Научная статья на тему 'Фундаментальные вопросы клинической и лабораторной медицины'

Фундаментальные вопросы клинической и лабораторной медицины Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
2184
116
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы —

Фундаментальные вопросы клинической и лабораторной медицины, этиология и патогенез метаболических пандемий; методическое совершенство (метаболомика, липидомика, персонализированная медицина); основы профилактики.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Fundamental questions of clinical laboratory medicine, metabolic pandemics etiology and pathogenesis; methodical perfection (metabolomics, lipidomics, personalized medicine); prevention basics.

Текст научной работы на тему «Фундаментальные вопросы клинической и лабораторной медицины»

ВТОРОЙ РОССИЙСКИЙ КОНГРЕСС ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ ДНИ ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ РОССИИ - 2016

МАТЕРИАЛЫ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕЖДИСЦИПЛИНАРНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ

«ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ КЛИНИЧЕСКОЙ И ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ»

«ДИАЛОГ КЛИНИКИ И ЛАБОРАТОРИИ»

«ЭТИОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА И ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ»

(12-14 октября 2016 г., Москва)

ЗАЛ «ПАВЛОВ»

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ КЛИНИЧЕСКОЙ И ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ

(Фундаментальные вопросы клинической лабораторной медицины, этиология и патогенез метаболических пандемий; методическое совершенство (метаболомика, липидомика, персонализированная медицина); основы профилактики)

К.И. Аношкин1 2, Е.Б. Кузнецова13, К.М. Мосякова3, А.С. Танас12, М.С. Чаплыгина', Е.А. Алексеева', Е.В. Шпоть3, Д.В. Залетаев12 3, А.З. Винаров3, В.В. Стрельников12. Мутации в генах при ангиомиолипоме почки спорадического генеза. 'ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва; 2ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава РФ, Москва; 3ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ, Москва

Ангиомиолипома (АМЛ) является наиболее встречаемой доброкачественной опухолью почек. Периодически ее обнаруживают в печени, и очень редко в других органах, например, в яичниках, фаллопиевых трубах, семенных канатиках и толстой кишке, а также при редком легочном заболевании -лимфангиолейомиоматозом. Встречаемость АМЛ составляет примерно 13 на 10 000 человек, и встречается в основном у женщин (Ж:М - 4:1).

АМЛ подразделяют на два типа. Тип, связанный с фа-коматозами, в основном с туберозным склерозом (ТС), составляет 20-30% от общего числа АМЛ почек. Второй тип спорадический, составляет 70-80% от общего числа АМЛ почек. Несмотря на большой прогресс в диагностировании и лечении АМЛ, нельзя говорить о подробной охарактеризо-ванности АМЛ с точки зрения генетики. Мутационное профилирование ограничивалось генами TSC' и TSC2.

Нами впервые проведен скрининг мутаций широкой панели генов, которые вовлечены в опухолеобразование, на операционном материале больных с АМЛ методом высокопроизводительного параллельного секвенирования. Было проанализировано восемь пациентов (семь женщин и один мужчина), у которых не диагностирован туберозный склероз. Были выявлены мутации в 104 генах из 409 исследованных. Наиболее часто у пациентов (более двух) встречались мутации в таких генах, как TSC2, ROS', RAD50, BCR, ARID2, ATR и CYPD2D6. TSC2 является геном супрессором, который за счет ингибирования RHEB влияет на комплексы mTORC1 и mTORC2, которые играют центральную роль в контроле клеточного роста.

Второй ген, в котором часто встречались мутации, ROS'. Являясь протоонкогеном, он принадлежит к семейству генов, которые кодируют тирозинкиназный рецептор инсулина. Белок, кодируемый этим геном, является интегральным мем-

бранным белком 1-го типа с тирозинкиназной активностью. Он активирует некоторые нижележащие сигнальные пути, связанные с клеточной дифференцировкой, пролиферацией, ростом и выживанием, в том числе путь PI3K/AKT/mTOR. Интересно, что мутации и в гене TSC2 и в гене ROS1 обнаружены только у одного пациента, тогда как у остальных шести пациентов мутации в этих генах не пересекаются.

Ген STK36, кодирует ферменты семейства серин-треонинкиназ, продукты которого играют важную роль в пути Shh за счет регулирования транскрипционного фактора GLI. Учитывая то, что он относится к семейству серин-треонинкиназ, можно предположить, что мутации в гене STK36 также приводят к развитию доброкачественных опухолей, как и мутации в гене опухолевого супрессора STK11.

Ген MUTYH, в котором также обнаружена мутация, кодирует ДНК-гликозилазу. Его продукт вовлечен в репарацию оксидативного повреждения ДНК, а мутации в гене MUTYH могут приводить к аутосомно-рецессивным формам семейного аденоматозного полипоза. Мутации в данном гене оказывают влияние на способность клетки корректировать ошибки, которые происходят во время репликации ДНК.

Дальнейший поиск и характеристика мутаций представляется перспективным для разработки эффективной терапии АМЛ, в том числе и таргетной терапии, а также будет способствовать профилактике заболевания за счет возможности его раннего обнаружения.

Т.Т. Асатрян1, М.Н. Зенина1,2, А.В Козлов1. Морфометри-ческие параметры эритроцитов при наследственном сфе-роцитозе. 'ФГБОУ ВО СЗГМУ им. И.И. Мечникова; 2ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА»

Наследственный сфероцитоз относится к группе мембра-нопатий, обусловленных генетическими дефектами белкового и/или липидного компонентов мембраны эритроцитов. Заболевание может быть компенсированным, клинически не проявляться, и не диагностироваться сразу после рождения, тем самым усложняя диагностику. При постановке диагноза учитываются средний диаметр (Рэо), толщина (Тэ ) и индекс сферичности (Дсф) эритроцитов. Оценка этих параметров эритроцитов методом микроскопии является трудоемкой процедурой, требующей измерение с помощью специального окуляра-микрометра. Эритроцитарные индексы (средний

объем эритроцита - МСУ, среднее содержание гемоглобина в эритроците - МСН, средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах - МСНС, распределение эритроцитов по объему - RDW), полученные при помощи гематологического анализатора, недостаточно отражают степень нарушения формы клетки.

Целью данного исследования являлась оценка морфоме-трических параметров эритроцитов с помощью аппаратно-программного комплекса «ВидеоТесТ-Морфология», позволяющего в автоматическом режиме описать варианты нарушения формы эритроцитов.

Материалом служили мазки периферической крови пациентов (антикоагулянт К2ЭДТА). Концентрацию гемоглобина, эритроцитов, величину гематокрита и эритроцитарные индексы определяли с помощью анализатора Sysmex КХ-2Ш. Контрольную группу (п = 40) составили пациенты без гематологических заболеваний. Основную группу (п = 20) составили больные с наследственным сфероцитозом. Анализ изображений проводился с использованием аппаратно-программного комплекса «ВидеоТесТ-Морфология».

Эритроцитарные показатели в группах составляли: концентрация НЬ в основной группе - 118,8±32,8 г/л, в контрольной группе - 137,6±9,3, р = 0,07, МСН - в основной группе - 27,6±2,2 пг, в контрольной группе - 28,6±1,3 пг, р = 0,05, МСНС - в основной группе - 36,7±1,0 г/дл, в контрольной группе - 34,7±0,9 г/дл, р = 0,01, MCV - в основной группа - 81,7±14,6 фл, в контрольной группе - 83,1±1,7 фл, р = 0,71, RDW - в основной группе - 17,6±3,9%, в контрольной группе - 13,6±0,5%, р = 0,0001.

Из приведенных данных видно, что на наличие анизоци-тоза указывают два параметра: снижение МСНС и RDW. При измерении эритроцитов с помощью аппаратно-программного комплекса были получены параметры: толщина эритроцитов-микроцитов (Тмэр) в основной группе составила 2,9±0,2 мкм, в контрольной группе - 2,3±0,2, р = 0,001, толщина эритроцитов (Тэр) - в основной группе - 2,6±0,3, в контрольной группе - 2,1±0,2, р = 0,005, индекс сферичности эритроцитов-микроцитов (К мэр) - в основной группе - 2,2±0,2, в контрольной группе - 2,8±0,2, р = 0,003, индекс сферичности эритроцитов (Дэр) - в основной группе - 2,3±0,1, в контрольной группе - 3,7±0,3, р = 0,005, средний диаметр эритроцитов (О) - в основной группе - 6,6±0,2, в контрольной группе - 7,5±0,2, р = 0,005, содержание микроцитов (% микр) - в основной группе - 68,7±16,9, в контрольной группе - 12,6±6,7, р = 0,005, содержание нормоцитов (% норм) - в основной группе - 30,4±16,5, в контрольной группе - 72,9±7,3, р = 0,005, содержание макро-цитов (% макр) - в основной группе - 1,9±1,2, в контрольной группе - 14,5±11,8, р = 0,005. Приведенные данные позволяют выявить достоверные различия в группах по всем изученным параметрам. Среди них наиболее значимыми для дифференциальной диагностики микросфероцитарной анемии являются: толщина эритроцитов (Тэр), индекс сферичности эритроцитов (Дэр) и средний диаметр эритроцитов (Оэр).

Автоматизация микроскопического анализа позволяет превратить трудоемкий субъективный описательный характер анализа формы клеток в стандартизированную процедуру, и выявить параметры эритроцитов, необходимые для проведения дифференциальной диагностики различных типов анемий.

Ю.А. Ахмадуллина, А.Р. Мавзютов, РМ. Саляхова, А.Ж. Гильманов, Ф.С. Билалов. Сравнительная оценка иммунного статуса и иммунорегуляции при микробной эндо-токсинемии различной степени. ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г. Уфа

Бактериальный вагиноз является актуальной гинекологической проблемой, требующей дальнейшего изучения и

разработки информативных лабораторных тестов, позволяющих оценить состояние иммунитета на фоне хронической интоксикации микробным эндотоксином. Попадание в кровоток эндотоксина при бактериальном вагинозе обусловлено выходом липополисахарида клеточной стенки грамоотрица-тельных бактерий (LPS) при их распаде.

Целью нашего исследования явилась оценка особенностей иммунорегуляторных процессов при бактериальном вагинозе (БВ) на фоне развивающейся умеренной эндоток-синемии. Под наблюдением находилось 105 пациенток с БВ III степени в возрасте от 18 до 40 лет; группу сравнения составили 28 женщин в возрасте от 18 до 46 лет с гнойной хирургической инфекцией - парапроктитом, сопровождающимся выраженной эндотоксемией и интоксикацией. В контрольную группу вошли 68 клинически здоровых женщин того же возраста. Для определения выраженности эндоток-синемии проводилось определение концентрации микробных липополисахаридов (LPS) в плазме крови хромогенным LAL-тестом с лизатом амебоцитов Limulus (набор Endosafe Endochrome, HyCult biotechnology, Голландия). Для оценки иммунного статуса определяли концентрацию цитокинов с преобладающим провоспалительным (TNF-a, IL-ip, IL-2, IL-8, IL-6) и противовоспалительным (IL-4, IL-10) эффектом (ИФА-наборы «Вектор-Бест», г Новосибирск).

В результате проведенных исследований обнаружено, что в плазме крови обследованных женщин c БВ и с острым парапроктитом (ОП) уровень LPS составил соответственно 0,69±0,56 EU/мл и 1,12±0,56 EU/мл, что практически вдвое и втрое выше, чем в контрольной группе (0,38±0,33 EU/мл, р = 0,001 и р = 0,0001). Приведенные данные свидетельствуют о развитии системной эндотоксинемии как при гнойном пара-проктите, так и при бактериальном вагинозе.

Исследования цитокинового статуса показали, что у женщин с БВ плазменная концентрация TNF-a (15,4±19,6 пг/мл, р = 0,001), IL-2 (10,3±10,7 пг/мл, р < 0,0001), IL-6 (1,45±1,21 пг/ мл), IL-8 (7,28±0,44 пг/мл), IL-4 (1,23±0,57 пг/мл) достоверно превышала уровни контроля, а уровень IL-10 (23,6±23,9 пг/ мл) и IL-1P (3,54±1,96 пг/мл, р < 0,05) достоверно снижался, причем IL-10 - до 66% от показателей контрольной группы.

При гнойной хирургической инфекции достоверно повышался уровень TNF-a (32,81±16,22 пг/мл, р < 0,0001), IL-2 (4,75±3,59 пг/мл, р = 0,0003), IL-6 (9,3±13,9 пг/мл, р < 0,0001), IL-8 (10,3±8,9 пг/мл, р = 0,0219 ). Наиболее выраженными были сдвиги TNF-a и IL-6. Концентрация противовоспалительного цитокина IL-4 существенно не изменялась, уровень IL-10 заметно снижался (28,4±17,6 пг/мл, р = 0,0745), достигая 79% по сравнению с контролем.

Таким образом, изменения провоспалительных цитоки-нов IL-6, IL-8, TNF-a и IL-2 при БВ и ОПП коррелировали с тяжестью эндотоксинемии, отражая степень активации цитокинового каскада. Как при БВ, так и при ОП наиболее выраженными были сдвиги TNF-a и IL-6. Рост плазменного уровня TNF-a при умеренной и особенно выраженной эндо-токсинемии доказывает, что LPS является мощным активатором макрофагов, нейтрофилов и эндотелиальных клеток, синтезирующих TNF-a. Повышение IL-6 отражало стимуляцию синтеза «острофазных» белков, преобладающих при гнойной хирургической инфекции. Содержание «противовоспалительного» IL-4 при БВ умеренно повышалось, при ОП - не отличалось от контроля; IL-10 был значительно снижен в обеих исследуемых группах, что может отражать особенности иммунной регуляции как на фоне выраженной эндотоксемии при острой хирургической инфекции, так и на фоне хронической умеренной эндотоксемии при бактериальном вагинозе III степени. Учитывая полученные данные, можно считать, что клинически значимым для оценки состояния иммунорегуляторных процессов в ходе мониторинга

состояния иммунитета больных с острой хирургической инфекцией и бактериальным вагинозом является исследование в динамике уровней TNF-a, IL-6, IL-10.

Ю.А. Ахмадуллина, А.Р. Мавзютов, РМ. Саляхова, А.Ж. Гильманов. Эндотоксины, антиэндотоксиновый иммунитет и эндотелиальная реактивность у пациентов с гнойной хирургической инфекцией. ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г Уфа

Хирургическая инфекция представляет собой гнойно-воспалительное заболевание с клинически выраженной интоксикацией. В зависимости от состояния иммунитета, выраженность иммунного ответа на циркуляцию липопо-лисахарид грамотрицательных бактерий (LPS) существенно различается, что влияет на состояние организма в целом и исход заболевания.

Целью нашего исследования стало определение выраженности эндотоксинемии (по концентрации LPS), анти-эндотоксинового иммунного ответа организма (уровень липополисахарид-связывающего белка - LBP и IgG-антител к соге-региону LPS) и маркеров повреждения / реактивности эндотелия (уровень фактора Виллебранда - vWF; эндотелина-1 и сосудистых молекул адгезии sVCAM-1, sPECAM-1) у больных с гнойной хирургической инфекцией (ГХИ). Для оценки уровня LPS использовался хромогенный LAL-тест с лизатом амебоцитов Limulus, для определения уровня LBP, IgG к соге-региону LPS и эндотелиальных маркеров в плазме крови - метод ИФА. Обследовано 28 пациентов в возрасте 18-46 лет с ГХИ, которые поступили на стационарное лечение в проктологическое отделение с диагнозом острого парапроктита; контрольная группа состояла из 68 здоровых доноров.

Средний уровень LPS в плазме крови пациентов с ГХИ (1,12±0,56 EU/мл) был почти втрое выше, чем у здоровых доноров (0,38±0,26 EU/мл; р = 0,00001), и прямо отражал развитие системной эндотоксинемии. Уровень LBP у пациентов (54,4±16,8 мкг/мл) также превысил верхнюю референтную границу (до 10 мкг/мл) и был значительно выше по сравнению с контрольной группой (30,8±13,1 мкг/мл; р = 0,00001). Уровень IgG к соге-региону LPS (0,95±0,64 MU/мл) в 2,5 раза превысил показатели контроля (0,37±0,22 MU/мл; р = 0,00001).

При исследовании эндотелиальных маркеров значимую тенденцию к повышению уровня в плазме крови при инфекции проявляли vWF (0,83±0,28 Ед/мл против уровня контрольной группы 0,58±0,21 Ед/мл, р = 0,0004) и sVCAM-1 (990,50±438,81 и 607,23±157,56 нг/мл, р = 0,0001); уровень sPECAM-1 и эндотелина-1 существенно не изменялся.

Полученные результаты позволяют оценить направленность и степень реакции эндотелия и патогенетическую роль антиэндотоксинового иммунитета в развитии ответа на циркуляцию LPS в крови при ГХИ.

И.В. Бабкина, Ю.С. Тимофеев, Ю.Н. Соловьев, И.В. Булычева. Рецептор конечных продуктов гликирования RAGE в сыворотке крови пациентов с новообразованиями костей. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Гликирование белков, в результате которого образуются «конечные продукты гликирования» (КПГ), считают одной из причин изменения процессов метаболизма клеток. Полагают, что взаимодействие КПГ именно с рецептором RAGE, является одним из звеньев патогенеза различных хронических заболеваний и опухолевых процессов.

Цель настоящего исследования - сравнительный имму-ноферментный анализ содержания рецептора конечных продуктов гликирования (RAGE) в сыворотке крови больных опухолями костей и практически здоровых людей соответствующего возраста.

Обследовали 115 больных опухолями костей: злокачественные - остеосаркома (18), хондросаркома (38), саркома Юинга (4), недифференцированная плеоморфная саркома (1), хордома (2); пограничные - гигантоклеточная опухоль кости (ГКО, 26); доброкачественные новообразования (26). В группе с саркомами костей было 64 мужчины и 51 женщина в возрасте 16-75 лет. Обследовали 40 практически здоровых людей (18 мужчин и 22 женщины) соответствующего возраста. У всех пациентов диагноз установлен впервые и подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Уровни RAGE определяли иммуноферментным методом реактивами фирмы «R&D» (США) в сыворотке крови, у больных - до начала специфического лечения.

В сыворотке крови практически здоровых людей среднее содержание RAGE составило 1632,4±105,7 пг/мл и было достоверно выше, чем у больных злокачественными (1315,9±85,1 пг/ мл; р < 0,05) и пограничными опухолями костей (1285,8±115,2 пг/мл; р < 0,05). При доброкачественных новообразованиях костей средний уровень RAGE был равен 1513,6±107,9 пг/мл, достоверные отличия отмечены только при сравнении с показателями больных злокачественными новообразованиями костей (р < 0,05). При остеосаркоме среднее содержание RAGE (1599,1±155,4 пг/мл) достоверно выше, чем при хондросарко-ме (1067,4±82,2 пг/мл; р < 0,05). При хондросаркоме среднее содержание RAGE в сыворотке достоверно ниже, чем у пациентов с доброкачественными опухолями костей (р < 0,05) и практически здоровых людей контрольной группы. При низ-кодифференцированных опухолях кости среднее содержание RAGE было достоверно выше, чем при высокодифференци-рованных (1524,7±216,9 и 1040,2±79,1 пг/мл соответственно; p < 0,05). При поражении трубчатых костей - достоверно выше (р < 0,05), чем при поражении плоских костей. У пациентов с новообразованиями костей отмечена обратная зависимость между возрастом пациентов и содержанием RAGE в сыворотке крови (r = -0,4; p < 0,001). У практически здоровых людей в возрасте от 20 до 30 лет уровни RAGE в сыворотке крови были достоверно выше, чем у пациентов старше 50 лет (р < 0,05). При новообразованиях костей отмечено снижение средних уровней RAGE в сыворотке крови с увеличением возраста пациентов - минимальные средние уровни отмечены у пациентов старше 50 лет. Анализ уровней RAGE при хондросаркоме (38 больных) с учетом возраста показал, что у пациентов старше 50 лет (21 больной) средний уровень RAGE был достоверно ниже, чем у практически здоровых людей соответствующего возраста (25) (1002,9±103,5 и 1434,1±129,1 пг/мл соответственно; p < 0,01).

Таким образом, показано, что в сыворотке крови больных злокачественными и пограничными опухолями костей (ГКО) исходные уровни RAGE достоверно ниже, чем у практически здоровых людей соответствующего возраста. При опухолях костей из низкодифференцированных клеток содержание RAGE в сыворотке крови было достоверно выше, чем при опухолях из высокодифференцированных клеток (p < 0,05), что может иметь отношение к патогенезу этих заболеваний и послужить причиной для дальнейших исследований.

В.В. Базарный1, 2, А.П. Линевич1, Н.В. Гаренских2, Л.В. Алтухова2, Д.А. Макаров2. Морфофункциональная характеристика тромбоцитов у доноров крови. 'Уральский государственный медицинский университет; 2Свердловская областная клиническая больница № 1 , Екатеринбург

Заготовка и переработка донорской крови является важной задачей клинической трансфузиологии, а охрана здоровья доноров - приоритетной медико-социальной задачей государства. Вопросы донорства регламентируются рядом нормативных документов, но и при соблюдении режимов кроводач не исключается возможность развития дефицита железа и витаминов. В последние годы отмечается расшире-

ние использования аппаратного тромбоцитофереза, что делает актуальным вопрос изучения реакций повреждения и восстановления тромбоцитопоэза у доноров. Для решения этой задачи нами было обследовано 158 доноров тромбоцитов -первичных (контрольная группа) и кадровых. Исследования проводили с использованием гематологического анализатора Sysmex ХТ-4000/ и агрегометра Скгопо^ 590.

Современные гематологические анализаторы позволяют оценивать следующие параметры тромбоцитов: количество (РЬТ), процент крупных тромбоцитов (Р-ЬСЯ), тромбо-крит (РСТ), ширину распределения тромбоцитов по объему (PDW), средний объем тромбоцитов (МРУ). Исследование указанных цитометрических показателей первичных доноров (контрольная группа) показало, что они соответствуют референтным значениям. Количество тромбоцитов и тром-бокрит у доноров тромбоконцентрата было повышено, отмечался незначительный анизоцитоз тромбоцитов, хотя фракция Р-ЬСЯ количественно не изменялась.

Функциональную активность тромбоцитов оценивали методом оптической агрегатометрии. Показатели агрегации тромбоцитов с использованием АДФ в качестве индуктора у всех категорий доноров оставались нормальными. Другой индуктор - адреналин вызывал снижение агрегационной способности тромбоцитов у доноров.

Таким образом, у доноров тромбоконцентрата выявлены умеренно выраженные реактивные изменения тромбоцитар-ного ростка кроветворения. Это обусловливает актуальность проведения лабораторного мониторирования активных доноров, которое должно включать определение тромбоцитарных параметров при регулярных кроводачах.

В.В. Базарный, Л.Г. Полушина, Е.А. Семенцова, Н.И. Шарипова. Клинико-лабораторная характеристика слизистой оболочки полости рта при пародонтите. ГБОУ ВПО Уральский государственный медицинский университет Минздрава РФ, Екатеринбург

Нарушение механизмов иммунологической резистентности слизистой оболочки полости рта играет важную роль в формировании патологических процессов, в частности - пародонтита. В литературе представлен широкий спектр публикаций, посвященных содержанию иммуноактивных пептидов в ротовой жидкости (РЖ) при данном заболевании. В то же время исследование буккального эпителия ограничивается чаще всего описанием его колонизационной активности. В данной работе сделана попытка комплексной оценки слизистой оболочки полости рта при пародонтите. Для этого определяли активность цитокинов в РЖ и исследовали цито-граммы буккального эпителия.

Работа основана на результатах обследования 112 пациентов с пародонтитом и 38 практически здоровых добровольцев. Оно включало подсчет индекса интенсивности кариеса зубов - КПУ, определение значения упрощенного индекса гигиены - ОЖ и определение папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (РМА). В РЖ определяли концентрацию цитокинов методом твердофазного гетерогенного ИФА. Цитологические препараты буккального эпителия приготавливали и окрашивали стандартными методиками.

Объективными показателями состояния полости рта являются стоматологические индексы КПУ, ОЖ, РМА. Все они были повышены у пациентов с пародонтитом и отражали тяжесть патологического процесса. Концентрация ИЛ-4 и ИЛ-18 в РЖ пациентов возрастала, уровень ИЛ-2 имел тенденцию к повышению, а ИЛ-17 - существенно не менялся. Это дает основание полагать, что для пародонтита характерно преобладание ТЬ2-зависимых механизмов.

В цитологическоих препаратах буккального эпителия пациентов было выявлено возрастание числа различных клеточных аномалий (клетки с микроядрами, протрузиями,

конденсированным хроматином, двуядерные клетки) в 3-5 раз в сравнении с контрольной группой. На основании полученных данных можно предположить, что при пародонтите активация провоспалительных иммунных механизмов патогенетически связана с механизмами нарушения дифференци-ровки, пролиферации и апоптоза эпителиальных клеток.

А.С. Балашов, М.Н. Калинкин, М.А. Горшкова Динамика содержания остеопротегерина и гомоцистеина при патологической одонтогенной резорбции корней зубов. ГБОУ ВПО Тверской государственный медицинский университет Минздрава РФ, Тверь

Активные исследования последних лет привели к существенному прогрессу в области изучения патологической резорбции корней зубов. Установлен полиэтиологичный характер данной патологии, а также активная роль остеокластов и биохимических маркеров их метаболизма.

Дифференцировку остеокластов тормозит остеопроте-герин (osteo-protegerin, OPG, osteoclasto-genesis-inhibitory factor, OCIF). Остеопротегерин вырабатывается остеобластами, а также фибробластами периодонтальной связки и блокирует взаимодействие RANK и RANKL, в результате чего невозможна активация клеток-предшественников остеокластов. Исследования показывают, что OPG обнаруживается в смешанной слюне в достаточных концентрациях, а потому может быть использован в качестве маркера метаболизма костной ткани при деструктивных процессах, например, хроническом генирализованном пародонтите. В ряде отечественных работ установлена роль нарушений гомоцистеи-нового обмена при наследственной соединительно-тканной дисплазии костной ткани, вместе с тем, данные о роли го-моцистеина в развитии патологической резорбции корней в литературе отсутствуют, хотя повышенные концентрации гомоцистеина являются цитотоксичными.

Цель исследования: установить характер и степень биохимических изменений гомоцистеина и остеопротегерина в смешанной слюне в зависимости от структурных изменений цемента корня при патологической одонтогенной резорбции.

Обследовано 57 человек в возрасте от 20 до 50 лет, проходивших лечение в стоматологической поликлинике ГБОУ ВПО Тверской ГМУ Минздрава РФ. Сформированы выборки из четырех групп сравнения, имеющих рентгенологические признаки переструктуризации цемента и резорбции корней зубов. Исследовалась смешанная слюна. Содержание OPG и гомоцистеина в смешанной слюне оценивалось методом иммуноферментного анализа с помощью тест-систем BIO-MEDICA и Axis-Shied

Полученные результаты изучения уровня гомоцистеина и остеопротегерина в смешанной слюне варьируют в зависимости от степени выраженности патологического процесса и его стадии. Установлено, что концентрация остеоклас-тсвязывающего фактора (OPG) у больных патологической резорбцией с компенсированным течением патологического процесса достоверно выше 5,839±1,276 пмоль/л (р < 0,01), чем у больных с декомпенацией 2,241±1,175 пмоль/л. При этом концентрация OPG у больных с хроническим генерализованным пародонтитом достоверно 9,66±0,73 пмоль/л (р < 0,01) выше, чем у больных патологической резорбцией, что, по-видимому, можно объяснить большей площадью поражения. Установлено статистически достоверное (р < 0,01) увеличение концентрации остеокластсвязывающего фактора у больных патологической одонтогенной резорбцией в состоянии компенсации по сравнению с группой контроля 1,956±1,335 пмоль/л, при этом статистически достоверных различий между группой контроля и группой больных патологической резорбцией в стадии декомпенсации получено не было. В отношении гомоцистеина установлены статистиче-

ски достоверное 1,45±0,577 мкмоль/л (р < 0,01) увеличение концентрации последнего у больных патологической резорбцией корня в стадии декомпенсации, по сравнению с больными патологической резорбцией корня в стадии компенсации 0,403±0,223 мкмоль/л и контрольной группой, по сравнению с группой сравнения статистически значимых различий получено не было. На основании полученных данных, можно утверждать, что повышение гомоцистеина в смешанной слюне является достоверным признаком переструктуризации костной ткани, дентина и цемента корня, усугубляющим течение патологической одонтогенной резорбции.

