.
Баранов-доноров для иммунизации брали оценивая по клиническому статусу и по исследованию крови на отсутствие антител к вирусу КЧС. В опытах использовали 57 голов животных с живой массой 35-40 кг.
Для гипериммунизации подопытных животных в качестве вируссодержащих материалов использовали вирусвакцину против чумы свиней (ВГНКИ) из штамма «К» (ТУ 46-21-810-77), вирусвакцину ЛК-ВНИИВВиМ сухую культуральную против классической чумы свиней из штамма «К» (ТУ 46-21-796-78), а также культуральный вирус КЧС штамма «Ши-Мынь», выращенный на культуре перевиваемых клеток почек овец (ППЭО) с титром 10-4 ЛД50/мл, который предварительно инактивировали у-облучением при интенсивности 2 мРад на установке «Исследователь».
В исследованиях использовали иммуноглобулины из гипериммунных сывороток крови баранов, содержащие специфические антитела к вирусу КЧС в высоких титрах (1:128 - 1:256) в РНГА. Осаждение иммуноглобулинов проводили насыщенным раствором сульфата аммония по общепринятой методике.
Для метки иммуноглобулина применяли пероксидазу производства «Sigma Reanal» с активностью Rz около 3. Конъюгацию проводили периодатным методом по P.K. Nakane (1978).
Постановку ИФА для обнаружения антигена вируса КЧС осуществляли следующим образом. Исследуемые и контрольный специфический антигены адсорбировашли на полистироловых планшетах плоским дном «Linbro» фирмы «Fiow laboratories» или «Cooke mieratiter» фирмы «Dynatech».
Для исследования от свиней павших после экспериментального заражения вирусом КЧС, брали кусочки селезенки, лимфатических узлов, почек, печени и готовили гомогенат в виде 20%-ной суспензии на физиологическом растворе NaCl, рН 7,4. Вначале ткани тщательно очищали от пленок, жировой ткани, растирали в ступке со стерильным стеклянным песком. Смесь подвергали замораживанию при минус 10-15оС и оттаивали при 37оС в термостате, центрифугировали при 1000 g в течение 25-30 мин. Надосадочную жидкость разводили 1:10 в физиологическом растворе и использовали в ИФА в качестве испытуемого антигена. Пробу считали положительной при коэффициенте
специфичности (Ксп) равной 2 и более, а отрицательной, если величины Ксп менее 2.
Одновременно с постановкой ИФА для подтверждения наличия вируса КЧС в исследуемых органах и тканях использовали метод флуоресцирующих антител (МФА) в прямом варианте. Специфические иммуноглобулины метили флуорохромом (изотиоцианат флуоресцеина -ФИТЦ).
Обнаружение антигена вируса КЧС методом иммунофлуоресценции в мазках-отпечатках осуществляли по общепринятой методике.
Учет и оценку результатов проводили по следующей мхеме: обнаружение во всех полях зрения множества групп клеток с яркой зеленой цитоплазматической флуоресценцией - результат положительный (+), обнаружение в 5-10-ти полях зрения единичных групп, состоящих из 3-5 клеток с зеленой цитоплазматической флуоресценцией - результат сомнительный (±), отсутствие в мазках-отпечатках клеток с цитоплазматической флуоресценцией - результат отрицательный (-). Отдельно расположенные клетки с флуоресценцией цитоплазмы или ядра не учитывали.
Результаты исследований. Данные по обнаружению антигена вируса КЧС усовершенствованными методами ИФА и МФА в органах свиней, павших после экспериментального заражения их возбудителем, приведены в таблице 1.
Как видно из таблицы, усовершенствованные методы ИФА и МФА обеспечивают обнаружение антигена вируса КЧС в органах свиней, павших от заражения возбудителем классической чумы свиней.
В следующей серии опытов проводили выявление вируса КЧС методом иммунофлуоресценции в сочетании с культурой клеток РК-15.
1. Результаты выявления антигена вируса КЧС методами ИФА и МФ
№ животного Характер воздействия Титр в ИФА Результат в МФА
суспензия селезенки суспензия лимфоузла мазки из селезенки мазки из лимфоузла
І Заражение вирусом КЧС І 64 І 32 ++++ ++++
2 І 32 І 32 ++++ ++++
3 І 64 І 64 ++++ ++++
4 І 64 І 32 ++++ ++++
5 І 32 І 32 ++++ ++++
6 Контроль (интактные) 0 0 0 0
7 0 0 0 0
Для этого подготовленные для исследования экстракты 20%-ных суспензий проб органов вносили по 0,5-0,6 см в пробирки с культурой клеток, выращенной на стеклянных пластинках из покровных стекол, предварительно удалив ростовую среду. Для инокуляции суспензии каждого органа брали не менее 8 пробирок. Пробирки помещали в термостат при 37 (±)°С на 2 часа. По истечении указанного времени инокулюм удаляли, монослой клеток однократно промывали средой Игла (МЕМ) без сыворотки. Затем в пробирки вносили по 2,0 см питательной среды, содержащей 2% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (поддерживающая среда), и инкубировали 24-96 часов. Через 24 ч после инокуляции поддерживающую среду меняли на свежую. В качестве контроля культуры клеток (отрицательные препараты) 8 пробирок оставляли интактными, предварительно сменив ростовую среду на поддерживающую. Каждые 24 ч по 2 пластинки с культурой клеток, инокулированной исследуемым экстрактом суспензии каждого органа, извлекали из пробирок, вставляли в расщепы спичек с номерами, обсушивали на воздухе до полного удаления влаги и фиксировали холодным ацетоном в течение 10 мин, препараты окрашивали специфической и контрольной люминесцирующей сыворотками и проводили люминесцентную микроскопию.
