CC BY
17
клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(9) doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
ция ГЦ выше 15 мкмоль/л у мужчин и выше 12 мкмоль/л у женщин) выявлена у 82,6% обследованных больных СД 2 (основная группа II), у 67,2% обследованных группы I и у 23,3% обследованных контрольной группы III (р < 0,05,
р-Ш < 0,°5, рII-III < 0,°5).
Отмечена значимая обратная корреляционная связь умеренной силы между концентрацией ГЦ и уровнем ЭЗВД (r = -0,583,р < 0,05).
Выводы. 1. В результате проведенных исследований установлена достоверно более высокая частота встречаемости гипергомоцистеинемии и нарушения вазомоторной функции эндотелия у пациентов с сахарным диабетом 2 типа по сравнению группой пациентов только с ИБС без СД 2 и с обследуемыми контрольной группы.
2. Выявленная высокая концентрация гомоцистеина и обратная корреляционная связь между его уровнем с ЭЗВД подтверждает данные о наибольшем повреждающем действии на эндотелий сосудов гипергомоцистеинемии и высоком риске сердечно-сосудистых осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа.
Джатдоева А.А., Полимова А.М., Проскурнина Е.В., Владимиров Ю.А. Люцигениновая хемилюминесценция как метод оценки радикал-продуцирующей способности тканей. Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, факультет фундаментальной медицины, Москва
В патогенезе многих патологических процессов важную роль играет оксидативный стресс. Между тем, прямых методов обнаружения радикалов в клетках и тканях немного, и среди них значительное место принадлежит методу активированной хемилюминесценции (ХЛ). Работа посвящена разработке ХЛ-методов анализа свободнорадикальных процессов в тканях человека и животных.
Люцигенин-активированная ХЛ оказалась эффективным методом оценки образования супероксидного радикала в тканях в условиях их аэрации. Затухание люцигенин-зависимой компоненты при прекращении перемешивания отражало скорость потребления кислорода, которая различна в разных тканях. Основным источником радикалов в тканях является дыхательная цепь митохондрий, в результате работы которой генерируется супероксид-анион радикал. Таким образом, тканевая хемилюминесценция дает информацию о работе митохондрий в норме и при патологии.
Метод был применен для исследования радикал-продуцирующей активности тканей животных, таких как а) срезы миокарда крыс в условиях гипоксии/реоксигенации, б) срезы мозга мышей в модели паркинсонизма (область striatumи sub stantia nigra), в) биоптаты глиомы C6 крыс, а также г) предстательная железа крыс.
Для миокарда крыс получены данные о влиянии предварительной ишемии на радикал-продуцирующую способность ткани сердца, для модели паркинсонизма показана увеличенная продукция радикалов тканью мозга.
Л.С. Дмитриев, М.А. Барсукова. Влияние температурного режима инкубационной среды на накопление док-сорубицина в эритроцитах. Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького, Донецк
Онкологические заболевания являются одними из основных причин смертности в мире. Несмотря на прогресс в ранней диагностике рака, количество летальных случаев продолжает расти.
Если отбросить, как неблагоприятный фактор выживаемости больных, отсутствие компетентной медицинской помощи, то остаются индивидуальные особенности пациента, влияющие на эффективность лечения. Одной из основных факторов, ограничивающей успешность химиотерапии, является лекарственная резистентность.
Целью химиотерапевтического лечения является по-
вреждение клеток-мишеней. Клетка же в свою очередь может противодействовать как проникновению препарата, так и не давать ему накопиться в достаточной внутриклеточной концентрации, необходимой для реализации своего эффекта, путем увеличения активности транспортных систем, выводящих лекарственный препарат из клетки.
Цель работы - определение динамики насыщения эритроцитов доксорубицином (ДР) в зависимости от температурного режима.
Оценивали обмен ДР между эритроцитами и инкубационной средой - изотонический фосфатный буфер с глюкозой (ИФБ) следующего состава: NaCl - 140 mM; Na2HPO4 - 1,3 mM; глюкоза-5 mM, pH = 7,4-7,8. Цельную кровь центрифугировали при 1500 об/мин в течение 3 минут, надосадоч-ную жидкость сливали, а эритроциты отмывали 4 раза в 10 кратном объеме ИФБ. Затем эритроциты ресуспендировали в ИФБ (значение гематокрита 12-13%), содержащем ДР в конечной концентрации 200 мкг/мл. Ресуспендированные эритроциты инкубировали при постоянном легком встряхивании на протяжении 2 часов. В первой серии суспензию эритроцитов инкубировали при 37oC, во второй - 35oC, в третьей - 30oC. Каждые 10 минут отбирали пробы которые центрифугировали при 1500 об/мин в течение 3 мин, а содержание ДР определяли в надосадочном растворе спектро-фотометрическим методом, в стеклянной кювете с длиной оптического пути в 1 см, на длине волны 485 нм.