М.А. Барсукова, Е.В. Хомутов, Л.С. Дмитриев. Модификация метода определения активности аденозиндезами-назы. Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького, Донецк

Аденозиндезаминаза (АДА) - ключевой фермент катаболизма пуриновых нуклеотидов, изменение активности которого сопряжено с различными иммунологическими и метаболическими нарушениями, представляет большой интерес в исследовании патогенеза опухолевых клеток. В общепринятых методиках (метод Giusti и модификации) определения активности фермента используется принцип регистрации скорости образования продукта реакции в среде, состоящей из буфера с избыточной концентрацией субстрата. Однако при исследовании активности АДА возникает существенная проблема: невозможно точно оценить активность фермента по накоплению продукта (инозина), так как фосфат-анион, входящий в состав фосфатного буфера, является одним из субстратов пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) - следующего фермента цепи пуринового катаболизма, вторым субстратом которого является инозин.

Целью данной работы являлось подобрать оптимальные условия проведения анализа, при которых продукт реакции не будет неконтролируемо расходоваться. Для достижения цели нами было предложено заменить фосфатный буфер на натрий-ацетатный, с доведением pH до значения оптимума активности АДА при помощи NaOH.

В работе было исследовано две серии проб: опытная, с использованием 0,1 М натрий-ацетатного буфера (pH 7,0), и контрольная, с использованием 0,1 М натрий-ацетатного буфера с добавлением KH2PO4 и Na2HPO4 (pH 7,0). В качестве субстрата использовали аденозин, конечная концентрация в реакционной среде - 3 мМ. В пробирки с притертой пробкой помещали 10 мл реакционной среды, термостатировали 15 мин при 37oC. Затем приливали 0,4 мл гемолизата здорового добровольца и инкубировали при 37oC 180 минут. Из реакционной среды каждые 20 минут отбирали по 0,5 мл образца и осаждали белки ацетонитрилом. Дальнейшее исследование метаболического профиля гемолизата проводили при помощи обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Работу выполняли на жидкостном хроматографе Konikrom Plus с ультрафиолетовым детектором. В работе использовали силикагелевую колонку Restek Ultra C18, режим элюирования градиентный, в качестве элю-ента использовали 0,1% ацетат аммония и ацетонитрил. Температура колонки 35oC, поток 1,5 мл/мин, время хроматогра-фирования 30 минут.

Анализируя полученные результаты хроматографирова-ния, можно увидеть значительную разницу в ходе кинетических кривых накопления продуктов реакций в зависимости от состава реакционной среды. В контрольной пробе (присутствует фосфат-анион) наблюдается линейное нарастание концентрации инозина на всем протяжении кинетических наблюдений вплоть до 67,8 мкМ, а также значительное нарастание гипоксантина (продукта ПНФ) до 137,67 мкМ. Это свидетельствует о высокой активности ПНФ в контрольной пробе и соответственно о расходовании инозина. В отсут-

ствии фосфат-аниона (в опытной пробе) наблюдается линейное нарастание только инозина до 130,8 мкМ. Концентрация гипоксантина на протяжении 60 минут медленно нарастает лишь до 16,37 мкМ, а затем выходит на плато. Полученные различия в интенсивности можно объяснить тем, что в опытной пробе катализируемая ПНФ реакция идет до тех пор, пока не был полностью израсходован запас фосфат-аниона из гемолизата.

Таким образом, для более точной оценки активности аде-нозиндезаминазы необходимо использовать буферный раствор, не содержащий фосфат-анионы, в частности буфер на основе ацетата натрия.

Д.И. Борисевич, А.Е. Ивлиев, М.Г. Сергеева. Анализ транскриптома в диагностике и изучение механизмов развития рака. НИИ ФХБ им. А.Н. Белозерского, Москва; Факультет биоинженерии и биоинформатики МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

Рак представляет собой многофакторное заболевание, существенную роль в развитии и поддержании которого играют процессы, протекающие на уровне регуляции клеточных процессов. Показано, что у разных пациентов опухоли в пределах одной ткани, отличающиеся между собой по фенотипу и тяжести протекания, также различаются по уровню активности транскрипции групп генов. Данные группы называются модулями и характеризуются высоким уровнем коэспрес-сии генов между собой внутри модуля, а также, как правило, наличием общего механизма регуляции транскрипции или общей биологической функции для всех генов модуля.

Цель работы - оценить возможности применения известных модулей, полученных на группах пациентов, для изучения информации о маркерах различных типов опухолей.

В качестве основного источника модулей использовали полученную в нашей группе базу данных по 82 наборам транскриптомных данных в 9 типах рака: раке груди, кишечника, желудка, легких, почек, яичников, простаты, а также глиоме и меланоме, с интерфейсом доступа на http:// wgcna-modules.appspot.com. Отобраны гены, чье повреждение (мутации, нарушения регуляции) считается значимым для развития рака. Проанализировано присутствие и положение в модулях этих генов. Обнаружено, что для части генов характерно присутствие в модулях, специфичных только для одного или нескольких видов рака, а для других - равномерное присутствие в модулях во всех видах рака. Например, ген рецептора эпителиального гормона роста EGFR был найден в модулях в 4 из 5 наборов данных для меланомы и только в 14 из 77 наборах данных для всех остальных видов рака. Ген EGFR также статистически значимо больше коррелирует с собственными векторами модулей из наборов данных из ме-ланомы, чем из других типов рака. Напротив, гены BRCA1 и BRCA2, отвечающие за репарацию ДНК, были обнаружены в 50 и 44 наборах данных из 82 соответственно, и содержащие их модули были обнаружены в наборах данных для всех видов рака, со сходной степенью корреляции с собственным вектором модуля, независимо от типа рака.

В настоящее время при проектировании тестов на прогнозирование протекания рака используются дифференциально экспрессирующиеся гены. Наш подход через анализ модулей коэкспрессирующихся генов расширяет возможности создания таких тестов. Нами были отобраны группы генов, которые, согласно публикациям, могут различать различные формы рака одного органа, и был проведен поиск этих групп генов среди модулей коэкспрессии. Выявлено, что, как правило, данные группы генов содержат гены, относящиеся более чем к одному модулю, и соответственно к разным метаболическим и сигнальным путям. При этом для подгрупп генов, соответствующих отдельным сигнальным путям, как правило, существуют модули коэкспрессии, которые разделяют образ-

цы на подгруппы в ходе иерархической кластеризации образцов, таким образом, использование этих подгрупп оправдано для поиска молекулярных подписей определенных форм раков. Для оценки степени связанности подгрупп между собой, сравнили частоту совместного появления модулей, описывающих подгруппы списков дифференциально экспрессирую-щихся генов, в одном наборе транскриптомных данных по сравнению с ожидаемой частотой их совместного появления, а также разбиения образцов, которые данные модули производят. Получено, что отдельные модули выделяют разные подгруппы образцов, что говорит о том, что описываемые в литературе перечни дифференциально экспрессирующихся генов зачастую содержат в себе совокупность генов разных молекулярных механизмов, не обязательно связанных друг с другом. Проведено обсуждение использования двух подходов для создания диагностических тестов.

О.С. Брусов, Е.Г. Черемных, М.И. Фактор, Н.С. Карпова. Новый метод для оценки функциональной активности системы комплемента. ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», Москва

Система комплемента (СК) крови человека и животных выполняет одну из центральных ролей в защите внутренней среды организма. Современная наука представляет СК концентратором-организатором всей совокупности иммунологических и воспалительных процессов. Существующие методы оценки активности СК или очень дороги (иммуно-ферментный метод), или недостаточно надежны (метод определения активности СК по гемолизу эритроцитов барана). Поэтому целью разработки является разработка надежного, быстрого и экономичного метода оценки активности СК.

Разработанный метод основан на лизисе инфузорий Tet-rahymena pyriformis (тест-организмов) в растворах сыворотки крови. Метод состоит циклическом подсчете живых подвижных клеток с помощью прибора БиоЛаТ в 20 лунках планшета и расчете времени гибели 50% клеток простейших в исследуемой сыворотке с разведением в специальном буфере 1:20, 1:40, 1:80 и 1:160 (Т5020,Т5040,Т5080,Т50160). При этом активность СК обратно пропорциональна величинам Т50 (мин) по каждому титру сыворотки.

Прибор управляется специальной программой, в которой реализован способ регистрации количества клеток, состоящий в обработке изображения лунки с живыми подвижными объектами. Обработка изображения основана на захвате двух кадров подряд и вычитании их цифровых образов. Подсчет осуществляется в режиме реального времени во всех заданных лунках. Лунки планшета последовательно перемещаются под объектив видеокамеры в течение заданного времени экспозиции. Эти процедуры повторяются до полной гибели инфузорий во всех заданных лунках. Далее программа рассчитывает время гибели половины от начального количества клеток (Т50) и сохраняет результаты и расчетные параметры в файле Excel.

Результаты подсчета каждой лунки отражаются на экране в виде графика изменения количества клеток. Процесс, отражаемый графиком, имеет 3 фазы: лаг-фаза - количество клеток почти не меняется, фаза быстрой гибели клеток и фаза стабильного остаточного количества клеток. Такая зависимость изменения количества клеток инфузорий от времени при активации СК в растворе с сывороткой крови отражает особенность этой каскадной системы многократно увеличивать количество конечных продуктов - мембраноатакующих комплексов (МАК) при запуске СК с помощью активации стартовых компонентов СК с гликопротеидами мембран тест-организмов. В результате образования МАК, прошивающих клеточную мембрану, содержимое клеток вытекает наружу и происходит их гибель, что было зафиксировано при микроскопическом наблюдении. Целостность клетки нарушается

из-за сквозных отверстий в районе клеточного рта, где клеточная мембрана наиболее тонка, и мембрано-атакующие комплексы, образующиеся в результате активации СК, быстро меняют осмотическое давление клетки. При этом содержимое клетки вытекает наружу. Это наблюдение, а также ряд наших исследований, касающихся действия на СК известных ингибиторов сериновых протеаз, доказывают утверждение о том, что гибель простейших происходит в результате активации комплемента сыворотки крови.

В течение последних 3-х лет нами проведены исследования сыворотки крови больных шизофренией, расстройствами аутистического спектра и болезнью Альцгеймера. При сравнении результатов исследования указанных групп больных с группами здоровых доноров выявлено достоверное уменьшение активности СК для всех групп больных по сравнению с группами здоровых.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что новый метод оценки активности СК может служить надежным маркером комплемент зависимой остроты воспалительных процессов у больных психическими заболеваниями.

В.И. Бутвиловская', Е.Н. Савватеева1, А.А. Тихонов', А.А. Рагимов2, Э.Л. Салимов2, Е.И. Пожарицкая3, А.Ю. Рубина'. Возможности биологических микрочипов в скрининге колоректального рака. 'ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» (ИМБ РАН), Москва; 2Центр коллективного пользования «Трансфузионная медицина» на базе Центра крови ГБОУ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, Москва; 3ГБУЗ «Городская клиническая больница им. В.М. Буянова Департамента здравоохранения города Москвы»

Колоректальный рак (КРР) занимает третье место по частоте среди всех злокачественных новообразований, причем на первых стадиях болезнь протекает с минимальными симптомами. Пятилетняя выживаемость пациентов с диагнозом КРР (III-IV стадия) несмотря на все усилия врачей до сих пор не превышает 36%. Смертность от КРР можно снизить с помощью ранней диагностики, однако, на ранних этапах КРР развивается с минимальными клиническими симптомами. Диагностическая эффективность существующих методов in vitro диагностики КРР не позволяет выявлять заболевание на ранних стадиях.

В ИМБ РАН разрабатывается биологический гидрогеле-вый микрочип для одновременного обнаружения диагностических сигнатур, состоящих из антител к гликанам (SiaTn, TF, T , LeC, LeY, SiaLeA, Manp1-4GlcNAc) и онкомарокеров (РЭА, сА 19-9, СА 125, SCC, ПСА общ., ХГЧ, АФП, СА 242).Про-ведено количественное определение онкомарокеров и антител к гликанам в сыворотках крови пациентов из различных групп: КРР (I-IV стадия 33 сыворотки), воспалительные заболевания кишечника (27 сывороток), здоровые доноры (67 сывороток).

Обнаружена диагностическая сигнатура, состоящая из онко-маркеров (РЭА, СА 19-9, СА 125, СА 15-3, ХГЧ, АФП), антител к гликанам (Tn, TF, SiaLeA и Manp1-4ClcNAc), позволяющая выявлять КРР с чувствительностью 88%, специфичностью 98%, диагностической эффективностью 95% (AUC = 0,9).

Работа выполнена при поддержке Министерства образования и науки РФ, Соглашение о предоставлении субсидии № 14.604.21.0103 от 05 августа 2014 г, уникальный номер научного исследования RFMEFI60414X0103.

Е.Ф. Васильева, М.И. Фактор, О.С. Брусов, Ю.Е. Шилов, В.Г. Каледа, А.Н. Бархатова. Оценка цитотоксической активности лимфоцитов натуральных киллеров в периферической крови больных с первым приступом шизофрении и здоровых доноров на автоматическом счетчике и анализаторе клеток Multisizer 4. ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», Москва

Известно, что лимфоциты натуральные киллеры (НК)

являются первой линией защиты организма человека и животных от разного рода чужеродных воздействий. В связи с этим представляется важным определять функциональную активность этого звена естественного иммунитета у больных и здоровых. Существующие в настоящее время методы определения цитотоксической активности НК-лимфоцитов (ЦА НК) являются достаточно трудоемкими и требуют использования меченых по тритию соединений. Цель исследования -апробировать разработанный нами новый способ оценки ЦА НК с помощью подсчета количества клеток-мишеней К-562 (КМ), оставшихся не деградированными после контакта с НК-лимфоцитами, на автоматическом счетчике и анализаторе клеток Multisizer 4 фирмы Beckman Coulter (патент № 2514019 от 25.02.2014 г.). Апробация метода определения уровня ЦА НК проводилась у 16 больных шизофренией мужчин с первым приступом эндогенного психоза в возрасте от 18 до 25 лет и 15 здоровых мужчин соответствующего возраста. Мононуклеарные клетки, состоящие из моноцитов и лимфоцитов, 10-15% от которых составляют НК-лимфоциты, выделяли из периферической венозной крови в градиенте плотности фиколл-верографина (плотность 1,077). Постановку цитотоксического теста осуществляли в 96-луночных круглодонных полистироловых планшетах с объемом лунки - 0,25 мл. В лунки с опытными пробами к обогащенной среде 199 добавляли взвесь мононуклеарных клеток и КМ в соотношении 20:1. В лунки с контрольными пробами вместо мононуклеарных клеток добавляли среду 199. Каждую опытную и контрольную пробы ставили в 2-х или 3-х параллелях. Планшеты инкубировали в термостате в течение 16-18 часов при температуре 37oC и 5% СО2. После инкубации из каждой пробы отбирали 100 мкл клеточной взвеси и разводили в 10 мл жидкости для разведения проб в специальных кюветах для Multisizer 4 (Accuvette ST) и тщательно перемешивали. Далее кюветы помещали в автоматический счетчик, на котором подсчитывали количество КМ с диаметром 15-40 мкм. Принцип предложенного метода основывался на том, что КМ имели диаметр не менее 15 мкм, тогда как диаметр других клеток в изучаемой клеточной взвеси не превышал 15 мкм. Таким образом, при подсчете клеток с диаметром от 15 до 40 мкм, учитывали именно КМ, оставшиеся не деградированными после контакта с НК-лимфоцитами. ЦА НК выражали в виде индекса цитотоксичности (ИЦ) в %, который рассчитывали по формуле:

Щ,л Количе ство клеток-мишеней в опытной те ст-ячейке . = (1 —~-з-з-— )х100%.

4 Количество клеток-мишеней в контрольной тест-ячейке 7

Для определения статистической значимости различий средних значений ИЦ использовали параметрический /-критерий Стьюдента для независимых переменных. Статистически значимый уровень был принят приp < 0,05.

С помощью предложенного метода было показано достоверно выраженное снижение уровня ЦА НК лимфоцитов у больных по сравнению со здоровыми (ИЦ равен 37,1±5,6 и 55,9±4,6 соответственно, р < 0,001), что подтверждают данные литературы.

Описанный способ оценки ЦА НК-лимфоцитов может быть применен в качестве тест системы для выявления снижения активности этого важного звена естественного иммунитета у больных с психопатологической симптоматикой и различными соматическими заболеваниями в первую очередь злокачественными новообразованиями и заболеваниями инфекционной природы, а также при проведении скри-нинговых обследований, с целью выявления среди населения групп людей с высоким риском развития этих заболеваний.

Е.Ю. Васильева, М.А. Карпенко, Г.А. Березовская, Е.Е. Казакова, И.М. Ким, Т.В. Вавилова. Показатели липидно-го обмена и сосудистый возраст у пациентов с ишемиче-

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

ской болезнью сердца, подвергшихся чрескожным коронарным вмешательствам. Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова Минздрава РФ, Санкт-Петербург

Нарушение функции эндотелия является ранним индикатором развития и прогрессирования ишемической болезни сердца (ИБС) и других сосудистых заболеваний. Существенное влияние на его состояние оказывает прием гиполипидемических препаратов из группы статинов, противоатеросклеротический эффект которых основан не только на гиполипидемическом действии, но и на прямом плейотропном влиянии на сосуды, что ведет к улучшению функции эндотелия, подавлению воспаления, стабилизации атеросклеротической бляшки, снижению возможности тромбообразования.

Целью исследования являлось изучение показателей ли-пидного обмена, в том числе, антител к окисленным липо-протеинам низкой плотности, а так же сосудистого возраста, рассчитанного на основе Фрамингемской шкалы оценки сердечно-сосудистого риска, у пациентов с хронической ИБС, подвергшихся чрескожным коронарным вмешательствам, и взаимосвязь этих показателей с приверженностью к гиполипидемической терапии.

В исследование включено 66 человек (14 женщин, 52 мужчины) с диагнозом ИБС, стабильная стенокардия П-Ш ФК, средний возраст (58,7±0,9) лет, имеющих показания к реваскуляризации миокарда. Критерием отбора явилось наличие клинически значимого стеноза коронарных артерий атеросклеротического генеза. По результатам годичного проспективного наблюдения пациенты были разделены на 2 группы: I группа (п = 47) пациентов, средний возраст 58,5±1,3, приверженных к гиполипидемической терапии, II группа (п = 19) - пациенты, не принимающие статины, средний возраст 59,4±1,6. Всем включенным в исследование были определены показатели липидного спектра в сыворотке крови: холестерин и триглицериды определяли энзиматическим колориметрическим методом, липопротеины высокой плотности (ЛПВП) и липопротеины низкой плотности (ЛПНП) - прямым энзиматическим методом. Коэффициент атероген-ности (КА) рассчитывали по формуле: КА = (холестерин, ммоль/л - ЛПВП, ммоль/л) / ЛПВП, ммоль/л. Определение антител к окисленным ЛПНП в сыворотке крови проводился методом твердофазного иммуноферментного анализа (Вю-medica, OLAB-IgG).

Был проведен сравнительный анализ уровней антител к окисленным ЛПНП и состав липидного спектра в крови у групп пациентов, принимающих статины и пациентов без терапии. Достоверные различия были выявлены в уровне холестерина и ЛПНП 4,36±0,18 и 2,52±0,15 ммоль/л у лиц, приверженных терапии, против 4,92±0,19 и 3,01±0,15 ммоль/л соответственно, у пациентов не принимающих препараты. Уровень АТ к окисленным ЛПНП составил 186,24±31,25 против 261,7±91,8 Ед/мл (р < 0,05). Для остальных показателей (ЛПВП, ЛПНП, триглицериды, коэффициент атерогенности) различия не достигали статистической значимости.

Была изучена взаимосвязь сосудистого и биологического возраста в 2-х группах пациентов. Отмечено, что у лиц, принимающих статины, уровень сосудистого возраста ниже, чем у пациентов без терапии (66,2±1,7 против 75,9±2,2); отмечено сокращение разницы между показателями сосудистого и биологического возраста.

Уровень сосудистого возраста в группе лиц, принимающих статины, ниже, чем в группе пациентов без терапии; применение статинов, независимо от возраста, не только нормализует показатели липидного обмена, но и уменьшает сосудистый возраст больных; таким образом, определение сосудистого возраста расчетным методом может использо-

ваться в качестве критерия при оценке эффективности гипо-липидемической терапии.

Более высокий уровень антител к окисленным ЛПНП в группе пациентов без терапии статинами указывает на активное развитие атеросклеротического процесса у этой группы пациентов.

И.В. Ворожко1, Т.Б. Сенцова1, О.О. Черняк', В.А. Ревякина1, А.Г. Тимофеева1, В.А. Мухортых1, А.Е. Донников2. Принципы нутригеномной диагностики у детей с аллергическими заболеваниями. 'ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», Москва; 2ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова», Москва

Согласно современным представлениям диагностика аллергических заболеваний у детей предусматривает проведение генетических исследований, позволяющих прогнозировать развитие и течение этих болезней, а также эффективность профилактических и лечебных мероприятий. Известно, что ген рецептора витамина D (VDR) кодирует внутриклеточный рецептор, способный связывать активные формы витамина D, способный опосредованно осуществлять дозозависимые иммунорегуляторные эффекты. Целью исследования явилось изучение обеспеченности витамином D детей с аллергическими заболеваниями при различных полиморфных вариантах гена VDR . Было обследовано 130 детей (66 мальчиков и 64 девочек) с аллергическими заболеваниями в возрасте от 1,5 до 16 лет. Группу контроля составил 41 практически здоровый ребенок. Исследование витамина D осуществляли на основании определения 25-OH витамина D иммуноферментным методом. Анализ полиморфных маркеров FokI (rs2228570), BsmI (rs 1544410) и TaqI (rs 731236) гена VDR проводили методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Выявлено снижение концентрации 25-OH витамина D (p = 0,02) у детей при вариантах A/G и G/G Fok1 гена VDR, и хотя уровень этого метаболита не достигал значений дефицита (< 20 нг/мл) полученные результаты можно использовать для подбора индивидуальных доз витамина D при обязательном мониторинге концентрации данного метаболита у детей с аллергическими заболеваниями.

А.А. Ганина1, К.К. Кюрегян2, М.И. Михайлов2. Частота выявления гепатитов у беременных, обследованных на инфекции TORCH группы. '«Эколаб», г Электрогорск; 2ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН», Москва

При медицинском наблюдении беременных в России рекомендуется проводить лабораторное обследование на маркеры вирусных гепатитов трижды: в каждом триместре. Рекомендуемый стандарт позволяет выявить бессимптомное носи-тельство вируса. Однако обнаружение серологических маркеров вирусных гепатитов во время планового обследования у беременных женщин без клинических симптомов гепатита вызывает у них негативную реакцию и недоверие к результатам проведенного анализа, особенно, если при повторных исследованиях получены противоречивые результаты.

Цель исследования: оценка распространенности вирусных гепатитов среди беременных г. Москвы и Московской области, обследованных на инфекции TORCH группы.

На маркеры парентеральных вирусных гепатитов и инфекций TORCH группы исследовано 404 сыворотки крови беременных, проходивших плановое обследование; для сравнения использованы исследования образцов, полученных от женщин-доноров крови.

При первичном исследовании HBsAg было выявлено 10 положительных результатов у беременных женщин, в реакции нейтрализации подтверждение получено в 9 случаях. При исследовании 5 первично положительных результатов выявления анти-ВГС иммуноглобулины класса G ко всем ан-

тигенам вируса удалось определить у 2 беременных женщин, в 2 других образцах подтверждено наличие антител только к ядерному гликопротеиду ВГС. Все вышеперечисленные образцы были положительными в аналогичных отечественных тестах на анти-ВГС, причем также только по ядерному антигену ВГС. При этом РНК ВГС удалось обнаружить только в образцах, содержащих весь спектр специфических антител; 1 из представленных образцов в ПЦР не исследовали, так как на стадии подтверждения в ИФА с ним был получен отрицательный результат.

Частота выявления маркеров инфицированности у беременных в г Москве и Московской области составила: анти-ВГС - 0,5%, HBsAg - 2,2%. Полученные цифровые показатели были в 2,5 раза выше, чем в среднем по России. Высокая частота выявления HBsAg среди беременных в г Москве и Московской области может быть обусловлена тем, что они по возрасту, скорее всего, не получили вакцинацию против гепатита В (всем носителям HBsAg на момент исследования было больше 25 лет), кроме того в этой группе были представлены мигранты из бывших союзных республик (Таджикистан, Узбекистан, Молдова и др.). Специфичность наборов для ИФА (HBsAg и анти-ВГС) при обследовании беременных 99,8 и 99,5% соответственно.

Е.С. Герштейн. Факторы роста, их рецепторы и нижележащие сигнальные белки в клинической онкологии: достижения, проблемы, перспективы. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Ключевой характеристикой злокачественных опухолей является способность к неограниченному автономному росту, в основе которой лежат эффекты факторов роста - белков или полипептидов, продуцируемых опухолевыми клетками или другими компонентами опухолевой ткани (фи-бробластами, инфильтрирующими опухоль макрофагами и лимфоцитами, эндотелиоцитами) и взаимодействующих со специфическими рецепторами на поверхности самих клеток-продуцентов и/или соседних клеток, стимулируя в результате последующей сложной цепи реакций клеточное деление. К настоящему времени известно несколько десятков факторов роста, принадлежащих к различным семействам, но наиболее изученной и клинически реализованной является сигнальная система рецепторов эпидермального фактора роста (РЭФР) и родственных ему рецепторов семейства c-erbB или HER (human epidermal growth factor receptor). Важнейшую роль в возникновении и прогрессии различных злокачественных опухолей играет также сигнальная система инсулиноподоб-ных факторов роста (ИФР), включающая ИФР-I и ИФР-II, их трансмембранные рецепторы ИФР, а также связывающие белки крови (ИФРСБ), которые образуют сложно регулируемую сеть взаимодействий как между собой, так и с другими биологическими регуляторами роста и выживаемости клеток. Еще одной специфической и чрезвычайно важной для опухолевого роста является система VEGF - ключевого регулятора неоангиогенеза.

В докладе представлены основополагающие данные современной литературы и результаты собственных многолетних исследований роли ауто/паракринных факторов роста, их рецепторов и некоторых нижележащих сигнальных белков (PI3K, Akt, NFkB, mTOR) в клиническом течении, прогнозе и формировании гормональной и/или лекарственной чувствительности или резистентности различных опухолей человека. Суммированы также данные о ключевых "таргетных" препаратах, направленных на подавление различных компонентов сигнальных путей факторов роста, критериях оценки индивидуальной чувствительности к этим препаратам, в том числе с использованием современных молекулярно-биологических технологий.