Исследования показали, что в культуре клеток, зараженных вирусом КЧС и окрашенных специфической люминесцирующей сывороткой, обнаруживали специфическое желто-зеленое свечение в цитоплазме пораженных клеток, расположенных группами (флуоресцирующие микробляшки). В контрольных, незараженных клетках, свечение отсутствовало.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Байбиков, Т.З. Основные инфекционные болезни свиней и их специфическая профилактика в современных условиях / Т.З.Байбиков, А.М.Рахманов, Н.А.Еременко // Матер. междунар. научн.
конф., посвящ. 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» «Актуальные проблемы инфекционной патологии животных». - Владимир, 2008. - С.87-90. 2. Иванов, А.В. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации классической чумы свиней / А.В.Иванов, Р.Х.Юсупов и др. -Казань, 2007. - 18 с. 3. Куриннов, В.В. Сравнительное исследование напряженности иммунитета против классической чумы свиней промышленных свинокомплексов / В. В. Куриннов // Ветеринарная газета. -2003. - № 10. - С.7. 4. Мищенко, Н.К. Чума (классическая) свиней / Н.К.Мищенко // В кн. инфекцион. болезни животных. - М.: «Колос». -1987. - С.19-20. 5. Непоклонов, Е.А. Разработка препаратов нового поколения для диагностики и профилактики классической чумы свиней / Е.А.Непоклонов // Тез. докл. Всеросс. научн.-произв. конф. 20-21 июня 2000 г. - Ставрополь, 2000. - С. 57-60. 6. Сергеев, В.А. Вирусные вакцины /В.А.Сергеев // Киев, 1993. - С.292-994. 7. Фомина, Н.В. Вирусы животных / Н.В.Фомина, Р.В.Белоусова, В .В. Соболев, В.Н.Сюрин // Москва, 1991. -С. 122-138. 8. Юсупова, Г.Р. Разработка метода иммуноферментного анализа для обнаружения специфических антител к вирусу классической чумы свиней / Г.Р.Юсупова // Ветеринарный врач. - Казань, 2009. - № 1. -С.28-30. 9. Nakane, P.K. Peroxidase-labeled antibody: a new method of conjugation /P.K.Nakane, A.Kawaoi // J.Hostochem. Cytochem. - 1978. - V.22. - P.284-291.
ИЗГОТОВЛЕНИЕ И ИСПЫТАНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ И ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ КОНЪЮГАТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА КЧС МЕТОДАМИ ИФА И МФА В ПАТОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
Юсупова Г.Р., Кабиров Г.Ф., Юсупов Р.Х., Ильясова Г.Х.
Резюме
Проведенные исследования показали, что ИФА и метод иммунофлуоресценции с использованием специфических и активных диагностикумов позволяет диагностировать классическую чуму свиней в течение 5-6 часов, а МФА в сочетании с культурой клеток - в течение 2024 часов.
MAKING AND TESTING THE IMMUNE -ENZYME AND IMMUNE-FLUORESCENT CONJUGATES IN ORDER TO REVEAL THE SWINE FEVER VIRUS ANIGEN BY IFA AND MFA METHODSON PATHOLOGIC MATERIAL
Yusupova G.R., Kabirov G.F., Yusupov R.H., Ilyasova G.H.
Summary
The investigations showed that IFA and immune-fluorescent method with specific and active diagnosticums used helps to diagnose classic swine fever
within 506 hours, MFA in combination with cell culture diagnose it within 2024 hours.
УДК 338.94:631.164.23.004.14
ВЛИЯНИЕ КРЕАТИВНОГО КАПИТАЛА НА РАЗВИТИЕ ИННОВАЦИОННОЙ ЭКОНОМИКИ
Аюпов Р.Ф.
ФГБОУ ВПО ФГБОУ ВПО «Казанский научно-исследовательский технологический университет»
Ключевые слова: инновационная экономика, креативный капитал, анализ креативных отраслей, классификация креативных отраслей.
Key words: innovative economy, creative capital, creative industry analysis, creative industry classification.
Развитие учения о креативной экономики приходится на начало XXI века, когда начался бурный рост отраслей, базирующихся на авторском праве. Джон Хокинз первым использовал этот термин. Он также выделил те отрасли, которые являются ключевыми в этой модели. Это 14 отраслей, на которые в среднем приходится около 11% от ВВП развитых стран, что составляет 2,2 триллиона долларов, при 8% уровне темпов роста, который более чем в два раза превышает среднеотраслевой. Дальнейшее изучение экономической составляющей этих отраслей привело Хокинза к выводу о том, что они являются двигателями национальных экономик и их развитие является неотъемлемой частью благополучия регионов. На сегодняшний день, наиболее совершенной считается классификацией креативных отраслей Всемирной организации Интеллектуальной Собственности (ВОИС).
Социолог Роберт Кушинг, изучая деятельность креативных отраслей, выделил из социального капитала креативный капитал, который и объясняет возникновение и развитие инновационной активности. Это также объясняет диспропорцию развития одних регионов по отношению к другим. Для наиболее инновационно активных регионов характерно наличие креативных сообществ. Они формируют креативные цетры (в
сущности, кластеры), которые являются центрами разнообразия,
20
инноваций и экономического роста. Именно человеческий креативный
20 Robert Cushing, “Creative Capital, Diversity and Urban Growth”. Unpublished manuscript, Austin , Texas, December 2001
