CC BY
39
20
ТЕЗИСЫ..
Г.К. Герасимова, Т.А. Сидорова, Е.В. Хорошева, А.А. Штиль
ЭФФЕКТИВНОСТЬ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ТЕРАФТАЛ + АСКОРБИНОВАЯ КИСЛОТА
В ОТНОШЕНИИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК С ФЕНОТИПОМ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ
РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Введение. Бинарная каталитичская система ТФ+АК проходит клинические испытания как новое лекарственное средство для лечения злокачественных опухолей. Препарат ТФ (окта-4,5-карбоксифталцианин кобальта) - катализатор окисления АК, синтезирован в ФГУП «ГНЦ «НИОПИК». На предклиническом этапе исследований была выявлена цитотоксическая активность ТФ+АК в отношении 5 культур опухолевых клеток человека.
Цель исследования. Изучение влияния ТФ+АК на опухолевые клетки с фенотипом множественной лекарственной устойчивости (МЛУ), обусловленной белками-транспортерами Pgp и MRP.
Материалы и методы. Культуры опухолевых клеток: родительские линии, чувствительные к препаратам круга МЛУ: гепатома крыс McA RH УУУУ, эритролейкоз человека К562, аденокарцинома молочной железы человека линии MCF-7, немелкоклеточного рака легких человека COR/L23P и их варианты с разными механизмами и уровнем МЛУ. Исследованы: цитотоксическая активность ТФ и ТФ+АК относительно обоих вариантов клеток, способность этих препаратов модулировать цитотоксичность винкристина, чувствительность клеток к доксорубицину (Докс) после лечения их ТФ+АК в течение 8 пассажей. Жизнеспособность опухолевых клеток оценивали МТТ тестом. ЕС50 определяли методом регрессионного анализа с использованием программы GraphPad PRIZM.
Результаты. Выявлено, что все исследованные клетки с фенотипом МЛУ, обусловленной белками-транспортерами Pgp или MRP в 2-4 раза более чувствительны к ТФ+АК, чем клетки родительской линии. При этом не выявлено модифицирующего действия ТФ и ТФ+АК на цитотоксическую активность винкристина, в то время как известный модулятор Pgр-опосредовaнной МЛУ — верапамил обладал выраженной хемосенсибилизирующей активностью. При многократном лечении клеток К562/4 с индуцированной устойчивостью к Докс каталитической парой ТФ+АК обнаружено значительное снижение их устойчивости к Докс: ЕС50 для чувствительного и устойчивого вариантов линии К562 к 8 пассажу стали равны. Восстановление чувствительности к Докс клеток К562/4 может быть следствием более быстрой гибели в популяции устойчивых клеток по сравнению с чувствительными. Механизм различий в цитотоксичности ТФ+АК в отношении клеток с фенотипом МЛУ и родительских линий не ясен.
Выводы. 1) Клетки с фенотипом МЛУ в 2-4 раза более чувствительны к каталитической системе ТФ+АК, чем клетки родительских линий. 2) ТФ и ТФ+АК не являются ингибиторами белка Pgp, т.к. не влияют на его функцию. 3) Длительное лечение ТФ+АК клеток с фенотипом Pgp-МЛУ приводит к восстановлению их чувствительности к Докс. 4) Результаты исследования дают основание предположить, что в процессе лечения повторными курсами ТФ в присутствии АК возможно восстановление чувствительности опухолей не только к док-сорубицину, но и другим препаратам круга МЛУ.
Работа выполнена в рамках НТП «Разработка и практическое освоение в здравоохранении новых методов и средств диагностики и лечения онкологических, инфекционных и других опасных заболеваний».