В целом, можно констатировать, что анализ экспрессии рецепторов факторов роста и их лигандов, а также активности нижележащих сигнальных путей становится в настоящее время неотъемлемой составляющей комплексного обследования онкологического больного, необходимого для разработки стратегии и тактики лечения и выбора наиболее эффективных схем лекарственной терапии. Все более значимое место в этом обследовании занимают молекулярно-генетические исследования. Однако, несмотря на огромные успехи последних лет, нерешенных вопросов в данной области все еще намного больше, чем достижений. Все это и определяет важность углубленного изучения механизмов передачи сигналов факторов роста и роли отдельных компонентов различных сигнальных каскадов для эффективного использования уже существующих и разработки новых молекулярно-направленных противоопухолевых препаратов.

А.С. Горбенко2, М.А. Столяр2, 3, Е.В. Васильев4, М.А. Михалев5, И.А. Ольховский1 2. Оценка уровня мРНК гена рецептора тромбопоэтина (МРЦ) в лейкоцитах периферической крови пациентов с лейкозами. 'ФГБУН «Красноярский научный Центр Сибирского отделения РАН», Красноярск; ^Красноярский филиал ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава РФ; 3ФГАОУ ВПО «Сибирский федеральный университет», Красноярск; 4КГБУЗ «Краевая клиническая больница», Красноярск; 5МБУЗ «Городская клиническая больница № 7», Красноярск

Рецептор тромбопоэтина (MPL) экспрессируется клетками костного мозга и играет важную роль в регуляции их пролиферации и дифференцировки. При взаимодействии с тромбопоэтином MPL стимулирует JAK-2/STAT сигнальный путь регуляции экспрессии генов, ответственных за миело-пролиферацию. Известно, что уровень экспрессии мРНК гена MPL в клетках костного мозга существенно повышается при любых фенотипических вариантах Р^негативных хронических миелопролиферативных опухолей (ХМО) и снижается при ХМЛ. Уровень экспрессии мРНК MPL в лейкоцитах периферической крови пациентов с лейкозами ранее не исследовался.

Цель работы - определение уровня экспрессии гена MPL в лейкоцитах периферической крови у пациентов с лейкозами.

В исследование были включены 25 пациентов с ХМО (истинная полицитемия), 27 с ХЛЛ, 48 с ХЛЛ, и 20 с острым лейкозом (ОЛЛ и ОМЛ). Контрольную группу составил 21 практически здоровый неродственный доброволец. Венозную кровь отбирали в пробирки с ингибитором РНКаз. Из лейкоцитов периферической крови РНК выделяли фенол-хлороформным методом («РИБО-золь-Э», ООО «ИнтерЛаб-Сервис»). Уровень экспрессии мРНК определяли методом РВ-ПЦР с использованием зондов TaqMan. Расчет уровня экспрессии проводили методом ДО; по отношению к экспрессии гена домашнего хозяйства GAPDH.

Статистическая обработка осуществлялась в программной среде «К». Результаты представлены в виде медианы (Ые) и 25 и 75 процентилей (С25 и С75), значимость различий определялась с помощью критерия Манна-Уитни.

Уровень экспрессии мРНК гена MPL в лейкоцитах у пациентов с ХМО не отличался от уровня экспрессии в группе контроля 106 (68-178) и 102 (78-156) соответственно. Однако уровень экспрессии мРНК MPL был значительно ниже группы контроля при хронических лейкозах и составил: в группе ХЛЛ - 5 (2-16), а в группе ХМЛ - 20 (8-53) (р < 0,0001). Резкое снижение экспрессии гена MPL наблюдалось также при острых лейкозах не зависимо от их варианта - 21 (6-37) (р < 0,0001). Значительное снижение уровня экспрессии гена MPL при ХЛЛ, ХМЛ и острых лейкозах, но не при ХМО указывает на различные молекулярные процессы формирования данных заболеваний и роль гена MPL в патогенезе. С другой

стороны, существенно низкие уровня мРНК-транскриптов MPL в периферической крови могут иметь дифференциальное диагностическое значение при лейкоцитозах неясной этиологии.

А.С. Горбенко2, М.А. Столяр2,3, В.В. Овсянникова3, Е.В. Васильев4, М.А. Михалев5, И.А. Ольховский 1 2. Экспрессия мРНК HIF2a, но не HIFla, в лейкоцитах связана с экспрессией JAK2 у пациентов с ХМЛ. 'ФГБУН Красноярский научный Центр Сибирского отделения РАН, Красноярск; ^Красноярский филиал ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава РФ; 3ФГАОУ ВПО Сибирский федеральный университет, Красноярск; 4КГБУЗ Краевая клиническая больница, Красноярск; 5МБУЗ Городская клиническая больница № 7, Красноярск

Внутриклеточные индуцированные гипоксией факторы транскрипции (HIF) определяют скорость биосинтеза белков, критичных для адаптации метаболизма клеток к гипоксии. Ранее было показано, что увеличение экспрессии в гра-нулоцитах и лимфоцитах крови больных с гематологическими злокачественными опухолями мРНК изоформы HIF-2a является более выраженным, чем HIF-1a (Ольховский И.А. с соавт., Гематол. и трансфузиол., 2014; 59 (1)). Показана связь уровня мРНК-транскриптов HIF-1a в регуляции пролиферации и чувствительности к химиотерапевтическим препаратам при хроническом миелолейкозе (ХМЛ), но роль HIF-2a не была исследована. С другой стороны, известно, что ти-розинкиназа JAK2 активирована в положительных линиях клеток BCR-ABL и клетках крови у пациентов с ХМЛ, что позволяет предположить возможное участие HIF в регуляции экспрессии JAK2.

Цель - оценка взаимосвязи уровней экспрессии мРНК HIF-1a, HIF-2a и JAK2 в клетках крови пациентов с ХМЛ.

Уровень экспрессии мРНК HIF-1a, HIF-2a и JAK2 определяли методом аллель-специфической ПЦР в реальном времени у 49 пациентов в хронической фазе ХМЛ и у 29 здоровых добровольцев. Венозную кровь собирали в пробирку с ингибитором РНКаз, РНК выделяли из лейкоцитов цельной крови фенол-хлороформным методом («РИБО-золь-D», ООО ИнтерЛабСервис). Для нормализации результатов ПЦР использовали ген GAPDH. Результаты представлены в виде медианы и квартилей (25% и 75%) относительных единиц экспрессии. Сравнение экспрессии мРНК осуществлялось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.

Экспрессия мРНК JAK2 в группе здоровых добровольцев составляла 0,049 (0,032-0,073), в группе ХМЛ она была статистически достоверно выше: 0,108 (0,062-0,154) (p < 0,05). Экспрессия мРНК HIF-1a и HIF-2a составила 0,255 (0,2120,295) и 0,007 (0,006-0,014) в группе здоровых добровольцев и 0,252 (0,187-0,296) и 0,034 (0,011-0,064) у больных ХМЛ соответственно, при этом только уровень HIF-2a был увеличен в группе пациентов с ХМЛ (p < 0,05). Обнаружена положительная корреляция между JAK2 и уровнем мРНК HIF-2a как у здоровых добровольцев (r = 0,88, р < 0,001), так и в группе пациентов с ХМЛ (r = 0,75,р < 0,001), однако не было обнаружено корреляции с количеством лейкоцитов и уровнем транскрипта BCR/ABL.

Таким образом, в настоящем исследовании показано существование связи между HIF2a и JAK2. Такое взаимодействие может также быть дополнительной частью BCR/ABL-независимых путей в патогенезе ХМЛ и являться мишенью терапевтических воздействий.

М.А. Горшкова, Е.Н. Егорова, Р.А. Пустовалова. Динамика компонентов системы матриксных металлопро-теиназ - тканевых ингибиторов металлопротеиназ при лечении хронической сердечной недостаточности. ГБОУ ВПО «Тверской государственный медицинский университет» Минздрава РФ, Тверь

Особенности функционирования системы матриксных металлопротеиназ - тканевых ингибиторов металлопротеи-наз (ММР-TIMP), регулирующей процессы ремоделирова-ния экстрацеллюлярного матрикса различных тканей, в настоящее время активно исследуется при изучении патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний, в частности хронической сердечной недостаточности.

Целью исследования было изучить соотношение ММР-9/ TIMP-4 в крови больных хронической сердечной недостаточностью (ХСН) различной тяжести в динамике лечения, направленного на компенсацию сердечной деятельности.

Уровни ММР-9 и TIMP-4 определены методом иммуно-ферментного анализа с помощью тест-систем Bender Med-Systems® (Австрия) и R&D Systems® (Германия) в плазме крови до и после лечения 92 больных ПИКС, поступивших для стационарного лечения в связи с декомпенсацией сердечной недостаточности, из которых у 54 человек с помощью клинического и эхокардиографического исследований была диагностирована ХСН IIA стадии и у 38 - 11Б стадии.

В группе больных ХСН IIA стадии коэффициент ММР-9/ TIMP-4 до лечения и при компенсации сердечной недостаточности составил соответственно 12,5 и 10,6. У больных ХСН ПБ стадии данный коэффициент после лечения напротив был выше, чем при декомпенсации сердечной деятельности и составил соответственно 15,9 и 17,3.

Таким образом, при компенсации сердечной недостаточности в системе ММР-9/ТГМР-4 у больных ХСН IIA стадии нарастает (преобладает) ингибирующий эффект TIMP-4, а у больных ХСН ПБ стадии - каталитическая (протеолитиче-ская) активность ММР. Следовательно, при ХСН IIA стадии ингибирующий эффект TIMP-4 в системе ММР-9/ТГМР-4 выражен в большей степени, чем при ХСН ПБ стадии.

О.Г. Григорук 12, Е.Э. Пупкова2, Л.М. Базулина2, А.Ф. Лазарев 12. Дифференциальная диагностика метастазов рака яичников с использованием цитологического, иммуноци-тохимического методов и молекулярно-генетических исследований. 1 2Алтайский филиал ФГБНУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина; 2КГБУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер», г. Барнаул

Проблема диагностики метастазов рака яичника сложна и чрезвычайно актуальна. Даже при наличии диссеминации метастазов в брюшной полости клиника заболевания носит «стертый» характер, до 80% случаев рак яичника диагностируется на III-IV стадиях болезни. В диагностическом алгоритме обследования пациенток с подозрением на рак яичников цитологический метод диагностики выполняет немаловажное значение. Кроме традиционного исследования полученный выпот позволяет проводить иммуноцито-химические исследования, значительно повышающие точность диагностики. Данные о возможности использования молекулярно-генетических исследований клеток опухоли, находящихся в жидкости, в доступной научной литературе немногочисленны, хотя полученные знания будут важны для лечения и прогноза рака яичников.

Цель работы: оценить возможности дифференциальной диагностики метастазов рака яичников с использованием цитологического, иммуноцитохимического методов и молекулярно-генетических исследований.

Исследование включало 82 пациентки, обследованных и пролеченных в КГБУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер» в 2015 году, у которых по клиническим данным было подозрение на рак яичников. Метастаз рака яичников диагностирован у 70 женщин. Для цитологической диагностики использован пункционный материал. При получении жидкости препараты готовили традиционным и жидкостным методом, окрашивали по Паппенгейму. Применяли иммуно-цитохимический метод, используя стандартную методику,

для визуализации реакции систему REALTM EnVisionTM, в качестве хромогена использовали DAB (3,3-diaminobenzidine), после проведения реакции мазки докрашивали гематоксилином. Молекулярно-генетические исследования проводили ретроспективно, используя клетки опухоли серозной карциномы с цитологических препаратов. Отобранные комплексы опухолевых клеток отмечали маркером на стеклопрепаратах и растворяли лизирующим раствором. При выделении ДНК использовали набор «QIAamp DNA Mini Kit» QIAGEN (Германия). Очистку нуклеиновых кислот проводили в автоматическом режиме на станции QIAcube по стандартному протоколу. Определение мутаций в генах BRCA, BRAF и KRAS осуществлялось методом аллель-специфичной ПЦР в режиме реального времени с помощью наборов real-time-PCR, производства ООО «Биолинк» (Россия). Исследовали следующие мутации: в гене BRCA1 - 5382insC, 4153delA, 185delAG, T300G; в гене BRCA2 - 6174delT; в гене KRAS - G12C, G12S, G12R, G12V, G12D, G12A, G13D и V600E гена BRAF.

Из медицинских карт и данных канцер-регистра Алтайского краевого онкологического диспансера, результатов гистологического исследования, уточняли принадлежность клеток опухоли к раку яичника и дальнейшую судьбу женщины.

Опухолевые клетки аденокарциномы в асцитической жидкости оценены у 52 (63,4%) пациенток. В четырех (4,9%) случаях исследовали плевральную жидкость, в 18 (21,9%) наблюдениях цитологический диагноз установлен при пункции через задний свод влагалища, в 8 (9,8%) - метастазы в лимфатические узлы: паховые (3), забрюшинные (2), аксил-лярные (1) и надключичные (2).

Для уточнения первичного очага метастазирующей опухоли при иммуноцитохимическом исследовании использовали набор из 4-14 антител у 24 пациенток. Дифференциальная диагностика клеток аденокарциномы рака яичника проводилась с аденокарциномой желудка. С использованием иммуноцитохимических методик у 12 пациенток метастаз аденокарциномы был характерен для рака желудка, шесть из которых характеризовали перстневидно-клеточный рак. Наиболее значимой была реакция на СЕАтопо+, CEApoly+, СК7+/СК20-/+.

Рак яичника определен как серозная карцинома у 65 (92,9%) пациенток, у трех (4,3%) - муцинозная и у двух (2,9%) наблюдениях - эндометриоидная. При муцинозной и эндоме-триоидной аденокарциномах яичника клеточных комплексов для дополнительных лабораторных исследований было недостаточно. При серозных карциномах проведены иммуно-цитохимические исследования у 10 пациенток для уточнения принадлежности к раку яичника, которые имели иммуно-фенотип: Ber-EP4+, WT-1+, СЕАтопо-, CEApoly+/-, СК7+, CK18+, CK20-, СК5/6-, D2-40-/+, CDX2-, claudin+, CA125+, изредка позитивный калретинин и мезотелин. Оценка про-лиферативной активности клеток опухоли по индексу Ki-67 проведена в двух наблюдениях, составила 33,3%, экспрессия р53 наблюдалась в двух случаях в 45,3% клеток. Пациентки, которым были проведены иммуноцитохимические исследования, отнесены нами во вторую группу серозных карцином (high grade).

Молекулярно-генетические исследования проведены у 38 пациенток с серозной карциномой, у трех (7,9%) пациенток концентрация выделенной ДНК для исследования оказалась недостаточной. По результатам генетического исследования материала ДНК, пригодного для оценки данных, во всех наблюдениях отмечено отсутствие мутации V600E в гене BRAF. В гене KRAS обнаружена генетическая поломка у пяти из семи (71,4%) женщин из группы low grade карцином, в 4 случаях из них была выявлена мутация G12V и в одном - G12D. Мутации в гене BRCA1 обнаружены в 4 образцах из

двадцати восьми в группе пациенток с high grade карциномой (14,3%), три из которых представлены мутацией 5382insC, одна - T300G.

Геном опухоли low grade карциномы относительно устойчив. Прогноз у этих пациенток более благоприятный, также как и у небольшой части пациенток с мутациями BRCA1 из группы high grade, в связи с тем, что они более чувствительны к терапии препаратами платины. Учитывая данный факт молекулярно-генетические исследования необходимо проводить пациенткам с high grade серозной карциномой для исследования мутаций BRCA1 и мутаций KRAS в группе пациенток с low grade карциномой. Поэтому важно определять принадлежность клеток опухоли к low и high grade серозной карциноме на цитологическом материале. Проведенное исследование с применением многофакторного анализа позволило выделить наиболее информативные клеточные признаки в двух типах серозного рака яичника для их дифференци-ровки при световой микроскопии.

Выводы. 1) дифференциальная диагностика пациенток с подозрением на рак яичника с использованием цитологического, иммуноцитохимического метода и молекулярно-генетических исследований, позволяет устанавливать тип и форму опухоли для определения правильной тактики ведения больных;

2) использование иммуноцитохимических методик позволяет при дифференциальной диагностике уточнить принадлежность клеток опухоли к серозному раку яичника;

3) цитологический материал, при условии достаточного количества клеток опухоли, является полноценным материалом для молекулярно-генетических исследований;

4) учитывая факт того, что пациентки с мутациями BRCA1 связаны с более благоприятным прогнозом, молекулярно-генетические исследования, вероятно, необходимо проводить всем пациенткам с high grade серозной карциномой;

5) определение принадлежности клеток серозного рака к low и high grade серозной карциноме важны для определения тактики лечения и прогноза заболевания.

О.В. Груздева1, Е.В. Фанаскова1, Е.Г. Учасова1, О.У. Ак-башева3, Т.Ю. Пенская1, Г.П. Плотников1, О.Л. Барбараш12. Возможности использования теста генерации тромбина в оценке гемостатического потенциала при операциях коронарного шунтирования. 'ФГБНУ НИИ «Комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», г. Кемерово; 2ГБОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия Минздрава РФ, г. Кемерово; 3 БОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, г. Томск

Цель: оценить параметры теста генерации тромбина у пациентов с ишемической болезнью сердца при аортокоронар-ном шунтировании в условиях искусственного кровообращения (ИК) после трансфузии донорского тромбоцитарного концентрата на фоне длительной терапии аспирином.

В исследование включено 148 человек с ИБС, которым была выполнена плановая первичная операция КШ в условиях ИК без отмены антитромбоцитарной терапии (кардио-магнил - 75 мг/сутки, аспирин кардио - 100 мг/сутки или аспирин 125 мг/сутки). В качестве контрольных точек были выбраны следующие этапы: дооперационный, интраопераци-онный (после протаминизации до введения тромбоцитного концентрата) и ранний послеоперационный (в среднем через 1 час после поступления пациентов в отделение реанимации) периоды. В зависимости от трансфузии донорского тромбо-цитарного концентрата (ТК) пациентов разделили на 2 группы: 76 пациентов с трансфузией донорских тромбоцитов и 72 пациента без трансфузии тромбоцитов. Контрольную группу составили 20 практически здоровых лиц.

На фоне длительной аспиринотерапии у пациентов в

до- и интраоперационном периодах было выявлено состояние активации эндогенного тромбинового потенциала, о чем свидетельствовали высокая пиковая концентрация тромбина, увеличение скорости его образования, при этом время активации протромбиназного комплекса и время образования тромбина были удлинены по сравнению с контролем. В раннем послеоперационном периоде в группе пациентов, не получивших трансфузию ТК, на фоне дальнейшего увеличения временных показателей, гемостатический потенциал крови уменьшался, достигая уровня контроля, тогда как, трансфузия ТК стимулировала генерацию эндогенного тромбина: сокращалось время инициации свертывания, время достижения пика, при этом, скорость и концентрация тромбина увеличивались, но дооперационного уровня не достигали.

На фоне длительной аспиринотерапии у пациентов сохраняется гемостатический потенциал. Учитывая, что тромбоциты пациента сохраняют свою способность участвовать в генерации тромбина, а донорские дополнительно стимулируют эндогенный тромбиновый потенциал крови, трансфузия тромбоцитного концентрата в этих условиях может увеличивать риск тромбоишемических событий. К целесообразности трансфузии донорских тромбоцитов, необходимо подходить строго индивидуально с учетом показателей теста генерации тромбина, минимизировав риск периоперационных ишеми-ческих и геморрагических осложнений у каждого конкретного пациента.

О.В. Груздева1, Ю.А. Дылева1, Е.Г. Учасова1, О.Е. Акбаше-ва2, Н.В. Федорова1, В.Н. Каретникова1,3, В.В. Кашталап1,3, О.Л. Барбараш1,3. Клинико-лабораторное значение стимулирующего фактора роста (st2) у пациентов с инфарктом миокарда в динамике госпитального периода. 'ФГБНУ «НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний», г. Кемерово; 2ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, Томск; 3ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздрава РФ, г. Кемерово

Цель исследования: определить содержание стимулирующего фактора роста (ST2) и мозгового натрийуретического пептида (NT-proBNP) в сыворотке крови пациентов с ИМ в динамике госпитального периода и их взаимосвязь с адаптивным и дезадаптивным вариантами ремоделирования миокарда.

Обследовано 87 (65 мужчин и 22 женщины) пациентов с инфарктом миокардас подъемом сегмента ST (ИМ^Т), из них 67 больных имели адаптивный, физиологический вариант, а 20 - дезадаптивный, патологический вариант ремоде-лирования миокарда. Средний возраст пациентов составил 59±8,36 лет. В контрольную группу вошли 30 человек. На 1-е и 12-е сутки ИМ в сыворотке крови определяли иммунофер-ментным методом содержание ST2 и NT-proBNP с помощью тест-систем фирм CriticalDiagnostics (США) и Biomedica (Словакия) соответственно. Статистический анализ данных проводился с помощью непараметрических критериев.

В 1-е сутки госпитального периода ИМ концентрация ST2 и NT-proBNP увеличивалась по сравнению с контролем в 2,4 раза и в 4,5 раза соответственно. При дезадаптивном ремоделировании содержание ST2 на 1-е сутки было в 1,5 раза выше, чем в группе адаптивного ремоделирования и в 5,3 раза выше в сравнении с группой контроля. На 12-е сутки в обеих группах наблюдалось снижение уровня маркера. Концентрация NT-proBNP не зависела от варианта постинфарктного ремоделирования и на 1-е сутки была повышена среди пациентов обеих групп в 1,8 раза по сравнению с группой контроля. Высокий уровень ST2 в 1-е сутки ИМ повышает риск развития дезадаптивного ремоделирования в 4,5 раза (ОШ = 4,5, 95% ДИ = 2,0-10,1, р = 0,011, AUG составила 0,81, чувствительность - 78,7%, специфичность - 69,4%), в

то время как повышение содержания NT-proBNP - лишь в 2,3 раза (ОШ = 2,3, 95% ДИ = 2,0-2,01, р = 0,032, AUG составила 0,68, чувствительность - 69,5%, специфичность - 65,9%).

Таким образом, при ИМ в 23% случаях развился дезадап-тивный вариант ремоделирования. Высокий уровень стимулирующего фактора ST2 на 1-е сутки ИМ ассоциируется с развитием данного типа ремоделирования и позволяет прогнозировать риск его развития с большей чувствительностью и специфичностью по сравнению с NTproBNP.

В.В. Делекторская, И.Н. Перегородиев, В.Ю. Бохян, И.С. Стилиди. Экспрессия компонентов сигнального пути m-TOR в нейроэндокринных опухолях желудка: иммуноги-стохимическое исследование. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Нейроэндокринные новообразования (НЭН) желудка образуют гетерогенную группу опухолей, которые демонстрируют различные клинико-морфологические характеристики и клиническое поведение. Сигнальный путь mTOR (mammalian target of rapamycin, мишень рапомицина у млекопитающих) играет ключевую роль в контроле белкового синтеза и регуляции клеточной пролиферации. Компоненты данного сигнального пути очень важны для развития и роста нейро-эндокринных опухолей и являются мишенью для специфических ингибиторов. Однако в НЭН желудка экспрессия компонентов сигнального каскада mTOR остается малоизученной.

Целью исследования явилась оценка активности компонентов сигнального пути mTOR в различных типах НЭН желудка и корреляция уровня их белковой экспрессии с клинико-морфологическими параметрами и прогнозом. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование экспрессии фосфорилированного варианта mTOR (p-mTOR) и его нижележащих мишеней 4EBP1 (the eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 1, белок 4Е, связывающий эукариотический фактор инициации трансляции) и p70S6K (70-kDa the ribo-somal protein S6 kinase, 70 кДа киназа рибосомального белка S6) было выполнено на материале хирургически удаленных образцов 45 пациентов с НЭН желудка. Изученный материал включал 24 высокодифференцированные нейроэндокринные опухоли (15 НЭО I типа, 9 НЭО III типа) и 21 низкодиффе-ренцированный нейроэндокринный рак (16 НЭР крупноклеточного типа и 5 НЭР мелкоклеточного типа).

Позитивная иммунореактивность p-mTOR, 4EBP1 и p70S6K была выявлена в 29 (64,4%), 31 (68,9%) и 20 (44,4%) из 45 исследованных НЭН желудка соответственно. Распределение p-mTOR и нижележащих мишеней среди различных типов НЭН желудка было гетерогенным, при этом выявлялись как ядерная, так и цитоплазматическая модели иммунореактивности. Сильная экспрессия p-mTOR, 4EBP1 и p70S6K была обнаружена как в высокодифференцированных НЭО I и III типов, так и в НЭР крупно- и мелкоклеточного типов. Уровень позитивной ИГХ экспрессии p-mTOR, 4EBP1, pS6K1 был выше, но недостоверно в категории новообразований G3, чем в НЭО G1/G2. Ядерная экспрессия p70S6K высокой интенсивности наблюдалась достоверно чаще в опухолях высокой степени злокачественности (G3), чем в НЭО G1/G2 (p = 0,027). При сравнении экспрессии маркеров и клинико-морфологических характеристик опухоли выявлена достоверная связь позитивной иммунореактивность 4EBP1 с глубиной инвазии в стенку желудка (p = 0,02), средним размером опухоли (p = 0,01), возрастом (p = 0,02) и индексом пролиферативной активности опухолевых клеток Ki-67 (p < 0,0001). Предварительная оценка выживаемости позволила выявить достоверную корреляцию экспрессии p-mTOR с показателем пятилетней выживаемости больных НЭН желудка (p = 0,02).

Таким образом, различные типы нейроэндокринных но-

вообразований желудка демонстрируют высокую частоту и интенсивность позитивной экспрессии молекул сигнального пути mTOR. Полученные данные позволяют предположить, что «таргетная» терапия, направленная на молекулы сигнального пути mTOR, может играть важную роль в лечении данной категории больных. Прогностическая и предективная роль этих факторов при НЭН желудка требует дальнейшего исследования.

А.Г. Денисова, Е.Р. Кулюцина, Т.А. Дружинина, Е.В. Кривченкова. Гипергомоцистеинемия и эндотелиальная дисфункция артериол как факторы риска сердечнососудистых осложнений у больных сахарным диабетом типа 2. ГБОУ ДПО ПИУВ Минздрава РФ, Пенза, Россия

Замедление или прекращение развития макрососудистых осложнений и связанных с ними кардиоваскулярных событий является одной из главных задач управления сахарным диабетом типа 2 (СД 2) (Касаткина С. Г., 2011). К потенциальным факторам риска сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) относят гипергомоцистеинемию (Ефимов В.С., 2013). Причем повышение уровня гомоцистеина (ГЦ) в крови может являться независимым фактором развития эндотелиаль-ной дисфункции артерий или усиливать уже имеющееся повреждение эндотелия (Березикова Е.Н., 2014).

Цель исследования - оценить частоту встречаемости и характер взаимосвязи гипергомоцистеинемии и нарушения функции эндотелия у больных СД 2 в сочетании с артериальной гипертензией и стабильной стенокардией напряжения I-III ФК.

Основная группа I (n = 55) - пациенты в возрасте не старше 60 лет с артериальной гипертензией (АГ) и стабильной стенокардией напряжения (ССН). В основную группу II (n = 56) больные СД 2 в сочетании с АГ и ССН. В группу контроля III (n = 20) включены пациенты с нормальными значениями артериального давления без нарушения углеводного обмена. Длительность СД 6,7±3,4 года, длительность АГ 12,3±3,5 лет, ИБС - 4,5±1,2 года. Всем проведено дуплексное сканирование плечевой артерии с определением эндотелий зависимой вазодилатации (ЭЗВД). Исследование концентрации ГЦ сыворотки крови проводили иммунофер-ментным методом на анализаторе Statfax с использованием набора реактивов «Axis-Shield Diagnostics Limited» (Англия). Выявляли взаимосвязь с помощью корреляционного анализа по критерию Спирмена. Частоту встречаемости (ЧВ) нарушения вазомоторной функции эндотелия и ГГЦ определяли прямым подсчетом. Различия в их распределении оценивали с помощью точного критерия Фишера. Статистическая обработка и анализ полученных результатов проведены в системе статистического анализа STATISTIKA 6.0.