Полученные данные показали замедление скорости накопления ДР при понижении температурного режима инкубирования. Тангенсы углов наклона кинетических кривых, описывающих изменение концентрации ДР в ИФБ, при 30oC (1,178) больше, чем при 37oC (0,719). Несмотря на различия температурного режима инкубирования, равновесная концентрация ДР во всех пробах устанавливалась на значении 86 мкг/ мл. Однако при более низких температурах время достижения равновесной концентрации было больше на 15 минут.
А.Д. Донецкова, А.Н. Митин, М.ФНиконова, Н.И.Шарова, М.М. Литвина, В.В. Комогорова. Исследование молекулярных механизмов конверсии фенотипа Т-лимфоцитов при пострадиационной регенерации. ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва
Была исследована динамика экспрессии внутриклеточных и поверхностных молекул Т-клеток, задействованных при их восстановлении после лимфопении, вызванной сублетальным облучением мышей. Подтвержден феномен конверсии фенотипа наивных Т-лимфоцитов в клетки с фенотипом Т-клеток памяти при пострадиационном восстановлении. Показано, что восстановление Т-лимфоцитов после облучения сопровождается увеличением пролиферативной активности (по экспрессии внутриклеточного маркера пролиферации Ki-67) и относительным увеличением пула лимфоцитов с фенотипом центральных Т-клеток памяти (CCR7+ CD44hi) и снижением наивных Т-клеток (CCR7+ CD44lo/-) как в селезенке, так и лимфатических узлах, особенно выраженное на ранних этапах восстановления (5 сутки). Накопление клеток с фенотипом клеток памяти в отсутствие контакта с антигеном может являться причиной развития аутоиммунных процессов.
В Т-клетках вторичных лимфоидных органов (селезенки и лимфоузлов) отмечалось снижение уровня экспрессии мРНК FOXO1 на всем протяжении периода наблюдения. Транскрипционный фактор FOXO1 отвечает за экспрессию молекул, необходимых для миграции и хоминга наивных Т-лимфоцитов - CD62L, CCR7 и S1P1, а также альфа-цепи рецептора к IL-7 (IL-7R alpha), запускающего антиапоптоти-ческий сигнальный путь, необходимый для выживания наивных Т-клеток. Уровень экспрессии активированной формы протеинкиназы в процессе восстановления возрастал.
Russian clinical laboratory diagnostics. 2016; 61(9)
doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
Уровень экспрессии антиапоптотического белка bcl-2 при восстановлении Т-клеток находился в соответствии с динамикой экспрессии AKT и противоположно изменениям экспрессии FOXO1. Предполагая участие транскрипционного фактора KLF2 в регуляции экспрессии поверхностных маркеров Т-клеток, отвечающих за их миграцию и «возрастной» фенотип, нами проведено исследование уровня экспрессии мРНК KLF2 в периферических Т-клетках. Было обнаружено снижение уровня экспрессии мРНК KLF2 Т-клетками селезенки на всем протяжении периода наблюдения и увеличение на ранних сроках восстановления (5 и 10 сутки) Т-клетками лимфатических узлов. Данные изменения сопровождаются аналогичными колебаниями уровня экспрессии в Т-клетках лимфатических узлов рецептора к сфингозин-1-фосфату (S1P1), отвечающего за выход Т-клеток в кровоток из лимфо-идных органов. Однако, данная закономерность не соблюдается в селезенке, где, несмотря на низкий уровень экспрессии мРНК KLF2, на 10 сутки отмечается значимый рост уровня экспрессии S1P1, что, по-видимому, обусловлено массовой миграцией Т-клеток из тимуса вследствие достижения пика тимопоэза на 10 сутки перед вторичной атрофией тимуса.
Таким образом, можно говорить о важной роли PI3K/ AKT/mTOR сигнального пути в процессе регенерации Т-клеточного звена иммунной системы у мышей после лим-фопении, вызванной сублетальным облучением, связи его с экспрессией транскрипционных факторов FOXO1, KLF2 и антиапоптотического белка bcl-2, что в целом определяет выживание, пролиферацию, изменение поверхностного фенотипа и миграционных свойств Т-клеток.
Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ; грант 15-04-04394а.