Е.А. Кудинова, Т.М. Кулинич, Е.Ф. Филясова, А.В. Иванов, В.К. Боженко
ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ИНТЕРНАЛИЗУЕМОГО ПЕПТИДА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО ИНГИБИТОР ЦИКЛИНОВЫХ КИНАЗ, НА КРАТКОСРОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА
ФГУ РНЦ Рентгенрадиологии Росмедтехнологий, Москва
Ингибиторы циклиновых киназ наиболее часто повреждаются в процессе канцерогенеза. Результатом этого является повышение активности циклинов и, как следствие, нарушение контроля пролиферации. Поэтому поиск эффективных, избирательных, низкотоксичных ингибиторов циклиновых киназ является одним из актуальных направлений современной экспериментальной онкологии. Альтернативным направлением является использование естественных ингибиторов циклиновых киназ (варианты генной терапии) или их фрагментов - функциональных пептидов. Ранее мы показали, что химерные интернализуемые пептиды, включающие фрагменты ингибитров циклиновых киназ D или А типа эффективны в качестве цитостатических и цитотоксических агентов в отношении перевиваемых клеточных линий как in vitro, так и in vivo.
Задача исследования. Изучить цитотоксическую активность интернализуемых пептидов, содержащих ингибиторы циклиновых киназ в краткосрочных культурах опухолей человека.
Материалы и методы. Исследуемый химерный пептид представляет собой последовательность, включающую интернализуемую часть - Antp (участок белка Anntenapedia плодовой мухи Дрозофилы) и функционально-активную часть - р16, последовательность, идентичную фрагменту р16ШК4а. Краткосрочные культуры получали из операционного материала путем механического разделения клеток. Клетки высаживались в среду ДМЕМ, содержащую 10 % ФСБ, глутамин и антибиотик. Через 24 ч инкубации среду меняли на новую, содержащую в опытных образцах 40 мкМ исследуемого пептида Antp_р16. Нами были исследованы следующие культуры: рак почки, неизмененная, рак тела матки, рак эндометрия, рак шейки матки, рак желудка, рак яичника, рак молочной железы. В качестве контроля были исследованы также цитотоксические свойства на нормальные ткани соответствующих органов. Методом проточной цитометрии оценивали уровень апоптоза и некроза с помощью двойной окраски AnnexinV - пропидий йодид. Также часть каждого образца была зафиксирована и в дальнейшем окрашена пропидия йодидом, для определения уровня субдиплоидного пика. Для дифференциации опухолевых клеток использовали антитела к цитокератину.
Результаты. Нами было показано, что пептид Antp_p16 в концентрации 40 мкМ приводит к увеличению уровня апоптоза для ряда опухолей. Для краткосрочной культуры рака почки наблюдали увеличение уровня апоптоза до 31,8 % при внесении в культуральную среду Antp_р16 40 мкМ, уровень апоптоза в контрольном образце составлял 8,6. В краткосрочной культуре рака желудка апоптоз возрастал до 58,1 % при инкубации с исследуемым пептидом. В краткосрочной культуре неизмененной слизистой желудка уровень апоптоза увеличивался до 22,2 %. В краткосрочных культурах рака яичника, неизмененная ткань маточной трубы, рак тела матки (рак эндометрия) и неизмененная ткань тела матки (эндометрий) внесение химерного пептида Antp_р16 в концентрации 40 мкМ не приводило к достоверному изменению уровня апоптоза. При добавлении исследуемого пептида к культуре рака молочной железы наблюдалось увеличение уровня апопто-за с 1У,3 % до 42,%. А в культуре нормальной ткани молочной железы уровень апоптоза возрастал с 11,1 % до 50,6 %.
Выводы. На модели краткосрочных культур опухолей человека показано, что интернализуемый пептид, включающий ингибитор циклиновых кинах D типа - р16ШК4а проявляет избирательные цитоксические свойства по отношению к опухолевым клеткам для таких локализаций как рак почки и рак желудка по сравнению с аутологической нормальной тканью. При этом исследуемый пептид был не эффективен для рака эндометрия, рака матки и рака яичника.
№ 3/том 8/2009
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