В основной группе II во всех случаях отмечено нарушение вазомоторной функции эндотелия, индуцированной напряжением сдвига. У 72% больных нарушение вазомоторной функции эндотелия диагностировали в виде недостаточного вазодилатирующего эффекта; у 16% - в виде отсутствия прироста диаметра плечевой артерии (ПА); у 12% - в виде патологической вазоконстрикции. ЭЗВД ПА в основной группе II (3,4±1,1%) достоверно ниже по сравнению с аналогичным показателем в основной группе I (ЭЗВД - 7±2,2%) и в группе сравнения (ЭЗВД - 12,2±2,1%). Получена достоверная зависимость ЭЗВД от функционального класса (ФК) стенокардии (r = 0,4215, p = 0,042): у больных стабильной стенокардией напряжения III ФК ЭЗВД составила 2,4±0,3%, что достоверно ниже в сравнении с больными стабильной стенокардией напряжения I и II ФК соответственно: 5,2±0,2% и 4,05±0,15%.

Концентрация ГЦ у больных СД 2 (основная группа II) составила в среднем 16,9±8,2 мкмоль/л и была статистически значимо выше, чем в основной группе I (13,7±2,2 мкмоль/л) и в группе контроля III (8,5±1,6 мкмоль/л). ГГЦ (концентра-

ция ГЦ выше 15 мкмоль/л у мужчин и выше 12 мкмоль/л у женщин) выявлена у 82,6% обследованных больных СД 2 (основная группа II), у 67,2% обследованных группы I и у 23,3% обследованных контрольной группы III (р < 0,05, рнп < 0,°5, рп-ш < 0,°5).

Отмечена значимая обратная корреляционная связь умеренной силы между концентрацией ГЦ и уровнем ЭЗВД (r = -0,583,р < 0,05).

Выводы. 1. В результате проведенных исследований установлена достоверно более высокая частота встречаемости гипергомоцистеинемии и нарушения вазомоторной функции эндотелия у пациентов с сахарным диабетом 2 типа по сравнению группой пациентов только с ИБС без СД 2 и с обследуемыми контрольной группы.

2. Выявленная высокая концентрация гомоцистеина и обратная корреляционная связь между его уровнем с ЭЗВД подтверждает данные о наибольшем повреждающем действии на эндотелий сосудов гипергомоцистеинемии и высоком риске сердечно-сосудистых осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа.

Джатдоева А.А., Полимова А.М., Проскурнина Е.В., Владимиров Ю.А. Люцигениновая хемилюминесценция как метод оценки радикал-продуцирующей способности тканей. Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, факультет фундаментальной медицины, Москва

В патогенезе многих патологических процессов важную роль играет оксидативный стресс. Между тем, прямых методов обнаружения радикалов в клетках и тканях немного, и среди них значительное место принадлежит методу активированной хемилюминесценции (ХЛ). Работа посвящена разработке ХЛ-методов анализа свободнорадикальных процессов в тканях человека и животных.

Люцигенин-активированная ХЛ оказалась эффективным методом оценки образования супероксидного радикала в тканях в условиях их аэрации. Затухание люцигенин-зависимой компоненты при прекращении перемешивания отражало скорость потребления кислорода, которая различна в разных тканях. Основным источником радикалов в тканях является дыхательная цепь митохондрий, в результате работы которой генерируется супероксид-анион радикал. Таким образом, тканевая хемилюминесценция дает информацию о работе митохондрий в норме и при патологии.

Метод был применен для исследования радикал-продуцирующей активности тканей животных, таких как а) срезы миокарда крыс в условиях гипоксии/реоксигенации, б) срезы мозга мышей в модели паркинсонизма (область stгiatumи sub stantia nigra), в) биоптаты глиомы C6 крыс, а также г) предстательная железа крыс.

Для миокарда крыс получены данные о влиянии предварительной ишемии на радикал-продуцирующую способность ткани сердца, для модели паркинсонизма показана увеличенная продукция радикалов тканью мозга.

Л.С. Дмитриев, М.А. Барсукова. Влияние температурного режима инкубационной среды на накопление док-сорубицина в эритроцитах. Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького, Донецк

Онкологические заболевания являются одними из основных причин смертности в мире. Несмотря на прогресс в ранней диагностике рака, количество летальных случаев продолжает расти.

Если отбросить, как неблагоприятный фактор выживаемости больных, отсутствие компетентной медицинской помощи, то остаются индивидуальные особенности пациента, влияющие на эффективность лечения. Одной из основных факторов, ограничивающей успешность химиотерапии, является лекарственная резистентность.

Целью химиотерапевтического лечения является по-

вреждение клеток-мишеней. Клетка же в свою очередь может противодействовать как проникновению препарата, так и не давать ему накопиться в достаточной внутриклеточной концентрации, необходимой для реализации своего эффекта, путем увеличения активности транспортных систем, выводящих лекарственный препарат из клетки.

Цель работы - определение динамики насыщения эритроцитов доксорубицином (ДР) в зависимости от температурного режима.

Оценивали обмен ДР между эритроцитами и инкубационной средой - изотонический фосфатный буфер с глюкозой (ИФБ) следующего состава: NaCl - 140 mM; Na2HPO4 - 1,3 mM; глюкоза-5 mM, pH = 7,4-7,8. Цельную кровь центрифугировали при 1500 об/мин в течение 3 минут, надосадоч-ную жидкость сливали, а эритроциты отмывали 4 раза в 10 кратном объеме ИФБ. Затем эритроциты ресуспендировали в ИФБ (значение гематокрита 12-13%), содержащем ДР в конечной концентрации 200 мкг/мл. Ресуспендированные эритроциты инкубировали при постоянном легком встряхивании на протяжении 2 часов. В первой серии суспензию эритроцитов инкубировали при 37oC, во второй - 35oC, в третьей - 30oC. Каждые 10 минут отбирали пробы которые центрифугировали при 1500 об/мин в течение 3 мин, а содержание ДР определяли в надосадочном растворе спектро-фотометрическим методом, в стеклянной кювете с длиной оптического пути в 1 см, на длине волны 485 нм.

Полученные данные показали замедление скорости накопления ДР при понижении температурного режима инкубирования. Тангенсы углов наклона кинетических кривых, описывающих изменение концентрации ДР в ИФБ, при 30oC (1,178) больше, чем при 37oC (0,719). Несмотря на различия температурного режима инкубирования, равновесная концентрация ДР во всех пробах устанавливалась на значении 86 мкг/ мл. Однако при более низких температурах время достижения равновесной концентрации было больше на 15 минут.

А.Д. Донецкова, А.Н. Митин, М.ФНиконова, Н.И.Шарова, М.М. Литвина, В.В. Комогорова. Исследование молекулярных механизмов конверсии фенотипа Т-лимфоцитов при пострадиационной регенерации. ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Была исследована динамика экспрессии внутриклеточных и поверхностных молекул Т-клеток, задействованных при их восстановлении после лимфопении, вызванной сублетальным облучением мышей. Подтвержден феномен конверсии фенотипа наивных Т-лимфоцитов в клетки с фенотипом Т-клеток памяти при пострадиационном восстановлении. Показано, что восстановление Т-лимфоцитов после облучения сопровождается увеличением пролиферативной активности (по экспрессии внутриклеточного маркера пролиферации Ki-67) и относительным увеличением пула лимфоцитов с фенотипом центральных Т-клеток памяти (CCR7+ CD44hi) и снижением наивных Т-клеток (CCR7+ CD44lo/-) как в селезенке, так и лимфатических узлах, особенно выраженное на ранних этапах восстановления (5 сутки). Накопление клеток с фенотипом клеток памяти в отсутствие контакта с антигеном может являться причиной развития аутоиммунных процессов.

В Т-клетках вторичных лимфоидных органов (селезенки и лимфоузлов) отмечалось снижение уровня экспрессии мРНК FOXO1 на всем протяжении периода наблюдения. Транскрипционный фактор FOXO1 отвечает за экспрессию молекул, необходимых для миграции и хоминга наивных Т-лимфоцитов - CD62L, CCR7 и S1P1, а также альфа-цепи рецептора к IL-7 (IL-7R alpha), запускающего антиапоптоти-ческий сигнальный путь, необходимый для выживания наивных Т-клеток. Уровень экспрессии активированной формы протеинкиназы в процессе восстановления возрастал.

Уровень экспрессии антиапоптотического белка bcl-2 при восстановлении Т-клеток находился в соответствии с динамикой экспрессии AKT и противоположно изменениям экспрессии FOXO1. Предполагая участие транскрипционного фактора KLF2 в регуляции экспрессии поверхностных маркеров Т-клеток, отвечающих за их миграцию и «возрастной» фенотип, нами проведено исследование уровня экспрессии мРНК KLF2 в периферических Т-клетках. Было обнаружено снижение уровня экспрессии мРНК KLF2 Т-клетками селезенки на всем протяжении периода наблюдения и увеличение на ранних сроках восстановления (5 и 10 сутки) Т-клетками лимфатических узлов. Данные изменения сопровождаются аналогичными колебаниями уровня экспрессии в Т-клетках лимфатических узлов рецептора к сфингозин-1-фосфату (S1P1), отвечающего за выход Т-клеток в кровоток из лимфо-идных органов. Однако, данная закономерность не соблюдается в селезенке, где, несмотря на низкий уровень экспрессии мРНК KLF2, на 10 сутки отмечается значимый рост уровня экспрессии S1P1, что, по-видимому, обусловлено массовой миграцией Т-клеток из тимуса вследствие достижения пика тимопоэза на 10 сутки перед вторичной атрофией тимуса.

Таким образом, можно говорить о важной роли PI3K/ AKT/mTOR сигнального пути в процессе регенерации Т-клеточного звена иммунной системы у мышей после лим-фопении, вызванной сублетальным облучением, связи его с экспрессией транскрипционных факторов FOXO1, KLF2 и антиапоптотического белка bcl-2, что в целом определяет выживание, пролиферацию, изменение поверхностного фенотипа и миграционных свойств Т-клеток.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ; грант 15-04-04394а.

В.В. Дорофейков1,2, В.И. Иванов1,2, И.В. Кайстря1,2, Е.В. Фролова2. Витамин D и мозговой натрийуретический пептид у пожилых жителей Санкт-Петербурга. 'ФГБУ СЗФМИЦ им. В.А. Алмазова, Санкт-Петербург; 2Клиника «СМТ», Санкт-Петербург

В последние годы в зарубежной научной литературе приводятся многочисленные данные о важной роли витамина D в области охраны здоровья, включая сердечно-сосудистые заболевания. Целью настоящей работы было исследование сывороточного уровня витамина D(OH) у пожилых жителей Санкт-Петербурга и его ассоциации с маркером хронической сердечной недостаточности - мозговым натрийуретическим пептидом (МНП). Для решения поставленной задачи в зимний период (февраль-март) было обследовано 209 пациентов, не принимавших препараты витамина D в течение предыдущих шести месяцев. Возраст пациентов варьировал от 71 до 91 года, с медианой (интерквартальной широтой) равной 77 годам (от 74 лет до 81 года). 72,7% (152/209) выборки составили женщины. В качестве лабораторного показателя статуса витамина D использовали сывороточный уровень 25-гидроксивитамина D [25(ОЩЭ]. Все исследования проводили на автоматическом анализаторе «ARCHITECT i1000 SR» с использованием наборов реактивов, калибраторов и контролей фирмы Abbott (США). Сывороточная концентрация 25(ОНН® у пациентов изменялась от 5,0 до 28,0 нг/мл при следующих устойчивых показателях распределения: медиана 15,5 нг/мл (25-й процентиль равен 12,8 нг/мл, 75-й процен-тиль - 19,7 нг/мл). Рассчитанный медианный доверительный интервал позволяет утверждать, что медиана популяционной совокупности витамина D с вероятностью 0,95 будет находиться в пределах от 14,9 до 16,8 нг/мл. Достоверных различий в обеспеченности витамином D по полу не выявлено, что подтверждается рассчитанным U-критерием Манна-Уитни (Z = -1,267, p = 0,205). В ходе нашего исследования установлено, что авитаминоз D (уровень кальцидиола в крови менее 10 нг/мл) имел место у 9,6% (20/209) обследованных, у 66%

(138/209) пациентов наблюдался гиповитаминоз (25(ОН^ в пределах от 10 до 20 нг/мл, включительно) и у 24,4% (51/209) был пониженный уровень витамина D (от 21 до 30 нг/мл).

Обнаружена ассоциация дефицита витамина D с уровнем мозгового натрийуретического пептида (МНП), являющегося маркером хронической сердечной недостаточности. Риск иметь уровень МНП выше 100 пг/мл, т. е. выше нормы, в группе пациентов с авитаминозом был в 1,9 (95% ДИ 1,143,23) раза вероятней, чем в группе с дефицитом витамина и в 2,6 (95% ДИ 1,257-5,175) раза выше, чем в группе с пониженным уровнем витамина D. Таким образом, относительный риск сердечно-сосудистых заболеваний увеличивается с уменьшением концентрации сывороточного витамина D. Необходимы дополнительные рандомизированные исследования для корректного выявления роли низкого статуса витамина D в нарушении функции сердца.

С.А. Евгина', А.В. Ружанская', И.И. Скибо2, Д.Г. Денисов2, Н.Б. Выборнова2, А.В. Васильев2, Г.А. Агаркова', Д.А. Бутлиц-кий', Е.И. Волкова', Е.Г. Виленская', В.Л. Эмануэль3. Результаты исследования российских референсных интервалов для 55 основных биохимических и иммунохимических аналитов в рамках глобального проекта под эгидой IFCC. 'ООО «БЕКМЕН КУЛЬТЕР», Москва; 2Лаборатор-ный комплекс научно-производственной фирмы «Хеликс», Санкт-Петербург; 'Институт лабораторной медицины на базе Санкт-Петербургского медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург

В ходе российского этапа глобального исследования с использованием биохимического анализатора AU5800 и иммунохимического анализатора UniCell DxI800 (Beckman Coulter) были определены значения 55 аналитов в сыворотке крови 793 добровольцев из трех городов России (Санкт-Петербург, Москва, Екатеринбург). Значимые половые отличия были выявлены для 23 аналитов, российский перечень данных аналитов схож с таковым у других стран - участниц глобального проекта, за исключением выявленных значимых отличий между российскими популяциями мужчин и женщин по общему билирубину и ионам магния. Для 28 анали-тов были установлены раздельные референсные интервалы для мужчин и женщин, в случае таких аналитов как амилаза, щелочная фосфатаза, иммуноглобулин А, СА125, СА19-9, трансферрин, фолат, витамин В12 по причине различной возрастной динамики у женщин и мужчин.

Возрастную зависимость продемонстрировали 25 анали-тов у женщин и 15 аналитов у мужчин, при этом частичный коэффициент регрессии у возраст-зависимых аналитов у российских женщин был выше, чем у мужчин, что согласуется с результатами других стран. По результатам анализа для 4 возраст-зависимых аналитов (глюкоза, ЛДГ, АФП, СА15-3) были определены референсные интервалы для групп младше и старше 45 лет. Для холестерина, триглицеридов, липопро-теидов низкой плотности, тестостерона разбиение проводилось как по возрасту, так и по полу, в связи с чем, устанавливались отдельные референсные интервалы для мужчин младше 45 лет и женщин младше 45 лет. Если после применения третичного исключения имелось приемлемое количество данных также рассчитывались референсные интервалы для мужчин старше 45 лет и для старшей группы женщин. Для репродуктивной панели, включавшей ЛГ, ФСГ, эстради-ол, прогестерон и пролактин были определены референсные значения для женщин в состоянии пре- и постменопаузы.

Интересные данные были получены при анализе такого источника вариации как индекс массы тела (ИМС). 34% добровольцев мужчин и 30% участников женщин имели ИМС > 28, и соответственно результаты измерений по этим индиви-думам исключались при определении референсных интервалов для 19 аналитов. Данные аналиты продемонстрировали

зависимость от ИМС и в популяциях других стран. При этом в российской популяции для многих аналитов зависимость была более выраженной, с более высокими значениями частичного коэффициента регрессии и большим углом наклона линии регрессии, в частности в случаях высокочувствительного СРБ, мочевой кислоты, триглицеридов, ГГТ, АЛТ.

Зависимость от интенсивности курения была выявлена для РЭА с более высокими референсными значениями у курящих и для иммуноглобулина G с более низкими референсными значениями у курящих. Корреляцию с уровнем потребления алкоголя продемонстрировал только один аналит у мужчин - глюкоза.

Для 30 аналитов референсные интервалы, определенные в ходе исследования, отличались от данных, приведенных в инструкциях производителя к реагенту, полученных, как правило, на американской или европейской популяции. Для ряда аналитов, в частности ТТГ, инсулина, различия были существенными, что подчеркивает практическую значимость данного исследования и необходимость валидации референсных интервалов лабораторией согласно руководству CLSI/IFCC О28-А3.

И.В. Елистратова1 2, А.В. Гречко3, С.Г. Морозов'. Измерение уровня митохондриального шаперона DNAJC15/ МО в клетках крови больных атопическим дерматитом.

'ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», Москва; 2ФГКУ «Главный военный клинический госпиталь внутренних войск МВД России», Балашиха; 3ФГБНУ «Госпиталь для инкурабельных больных - Научный лечебно-реабилитационный центр», Москва.

Целью данной работы было изучение экспрессии мито-хондриального белка - молекулярного шаперона DNAJC15/ MCJ семейства ЖР40, в лимфоцитах и нейтрофилах крови больных атопическим дерматитом (АД) средней степени тяжести (индекс SCORAD от 20 до 40) в остром периоде заболевания. В исследовании приняли участие 68 больных АД и 32 здоровых донора, все мужчины в возрасте от 18 до 34 лет, все подписывали утвержденную форму информированного согласия. Клетки крови фракционировали на градиенте плотности Перколла, окрашивали антителами и анализировали на проточном цитометре. Статистический анализ проводили по программе ANOVA. Установлено, что экспрессия белка DNAJC15/MCJ в СЭ8+ цитотоксических лимфоцитах и в нейтрофилах периферической крови больных АД достоверно выше по сравнению с донорами (р < 0,05). Выявлено достоверное различие в уровне экспрессии белка DNAJC15/MCJ в Т-хелперах и в цитотоксических лимфоцитах как больных АД, так и здоровых доноров. При наличии бактериальной контаминации кожи уровень экспрессии белка DNAJC15/ MCJ в нейтрофилах крови больных АД в два раза выше показателей больных без таковой. Увеличение экспрессии белка DNAJC15/MCJ сопряжено с возрастанием уровня церамид-индуцированного апоптоза нейтрофилов крови больных АД. Значение полученных нами результатов определяется ролью белка DNAJC15/MCJ в клетках: он участвует в биогенезе митохондрий, является эндогенным репрессором электронно-транспортной цепи, регулирует открытие митохондриальных пор, индуцирует апоптоз, регулирует ответ клетки на изменение метаболизма. ВЫВОДЫ. Повышение экспрессии митохондриального белка DNAJC15/MCJ в лимфоцитах и нейтрофилах больных атопическим дерматитом средней степени тяжести в острой стадии заболевания отражает изменения метаболизма в клетках крови. Измерение уровня экспрессии белка DNAJC15/MCJ в клетках крови может служить новым маркером изменения метаболизма у больных атопическим дерматитом, а также для прогноза течения АД.

И.В. Елистратова', А.В. Гречко2, С.Г. Морозов'. Экспрессия цитозольных молекулярных шаперонов семейства

белков теплового шока HSP40 в клетках крови больных атопическим дерматитом. 'ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 2ФГБНУ «Госпиталь для инку-рабельных больных - Научный лечебно-реабилитационный центр», Москва

Во всем мире повышается число больных атопическим дерматитом (АД), тяжесть которого и частота обострений возрастают с каждым годом. В связи с этим уточнение патогенеза заболевания и поиск новых мишеней для разработки лекарственных препаратов являются насущной необходимостью. Стресс играет значительную роль в патогенезе АД. Молекулярные механизмы стресса включают в себя функционирование системы молекулярных шаперонов - белков теплового шока (Heat Shock Proteins), которые контролируют качество внутриклеточных белков. Среди 49 белков семейства HSP40 человека выделяют подсемейства А, В, С. Целью исследования было сравнение экспрессии белка DNAJB6/ MRJ подсемейства В HSP40 в клетках крови больных АД и здоровых доноров. В исследовании приняли участие 88 больных АД, находящихся в госпитале МВД в период с 2012 по 2015 г., а также 36 здоровых доноров, обращавшихся за справками, все мужчины в возрасте от 18 до 34 лет. Все участники исследования подписывали утвержденную форму информированного согласия. Тяжесть состояния больных АД оценивали по индексу SCORAD. Клетки крови фракционировали на градиенте плотности Перколла, чистота выхода популяций составляла >98%. Выделенные нейтрофилы и лимфоциты фиксировали и окрашивали антителами к белку DNAJB6/MRJ, интенсивность флуоресценции анализировали на проточном цитометре. Статистический анализ проводили по программе ANOVA. Анализ полученных данных позволил выявить повышение экспрессии белка DNAJB6/ MRJ во всех изученных образцах клеток крови больных АД по сравнению со здоровыми донорами. Экспрессия белка DNAJB6/MRJ в нейтрофилах более высокая, чем в лимфоцитах. Максимальная экспрессия показана в нейтрофилах больных АД в острый период заболевания, которая линейно возрастала по мере увеличения индекса SCORAD и соответственно тяжести заболевания. При хроническом течении АД экспрессия белка DNAJB6/MRJ в нейтрофилах постепенно снижалась. В лимфоцитах наиболее высокий уровень белка DNAJB6/MRJ регистрировался при подостром течении АД, но также положительно коррелировал с тяжестью заболевания. ВЫВОДЫ. Анализ цитозольного белка DNAJB6/MRJ в клетках крови показал его участие в развитии атопического дерматита, поэтому его можно использовать в качестве нового маркера для прогнозирования течения заболевания и оценки тяжести состояния при атопическом дерматите.

А.В. Ершова1, Бердюгина О.В.1, 2, Фадина О.В.1. Уровень суммарных перекисей крови и антиоксидантной защиты у больных туберкулезом легких. 'ФГБУ «УНИИФ» Минздрава РФ; 2ГБОУ ВПО «УГМУ» Минздрава РФ, Екатеринбург

Осуществление защитной функции фагоцитами определяется способностью не только поглотить микроорганизм, но и интрацеллюлярно разрушить его. Одним из ключевых моментов этого становится выработка активных форм кислорода, формирующего регистрируемый «окислительный взрыв». Вместе с тем, чрезмерное образование подобных соединений может приводить к повреждению тканей макроорганизма. Одним из антиоксидантов, контролирующих процесс, является фермент супероксиддисмутаза (СОД). Изучение метаболических процессов фагоцитов у больных разными формами туберкулеза позволяет приблизиться к пониманию вопроса распространенности этого заболевания в популяции сегодня. Целью данного исследования была оценка уровня суммарных перекисей и концентрации СОД в сыворотке крови больных различными формами туберкулеза легких.

В исследования включены 99 пациентов, из которых: 31 был поставлен диагноз «туберкулема легкого», 44 - «инфиль-тративный туберкулез легких», 24 - «фиброзно-кавернозный туберкулез легкого». Контрольную группу составили 25 практически здоровых людей, доноров крови. Концентрацию суммарных перекисей и СОД оценивали в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Oxystat» (Biomedica Gruppe, Austria) и «Human Cu/Zn SOD Platinum ELISA» (eBioscience) соответственно. Статистическая обработка результатов включала базовые статистики с установлением достоверности отличий между сравниваемыми группами с использованием непараметрического метода (критерий Манна-Уитни).

Выявлено увеличение концентрации суммарных перекисей сыворотки у больных при всех изученных формах туберкулеза легких. Максимального повышения этот показатель достигал при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких и составлял в среднем 1266,2 мкмоль/л, тогда как в контрольной группе он в среднем был 366,1 мкмоль/л (р < 0,01). У больных с туберкулемами легкого и инфильтратив-ным туберкулезом легких количество суммарных перекисей было увеличено по сравнению с группой здоровых лиц соответственно в 1,9 и 2,2 раза (704,9 мкмоль/л, р < 0,05 и 804,3 мкмоль/л, р < 0,05).

Концентрация фермента СОД в сыворотке крови была увеличена у всех больных пропорционально количеству суммарных перекисей. В частности у пациентов с тубер-кулемой легкого она составляла 1135,1 нг/мл, у обследованных с инфильтративным туберкулезом - 2071,6 нг/мл (р < 0,01), у больных фиброзно-кавернозным туберкулезом легких - 3046,0 нг/мл (р < 0,01), тогда как величина в контрольной группе была в среднем 757,0 нг/мл. Также было отмечено достоверное увеличение количества СОД у больных инфильтративным и фиброзно-кавернозным туберкулезом легких в сравнении с группой больных с туберкулемами соответственно в 1,8 и 2,7 раза (в обоих случаях р < 0,01).

Полученные данные дают возможность полагать, что увеличение количества активных форм кислорода у больных разными формами туберкулеза, сопровождается компенсаторным повышением активности антиоксидантной системы, регистрируемым по концентрации супероксиддисмутазы крови.

И.В. Жегалова, С.В. Сучков. Антитела с каталитической активностью (абзимы) как стратегический инструмент в структуре предиктивно-превентивной и персонализированной медицины. ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ, Москва

Не секрет, что ферменты играют важную роль в жизнедеятельности организма, ускоряя или замедляя скорость химических реакций на разных стадиях. В то же время иммунная система является главным антагонистом чужеродных агентов, проникающих в наш организм, а также медиатором реакций системного порядка, формирующихся на фоне ауто-агрессии. При этом основу компенсаторного ответа на аутоа-грессию составляет процесс кооперации между наследственной и адаптивной ветвями иммунитета, среди инструментов которой присутствуют абзимы (AntiBody + enzyme = abzyme) - антитела с каталитической активностью.

Наличие абзимов при аутоиммунных (системная красная волчанка, рассеянный склероз, ревматоидный артрит и др.), инфекционных и опухолевых формах патологии считается доказанным. Титры и активность абзимов коррелируют с активностью заболевания, клинической симптоматикой и масштабами тканевой деструкции годы спустя с момента начала патологического процесса. В этой связи особенности абзи-мов могут использоваться как:

1. Предиктивные и прогностические биомаркеры новых генераций в доклинической и клинической диагностике заболевания и его стадий;

2. Пара «биомаркер-мишень» - например, в онкологии в ходе трансформации первичных фармакоконструкций (про-лекарства), подвергающихся под действием абзимов химическому превращению в действующее лекарственное средство.

3. CD-пакеты с диагностическим сегментом (самого аб-зима и надлежащего «имущества») для мониторинга эффективности таргетной терапии и предикции рисков побочных эффектов. Это позволяет повысить эффективность мониторинга заболевания, обусловливая возможность прогнозирования осложнений.

Ю.И. Жиленкова', О.Ю. Верлинский2, С.С. Бессмель-цев3, А.В. Козлов '. Структура и распространенность гемоглобинопатий в Санкт-Петербурге. 'ФГБОУ ВО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова», Санкт-Петербург; 2Институт репродуктивной генетики, Чикаго, США; 3ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России», Санкт-Петербург

Гемоглобинопатии представляют собой группу наследственных заболеваний, приводящих к нарушению структуры или синтеза гемоглобина. Часть мутаций в глобиновых генах приводит к развитию анемий, требующих наблюдения и лечения, что является серьезной медицинской проблемой. Миграция населения привела к распространению глобиновых аномалий в те географические зоны, для которых они ранее не были характерны, в том числе и в РФ.

Цель работы - изучить структуру гемоглобинопатий в г. Санкт-Петербурге.