В.В. Дорофейков2, В.И. Иванов12, И.В. Кайстря2, Е.В. Фролова2. Витамин D и мозговой натрийуретический пептид у пожилых жителей Санкт-Петербурга. 'ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова, Санкт-Петербург; 2Клиника «СМТ», Санкт-Петербург
В последние годы в зарубежной научной литературе приводятся многочисленные данные о важной роли витамина D в области охраны здоровья, включая сердечно-сосудистые заболевания. Целью настоящей работы было исследование сывороточного уровня витамина D(OH) у пожилых жителей Санкт-Петербурга и его ассоциации с маркером хронической сердечной недостаточности - мозговым натрийуретическим пептидом (МНП). Для решения поставленной задачи в зимний период (февраль-март) было обследовано 209 пациентов, не принимавших препараты витамина D в течение предыдущих шести месяцев. Возраст пациентов варьировал от 71 до 91 года, с медианой (интерквартальной широтой) равной 77 годам (от 74 лет до 81 года). 72,7% (152/209) выборки составили женщины. В качестве лабораторного показателя статуса витамина D использовали сывороточный уровень 25-гидроксивитамина D [25(OH)D]. Все исследования проводили на автоматическом анализаторе «ARCHITECT i1000 SR» с использованием наборов реактивов, калибраторов и контролей фирмы Abbott (США). Сывороточная концентрация 25(OH)D у пациентов изменялась от 5,0 до 28,0 нг/мл при следующих устойчивых показателях распределения: медиана 15,5 нг/мл (25-й процентиль равен 12,8 нг/мл, 75-й процен-тиль - 19,7 нг/мл). Рассчитанный медианный доверительный интервал позволяет утверждать, что медиана популяционной совокупности витамина D с вероятностью 0,95 будет находиться в пределах от 14,9 до 16,8 нг/мл. Достоверных различий в обеспеченности витамином D по полу не выявлено, что подтверждается рассчитанным U-критерием Манна-Уитни (Z = -1,267, p = 0,205). В ходе нашего исследования установлено, что авитаминоз D (уровень кальцидиола в крови менее 10 нг/мл) имел место у 9,6% (20/209) обследованных, у 66%
(138/209) пациентов наблюдался гиповитаминоз (25(OH)D в пределах от 10 до 20 нг/мл, включительно) и у 24,4% (51/209) был пониженный уровень витамина D (от 21 до 30 нг/мл).
Обнаружена ассоциация дефицита витамина D с уровнем мозгового натрийуретического пептида (МНП), являющегося маркером хронической сердечной недостаточности. Риск иметь уровень МНП выше 100 пг/мл, т. е. выше нормы, в группе пациентов с авитаминозом был в 1,9 (95% ДИ 1,143,23) раза вероятней, чем в группе с дефицитом витамина и в 2,6 (95% ДИ 1,257-5,175) раза выше, чем в группе с пониженным уровнем витамина D. Таким образом, относительный риск сердечно-сосудистых заболеваний увеличивается с уменьшением концентрации сывороточного витамина D. Необходимы дополнительные рандомизированные исследования для корректного выявления роли низкого статуса витамина D в нарушении функции сердца.
С.А. Евгина', А.В. Ружанская', И.И. Скибо2, Д.Г. Денисов2, Н.Б. Выборнова2, А.В. Васильев2, Г.А. Агаркова', Д.А. Бутлиц-кий', Е.И. Волкова', Е.Г. Виленская', В.Л. Эмануэль3. Результаты исследования российских референсных интервалов для 55 основных биохимических и иммунохимических аналитов в рамках глобального проекта под эгидой IFCC. 'ООО «БЕКМЕН КУЛЬТЕР», Москва; Лабораторный комплекс научно-производственной фирмы «Хеликс», Санкт-Петербург; 'Институт лабораторной медицины на базе Санкт-Петербургского медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург
В ходе российского этапа глобального исследования с использованием биохимического анализатора AU5800 и иммунохимического анализатора UniCell DxI800 (Beckman Coulter) были определены значения 55 аналитов в сыворотке крови 793 добровольцев из трех городов России (Санкт-Петербург, Москва, Екатеринбург). Значимые половые отличия были выявлены для 23 аналитов, российский перечень данных аналитов схож с таковым у других стран - участниц глобального проекта, за исключением выявленных значимых отличий между российскими популяциями мужчин и женщин по общему билирубину и ионам магния. Для 28 анали-тов были установлены раздельные референсные интервалы для мужчин и женщин, в случае таких аналитов как амилаза, щелочная фосфатаза, иммуноглобулин А, СА125, СА19-9, трансферрин, фолат, витамин В12 по причине различной возрастной динамики у женщин и мужчин.
Возрастную зависимость продемонстрировали 25 анали-тов у женщин и 15 аналитов у мужчин, при этом частичный коэффициент регрессии у возраст-зависимых аналитов у российских женщин был выше, чем у мужчин, что согласуется с результатами других стран. По результатам анализа для 4 возраст-зависимых аналитов (глюкоза, ЛДГ, АФП, СА15-3) были определены референсные интервалы для групп младше и старше 45 лет. Для холестерина, триглицеридов, липопро-теидов низкой плотности, тестостерона разбиение проводилось как по возрасту, так и по полу, в связи с чем, устанавливались отдельные референсные интервалы для мужчин младше 45 лет и женщин младше 45 лет. Если после применения третичного исключения имелось приемлемое количество данных также рассчитывались референсные интервалы для мужчин старше 45 лет и для старшей группы женщин. Для репродуктивной панели, включавшей ЛГ, ФСГ, эстради-ол, прогестерон и пролактин были определены референсные значения для женщин в состоянии пре- и постменопаузы.
Интересные данные были получены при анализе такого источника вариации как индекс массы тела (ИМС). 34% добровольцев мужчин и 30% участников женщин имели ИМС > 28, и соответственно результаты измерений по этим индиви-думам исключались при определении референсных интервалов для 19 аналитов. Данные аналиты продемонстрировали