Обследованы 95 пациентов различных возрастных групп (50 мужчин, 45 женщин, от 2 до 58 лет, 16,4±1,2, медиана 12,5 лет), направленных на обследование и лечение в СПб ГУЗ «Детский консультативно-диагностический центр» и ФГБУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии» в Санкт-Петербурге с различными гемоглобинопатиями. Для подтверждения гемоглобинопатии использовали лабораторные методы исследования:

1. Эритроцитарные параметры (анализатор Sysmex XT-4000i, Япония) и индекс Менцера (M = MCV/RBC);

2. Фракции гемоглобина разделяли методом капиллярного электрофореза (MINICAP, Sebia, Франция), электрофореза на агарозе и изоэлектрофокусирования (SAS1 и SAS2 Helena, Великобритания);

3. Определяли активность фермента глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (G. Glock и P. McLenan, 1964) для исключения ферментопатии;

4. Для подтверждение носительства бета-глобинового гена и установления генотипа бета-талассемии определяли мутации бета-глобинового гена методом обратной гибридизации продуктов мультиплекс-ПЦР с олигонуклеотидными зондами, фиксированными на стрипах (ViennaLabDiagnostics, Австрия).

Материалом для исследования служила венозная кровь пациентов. На основании лабораторных данных выделены следующие группы пациентов (в соответствии с классификацией МКБ-10):

1. D 56.0 Альфа-талассемия (гемоглобинопатия Н) - n = 1 (Hb H 8,5%).

2. D 56.1 Бета-талассемия (большая форма) - n = 5 (Hb F 29,5%±0,7).

3. D 56.1 Бета-талассемия (промежуточная форма) - n = 2 (Hb F 5,1 и 10,4%).

4. D 56.9 Бета-талассемия малая форма - n = 81 (Hb A2 5,4%±0,2, Hb F 1,6%±0,2).

5. Э 56.9 Бета-талассемия смешанная форма (с гемоглобинопатией Э) - п = 2 (НЬ F 3,8 и 2,4%, НЬ Э 8,8 и 1,6%).

6. Э 57.1 Серповидно-клеточная анемия - п = 1 (НЬ S 85,1%).

7. Э 57.3 Носительство признака серповидно-клеточности (гетерозиготный НЬ S) - п = 1 (НЬ S 9,7%).

8. Э 58.2 Другие гемоглобинопатии (НЬ С и НЬ Э) - п = 2 (НЬ С 7,1%, НЬ Э 10,7%).

Таким образом, гемоглобинопатии становятся распространенным генетическим нарушением в г. Санкт-Петербурге преимущественно за счет бета-талассемии.

М.Г. Залеский. Криогель положительной холодовой пробы мочи - это белок Тамма-Хорсфалла - маркер поражения почек. ООО «Санаторий (курорт) «Краинка», Тульская область

При исследовании способности некоторых проб мочи при охлаждении образовывать солевой осадок - эффект Sedi-теПит Ые^шт ^1), с помощью его лабораторной модели - холодовой пробы мочи (ХПМ) было установлено, что ХПМ выявляется в 24% проб всего пула мочи, исследуемой в КДЛ санатория и у 94% пациентов с положительными ХПМ (образование солевого осадка), выявляются патологические процессы в почках (патент № 2402769).

Впервые было выявлено, что в положительных пробах ХПМ - (SL) наряду с солевым осадком обязательно присутствует гелеобразная субстанция - криогель, представляющий собой гликопротеид, богатый сиаловыми кислотами. Абсолютное большинство проб мочи с обнаруженным криогелем имеет относительную плотность мочи 1,010 г/л и выше.

Был проведен анализ свойств диагностически значимых белков мочи с целью определения их роли в образовании кри-огеля. К диагностически значимым белкам мочи относятся: IgG, альбумин, а 1-микроглобулин, ретинол-связывающий белок, цистатин С, Р2-микроглобулин, белок Тамма-Хорсфалла (БТХ). Все диагностически значимые белки мочи, за исключением белка Тамма-Хорсфалла, сохраняют стабильность при ^ +4 - +80С от 1 нед до 1 мес и в осадок не выпадают. Известно, что БТХ имеет молекулярную массу 7*106 Э. Его олигомер с ММ 28*106 Э, считается маркером мочекаменной болезни и воспалительных процессов в почках. Однако из-за дороговизны и сложности исследований определение БТХ не доступно для КДЛ.

Осаждение БТХ из мочи производится добавлением в мочу хлористого натрия до концентрации 0,58М с дальнейшим выдерживанием ее при +40С в течение 24 часов.

Образование криогеля ХПМ происходит в результате понижения температуры мочи до +3 - +50С (экспозиция 7 ч) с уровнем относительной плотности мочи 1,010 г/л и выше. В обоих случаях действуют два фактора: достижение определенного уровня относительной плотности мочи и понижение температуры.

При проведении параллельных исследований проб мочи методом ХПМ и проведения осаждения БТХ, образование криогеля в пробах с положительной ХПМ полностью совпадает с пробами, в которых произошло осаждение БТХ (полупрозрачный гель). Количество и структура осадков в сравниваемых параллельных пробах совпадают друг с другом. Исследований свойств выпавших в осадок криогеля ХПМ и геля БТХ растворяться при снижении плотности растворов и вновь выпадать в осадок при ее увеличении доказывает, что обе анализируемые субстанции проявляют свойства БТХ.

Условия образования осадка в положительных ХПМ совпадают с условиями осаждения БТХ. Полное совпадение образующихся осадков в исследуемых параллельных пробах, их объема, структуры и физико-химических свойств доказывает, что криогель ХПМ и есть БТХ. ХПМ, наряду с известными в клиническом анализе мочи лабораторными

показателями, позволяет выявлять еще один важный, не доступный ранее для КДЛ биохимический маркер - БТХ, и может дополнить известные методы лабораторной диагностики почечных болезней как скрининговый способ формирования групп риска пациентов с заболеваниями почек.

Н.М. Захарова1, В.И. Егоров2, К.Н. Шачнев3. Возможности цитологической диагностики пролиферативных процессов в полости носа и околоносовых пазухах. 'ФГБУЗ МСЧ № 174 ФМБА РФ, г. Протвино, Московская область; 2ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва; ТБУЗ НИКИО им. Л.И. Свержевского ДЗМ, Москва

Цель: определить значимость цитологического метода исследования в диагностике пролиферативных процессов в полости носа и околоносовых пазухах.

Цитологическое исследование было проведено 120 больным за период 2012-2013 г. Материалом для цитологического исследования служили соскобы со слизистой оболочки полости носа (ПН) и околоносовых пазух (ОНП), жидкость, полученная во время диагностической пункции ОНП, мазки-отпечатки с удаленной опухоли или опухолевидного образования. Материал, нанесенный на предметное стекло, высушивали на воздухе, окрашивали азур-эозином по Паппенгей-му. Исследование препаратов проводили с использованием световой микроскопии. Клинический диагноз формулировался на основании данных передней риноскопии, эндоскопии, УЗИ, рентгенографии.

Исследуемую группу составили 72 мужчины и 48 женщин в возрасте от 15 до 83 лет. У 107 (89,2%) из этих больных диагностирован полипозный риносинусит, у 11 (9,2%) пациентов обнаружены признаки доброкачественного новообразования и у двоих (1,6%) больных - плоскоклеточный рак. Дифференцировать гистологические виды полипов по цитологическому материалу не представляется возможным. По нашим данным, фиброзный компонент в ткани полипа более характерен для сопутствующего хронического воспаления в ПН и ОНП, в то время как отечный, миксоидный сочетаются с аллергическим процессом. Клеточный состав материала, полученного при соскобе с поверхности полипа до начала комплексного лечения, отличается от цитограмм мазков-отпечатков удаленного полипа и соскобов со слизистой оболочки полипозной ткани, подвергшейся воздействию того или иного терапевтического агента.

На основании результатов цито-гистологических сопоставлений произведен расчет следующих показателей цитологического исследования: чувствительность - 92,4%, специфичность - 98,6%, точность - 95,4%.

Цитологический метод эффективен, не требует специального оборудования. Малотравматичен, хорошо воспроизводим и может быть рекомендован в комплексном обследовании больных.

Т.А. Зыкова, Г.А. Неродо, Е.М. Франциянц, О.А. Богомолова. Об участии анаэробной микрофлоры в онкогенезе женских репродуктивных органов. ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Минздрава РФ, Ростов-на-Дону

Основным местом обитания Bacteroides spp. является толстая кишка, однако, в небольшом количестве он может колонизировать тонкую кишку, желудок, ротовую полость, вульву. Целью исследования было установить частоту инфицирования Bacteroides spp. тканей опухолей репродуктивной системы у женщин. Исследовали образцы FFPE и замороженных тканей опухоли рака шейки матки (34), рака вульвы (44) и рака тела матки (28). Для экстракции бактериальной ДНК из FFPE ткани использовали наборы реагентов «QIAamp DNA FFPE TissueKit» (QIAGEN, Германия). Из замороженных тканей ДНК выделяли в автоматическом режиме с помощью наборов реагентов MagNaPure Compact Nucleic Acid Isolation

Kit I-LargeVolume, (Roche). Выявление ДНК проводили методом ПЦР в режиме реального времени.

Определяли ДНК Bacteroides caccae, Bacteroides distaso-nis, merdae, Bacteroides eggerthii, stercoris, uniformis, Bacteroides fragilis, vulgatus, thetaiotomicron, ovatus, а также Bacteroides fragilis, продуцирующих энтеротоксин (BFT). ДНК Bacteroides fragilis в ткани опухоли при раке вульвы была обнаружена в 77,3% (34) образцов, при раке тела матки в 14,3% (4), при раке шейки матки в 11,8% (4). Бактероиды других групп в нашем исследовании обнаружены не были. Известно, что энтеротоксигенные штаммы Bacteroides fragilis продуцируют фрагилизин, который является металлопротеина-зой и деградирует Е-кадгерин. Деградация Е-кадгерина освобождает ß-катенин, который активирует транскрипционные факторы, индуцирующие синтез белков c-myc и циклина D, обладающих разнонаправленным онкогенным действием. Кроме того, фрагилизин инициирует каскад активации транскрипционных факторов NF-kB и Stat3, что ведет к стимуляции синтеза провоспалительных цитокинов, промоти-рующих развитие опухоли.

Таким образом, был установлен высокий уровень инфицирования B. fragilis ткани опухоли вульвы. Для уточнения является ли это доказательством участия B. fragilis в процессе канцерогенеза рака вульвы или следствием контаминации из-за анатомической близости к толстой кишке планируется продолжение исследований.

Е.В. Ивкин1, В.В. Руденко2, Д.С. Михайленко2, В.Б. Черных2, О.А. Симонова2, О.Б. Лоран1, М.В. Немцова1, 2. Генетические факторы повышенного риска герминогенных опухолей у пациентов. ТОУ ДПО РМАПО Минздрава РФ, Москва; 2ФГБНУ «МГНЦ», Москва

Опухоли яичка - наиболее частые формы рака у молодых мужчин, примерно 95% тестикулярного рака представлено герминогенными опухолями яичка (ГОЯ). Источником ГОЯ являются эмбриональные клетки различной степени диффе-ренцировки, и их появление связано с формированием мужских половых клеток и гаметогенезом. К клиническим факторам предрасположенности к развитию ГОЯ, относят криптор-хизм, микролитиаз яичек, бесплодие, связанное с наличием gr/ gr делеции в локусе AZF^ Гены KITLG, SPRY4, BAK1 влияют на эмбриональное развитие ткани яичек и гаметогенез, по результатам полногеномного исследования ассоциаций генотипы AA(rs4624820), CC(rs6897876) для SPRY4, GG(rs995030), GG(rs1508595) для KITLG и GG(rs210138) для BAK1 определены как генотипы высокого риска развития ГОЯ.

Цель настоящего исследования - выявление связи между полиморфизмами генов KITLG (rs995030, rs1508595), SPRY4 (rs4624820, rs6897876), BAK1 (rs210138) и развитием ГОЯ, а также генетических факторов повышенного риска у пациентов с бесплодием, имеющих делецию AZF^

Разработана система детекции аллелей и генотипов методом ПЦР-ПДРФ, и проведено их исследование у 95 фер-тильных мужчин, 45 пациентов с ГОЯ и 88 пациентов с бесплодием, имеющим делецию AZF^ Микроделеции локуса AZF определяли по 9 STS-маркерам (SY85, SY86, DBY, SY114, SY127, SY143, SY152, SY254, SY283).

Выявлена достоверная ассоциация rs995030 гена KITLG с развитием ГОЯ (р = 0,029 для аллеля G; р = 0,0124 для генотипа GG). Для других полиморфизмов достоверных различий между группами ГОЯ и фертильными мужчинами не обнаружено. При сравнении частот аллелей и генотипов в группе пациентов с делецией AZFc для rs995030 выявлена вероятность различия близкая к достоверной для частоты аллеля А и генотипа АА (р = 0,077 и р = 0,057 соответственно). При анализе сочетания всех полиморфизмов высокого риска в контрольной группе, у пациентов с AZFc делецией и пациентов с ГОЯ показаны достоверные различия ГОЯ-

AZFс-Контроль (р = 0,0207). Показано увеличение частоты сочетания всех генотипов в группе ГОЯ в 5 раз (р = 0,0116; OR: 5,25 [1,44-19,15]), а в группе пациентов с AZFc в 3,7 раза (р = 0,045; OR: 3,69 [1,11-12,29]).

Таким образом, генотипирование пациентов с бесплодием, обусловленным делецией AZFc, может быть использовано для выявления лиц, имеющих повышенный риск развития ГОЯ.

Д.Ю. Измайлов. Хемилюминесцентные методы диагностики свободнорадикальных процессов. МГУ им. М.В. Ломоносова, факультет фундаментальной медицины, Москва

Воспаление в живом организме сопровождается процессом окисления биологического материала (оксидатив-ным стрессом), обусловленным образованием свободных радикалов. Определение свободных радикалов вне живого организма (in vitro) крайне затруднено, так как они существуют очень короткое время (доли секунды). Биологические пробы, взятые для анализа свободных радикалов, невозможно транспортировать до лаборатории и тем более хранить, так как свободные радикалы полностью исчезают уже в процессе взятия пробы. Поэтому большинство существующих методов диагностики оксидативного стресса определяют не свободные радикалы, а стабильные продукты окисления - т. е. маркеры оксидативного стресса. Однако такая информация о происходящих в организме свободнорадикальных процессах является вторичной и весьма неполной.

Одним из прямых методов определения свободных радикалов является метод хемилюминесценции (ХЛ) - измерение свечения, возникающего в химической реакции. Свободные радикалы нестабильны, так как обладают большой энергией неспаренного электрона и эта энергия, в конечном счете, может быть реализована в виде светового излучения. В хемилюминесцентных методах измеряется интенсивность свечения, соответствующая скорости химических реакций с участием свободных радикалов, что дает принципиально новую информацию об активности свободнорадикальных процессов в организме, а не только о количестве накопленных продуктов окисления.

Хемилюминесцентные методы позволяют проводить оценку интенсивности следующих свободнорадикальных процессов:

1. Образование первичных свободных радикалов - определение интенсивности образования супероксидного радикала в клетках и тканях живого организма. Метод тканевой хемилюминесценции позволяет определять образование супероксидного радикала на внутренней мембране митохондрий клеток и, таким образом, оценивать активность и жизнеспособность целых кусочков биологической ткани (биоптатов). Метод клеточной хемилюминесценции позволяет определять активность фагоцитарных клеток, генерирующих свободные радикалы в ответ на стимул или раздражитель.

2. Образование вторичных свободных радикалов - определение липидных радикалов и уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ).

3. Образование продуктов окисления - определение степени окисленности биологического материала, например, ХЛ-метод определения гидропероксидов липидов.

4. Действие прооксидантов - определение факторов и веществ, способствующих образованию свободных радикалов или окислению биологического субстрата, например, ХЛ-метод определения пероксидазной активности.

5. Действие первичных антиоксидантов - определение активности собственных антиоксидантных ферментов организма, например, ХЛ-методы определения активности супер-оксиддисмутазы и каталазы.

6. Действие вторичных антиоксидантов - определение количества и активности антиоксидантов, попадающих в организм извне.

Таким образом, хемилюминесцентные методы предоставляют комплексный подход к диагностике протекающих в организме свободнорадикальных процессов.

Е.А. Карбовничая', Л.П. Евстигнеева2, С.В. Цвиренко3. Маркеры активации системы гемостаза в оценке развития хронического воспаления у больных с ревматоидным артритом. 'ООО Европейский медицинский центр «УГМК-Здоровье»; 2ГБУЗ СО «Областная клиническая больница № 1»; 3ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, Екатеринбург

Локальные и системные изменения гемостаза при развитии воспаления связаны прежде всего с повреждением сосудистой стенки под влиянием биологически-активных веществ и определяют повышенный тромбогенный риск. У больных с системными заболеваниями соединительной ткани, в частности, ревматоидным артритом (РА), самым распространенным ревматическим заболеванием на планете, которым страдает 0,5-2% населения мира, отмечается раннее и быстро прогрессирующее развитие атеросклероза, на 60% более высокий уровень сердечно-сосудистой летальности по сравнению с общей популяцией (Н.Ю.Левшин и соавт., 2014). Венозный тромбо-эмболизм развивается у пациентов с РА также достоверно чаще и в более раннем возрасте, чем в среднем по популяции (Fox E.A., Kahn S.R., 2005). Этот риск максимален в первый год от развития заболевания, когда пациенту не подобрана эффективная базисная противовоспалительная терапия (Znller B., Li X., Sundquist J., Sundquist K., 2012).

С целью определить возможности объективной оценки хронического воспаления и тромбоэмболических рисков с помощью маркеров активации гемостаза обследовано 46 больных ревматоидным артритом: 34 женщины, 12 мужчин, средний возраст 52,7 лет, средний стаж болезни - 8,86 лет. Контролем служила группа пациентов, не имеющих клинических признаков воспаления.

У 96% больных РА отмечалась гиперфибриногенемия, повышенный уровень РФМК, определенный с помощью орто-фенантролинового теста. Концентрация комплексов тромбин-антитромбин (ТАТ) и Д-димеров значительно превышала аналогичные значения в контрольной группе. Концентрация растворимых фибрин-мономеров была выше, чем в контроле, но не выходила за пределы референсного интервала.

Выявлена прямая, статистически значимая корреляция между концентрацией острофазового белка фибриногена, маркеров активации (ТАТ, Д-димеров, РФМК методом ОФТ) и активности РА по шкале DAS28. Концентрация же растворимого фибрин-мономера (ФМ) имела обратную корреляционную связь с активностью РА по шкале DAS28 и превышала нормальный диапазон лишь у семи пациентов, пять из которых имели среднюю степень активности процесса.

Таким образом, маркеры активации - Д-димеры, ТАТ, ОФТ отражают степень воспаления при РА. Для оценки же риска тромботических состояний у данной группы пациентов целесообразно использовать только уровень растворимого ФМ.

И.А. Карбышев', А.П. Момот2, Я.Н. Шойхет3. D-димеры, фибринолитические и протеолитические (лейкоцитарные) реакции у пациентов с механической желтухой. 'КГБУЗ «Диагностический центр Алтайского края», Барнаул; 2Алтайский филиал ФГБУ «Гематологический научный центр», Барнаул; 3ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», Барнаул

К основным известным эффекторам фибринолитических реакций крови относится плазмин. В то же время накоплено много данных о вкладе в процесс растворения стабилизированного фибрина протеолитических ферментов лейкоцитар-

ного происхождения, в частности эластазы полиморфноядер-ных нейтрофилов (эластаза PMN). Показано также, что разрушение фибринового сгустка эластазой PMN, как и в случае действия плазмина, приводит к образованию определяемых в современной клинической практике D-димеров, точнее -растворимых Х-связанных полимеров фибрина с неоантигенами D-димеров.

Целью работы явилось изучение роли фибринолитиче-ских и лейкоцитарных протеолитических реакций в метаболизме стабилизированного фибрина у пациентов с механической желтухой (МЖ). Оценка уровня ряда лабораторных маркеров воспалительных, гемостатических и фибриноли-тических реакций проведена у 37 пациентов с МЖ кальку-лезного генеза (средний возраст 62±2,8 лет), проходивших лечение в отделениях общей хирургии и реанимации КГБУЗ «Городская больница № 5» г. Барнаула. Показатели крови анализировались на 1-е, 3-5 и 12-14 сутки после госпитализации. В их число вошло определение количества нейтрофи-лов, тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена I типа (PAI-1), комплекса плазмин/ а2-антиплазмин (PAP), эндотелина-1, комплекса эластазы по-лиморфноядерных нейтрофилов с aj-антиплазмином («эластаза PMN-ajAÜ») и D-димеров. В целях диагностики тромбоза выполняли ультразвуковое ангиосканирование системы нижней полой вены и внутренних органов. Полученные данные сравнивались с результатами 39 условно здоровых лиц, сопоставимых по возрасту и полу (контрольная группа).

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

У больных с МЖ на всех сроках обследования зафиксирован резкий рост уровня D-димеров, превысивший среднее значение в контрольной группе в 9,76 раза (p < 0,01). При этом во всех случаях у пациентов отсутствовали клинические проявления венозного тромбоза. В ходе исследования показателей крови не выявлены изменения уровня t-PA, но установлены избыточные значения PAI-1, превышающие контрольные показатели в 2,3-2,4 раза на 1-5 сутки наблюдений (p < 0,01), что свидетельствует в пользу угнетения пристеночных вну-трисосудистых фибринолитических реакций. Наряду с этим зафиксирована активация фибринолиза в общей циркуляции крови с появлением следов плазмина в виде комплекса PAP, средний уровень которого превышал контрольные данные не менее чем на 56,7% (p < 0,01). Интересно отметить, что у больных с МЖ имело место сочетанное увеличение абсолютного количества нейтрофилов (6,36±0,44*109/л) и комплекса «эластаза PMN-ajAQ» (390,4±30,3 нг/мл). Между этими показателями выявлена положительная зависимость средней силы (r = 0,34, p < 0,05).

Наличие высоких уровней D-димеров, комплекса PAP и комплекса «эластаза PMN-ajAQ» у пациентов с механической желтухой позволяет сделать предположение о сочетан-ном вкладе плазмина и эластазы PMN в процесс деградации стабилизированного фибрина, находящегося в растворимом состоянии и не дошедшего до уровня сгустка (геля).

М.Ю. Карганов, И.Б. Алчинова, Е.Н. Яковенко, О.И. Ковалева, Ю.С. Медведева, М.В. Вялкина. Применение метода лазерной корреляционной спектроскопии в лабораторной медицине. ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва

В настоящее время, наряду с традиционными способами лабораторной диагностики, активно развиваются ее интегральные методы. Эти подходы предполагают не механическое накопление показателей, а исследование их взаимных влияний, сочетаний, связи с клиническими симптомами и корреляции с другими показателями. Одним из способов исследования нативных биологических жидкостей, успешно зарекомендовавшим себя в клинике, является лазерная корреляционная спектроскопия (ЛКС). Суть метода заключается в определении спектральных характеристик квазиупруго

рассеянного изучаемой системой света по спектру флуктуа-ций интенсивности регистрируемого излучения. Зарегистрированные спектры флуктуации интенсивности рассеянного света подвергаются математической обработке методом регуляризации при помощи специальной процедуры, входящей в комплект программного обеспечения спектрометра. Этот математический аппарат решения обратной спектральной задачи близок к тому, который с успехом применяется в современной рентгеновской и ЯМР-томографии.

Цель - анализ информативности метода ЛКС для оценки тяжести заболевания и эффективности лечения (при миастении, бронхиальной астме, гематологических и ряде других заболеваний) и выявления групп риска при массовых обследованиях.

Образец биологической жидкости в объеме 0,2 мл заливали в кювету ЛК-спектрометра «ЛКС-03-ИНТОКС» (рег. удостоверение № ФСР 2010/08619 от 11.08.2010 г.). Измерение проводили в частотном диапазоне 16 кГц (для сыворотки крови) и 8 кГц (для мочи) в количестве 2000 накоплений. Регуляризацию спектра проводили с использованием нелинейной шкалы (программы «Spectrometer», «Urine», «Blood», входящие в программное обеспечение спектрометра). Результатом расчета при таком способе обработки является гистограмма, по оси ординат которой отложен процентный вклад частиц в светорассеяние, а по оси абсцисс - их размер в нанометрах.

Для миастении не существует корреляции между содержанием антител к ацетилхолиновому рецептору и выраженностью процесса. В результате анализа спектров сыворотки крови пациентов с I, II и III степенью тяжести заболевания были выделены три информативные зоны, включающие в себя 75-84% общего светорассеяния: 6-15, 27-67 и 127-223 нм. У пациентов без нарушения витальных функций с нарастанием тяжести наблюдается достоверное увеличение вклада в светорассеяние частиц первой зоны при снижении этого показателя в третьей зоне. Таким образом, открывается перспектива для динамического отслеживания эффективности терапии. У пациентов с нарушениями витальных функций картина резко отличается, что является отражением существенных изменений в функционировании организма и свидетельствует об информативности примененного подхода. Существенные различия, достигающие уровня статистической значимости в зонах 4-6 и 20 нм, обнаружены в спектрах сыворотки крови больных миастенией одинаковой степени тяжести с тимомой и без опухоли. Преобладание крупных частиц у пациентов с тимомой, по-видимому, обусловлено пролиферативными процессами в организме.

По мере нарастания степени тяжести бронхиальной астмы возрастает вначале вклад в светорассеяние небольших иммуноглобулинов, а затем крупных иммунных комплексов. На основании данных, полученных при исследовании здоровых людей (без верифицированного диагноза), были построены усредненные гистограммы распределения светорассеиваю-щих частиц по размерам для крови и мочи - «нормальные» спектры. Исследование сыворотки крови методом ЛКС у лиц с бронхиальной астмой показало возрастание содержания частиц зоны 11-30 нм и двукратное снижение в области 2211500 нм по сравнению со здоровыми людьми. Тестирование мочи у тех же обследуемых выявило уменьшение более чем вдвое вклада в светорассеяние частиц размером 76-220 нм и увеличение в 6 раз - частиц 221-1500 нм.

Была осуществлена оценка распределения субклеточных компонентов биологических жидкостей пациентов с заболеваниями системы крови (железодефицитные и В12дефицитные анемии, лимфогрануломатоз, множественные миеломы, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, тромбо-цитемии, полицитемии). Сопоставление полученных данных с результатами традиционных клинических исследований

продемонстрировало высокую степень информативности разработанного подхода и корреляцию между показателями, определенными различными методами. Так, например, коэффициент корреляции между содержанием иммуноглобулинов у больных с идиопатической тромбоцитопенической пурпурой и вкладом в светорассеяние соответствующей фракции, определенный методом ЛКС, составил 0,84 при достоверности 0,03. В результате при массовых обследованиях была выделена группа риска по заболеваниям системы крови (анемии, эритремии). Из 300 обследованных в эти группы вошло 11 и 5 человек соответственно. Достоверность выделения группы риска была подтверждена традиционными гематологическими исследованиями.

Метод лазерной корреляционной спектроскопии биологических жидкостей информативен для оценки тяжести исследованных заболеваний и эффективности их лечения, а также для выявления групп риска при массовых обследованиях.

О.И. Костылева1, Д.Н. Кушлинский2, Е.А. Короткова1, И.В. Терешкина1, Л.В. Адамян2. VEGF, его рецепторы и ма-триксные металлопротеиназы при раке яичников. 'ФЕБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва; 2ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Минздрава РФ, Москва

Для более углубленного понимания базисных основ развития новообразований яичников в условиях свершившейся опухолевой трансформации клеток, важно изучение конкретных молекул в механизмах регуляции скорости роста, про-лиферативной активности, апоптоза, неоангиогенеза и инва-зивной способности. Одним из наиболее актуальных разделов клинической и экспериментальной онкологии является изучение механизмов неоангиогенеза при развитии опухолей Экспериментальные факты и клинические наблюдения подтверждают зависимость метастазирования ряда опухолей от активности неоангиогенеза и его ключевого активатора - фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Кроме того, показано, что процессы разрушения базальной мембраны опухоль-ассоциированными металлопротеиназами (ММР) также имеют тесную связь с процессами инвазии и метаста-зирования опухолей.Однако данные литературы по изучению изоформ VEGF, его рецепторов и ММР в опухолях больных новообразованиями яичников не однозначны.

Цель настоящего исследования - изучение содержания VEGF, его рецепторов VEGF-R1 и VEGF-R2, а также ММР-2 и ММР-7 в сыворотке крови и опухоли больных доброкачественными новообразованиями (ДНЯ), пограничными опухолями (ПОЯ) и раком яичников (РЯ), и их взаимосвязи с основными клинико-морфологическими характеристиками выше указанных заболеваний.

Обследовали 133 пациентки в возрасте от 17 до 82 лет (53,1±1,4 года): 100 больных РЯ, 9 - ПОЯ и 24 - ДНЯ. В группе контроля обследовали 35 практически здоровых женщин. Содержание VEGF, VEGF-R1, VEGF-R2, ММР-2, ММР-7 в сыворотке крови и экстрактах опухолей яичников определяли прямым иммуноферментным анализом реактивами фирмы «R&D» (США).

Обнаружено достоверное более высокое содержание VEGF в сыворотке крови и ткани опухоли больных РЯ по сравнению с аналогичными показателями при ДНЯ и ПОЯ, а сывороточный VEGF был выше во всех группах больных по сравнению с контролем. При этом обнаружено, что уровни VEGF в сыворотке крови больных РЯ зависели от стадии, гистологического строения и степени дифференцировки опухоли, а содержание его в опухолях связано с гистологическим строением новообразования. У больных РЯ сывороточный уровень VEGF-R1 был достоверно выше при III-IV стадиях и в эндометриоидных РЯ, чем в серозных и муциноз-

ных. Показано, что уровни сывороточного VEGF-R2 достоверно отличались во всех исследованных группах и связаны с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания, но были достоверно ниже при I стадии и в вы-сокодифференцированных РЯ. Обнаружено, что содержание ММР-7 достоверно выше в РЯ, чем в ДНЯ.У больных РЯ выявлена прямая достоверная связь между содержанием ММР-7 в сыворотке крови и опухоли; содержание ММР-2 и ММР-7 в опухоли не было связано с гистологическим строением, степенью дифференцировки, стадией заболевания и наличием асцита.

Таким образом, на основании полученных нами результатов исследования выявлена ассоциация высокого сывороточного уровня ММР-7 с РЯ, что открывает перспективы использования данного маркера в диагностике этого заболевания. При этом обнаружено, что одновременное определение соотношения уровней сывороточных VEGF/VEGF-R2 можно использовать как дополнительный маркер в дооперационной диагностике РЯ.

Л.В. Кремнева, С.Н. Суплотов. Об изменении клиренса креатинина у больных стенокардией после коронарного шунтирования. ГБОУ ВПО Тюменский ГМУ Минздрава РФ, г. Тюмень

Целью исследования являлось изучение особенностей изменений клиренса креатинина у больных стенокардией после коронарного шунтирования (КШ) с выявлением факторов, ассоциированных с развитием послеоперационного нарушения функции почек.

В исследование было включено 99 больных стабильной стенокардией, госпитализированных в стационар для проведения операции КШ . Средний возраст больных составил 57±7 лет, длительность ИБС - 6±5,7 лет. Содержание креати-нина в крови определяли по методу Jaffe на аппарате Synchron CХ Systems фирмы Beckman Coulter (США). Функцию почек оценивали по скорости клубочковой фильтрации (СКФ) в соответствии с классификацией хронической болезни почек NKF/KDOQI (2002). СКФ рассчитывали по формуле CKD-EPI. Исходно, в первые и вторые сутки после КШ измеряли уровень креатинина в крови и рассчитывали клиренс креати-нина (СгО) по формуле Кокрофта-Гаулта. Снижение СгО < 60 мл/мин расценивали как почечную дисфункцию.

При оценке сердечно-сосудистых осложнений учитывали случаи сердечной смерти, периоперационных инфарктов миокарда (пИМ), тяжелой острой сердечной недостаточности, потребовавшей установки контрпульсатора, долю лиц с пароксизмами фибрилляции предсердий. Статистическую обработку материалов исследования проводили с использованием пакета программ SPSS. Для выявления прогностически значимых показателей использовали метод логистического пошагового регрессионного анализа. Достоверными считали различия показателей при уровне значимости p < 0,05.

Проведенное исследование выявило наличие многососудистого поражения коронарных артерий у 69,7% больных, стеноза ствола левой коронарной артерии > 50% - у 15,1%. У 88,9% больных операция КШ выполнялась в условиях искусственного кровообращения, у остальных - на работающем сердце. Частота случаев транзиторной почечной дисфункции после КШ составила 18,2%. Факторами, ассоциированными со снижением СгО < 60 мл/мин после КШ, явились: возраст более - медиана 62,5 (59-68) лет, увеличение продолжительности искусственного кровообращения более - медиана 103 (88-133) мин и окклюзии аорты более - медиана 53 (44-60) мин, тяжелая послеоперационная острая сердечная недостаточность. Кумулятивная частота госпитальных сердечнососудистых осложнений была выше (55,6% против 18,5%, p = 0,001) среди больных с послеоперационной почечной дисфункцией.

Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что после проведения коронарного шунтирования почечная дисфункция (снижение СгО < 60 мл/мин) развивается у 18,2% больных, перенесших операцию. Факторами, ассоциированными с послеоперационной почечной дисфункцией являются возраст, увеличение продолжительности периода искусственного кровообращения, окклюзия аорты и тяжелая острая послеоперационная сердечная недостаточность. Послеоперационная почечная дисфункция ассоциирована с повышенным риском госпитальных сердечнососудистых осложнений.

О.Ю. Куклева1, Е.Н. Яковенко2, М.А. Степанова1, К.К. Дав-тян3, М.Ю. Карганов2, Э.Н. Эскина1. Изменения субфракционного состава слезной жидкости в результате проведения операции по методу ReLexSmile. 'ООО Клиника лазерной медицины «Сфера» профессора Эскиной Э.Н., Москва; 2ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 3ФГАУ Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» им. С.Н. Федорова, Москва

Цель - изучить субфракционный состав слезной жидкости методом лазерной корреляционной спектроскопии до и после проведения фемтосекундной лазерной коррекции зрения с формированием интрастромальной лентикулы по методу ReLexSmile для оценки травматического действия на роговицу.

Нами проведено исследование, в котором участвовали 15 пациентов (30 глаз), из них 7 женщин, 8 мужчин. Возраст обследуемых составил от 19 до 44 лет (средний возраст 31,4 года). Операцию ReLexSmile проводили на фемтосекундном лазере VisuMax, CarlZeissMeditec.y всех участников исследования собирали смывы с глаз 0,9% раствором хлорида натрия объемом 0,4-0,5 мл. Полученный материал помещали в пробирки типа «Эппендорф». Образцы были заморожены при температуре -20oC на срок не более 5 суток. В этот срок проводили их анализ методом лазерной корреляционной спектроскопии. Образец после разморозки в объеме 0,2 мл заливали в кювету ЛК-спектрометра «ЛКС-03-ИНТОКС» (рег. удостоверение № ФСР 2010/08619 от 11.08.2010 г.). Измерение проводили в частотном диапазоне 16 кГц в количестве 2000 накоплений.

В ходе исследования слезной жидкости на следующий день после операции наблюдали некоторое смещение спектра в сторону среднемолекулярных фракций (100-600 нм). Однако достоверно значимые различия зафиксированы только в двух точках, которые соответствуют размеру частиц порядка 6 и 122 нм. Появление высокомолекулярных фракций (600-2000 нм), что соответствует большим гликолипопротеиновым и иммунным комплексам, не обнаружено. Через 1 неделю после проведения хирургического вмешательства общая картина спектра практически полностью возвращается к начальному уровню. Отмечается некоторое увеличение низкомолекулярных фракций, по сравнению с 1 днем. В срок 1 месяц отмечается тенденция к возвращению состояния слезной жидкости к раннему послеоперационному периоду, но достоверно значимых различий между результатами до операции и через 1 месяц не обнаружено.

Данные проведенных нами исследований, полученные c помощью лазерной корреляционной спектроскопии, говорят о том, что операция по методу ReLexSmile c формированием интрастромальной лентикулы не оказывает выраженного травматического действия на роговицу и является методом выбора коррекции для пациентов с любой степенью миопии при отсутствии противопоказаний и возможностью провести операцию технически.

Р.М. Курабекова1, О.М. Цирульникова1,2, Н.П. Можейко1, Г.А. Олефиренко1, И.Е. Цирульникова1, Л.В. Макарова1, О.П.

Шевченко12, С.В. Готье12. Трансформирующий фактор роста бета 1 - индикатор степени фиброза печени у детей с заболеваниями гепатобилиарной системы. 'ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И. Шумакова» Минздрава РФ, Москва; 2Кафедра трансплантологии и искусственных органов, ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава РФ, Москва

Проведение диагностической биопсии печени при заболеваниях гепатобилиарной системы является травматической процедурой для детей раннего возраста, что требует развития неинвазивных методов диагностики фиброза печени. Tрансформирующий фактор роста бета 1 (TGF-P1) играет ключевую роль в развитии фиброза печени: известно, что в процессе фиброгенеза его синтез в ткани печени увеличивается. Однако остается неясным отражает ли уровень TGF-P1 в крови тяжесть фиброза у детей с печеночной недостаточностью. Цель: выявить связь между уровнем TGF-P1 в крови и степенью фиброза печени при заболеваниях гепатобилиар-ной системы у детей раннего возраста. В исследование включено 73 ребенка в возрасте от 3 до 73 месяцев (медиана - 8), из них 33 мальчика, с терминальной стадией печеночной недостаточности, развившейся в исходе врожденных заболеваний гепатобилиарной системы. Также в исследование были включены дети без патологии печени (n = 12) в возрасте 10±6 мес, из них 7 мальчиков. Концентрацию TGF-P1 определяли в плазме крови методом ИФА. Морфологическое исследование включало макроскопическое описание и гистологическое исследование образцов печени детей, удаленной перед трансплантацией. Стадию фиброза печени определяли по критериям шкалы METAVIR: F0 - фиброз отсутствует, F1 -звездчатое расширение портальных трактов, F2 - единичные портопортальные септы, F3 - многочисленные портоцен-тральные септы, F4 - цирроз. У детей с печеночной недостаточностью средний уровень TGF-P1 в плазме крови был ниже, чем у здоровых детей того же возраста (6,3±5,0 и 22,2±4,9 нг/ мл соответственно, p = 0,001). Гистопатологический анализ удаленной печени показал, что у 6 из 73 пациентов (8%) был слабо выраженный фиброз (F1); у 12 (16%) - средняя степень фиброза (F2); у 10 (14%) - выраженный фиброз (F3) и у 45 детей (62%) - цирроз (F4). Уровень TGF-P1 у пациентов с F1 был ниже такового при F2 и F3, но не отличался от такового при F4 (3,1±1,7, 10,9±6,5, 8,7±5,2 и 5,2±4,7 нг/мл, p = 0,02, p = 0,04, p = 0,33 соответственно). Полученный результат позволяет полагать, что уровень TGF-P1 в крови отражает активность процесса развития фиброза в печени: при F1 и F4 процесс развития фиброза выражен слабо, уровень цитокина в крови низкий, в то время как при F2 и F3 процесс фиброза активно развивается и уровень биомаркера значительно выше. Выявленная связь содержания в крови TGF-P с тяжестью фиброза у детей с печеночной недостаточностью может быть использована для развития методов неинвазивной диагностики фиброза у детей.

Р.М. Курабекова', О.М. Цирульникова1 2, Г.А. Олефирен-ко', И.Е. Цирульникова', О.Е. Гичкун', О.П. Шевченко1, 2, С.В. Готье1, 2. Трансформирующий фактор роста бета 1 - возможный предиктор индивидуальной потребности в иммуносупрессии при трансплантации печени детям. 'ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. акад. В.И. Шумакова» Минздрава РФ, Москва; 2Кафедра трансплантологии и искусственных органов, ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава РФ, Москва

В настоящее время единственным эффективным способом лечения терминальной стадии печеночной недостаточности является трансплантация печени. Для нормального функционирования трансплантата необходимо применение

иммуносупрессивных препаратов, дозы которых подбираются эмпирически. В экспериментальных моделях иммунной толерантности показано, что после трансплантации печени (ТП) увеличивается концентрация трансформирующего фактора роста бета 1 (TGF-pl), плейотропного цитокина с им-муносупрессивным эффектом, что позволяет рассматривать его в качестве прогностического биомаркера иммунной толерантности трансплантата. Цель: определить связь уровня TGF-pl в крови с дозой и концентрацией такролимуса в крови детей раннего возраста после трансплантации печени. Обследовано 135 детей в возрасте от 3 до 73 месяцев (медиана - 8), из них 61 мальчик, с терминальной стадией печеночной недостаточности, развившейся в исходе врожденных заболеваний гепатобилиарной системы. Всем пациентам была проведена трансплантация левого латерального сектора печени от живого родственного донора. После трансплантации пациенты получали 2-х или 3-х компонентную иммуносупрес-сивную терапию, включающую такролимус. Содержание TGF-pl в плазме крови определяли методом ИФА. У детей с терминальной стадией печеночной недостаточности медиана уровня TGF-pl в плазме крови составляла 4,6 (0,9-23,4) нг/ мл. После трансплантации печени уровень TGF-pl в крови реципиентов составлял через месяц - 7,0 (0,9-42,7) нг/мл, спустя год - 7,5 (0,9-37,4) нг/мл и был достоверно выше, чем до трансплантации (р = 0,002 и р = 0,01 соответственно). Не обнаружено корреляции между уровнями TGF-pl и концентрацией такролимуса в крови ни через месяц, ни через год после ТП. В то же время через месяц после ТП уровень TGF-pl коррелировал с индивидуально подобранной суточной дозой такролимуса через год после ТП (г = -0,23, р < 0,05): у реципиентов, получавших 0,4-2,5 мг такролимуса в сутки, уровень TGF-pl был достоверно выше, чем у реципиентов, получавших 3,0-6,0 мг такролимуса в сутки. У детей-реципиентов печени доза такролимуса, назначаемая через год после ТП, коррелирует с содержанием TGF-pl в крови через месяц после ТП. Уровень цитокина в крови после ТП может служить объективным критерием при подборе индивидуальной дозы иммуносупрессанта.

А.С. Куракина1, Н.А. Щелчкова1 2, М.В. Ведунова2,', И.В. Мухина1 2, В.Н. Григорьева1. Определение концентрации глиального нейротрофического фактора в плазме крови пациентов с внемозговыми интракраниальными опухолями в динамике лечения. 'ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Минздрава РФ, Нижний Новгород; 2ФГАОУ ВПО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород

Современные методы диагностики позволяют использовать сигнальные молекулы, синтезирующиеся в центральной нервной системе (ЦНС) в качестве биологических маркеров для оптимизации прижизненной диагностики и терапии заболеваний. Глиальный нейротрофический фактор (GDNF) является эндогенным репрезентативным белком для ЦНС. Он рассматривается как мощный терапевтический агент, способствующий пролиферации и дифференцировке различных популяций клеток в головном мозге. Многие работы указывают на нейропротекторное действие GDNF при болезни Паркин-сона, ишемии головного мозга. Однако имеются данные о его роли в прогрессии таких новообразований головного мозга, как глиомы различной степени дифференцировки, но участие GDNF в развитии внемозговых интракраниальных опухолей остается не изученным. В связи с этим целью исследования являлось изучить содержание GDNF в плазме крови пациентов с аденомами гипофиза и менингиомами внутричерепной локализации до и после оперативного лечения для прояснения его роли в развитии указанных опухолей. В исследование было включено 35 женщин. В 1-ю группу вошли 22 пациентки с

менингиомами головного мозга в возрасте от 41 до 63 лет. Вторую группу составили 13 пациенток с аденомами гипофиза (у 12 из них диагностирована пролактинома, у 1 - соматотропи-нома) в возрасте от 30 до 63 лет. Тип опухоли головного мозга (ОГМ) до операции устанавливался на основании результатов магнитно-резонансной томографии головного мозга с контрастным усилением (GE Signa Infinity 1,5Т, США), данных лабораторных анализов, а в последующем, после оперативного лечения больных, подтверждался гистологически. До и после оперативного лечения всем больным проводилось общеклиническое обследование, а также определение содержания в плазме крови уровней фактора GDNF (R&D Systems, США) методом иммуноферментного анализа (ИФА). По результатам проведенного исследования средний уровень GDNF в плазме крови больных первой группы (14,97 [8,45; 26,04] пг/мл) до оперативного лечения был статистически значимо выше, чем во второй группе пациентов (8,97 [3,14; 12,27] пг/мл, p = 0,03). После оперативного лечения средний уровень GDNF в группе пациентов с менингиомами интракраниальной локализации (11,22 [5,55; 25,67] пг/мл) оказался также статистически значимо выше, чем в группе пациентов с диагностированной аденомой гипофиза (7 [2,05; 8,6] пг/мл, р = 0,05). Имелась корреляция уровней GDNF, измеренных до и после оперативного лечения больных (r = 0,85, p = 0,01). В послеоперационном периоде концентрация фактора GDNF в плазме крови статистически значимо снизилась только в первой группе пациенток (р = 0,04). Таким образом, уровень глиального нейротрофиче-ского фактора в плазме крови больных с менингиомами внутричерепной локализации выше, чем у больных с аденомами гипофиза. После оперативного удаления менингиом содержание этого фактора в крови снижается, однако остается выше, чем у больных, перенесших хирургическое лечение аденом гипофиза. Определение концентрации глиального нейротро-фического фактора в крови пациентов может иметь значение для изучения патогенеза менингиом интракраниальной локализации и оценки эффективности хирургического удаления опухоли.

О.В. Курбатова, Р.Ш. Закиров, А.Н. Сурков, А.В. Никитин, И.В. Самохина, Е.В. Фрейдлин, А.С. Потапов, С.В. Петричук. Уровень сывороточных цитокинов при различных стадиях фиброза печени у детей с печеночными формами гликогеновой болезни. ФГАУ НЦЗД Минздрава РФ, Москва

Содержание сывороточных цитокинов отражает стадии фиброза печени и степень гистологической активности воспалительного процесса при хронических болезнях печени различной этиологии. К метаболическим заболеваниям, протекающим с преимущественным поражением печени, относятся I, III и VI типы гликогеновой болезни(ГБ).Показана информативность определения фактора некроза опухоли альфа (TNF-a), интерлейкинов IL-6, IL-8 и др., которые активируют звездчатые клетки, продуцирующие компоненты соединительной ткани и способствующие апоптозу гепатоцитов, при диагностике степени фиброза при ожирении, сахарном диабете и хроническом гепатите С у взрослых, подобные данные у детей с ГБ отсутствуют.

Цель работы: оценить информативность определения цитокинового профиля у детей с ГБ в зависимости от типа болезни и стадии фиброза печени.

На базе ФГАУ НЦЗД Минздрава РФ в динамике было обследовано 56 детей с ГБ в возрасте от 1 года до 17 лет, у которых исследовано 94 образца плазмы крови. Оценка стадии фиброза проводилась с помощью метода транзиентной эластографии печени, выполненной на аппарате FibroScan F502(EchoSence, Франция). Концентрацию 13 циркулирующих цитокинов (IL-1ß, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12р70, IL-17-a, TNF-a, TNF-ß, TGF-ß и IFN-y) определяли

мультиплексным количественным методом с использованием проточной цитофлуориметрии (Bender MedSystems GmbH, Германия). Статистическая обработка результатов выполнена с помощью пакета Statistica 6.0. (критерий Манна-Уитни, р < 0,05).

При обследовании 56 детей с ГБ (119 госпитализаций) фиброз печени стадии F1 выявлялся у 23% обследованных пациентов, F2 - в 38%, F3 - в 11% и F4 - в 4% случаев. Наиболее часто выраженные фибротические изменения наблюдались при III типе ГБ (F4 - у 35%, F3 - 12%, F2 - 8%, F1

- 27% пациентов с этим типом), и I типе (F4 - у 4%, F3 - 11%, F2 - 38%, F1 - 23% пациентов с этим типом), тогда как при VI типе ГБ фибротические изменения отсутствовали (F0 -89%) или были минимальны (F1 - 11%). У всех пациентов с ГБ выявлено увеличение уровней циркулирующих цитоки-нов. Наиболее часто повышались: IL-2 в 82% случаев, IL-8

- 80%, IL-5 - 75%, IL-1ß - 61%, IL-4 - 62%, ¡Ь-12р70 - 55%, IL-6 - 53%, IL-17-a - 48%, IL-10 - 47%, IFN-y - 46%, TNF-a

- 36%, TNF-ß - 10%. Степень увеличения содержания цито-кинов зависела от типа заболевания: при ГБ III типа и ГБ VI типа концентрации IL-2, IL-5 и IL-1ß были достоверно выше, чем при ГБ! типа (р < 0,05). Концентрация IL-2: ГБ I - 43,9 [0; 106] пкг/мл, ГБ III - 96,4 [51,6; 213] пкг/мл, ГБ VI - 74,3 [27; 123] пкг/мл. Концентрация IL-5: ГБ I - 250 [0; 607] пкг/ мл, ГБ III - 468 [121; 898] пкг/мл и ГБ VI - 454 [44; 974] пкг/ мл. Концентрация IL-1ß: при ГБ I - 0 [0; 50] пкг/мл, ГБ III -34,6 [11; 69] пкг/мл, ГБ VI - 34,5 [0; 75] пкг/мл. Были выявлены корреляционные зависимости между степенью фиброза печени и уровнями цитокинов плазмы крови, отличающиеся при различных типах ГБ. При ГБ I типа степень фиброза в большей степени зависит от возраста пациентов (r = 0,91), вероятно, это связано с участием цитокинов в патогенезе других сопутствующих заболеваний, таких как остеопороз, хронический панкреатит, подагрический артрит и др. Для ГБ III типа степень фиброза печени увеличивается не только с возрастом, но и при повышении концентраций TNF-a, IFN-y, ГЬ-12р70, и уменьшается при повышении концентраций IL-2, IL-4, IL-6 (r = 0,96). Наличие фибротических изменений в печени у детей с VI типом ГБ определялось уравнением регрессии, в которое вошли только цитокины: повышение концентрации ГЬ-12р70, IL-8, IL-5 увеличивает вероятность фиброза, увеличение концентрации IL-2, IL-4, IL-6 снижает ее (r = 0,95). Анализ уровня цитокинов в зависимости от стадии фиброза показал, что концентрации цитокинов: TGF-ß, TNF-a, IL-17-a, ¡Ь-12р70, IL-10, IL-1ß, IL-6, IL-4, IL-5 - выше при начальных стадиях фиброза (F1-F3) и снижаются к стадии F4, что возможно связано с замещением соединительной тканью клеток паренхимы печени.

При ГБ наблюдается повышение уровней циркулирующих цитокинов, отличающихся у пациентов с разными типами ГБ. По результатам исследования к наиболее информативным цитокинам для оценки степени повреждения печени можно отнести TNF-a, TGF-ß, IFN-y, IL-8, IL-5 и др. Концентрации циркулирующих цитокинов можно использовать как дополнительный диагностический критерий оценки стадии фиброза печени у детей с ГБ, что особенно актуально при интерпретации нечетких/сомнительных результатов аппарата FibroScan, связанных с морфологическими особенностями гликогеновой болезни.

С.В. Куревлев1, А.А. Дмитриев2, И.В. Пронина1, В.И. Логинов1, Г.С. Краснов2, А.Д. Бениаминов2, Г.А. Пузанов2, В.Н. Сенченко2, Э.А. Брага1, В.И. Кашуба3. Гиперметилирован-ные гены хромосомы 3 как новые маркеры рака молочной железы. 'ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 2ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» РАН, Москва; 3Центр микробиологии и биологии опухолей, Каролинский институт, Стокгольм, Швеция

Генетические и эпигенетические аберрации могут вызывать активацию онкогенов и инактивацию генов-супрессоров опухолевого роста и стимулировать развитие злокачественных опухолей.

Цель данной работы - идентифицировать гены хромосомы 3, подверженные гиперметилированию и/или делециям при раке молочной железы (РМЖ), которые можно использовать для диагностики этого заболевания.

Изменения статуса метилирования CpG-островков и числа копий ДНК исследованы с использованием сравнительной гибридизации ДНК на оригинальных ^А-микрочипах и с применением программного обеспечения NIMAN в 47 парных (опухоль/норма) образцах РМЖ. Микрочипы содержали 180 №А-клонов, связанных со 188 генами хромосомы 3, причем в основном, с их промоторными областями. Изменение уровня мРНК генов определяли методом количественной ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с применением оригинального программного обеспечения. Анализ метилирования проводили с помощью бисульфитного секвенирования.

В общей сложности, выявлены 35 №1[-сайтов с высокой частотой (15-38% образцов РМЖ) гиперметилирования / делеций (М/Д). Среди генов, ассоциированных с этими сайтами, есть как известные, так и потенциальные онкосупрес-соры (ALDH1L1, VHL, CTDSPL и т. д.), а также гены, для которых роль в патогенезе РМЖ показана впервые FOXP1, РШСКЬЕ2 и т. д.). Результаты, полученные на №>1[-микрочипах, проверены с использованием бисульфитного сек-венирования выборочно, а именно, для генов VHL, NKIRAS1, ITGA9, LRRC3B и СТП8РЬ. Для ряда генов с высокой частотой М/Д (ALDH1L1, ЕРНВ1, 1ТС.А9 и КОРМ) определено изменение уровня экспрессии методом ПЦР-РВ. Частое (в 57-90% образцов РМЖ) и значительное (> 2 раза) понижение экспрессии показано для всех генов с высокой частотой М/Д. Эти гены являются новыми кандидатами на роль онкосупрессоров при РМЖ. Функциональное гиперметилирование, ассоциированное с потерей экспрессии, показано для генов ALDH1L1, ЕРНВ1, ITGA9, ROPN1, что согласуется с предположением об их онкосупрессорных функциях. Наиболее значительная потеря экспрессии выявлена для гена АЬБИ1Ь1 - в среднем 50-кратное уменьшение уровня мРНК в 90% образцов.

Новые гены с частым снижением уровня мРНК и частым гиперметилированием можно рассматривать как потенциальные маркеры для диагностики и как мишени для таргетной терапии больных РМЖ. В дальнейшем наиболее интересным представляется детальное изучение способов «замалчивания» гена ALDH1L1 (снижающего уровень экспрессии вдвое в 90% образцов РМЖ) посредством гиперметилирования и/ или воздействия микроРНК.

Исследования метилирования и экспрессии новых он-косупрессорных генов, выявленных при помощи N011-микрочипов, выполнены при финансовой поддержке Российского Научного Фонда (грант № 14-15-00654). Исполнители этого гранта благодарят ИМБ РАН (Москва) и Каролинский институт (Стокгольм) за плодотворное сотрудничество.

Е.Н. Лебедева. Влияние экзогенных промышленных факторов на состояние локальной эндокринной регуляции жировой ткани у женщин, занятых в нефтехимическом производстве. ГБОУ ВПО Оренбургский государственный медицинский университет, Оренбург

В обследование были включены женщины, работницы нефтехимического производства (стаж работы не менее 10 лет). У всех обследованных лиц определяли содержание общего холестерина (О-ХС), холестерина липопротеинов высокой плотности (ХС ЛПВП) и холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛПНП), триацилглицеринов (ТАГ) и С-реактивного белка (С-РБ) в сыворотке крови определяли с помощью автоматического биохимического анализатора

COBAS Integra-400 plus (Швейцария-Германия) Содержание в сыворотке крови лептина и ФНО-а определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа.

У лиц, длительно работающих на предприятиях нефтехимии, отмечено наличие традиционных факторов атерогенного риска - повышение ОХС, ХС ЛПНП, ТАГ и ИА. На фоне избыточной массы тела основные показатели липидного обмена у обследованных лиц достоверно превышали нормальные значения. Особенно высокими были значения ТАГ, что коррелировало с ИМТ и указывало на нарушения метаболизма липидов. Значения С-реактивного белка и ФНО-а были повышенными, что свидетельствует о процессе воспаления. Леп-тин был выше нормы в 2,5 раза. Значения адипонектина были чрезвычайно низкими: наблюдалось 10-кратное снижение по отношению к норме. Соотношение лептин/адипонектин рассматривается многими авторами как биомаркер инсулиноре-зистентности, а одной из основных функций адипонектина и инсулина считают цитопротекторное действие. По всей вероятности длительный контакт с токсическими веществами в процессе производственной деятельности вызывает окислительный стресс и оказывает обесогенный эффект (приводит к увеличению общей массы жировой ткани). А по мере ее возрастания развивается асептическое хроническое воспаление, результатом которого является локальное и системное увеличение продукции ФНО-а, под влиянием которого увеличивается экспрессия лептина - основного гормона жировой ткани. Наряду с этим полученные в исследовании данные позволяют рекомендовать использование в качестве информативных биомаркеров токсического воздействия факторов производственной среды определение про- и противовоспалительных ади-покинов - лептина, адипонектина, ФНО -а и С-реактивного белка. Поскольку занятость женщин на вредном производстве является неизбежным явлением в обозримом будущем, серьезной проблемой становится своевременное выявление патологии и проведение первичной и вторичной профилактики.

В.И. Логинов2, И.В. Пронина1 2, Е.В. Береснева3, В.В. Хоконова1 2, А.М. Бурденный, А.В. Карпухин2, Т.П. Казуб-ская4, Э.А. Брага1,2. Гиперметилирование генов микроРНК как маркеры для диагностики и прогноза рака почки. 'ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 2ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва; 3ФГУП ГосНИИгенетика, Москва; 4ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина», Москва

Важную роль в поддержании уровня экспрессии генов микроРНК играют эпигенетические механизмы, нарушение которых может приводить к изменению функций генов микроРНК и их мишеней и развитию злокачественных опухолей. Почечно-клеточный рак и особенно светлоклеточный рак почки (скПКР) отличает агрессивное протекание с высокой частотой метастазирования. Следует отметить, что встречаемость рака почки ежегодно возрастает.

Цель данной работы - провести анализ изменений статуса метилирования и экспрессии для группы генов микроРНК, содержащих CpG-островки, на представительной выборке скПКР и оценить клиническую значимость этих параметров для диагностики и прогноза скПКР.

Использовано 50 парных образцов (опухоль/норма) скПКР от пациентов, не подвергавшихся ранее лучевой или химиотерапии. Отбирали образцы с содержанием опухолевых клеток не менее 70%. Профиль метилирования CpG-островков генов микроРНК определяли с помощью метилспецифичной ПЦР. Для анализа уровня экспрессии генов микроРНК применяли ПЦР в реальном времени с использованием сертифицированных наборов фирмы Applied Biosystems и в качестве контролей - RNU6B и RNU48. Статистический анализ проводили с применением непараметрической ранговой корреляции Спирмена.

Показано, что частота гиперметилирования генов MIR-124a-1/2/3, -129-2, -34b/c, -193a, -9-1/3 при скПКР достоверно выше, чем в прилежащей гистологически нормальной ткани (p < 0,05 по Фишеру). Причем в образцах гистологически нормальной ткани пациентов метилирование наблюдали с частотой 5-9%. Метилирование перечисленных микроРНК не обнаружено в образцах ДНК из тканей почки постмортальных лиц без онкопатологии в анамнезе. Определены статистически значимые корреляции между гиперметилированием и снижением уровня экспрессии для генов 5 микроРНК: miR-124a-5p - MIR-124a-3 (Rs = 0,74, p < 0,05); miR-129-5p - MIR-129-2 (Rs = 0,90, p < 0,05); miR-34b-3p -MIR-34b (Rs = 0,82, p < 0,05); miR-34c-3p - MIR-34c (Rs = 0,70, p < 0,05); miR-9-5p - MIR-9-1/-3 (Rs = 0,61, p < 0,05). Кроме того, выявлены статистически значимые корреляции частоты гиперметилирования генов MIR-124a-2 и MIR-129-2 с размером и стадией развития опухоли (p < 0,001 по Фишеру), MIR-124a-3 - со степенью дедифференцировки опухоли (p = 0,0001), и MIR-129-2 - с наличием метастазов в прилежащих лимфатических узлах (p = 0,01).

Гены микроРНК, подверженные гиперметилированию функционально (с потерей или снижением экспрессии) и с высокой частотой, представляют новые маркеры для диагностики скПКР. Гены микроРНК, гиперметилирование которых связано с прогрессией и метастазированием скПКР, можно применять как маркеры прогноза скПКР.

Н.В. Любимова, Т.К. Чурикова, Ю.С. Тимофеев, М.Г. Томс. Хромогранин А в диагностике, мониторинге и прогнозе нейроэндокринных опухолей. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Современная лабораторная диагностика нейроэндокрин-ных опухолей (НЭО) основывается на исследовании продуцируемых опухолевыми клетками соединений, которые могут определяться в различных видах биологического материала. В качестве дополнительных к морфологическим и им-муногистохимическим методам диагностики НЭО используют биохимические маркеры, определяемые в биологических жидкостях. В настоящее время наиболее востребованным является универсальный маркер хромогранин А (ХгА).

Цель настоящего исследования - оценка значимости ХгА в диагностике, мониторинге и прогнозе НЭО при его определении в плазме крови больных НЭО и практически здоровых мужчин и женщин.

Обследовали 214 больных НЭО в возрасте от 18 до 84 лет, из них 79 мужчин и 136 женщин. Наибольшую группу составили НЭО поджелудочной железы (n = 61) и НЭО легких (n = 40), в группы НЭО желудка вошли 28 пациентов, тонкой и толстой кишки - 26 и 23 пациента соответственно. У 36 пациентов диагностированы метастазы в печени без выявленного первичного очага. Карциноидный синдром выявлен у 110 пациентов, метастазы в печени у 140 больных. В группу контроля были включены 66 практически здоровых мужчин и женщин в возрасте от 18 до 80 лет. Определение ХгА в плазме крови проводили стандартизованным методом ИФА с использованием тест-системы «Chromogranin A ELISA kit» (Dako).

Уровень секреции ХгА у больных НЭО достоверно (р < 0,001) превышал соответствующий показатель у практически здоровых мужчин и женщин. Для больных НЭО характерна выраженная вариабельность ХгА, максимальные концентрации были зафиксированы у больных НЭО желудка (102 000 Ед/л) и легкого (29 603 Ед/л). В контрольной группе медиана ХгА составила 15,3 Ед/л при вариабельности от 2,8 до 47 Ед/л. При сравнительном анализе по отношению к контролю достоверное повышение медианы ХгА было установлено у больных со всеми типами НЭО: желудка (58,4 Ед/л),

поджелудочной железы (114,4 Ед/л), тонкой кишки (169,0 Ед/л), толстой кишки (122,5 Ед/л), легких (97,8 Ед/л). Оценка диагностической значимости ХгА с учетом порогового уровня 33 Ед/л (при специфичности 98,5%) показала высокую диагностическую чувствительность в общей группе НЭО - 80,3%, которая достигала максимума при НЭО поджелудочной железы (85,3%) и желудка (85,7%). При НЭО с метастазами в печени и карциноидным синдромом чувствительность маркера была максимально высокой (91,4% и 87,3% соответственно). В то же время достаточно высокая частота гиперсекреции ХгА у пациентов без метастазов в печени (64,6%) и клинических признаков карциноидного синдрома (73,7%) свидетельствует о возможности его использования в диагностических целях независимо от распространенности и активности опухолевого процесса. При анализе концентрации ХгА на фоне лечения аналогами соматостатина пролонгированного действия у пациентов со стабилизацией процесса выявлено достоверное снижение уровней ХгА по сравнению с базальными уровнями маркера (p = 0,015). В группе со стабилизацией заболевания на фоне терапии клинически значимое снижение уровней ХгА (более 50%) наблюдали в 66,7% случаев, в то время как для прогрессирования опухоли было характерно сохранение высоких уровней биомаркера. Прослежена связь выживаемости без прогрессирования с уровнями ХгА до начала лечения у 30 больных НЭО на фоне терапии препаратом Афинитор. Уровни ХгА более 100 Ед/л были достоверно ассоциированы с менее благоприятным прогнозом 1-летней выживаемости без прогрессирования, которая составила 13,7% при ХгА > 100 Ед/л и 65,9% - при низких < 100 Ед/л значениях ХгА. Полученные данные свидетельствуют о возможности использования ХгА в целях повышения точности диагностики, оценки распространенности, биологической активности, эффективности лечения и прогноза НЭО.

О.В. Лянг12. Биомаркеры сердечной недостаточности у пациентов с ХСН и сохраненной систолической функцией левого желудочка. 'ФГАОУ ВПО Российский университет дружбы народов, Москва; 2АНО ДПО «Институт лабораторной медицины», Москва

Исходом наиболее распространенных сердечнососудистых заболеваний является хроническая сердечная недостаточность (ХСН). В последние десятилетия наблюдается рост числа пациентов, имеющих признаки и симптомы ХСН, и отсутствие или минимальные нарушения насосной функции сердца (ХСН с сохраненной систолической функцией (ХСН с ССФ)). При этом риск смертности у таких пациентов повышается в 8-10 раз. Распространенность ХСН в России составляет 5,5% (8,1 млн человек), из них больных с ХСН и ССФ - 56,8%. Раннее выявление и прогноз ХСН приведет к снижению количества неблагоприятных исходов и сокращению летальности. Для диагностики, стратификации риска и контроля терапии при ХСН могут использоваться различные биомаркеры. Наиболее изученными из них являются натрийуретические пептиды (НУП), цитокины, микро-РНК, галектин-3, sST-2.

Из всех НУП наиболее значимым для диагностических и прогностических целей при ХСН с ССФ представляется использование НУП В-типа, в виде его предшественника NT-pro-BNP или собственно BNP. Более предпочтительным является использование NT-pro-BNP в связи с более длинным периодом полувыведения. Определение НУП рекомендуется для исключения или подтверждения диагноза ХСН у больных с неясными признаками и симптомами. Рутинное определение НУП с единственной целью стратификации риска у больных с ХСН не требуется. Также не обязательно рутинное определение концентрации НУП в крови для принятия конкретных терапевтических решений при ХСН.

ХСН нередко сопровождается повышением уровня ци-токинов, причины которого разнообразны - оксидативный стресс, аутоиммунные механизмы, повышение механической нагрузки на эндотелиоциты, ишемия миокарда, повышение ХС ЛПНП. Участие провоспалительных цитокинов в процессах снижения эластичности и нарушения релаксации миокарда левого желудочка может иметь огромное значение в разработке новых лекарственных агентов, призванных задержать прогрессирование ХСН с ССФ. Нейтрализация про-воспалительных цитокинов и блокада внутриклеточных сигнальных путей, в которых они принимают участие, являются одними из наиболее перспективных терапевтических стратегий в ближайшем будущем.

Растворимый толл-подобный рецептор-2 ^Т2) - это трансмембранный рецептор, принадлежащий к семейству интерлейкин-1-рецепторов. Показано, что sSТ2 стимулирует сердечную гипертрофию, фиброз и дисфункцию желудочков. sSТ2 является прогностическим фактором риска смертности в течение одного года у больных с ХСН (cut-off > 30 нг/ мл). Галектин-3 представляет собой белок, который в основном связывается с гликозилированными белками матрикса, включая ламинин, фибронектин и тенасцин. По-видимому, галектин-3 принимает участие в процессе формирования фиброза и в воспалительных процессах. Галектин-3 является статистически значимым предиктором смертности у больных с ХСН. Прогностическая значимость sSТ2 и галектина-3 выраженно повышается при комбинации с уровнем НУП.

Микро-РНК представляют собой одноцепочечные молекулы длиной 21-25 нуклеотидов, которые могут подавлять трансляцию мРНК за счет деаденилирования, ингибирова-ние инициации или элонгации трансляции. При ХСН наиболее изучены 3 микро-РНК. Так, показано, что микроРНК-21 обладает профибротическим, антиапоптотическим, провос-палительным и антиангиогенным эффектом, микроРНК-34а - профибротическим эффектом, микроРНК-423-5р является биомаркером ХСН.

Таким образом, существует немало биомаркеров для диагностики и мониторинга ХСН с ССФ, но наибольшая доказательная база имеется только по НУП В-типа. Для остальных биомаркеров необходима дальнейшая исследовательская работа с целью уточнения их клинической значимости.

Р.В. Макаров', Е.А. Спиридонова2, 4, В.Г. Пасько', М.Ю. Карганов3, И.Б. Алчинова3, Г.Р. Рабаев. Эффективность метода лазерной корреляционной спектроскопии в диагностике тяжести течения острого панкреатита. 'ФГБУ «Клиническая больница № 1» Управления делами Президента РФ, Москва; 2ФГБУ «ФНКЦ ДГОИ им. Д. Рогачева» Минздрава РФ, Москва; 3ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 4МГМСУ им. А.И. Евдокимова, Москва

Совершенствование методов лабораторной диагностики тяжести состояния ренимационного контингента больных является актуальной задачей.

Цель: определить эффективность метода лазерной корреляционной спектроскопии в диагностике тяжести состояния больных с острым панкреатитом.

Методом лазерной корреляционной спектроскопии проведено исследование спектрального состава молекул плазмы крови у 30 больных с отечным панкреатитом и 39 больных с деструктивным панкреатитом в остром периоде течения заболевания. Статистическая обработка данных проводилась с использованием точного двустороннего рангового критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Лазерная корреляционная спектроскопия (ЛКС) - метод, позволяющий исследовать нативные биологические жидкости и определять их спектральные характеристики. Суть метода ЛКС заключается в изучении интенсивности спектра флуктуаций, возникающего при квазиупругом рассеянии

света исследуемой жидкостью. Метод ЛКС предполагает использование нативных биопроб.

Метод ЛКС и гистограмма распределения молекул белка по размерам позволяют установить многопараметровый сим-птомокомплекс, который способен охарактеризовать анаболическую и катаболическую стороны метаболических процессов, гуморального иммунопоэза, наличие иммунных комплексов. По выраженности и направленности сдвигов в молекулах белка можно установить этапы патологического процесса: от стадии начальной интоксикации до выраженной иммунной реакции. Для детальной оценки диагностического значения гистограммы ЛКС, ее разделили на 5 дискретных зон в зависимости от гидродинамического радиуса белковых частиц в плазме крови: I-IV зоны включают белковые частицы с гидродинамическим радиусом 0-10, 11-30, 31-70, 71-150 нм; V зону составляют протеины с радиусом 151 нм. I зона представлена преимущественно низкомолекулярными мономерами белками с молекулярной массой, равной или ниже таковой альбумина; ко II зоне относятся глобулярные белки и низкомолекулярные липопротеины; III зону формируют высокомолекулярные протеины, РНК и ДНК, самые малые иммунные комплексы; в составе IV зоны входят конститутивные иммунные комплексы; V зона выявляется в случаях образования высокомолекулярных комплексов при аллергических и аутоиммунных процессах.

В спектральном составе молекул плазмы крови в 1-е сутки у группы больных отечным панкреатитом отмечалось значительное снижение уровня числа частиц в зонах I - Median 0,02 (0,00-4,03), II - Median 4,49 (0,0-11,12), III - Median -20,68 (15,69-31,72). Однако имело место увеличение уровня числа частиц в зонах IV - Median 35,16 (27,04-45,42) и V - Median 27,16 (21,63-38,76). Полученные данные свидетельствуют о преобладании аллергоподобных и аутоим-муноподобных изменений над дистрофически-подобными и некротически-подобными изменениями в плазме крови и объясняется клиническими проявлениями отека при минимальном повреждении ткани поджелудочной железы у этой группы больных.

В спектральном составе молекул плазмы крови в 1-е сутки у группы больных деструктивным панкреатитом по сравнению с группой больных с отечным панкреатитом отмечалось увеличение уровня числа частиц в зонах I (Median

- 8,01 - (2,01-21,46) и Median - 0,02 - (0,00-4,03) соответственно, p < 0,05) и II (Median - 19,86 (14,85-33,31) и Median

- 4,49 (0,0-11,12) соответственно, p < 0,05) с одновременным уменьшением уровня числа частиц в зонах IV (Median - 11,60 (5,05-18,42) и Median - 35,16 (27,04-45,42) соответственно, p < 0,05) и V (Median - 6,45 (2,83-21,34) и Median - 27,16 (21,63-38,76) соответственно, p < 0,05), что говорит о более выраженных дистрофически-подобных и некротически-подобных изменениях у больных группы деструктивным панкреатитом.

Представленные результаты свидетельствуют о возможности клинического использования метода ЛКС в комплексе клинико-лабораторного обследования больных с острым панкреатитом.

Л.Б. Маснавиева, И.В. Кудаева, О.А. Дьякович. Уровни цитокинов у подростков как маркеры хронического воздействия химических загрязнителей воздушной среды. ФГБНУ «Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований», Ангарск

Выбросы некоторых промышленных предприятий содержат формальдегид, бенз(а)пирен, соединения хрома, цинка, никеля, диоксид азота, которые оказывают влияние на иммунную систему. Цель исследования и заключалась в оценке содержания цитокинов у подростков с различной ингаляционной химической нагрузкой.

У подростков I-II групп здоровья, проживающих на тер-

риториях с различным уровнем загрязнения атмосферного воздуха, рассчитана ингаляционная химическая нагрузка и определено содержание интерлейкинов-2 и-10 (IL-2, I1-10), альфа-, гамма-интерферонов (a-INF, y-INF) в сыворотке крови. Статистическая обработка результатов выполнена непараметрическими методами в пакете прикладных программ «Statistica 6.0». В соответствии с индексом опасности (HI) нарушений в иммунной системе были выделены три группы: I - 39 человек с 2 < HI, II - 74 человека с 2 < HI < 3, III - 131 школьник с HI > 3. У подростков II группы уровень IL-2 и INF-y был ниже (0,01 (0,01-1,23) пг/мл, p < 0,001 и 0,01 (0,010,68) пг/мл, р = 0,009 соответственно), чем у их сверстников из группы III (0,21 (0,01-3,07) пг/мл и 0,01 (0,01-2,95) пг/мл соответственно), содержание IL-10 - выше (1,59 (0,01-2,70) пг/мл), чем у подростков I и III групп (0,51 (0,00-1,35) пг/мл, p < 0,001 и 1,39 (0,01-3,60) пг/мл,p = 0,003 соответственно). В группах II и III установлены ассоциации между уровнем IL-2, химической нагрузкой формальдегидом (r = 0,277, р = 0,026 и г = 0,597, р < 0,001) и диоксидом азота (r = -0,281, р = 0,025 и r = -0,598, р < 0,001).

Таким образом, различия уровней IL-2, IL-10 и INF-y у подростков в зависимости от ингаляционной химической нагрузки и наличие ассоциации между коэффициентами опасности воздействия формальдегида, диоксида азота и содержанием данных цитокинов позволяют рассматривать их как маркеры хронического воздействия химических загрязнителей воздушной среды.

А.Н. Митин, Н.И. Шарова, М.М. Литвина, В.В. Комого-рова, М.Ф. Никонова, А.Д. Донецкова. Изучение гомеоста-тических процессов при восстановлении после индукции лимфопении тимэктомированных мышей. ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, Москва

В нормальных условиях постоянство числа Т-клеток определяется балансом между тимопоэзом и гибелью Т-лимфоцитов на периферии. Снижение функции тимуса или лимфопенические состояния различной природы приводят к нарушению равновесия и сопровождаются включением механизма гомеостатической пролиферации, которая приводит не только к восстановлению численности Т-клеток, но и к изменению их фенотипических и миграционных характеристик. В настоящей работе были изучены некоторые аспекты феномена гомеостатической пролиферации Т-клеток и ее последствий на модели пострадиационной лимфопении тим-эктомированных мышей, исключающей влияние тимуса на эти процессы.

Полученные результаты выявили, что значимое усиление гомеостатической пролиферации наступает только на 10 сутки после воздействия повреждающего фактора, и обусловлено инертностью молекулярных механизмов, отвечающих за включение механизма гомеостатической пролиферации. Гомеоста-тическая пролиферация наивных Т-клеток приводит к конверсии их фенотипа в Т-клетки памяти без контакта с антигеном и соответственно к истощению клонов наивных Т-клеток, восприимчивых к сигналам гомеостатической пролиферации. В условиях отсутствия поступления новых наивных Т-клеток из тимуса потенциал гомеостатической пролиферации резко снижается, что обуславливает неполноценность данного механизма восстановления при индуцированной лимфопении у тимэктомированных животных. Изменение миграционных свойств Т-клеток в условиях пострадиационной лимфопении приводит к преимущественному восстановлению селезенки. В целом, можно констатировать, что в условиях отсутствия ти-мопоэза гомеостатическая пролиферация не может полностью восполнить клеточный дефицит Т-клеток, а также является потенциально опасной вследствие накопления клонов «суррогатных» Т-клеток памяти.

Инъекция рекомбинантного IL-7 приводит к усилению

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

гомеостатической пролиферации, конверсии фенотипа наивных Т-клеток в Т-клетки памяти в отсутствие контакта с антигеном. Механизм этого влияния заключается, вероятно, в защите вновь образованных «суррогатных» Т-клеток памяти от гибели за счет усиления экспрессии антиапоптотическо-го фактора Ьс1-2, т. к. в проведенных опытах данный эффект был получен в отсутствие прямого влияния ГЬ-7 на уровень пролиферации Т-клеток.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ; грант 14-04-00793а.

Л.Л. Михалева', С.Н. Диденко', М.Л. Золотавина2, А.И. Скорикова 2. Исследование наиболее значимых биохимических маркеров углеводного обмена и оценки реналь-ных функций у детей с сахарным диабетом I типа. 'ГБУЗ «Детская краевая клиническая больница» МЗКК, 2ФГБОУ ВО «Кубанский государственный университет», Краснодар

Увеличение заболеваемости сахарным диабетом 1 типа (СД 1) среди детей и подростков за последние несколько десятилетий подтверждено многими эпидемиологическими исследованиями в разных странах. Заболеваемость СД 1 типа среди детского населения в Краснодарском крае превышает, в среднем, этот показатель по Российской Федерации. Это связано с тем, что Краснодарский край имеет специфические социальные, природные и экономические особенности, одной из которых является интенсивное применение агрохи-микатов в сельском хозяйстве.

В связи с этим от лабораторной службы требуется разработка алгоритмов ранней диагностики СД у детей для последующего проведения клиницистами быстрой, адекватной терапии и коррекции развивающихся осложнений.

Исследование проводилось на базе клинико-диагностической лаборатории ГБУЗ «Детская краевая клиническая больница» г. Краснодара. Экспериментальную группу представляли 94 пациента, находившихся на лечении в отделении эндокринологии в возрасте от 3 до 18 лет с основным диагнозом СД 1 типа. Группу контроля составляли практически здоровые пациенты без патологии со стороны эндокринной системы (25 детей, медианный возраст - 6,97±6,29 лет: Х±т). Материалом для исследования служила кровь и моча. Были исследованы изменения концентрации биохимических показателей (глюкозы крови, гликозилированного гемоглобина (Ш^с) в цельной крови), проведено исследование концентрации сывороточного креатинина, определена скорость клубочковой фильтрации (СКФ) по уровню эндогенного креатинина с помощью формулы Шварца, исследована моча на микроальбумин (МАУ). Пациенты экспериментальной группы были разделены на три возрастные группы и с учетом гендерных особенностей: первая группа - дети в возрасте от 3-7 лет, вторая группа -8-12 лет и третья группа - 13-18 лет.

В процессе исследований нами были выделены тенденции в развитии осложнений СД 1 типа у детей Краснодарского края: 1) наиболее частыми осложнениями СД у детей являются нейропатия и нефропатия; 2) в большем количестве случаев СД с патологией неврологической направленности проявляется у мальчиков, чем у девочек; 3) тенденция процентного увеличения детей, больных СД 1 типа возрастает от 3 лет к 18 годам, но значимый скачок происходит в возрасте от 13 до 18 лет, что связано с физиологическими особенностями детского организма.

Результаты проведенной нами работы позволили сделать следующие выводы:

1) динамический контроль заболевания невозможен без систематического определения уровня глюкозы крови и кратного определения уровня Н^с для достижения и поддержания рекомендованных целевых значений гликемии;

2) для изучения характера дисфункции почки и механиз-

мов ее развития особое внимание необходимо проявлять к появлению микроальбуминурии;

3) основным диагностическим маркером состояния гло-мерулярного аппарата почек и развития диабетической не-фропатии является СКФ.

Таким образом, исследование наиболее значимых биохимических маркеров углеводного обмена и оценки ренальных функции у детей с СД 1 типа необходимо для своевременной диагностики на начальных этапах развития заболевания, подбора и при необходимости коррекции современной и адекватной терапии. Эти комплексные меры позволяют отдалить сроки возникновения осложнений, улучшают качество жизни пациентов и существенно продлевают длительность жизни.

Л.Г. Мишура', Г.Г. Родионов2. Лабораторная диагностика активности комплексов дыхательной цепи митохондрий лимфоцитов у лиц пожилого возраста. 'СПбГБУЗ «Госпиталь для ветеранов войн», Санкт-Петербург; 2ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург

В последние годы исследователи все больше уделяют внимания роли митохондриальной дисфункции (МД) при сердечно-сосудистых заболеваниях, признавая за ней одну из ведущих ролей. Развитие медицинской науки в этом направлении требует внедрения новых методов лабораторного обеспечения диагностики и таргетной терапии МД на уровне клинико-диагностических лабораторий многопрофильных стационаров.

Цель - изучить активность комплексов дыхательной цепи митохондрий лимфоцитов крови у лиц пожилого возраста с МД на фоне острого ИМ.

В исследование было включено 72 пациента с острым инфарктом миокарда (госпитализированных на 2-3 сут заболевания) в возрасте от 60 до 85 лет, проходивших лечение в СПбГБУЗ «Госпиталь для ветеранов войн» в 2013-2014 годах, из которых мужчин было 20 (27,7%) и 52 (72,3%) женщин. Группу сравнения составили 101 человек в возрасте от 50 до 75 лет (25 мужчин (25%) и 76 женщин (75%)), не имевших в анамнезе ишемических атак. Кровь брали в вакутей-неры с ЭДТА. В гомогенате лимфоцитов определяли активность комплексов дыхательной цепи (I-IV), каталазы и СОД, концентрацию лактата (анализаторы KONE Specific Basic и Cobas Integra 400 Plus). При статистической обработке рассчитывали средние арифметические и стандартное отклонение. Достоверность различий средних оценивали, используя /-критерий Стьюдента и критерий U Манна-Уитни. Различия считали достоверными при p < 0,05. При расчетах использовали програмный пакет PASW Statistics 18.

У пациентов без ОИМ активность комплексов дыхательной цепи составила: I (комплекс) 6,54±1,20 МЕ/г (белка); I—III 2,17±0,93 МЕ/г; II-III 6,77±1,07 МЕ/г; IV - 5,24±0,92 МЕ/г.

У всех пациентов с ОИМ в наших условиях было выявлено увеличение активности I комплекса дыхательной цепи (р < 0,001) (в среднем на 48%). Однако, активность комплекса I-III достоверно не отличалась (р > 0,05). Активность комплекса II-III у пациентов с ОИМ была снижена в 66% случаев (46 человек) (р < 0,01) (в среднем на 29%). В наибольшей степени (до 79%) активность этого комплекса дыхательной цепи была снижена у некоторых пациентов с умеренной и выраженной митохондриальной дисфункцией (в 32% случаев) (по снижению активности комплекса IV). У 77% пациентов (53 человека) была выявлена умеренная и выраженная ми-тохондриальная дисфункция со снижением активности комплекса IV более чем в 2 раза. У 84% погибших в стационаре пациентов (22 из 26) из числа обследованных активность IV комплекса была снижена более чем в 2 раза. Активность комплекса II-III была снижена у всех погибших пациентов с острым ИМ (р < 0,01). Отношение активности ЛДГ к активно-

сти последнего (комплекс IV) комплекса митохондриальной ЦПЭ было увеличено в 2-4 раза, при этом активность ЛДГ и концентрация лактата значимо не менялись. В лимфоцитах крови пациентов с острым ИМ активность СОД и каталазы снижалась незначительно.

Использование в качестве маркера МД изменения активности ферментных комплексов ЦПЭ митохондрий лимфоцитов позволяет выявить лабораторные признаки митохон-дриальной дисфункции у всех пациентов с острым ИМ в условиях патогенетической терапии. Снижение активности митохондриального фермента цитохром С оксидоредуктазы (IV (последнего) комплекса дыхательной цепи митохондрий) в лимфоцитах периферической крови у пациентов пожилого возраста с острым ИМ является прогностическим маркером неблагоприятного течения ОКС. Наибольший уровень летальности и сердечно-сосудистых осложнений отмечен у больных острым ИМ и сниженными ниже 1,5 МЕ/г белка показателями митохондриальной цитохром С оксидоредук-тазы.

Т.Е. Мокшанова, Н.В. Веснина, М.А. Недоризанюк Показатели тромбоэластограммы при условно нормально протекающей беременности. Бюджетное учреждение Ханты-Мансийского АО «Нижневартовский окружной клинический перинатальный центр», Нижневартовск

Тромбоэластограмма (ТЭГ) - один из методов оценки системы гемостаза. Особенностью этого метода является одномоментная оценка плазменного и клеточного звеньев гемоко-агуляции. Исследование не новое, однако не нашло широкого применения в медицине, в связи с отсутствием достаточной информации о референтных значениях при различных патологических состояниях. Тромбоэластография входит во многие стандарты обследования пациентов, что касаемо акушерства и гинекологии, согласно приказу Минздрава РФ от 12 ноября 2012г. № 572н «Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «акушерство и гинекология»» обследования должны проходить как на амбулаторном, так и на стационарном этапах наблюдения беременной. ТЭГ тем важна, что она имеет прогностический характер, по ее результатам можно предположить вероятность развития кровотечения в родах или наоборот подобрать антикоагулянт при риске развития тромбоза. Однако использование ТЭГ не отменяет использование рутинных методов оценки гемостаза, но лучше их использовать совместно с разработкой алгоритмов оценки показателей в разные сроки беременности. Использование тромбоэластографии в акушерстве осложняется тем, что нет утвержденных или даже ориентировочных норм, протоколов обследования женщин в разные сроки гестации, а особенно при патологическом течении беременности.

Цель исследования - формирование ориентировочных норм показателей тромбоэластограммы при беременности. Обследованы 92 женщины: 17 женщин в I триместр беременности; 34 - II триместр, 31 женщина в III триместре. Контрольную группу составили 10 женщин детородного возраста. Беременные наблюдались на амбулаторном этапе. Препараты, влияющие на гемостаз беременные не получали. Показатели тромбоэластограммы: R (мин), К (мин), угол альфа, МА (мм), G (d/sc), CI, LY30 (%) снимали с помощью тромбоэластографа TEG 5000 (США). Обработку результатов провели с помощью программы Statistica 6.0.

На первом этапе исследования мы сняли ТЭГ условно здоровых женщин для подтверждения норм, указанных в приборе и проверки правильности работы анализатора. Значимых отклонений от значений прибора не выявлено, результаты пациентов входили в доверительный интервал. При обследовании беременных было выявлено, что чем выше срок гестации, тем выраженней становятся признаки гиперкоагуляции. Наиболее значимо происходит укорочение времени

инициации свертывания (R, мин): 14,3±2,5 (норма), 8,6±21,8; 7,9±1,9 - I и III триместр беременности соответственно с достоверной вероятностью р < 0,05. В зависимости от сроков гестации повышается МА (максимальная амплитуда), отражающая клеточный состав гемостаза и на 80% зависящую от способности тромбоцитов к агрегации. МА в III триместре составила 73,3±1,9 (р < 0,05), достоверно отличаясь от значений нормы (61,1±5,2). Выраженные изменения происходят и в показателях плотности сгустка (G), укорачивается время образования плотного сгустка(к), увеличивается индекс коагуляции (CI). Усиления гиперкоагуляции у данных беременных контролировали также рутинными методами определения фибриногена и подсчета тромбоцитов. Уровень тромбоцитов в зависимости от сроков беременности достоверно не отличался, а уровень фибриногена к концу беременности был 4,3±0,86 (р < 0,05), что подтверждает гиперкоагуляцию.

В связи с тем, что выраженных осложнений течения беременности не наблюдалось, можно предположить, что все изменения в показателях гемостаза в сторону гиперкогауляции носят физиологический характер, необходимый для предотвращения чрезмерной кровопотери при родах. Исследования в формирование референтных величин ТЭГ продолжаются, на основании которых будут разработаны рекомендации акушерам-гинекологам.

А.В. Москалев1, А.С. Рудой1, А.И. Карпищенко1. Многогранность эффектов трансформирующего ростового фактора ß и иммунопатология. Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург

TGFß существует в виде 3-х изоформ, которые экспрес-сируются в нормальных тканях млекопитающих и обозначаются как TGFß1, TGFß2 и TGFß3. Изоформы TGFß имеют сходные биологические эффекты, однако наиболее выраженной экспрессией и значимой ролью при воспалении, ремоделировании и фиброзировании сосудов и миокарда обладает TGFß1. Начиная с 2005 года, нами изучалась роль молекулы TGFß в иммунопатогенезе наследственных нарушений соединительной ткани, а также в ряде других иммунопатологических состояний, получены неоднозначные результаты. Поэтому возникла необходимость, основываясь на данных литературы, представить информацию о биологии, структуре, путях активации и взаимосвязи TGFß с иммунопатологией в концентрированном виде.

Цель исследования - провести анализ современных литературных данных о молекулярной физиологии TGFß и его роли в патофизиологии различных видов патологии.

TGFß1 обладает ингибиторной активностью по отношению к T- и B-клеточной пролиферации, к созреванию и активации макрофагов, является элементом регуляции воспалительной реакции. TGFß1 ингибирует активность NK-клеток, цитотоксическую активность CD8+-лимфоцитов, лимфокин-активированных киллеров. В лимфоидных, эпителиальных и эндотелиальных клетках он является ингибитором роста. Определение TGFß1 рекомендуется при диагностике заболеваний, связанных с хроническим воспалительным процессом. Повышенные уровни TGFß1 определяется при синдроме хронической усталости и у пациентов, страдающих тромбоцитопенической пурпурой, что подразумевает его участие в гемопоэзе. Обратная корреляция уровня TGFß1 с активностью заболевания описана при болезни Кавасаки, у пациентов с дефицитом IgA. Доказано, что TGFß1 способствует фиброзным процессам. Показано, что определение уровня TGFß1 в сыворотке и спинномозговой жидкости при множественном склерозе имеет большое значение для мониторинга ремиссии и активной фазы заболевания. TGFß1 играет важную роль в метаболизме костного мозга, возможная его роль в остеокласт-остеобластных взаимодействиях, может рассматриваться как маркер остеопороза. TGFß1 мо-

жет играть модулирующую роль в опухолеобразовании. На ранних стадиях белки TGFP1, в ряде случаев, действуют как супрессоры опухолей. Повышение его уровня выявлено при раке простаты, мочевого пузыря, печени, снижение при сепсисе и инсульте, что отражает изменение иммуновоспали-тельного статуса пациентов. При преждевременных родах в околоплодных водах содержания TGFP1 увеличено более чем в 3 раза. TGFP1 способствует развитию атеросклеротических повреждений стенки сосудов. Установлено, что у пациентов с ишемической болезнью сердца уровни TGFP1 в сыворотке крови достоверно выше, чем у здоровых.

TGFfî2 - внеклеточный гликозилированный белок, связывает бета-амилоид; вызывает гомодимеризацию и гете-родимеризацию белков семейства Bcl-2. TGFP2 участвует в морфогенезе клетки, в разделении соматических стволовых клеток и апоптозе, инициирует апоптоз большинства типов клеток. TGFP2 участвует в миграции глиальных клеток, организации межклеточного контакта, внеклеточной матричной организации и регулировании клеточной адгезии, способствует уплотнению хряща, развитию кровеносных сосудов, органов зрения, индуцирует ответ на гипоксию, обеспечивает эпителиально-мезенхимальный переход и развитие волосяных фолликуллов, активирует и дегранулирует тромбоциты. TGFP2 блокирует активацию лимфоцитов и макрофагов; подавляет гемопоэз; синтез воспалительных цитокинов, пролиферацию лимфоцитов, формирование цитотоксических NK- и Т-клеток.

TGFP3 участвует в активации и увеличении количества остеобластов, хемотаксиса и синтезе коллагена. TGFP3 задействован в пролиферации трофобластов; способен принимать участие в активации щелочных фосфатаз; участвует в регенерации повреждений, регулируя движения эпи-дермальных клеток в травмированной коже и созревание грануляционной ткани. Недостаточное количество TGFP3 значительно уменьшает скорость эпителизации и миграции кератиноцитов. TGFP3 может способствовать дисфункции кишечника, заживлению роговичных эпителиальных клеток при диабетической ретинопатии. Анализ молекулярных изменений в IL-23 дает представление о роли TGFP3 в дифференцировке наивных Th в сторону клеток Th17-rarn. Выявлено, что преобразование TGFP3 выражено в верхних слоях эпидермиса на протяжении всего процесса заживления раны. Предполагают, что белок TGFP3 может использоваться для восстановления хрящевой ткани суставных поверхностей при остеоартрите.

Таким образом, установленные поливариативные особенности TGF позволяют на новом уровне понимать имму-нопатогенез не только аутоиммунной патологии, но также соматической и инфекционной, прогнозировать течение заболевания и корректировать лечение.

С.В. Муштенко1, Е.А. Короткова2, Д.Н. Кушлинский1, И.В. Терешкина1, Е.К. Дворова2, Н.Е. Левченко2, Е.С. Гер-шшейн1, 2. VEGF, матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы в сыворотке крови больных раком эндометрия. 'Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова, Москва; 2ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Матриксные металлопротеиназы (ММП) и тканевые ингибиторы ММП (ТИМП) - ключевые регуляторы инвазии и метастазирования злокачественных опухолей. ММП и ТИМП также активно взаимодействуют с VEGF в регуляции неоангиогенеза, который играет важную роль в репродуктивной системе женщин как при нормальных физиологических изменениях в эндометрии, так и при различных его патологических состояниях, включая рак.

Цель настоящего исследования - анализ взаимосвязи

концентраций ММП-2, 7, 9, ТИМП-1, 2, и VEGF в сыворотке крови больных раком эндометрия с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания для выявления клинически значимых биологических маркеров.

В исследование вошли 103 больные раком эндометрия и 104 практически здоровые женщины соответствующего возраста. Содержание ММП-2, 7, 9, ТИМП-1, 2 и VEGF определяли в сыворотке крови, полученной до начала специфического лечения, с помощью наборов реактивов для иммуно-ферментного анализа (R&D, USA).

Обнаружено высоко достоверное (p < 0,0001) увеличение концентраций ММП-7, ММП-9 и ТИМП-1 в сыворотке крови больных раком эндометрия по сравнению с группой контроля. Достоверных различий в уровнях VEGF между больными и контролем не обнаружено, а ТИМП-2 в сыворотке крови больных раком эндометрия был повышен незначительно (p < 0,05).

Наиболее значимые изменения выявлены для ММП-2, но сывороточный уровень этой ММП у больных раком эндометрия, в отличие от всех других маркеров, был резко снижен (медианы 31,3 и 586 нг/мл соответственно; p < 0,0001).

Таким образом, снижение уровня ММП-2 в сыворотке крови оказалось наиболее информативным диагностическим маркером рака эндометрия: его чувствительность при пороговом значении 90 нг/мл, определенном на основании построения кривой ROC, составила 98,7%, специфичность по отношению к здоровому контролю - 95,4%. Для сравнения, чувствительность ММП-7 при порговом уровне маркера 4,0 нг/мл составила 82,5%, специфичность - 76,8%, а ММП-9 и ТИМП-1 имели еще худшие диагностические характеристики. Следует отметить, что уровни и диагностические характеристики всех маркеров практически не зависели от стадии заболевания. В то же время, самые низкие уровни ММП-2 и самые высокие - ММП-9 были выявлены у больных с низко-дифференцированным раком эндометрия.

Полученные результаты исследования позволяют сделать заключение, что ММП-2 можно рассматривать в качестве перспективного серологического маркера рака эндометрия, заслуживающего дальнейшего изучения.

П.Б. Натальин. Таргетное секвенирование и периферийный мониторинг в онкологии. Компания Thermo Fisher Scientific. Inc., США, Москва

Успехи научных и клинических исследований привели к смене парадигмы в онкологии: от анатомической классификации рака к молекулярному пониманию причин на уровне мутаций в определенных генах, активирующих или дезактивирующих сигнальные пути в клетке. Это привело к появлению таргетных препаратов, оказывающих значимый терапевтический эффект для пациентов, несущих определенную мутацию. Число таргетных препаратов растет, а с ним растет и количество мутаций, от выявления которых зависит назначение лекарства. Рутинный анализ большого количества генетических маркеров осложняется ограниченным количеством биоматериала, его генетической гетерогенностью, потребностью выявления увеличивающегося числа маркеров одновременно, недостаточной чувствительностью и высокой стоимостью традиционных молекулярных методов. Указанные трудности преодолимы с помощью высокопроизводительного секвенирования (NGS). Технология таргетного секвенирования обладает высокой производительностью, точностью и чувствительностью. В сочетании с набором готовых и создаваемых на заказ таргетных панелей генов, такой подход позволяет одновременно детектировать герми-нальные и соматические мутации с аллельной частотой 1% и меньше, выявлять инсерции-делеции, CNV и химерные транскрипты в нескольких нанограммах ДНК и РНК, полу-

ченных из опухолевых тканей, фиксированных формалином (FFPE) или из образцов «жидкой биопсии». Технология для захвата циркулирующих опухолевых клеток, в сочетании с NGS, позволяет проводить периферийный мониторинг для раннего обнаружения повторного возникновения опухолей. Для задач, не требующих генотипирования большого количества локусов, а также для подтверждения результатов NGS, используется секвенирование по Сэнгеру. Разработан также протокол и программное обеспечение, позволяющее выявлять аллельные варианты с частотой 5% и менее, используя капиллярные генетические анализаторы.

А.А. Николаев, Е.А. Короткова, Е.С. Герштейн, Н.Е. Кушлинский. Инсулиноподобные факторы роста (ИФР) и ИФР-связывающие белки в сыворотке крови больных ко-лоректальным раком. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Сигнальная система инсулиноподобных факторов роста играет важнейшую роль в возникновении и прогрессии различных злокачественных опухолей. Она включает инсулиноподобные факторы роста I и II типа (ИФР-I, ИФР-II), трансмембранные рецепторы ИФР, а также связывающие белки крови (ИФРСБ), которые образуют сложно регулируемую сеть взаимодействий, как между собой, так и с другими биологическими регуляторами роста и выживаемости клеток. Результаты экспериментальных и клинико-лабораторных исследований свидетельствуют о том, что в клетках коло-ректального рака (КРР) присутствуют все компоненты, необходимые для реализации аутокринного механизма действия ИФР.

Цель настоящего исследования - сравнительная оценка содержания ИФР-I и II и ИФРСБ 1, 2 и 3 типа в сыворотке крови больных колоректальным раком и практически здоровых людей, а также анализ взаимосвязи изученных показателей с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания.

Содержание ИФР-I, ИФР-II, ИФРСБ-1, 2 и 3 определяли с помощью наборов реактивов для иммуноферментного анализа («Mediagnost GmbH», Германия) в сыворотке крови 95 больных КРР (50 мужчин и 45 женщин) в возрасте от 20 до 85 лет (медиана - 62 года). В группу контроля вошли 47 практически здоровых людей (17 мужчин и 31 женщина) в возрасте от 29 до 84 лет (медиана - 61 год).

Обнаружено высоко достоверное увеличение медианного уровня ИФР-I и ИФРСБ-2 и снижение ИФРСБ-3 в сыворотке крови у больных КРР по сравнению с контролем. На основании многофакторного анализа разработано эффективное решающее правило для распознавания злокачественных опухолей толстой кишки: пороговые уровни компонентов системы ИФР составили: для ИФР-I - до 60 лет - выше 181 нг/мл, от 60 до 69 лет - выше 150 нг/мл, от 70 лет и старше - выше 112 нг/мл; для ИФРСБ-2 - более 853 нг/мл и для ИФРСБ-3 -ниже 2,5 мкг/мл. Чувствительность этого комбинированного теста для диагностики КРР составила 94,9% [95%ДИ = 87,598,6%], специфичность - 83,9% [95%ДИ = 66,3-94,6%].

В группе контроля уровни ИФР-II, ИФРСБ-1 и ИФРСБ-3 в сыворотке крови были достоверно выше у женщин, чем у мужчин (во всех случаяхp < 0,01). У больных КРР аналогичные достоверные различия отмечены только для ИФРСБ-3. При этом, если в общей группе пациентов уровни ИФР-II не отличались от контроля, то у пациентов мужского пола этот показатель достоверно превышал показатели мужчин контрольной группы (р = 0,007). Различия, выявленные для ИФР-I, ИФРСБ-2 и ИФРСБ-3 при анализе общей группы пациентов, сохранялись как у мужчин, так и у женщин. В целом, нарушения в балансе сывороточных ИФР/ИФРСБ при КРР у мужчин были выражены больше, чем у женщин. При анализе взаимосвязи содержания ИФР и ИФРСБ в сыворотке

крови с основными показателями распространенности КРР, его локализацией, гистологическим строением и степенью дифференцировки опухоли статистически достоверных различий не выявлено.

Таким образом, нами разработано эффективное решающее правило для распознавания злокачественных опухолей толстой кишки, включающее три показателя - ИФР-I, ИФРСБ-2 и ИФРСБ-3. Выраженных взаимосвязей уровней ИФР и ИФРСБ в сыворотке крови первичных больных КРР с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания не обнаружено, что не исключает возможной роли этих маркеров в качестве независимых факторов прогноза.

Л.К. Овчинникова, В.Д. Ермилова, Е.И. Алексеева, Л.Т. Лякина, И.К. Воротников. Фактор роста эндотелия сосудов в сыворотке крови больных начальными стадиями рака молочной железы. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Рак молочной железы (РМЖ) относится к числу самых распространенных онкологических заболеваний у женщин, этиология и патогенез которого до конца не изучены, методы ранней диагностики несовершенны. Неудовлетворительные результаты лечения РМЖ связаны с тем, что более 40% пациенток обращаются за помощью с распространенным опухолевым процессом. Кроме того, даже на ранних стадиях РМЖ предсказать прогноз небольших по размеру первичных опухолей (так называемые «ранние» формы) только на основании широко известных клинических и морфологических критериев во многих случаях не представляется возможным. В настоящее время большое внимание уделяется проблеме неоангиогенеза в злокачественных опухолях, в том числе и при РМЖ, так как не вызывает сомнения тот факт, что опухоль не может развиваться без образования в ней разветвленной сети сосудов, обеспечивающих снабжение клеток кислородом и питательными веществами.

Цель исследования - анализ уровней активатора ангио-генеза - фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в крови больных РМЖ с начальными T1-2N0M0 стадиями.

Обследовали 248 больных РМЖ T1-2N0M0 стадий и 50 практически здоровых женщин (группа контроля). Концентрацию VEGF определяли у всех больных РМЖ до лечения иммуноферментным методом наборами реактивов фирмы «R&D» (США). Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микроплашек «ELX800» фирмы «Bio-Tek Instruments, Inc.» (США).

Следует отметить, что исходная концентрация VEGF в сыворотке крови 248 больных РМЖ ранних стадий колебалась в довольно широких пределах от 38 до 620 пг/мл, в среднем составляя 217,3±8 пг/мл (медиана - 185 пг/мл). Концентрация VEGF в сыворотке крови 50 практически здоровых женщин группы контроля колебалась от 45 до 377 пг/мл, в среднем равнялась 104,8±13,8 пг/мл, медиана - 103 пг/мл и была достоверно ниже, чем в общей группе больных РМЖ (р = 0,0001). При этом, референсный интервал исходного содержания VEGF в сыворотке крови группы практически здоровых женщин заключался в пределах от 48 до 300 пг/ мл, следовательно, значение VEGF, равное 300 пг/мл, можно использовать как пороговое для диагностических тестов. Сопоставление содержания VEGF в группе больных РМЖ ранних стадий и в группе контроля показало значимые различия (р = 0,001). Однако следует отметить, что только у 53 (21,4%) больных значения VEGF в сыворотке крови превышали пороговое значение маркера, равное 300 пг/мл и, следовательно, данный показатель не обладает достаточной диагностической ценностью при раннем РМЖ. При этом, частота выявления значений VEGF выше порогового, у больных РМЖ с T2N0M0 стадией была почти в 2 раза выше, чем у пациенток с T1N0M0 стадией опухолевого процесса (25 и 13,2% соот-

ветственно). Не выявлено связи уровней VEGF с возрастом и репродуктивной функцией больных РМЖ как при ТШ0М0, так и при Т2МЗМ0 стадиях. У больных с дольковым инфиль-тративным РМЖ содержание VEGF в сыворотке крови было достоверно выше, чем с протоковым (275,6±31,5 и 191,3±8,4 пг/мл соответственно; р = 0,002). При этом, тенденция к этим различиям становилась уже заметной в группе больных РМЖ в ТЖ0М0 стадии (р = 0,052). С увеличением степени злокачественности опухоли выявлено достоверное повышение уровней VEGF в сыворотке крови больных РМЖ железы ранних стадий (р < 0,0001). Не обнаружено достоверных различий в содержании VEGF в группах больных РМЖ с учетом рецепторного статуса опухоли (РЭ, РП, Нег-2/пеи).

Таким образом, уровни VEGF в крови больных РМЖ ранних стадий были достоверно выше, чем у здоровых женщин, при Т2МЗМ0 по сравнению с ТШ0М0 стадией, при G-3 степени злокачественности опухоли и были достоверно ниже при протоковом инфильтративном РМЖ.

Г.А. Осипов. Метаболом - метаболические контакты человека и его микробиоты. Институт аналитической токсикологии, Москва

Метаболические взаимодействия организма человека и его микробиоты являются объектом пристального внимания ученых, занимающихся микроэкологией, в связи с возросшим числом экспериментальных исследований, указывающих на серьезную связь процессов в кишечнике со здоровьем в целом, процессом старения организма, его психоэмоционального состояния, рационального питания в частности и адекватных лечебных мероприятий при его нарушении. Эта связь носит общебиологический характер, поскольку человек является участником экосистемы, в которой микробные сообщества поддерживают биогеохимические циклы почвы, океанов и атмосферы земли. Микробиота кишечника регулирует кишечный и внекишечный гомеостаз. Множатся доказательства ее участия в поддержании нормальной работы внутренних органов и систем макроорганизма. Новая парадигма, ось микробиом кишечника - мозг, предполагает, что кишечная микробиота играет важнейшую роль в формировании и реализации структуры и функций головного мозга и нервной системы за счет многочисленных микробных соединений, нейрометаболитов, кофакторов и сигнальных молекул, вмешивающихся в метаболические, иммунные, гормональные и нервные реакции в желудочно-кишечном тракте и вне его. Метаболические продукты хозяина и ми-кробиоты неразрывно связаны, пересекаются и подвержены диетическим вариациям. Для изучения этих взаимодействий и переплетений метаболизма необходимо понять какие из человеческих метаболических путей наиболее тесно связаны со структурными вариациями кишечной микробиоты. Состояние суперорганизма отражается в сумме метаболитов микробов и хозяина, которые выявляют по данным анализа крови и мочи. Так возникла метаболомика, как метод получения надежной и воспроизводимой количественной информации о внутриклеточных и внеклеточных метаболитах. Она приобретает повышенный интерес в широком перечне дисциплин, включая функциональную геномику, интегральную и системную биологию, нутриционную геномику, фармако-геномику, а также поиск биомаркеров терапевтического мониторинга. Отечественные работы последнего десятилетия показали возможность использования масс-спектрометрии микробных маркеров и метаболитов в качестве новой медицинской технологии для научных исследований и рутинного клинического анализа. В том числе и при эпигеномных исследованиях, поскольку метаболизм кишечника вбрасывает в кровь огромную массу биоактивных соединения пищевого или микробного происхождения, потенциальных участников эпигеномных процессов: карбоновых и фенилкарбоно-

вых кислот, жирных кислот, в том числе ПНЖК и липидных фрагментов клеток самих микробов, ЛПС и его компонент.

А.А. Павлова, Л.Н. Бубнова, С.С. Бессмельцев, И.Е. Павлова. Полиморфизм кластера генов интерлейкина-1 у здоровых доноров и пациентов с различными стадиями множественной миеломы Северо-Западного региона России. ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России, Санкт-Петербург

Цитокины регулируют межклеточные и межсистемные взаимодействия между иммунной системой организма и растущей опухолью, принимают участие в активации противоопухолевой защиты, вызывая лизис злокачественных клеток, и в тоже время синтезируются опухолевыми клетками, способствуя прогрессии и метастазированию опухолей. Значительную роль в координации иммунологических реакций отводят интерлейкину-1 (IL-1). Например, IL-1P синтезируется миеломными клетками и активирует продукцию IL-6, являющегося главным стимулятором роста опухолевых клеток, а также клеток-предшественников опухолевого клона при множественной миеломе (ММ).

В настоящей работе выполнен сравнительный анализ частоты встречаемости генотипов генов кластера IL-1 у здоровых доноров (100 человек, средний возраст - 51,2±6,9 лет) и у 80 пациентов с ММ (ср. возраст 69,6±8,6 лет). Пациенты были разделены на 2 группы, в зависимости от стадии болезни, согласно классификации Durie-Salmon (II и III стадии): 1-я группа - 42 пациента со II стадией ММ; 2-я группа - 38 пациентов с III стадией ММ. Все обследованные лица проживают в Северо-Западном регионе России. Исследовали од-нонуклеотидный полиморфизм (SNP) генов цитокинов IL-1a (-889C/T), IL-10 (-511C/T), IL-ip (+3962 C/T) и их рецепторов IL-1R (pst 1 +1970 C/T), IL-1RA (mspai 11100 C/T). Геномную ДНК выделяли из ядросодержащих клеток периферической крови с помощью коммерческого набора BOX 500 (Protrans); генотипирование проводили посредством PCR-SSP с использованием коммерческого набора Cytokine genotyping Kit (Invitrogen). Отклонения от распределения закона Харди-Вайнберга были рассчитаны методом хи-квадрат с помощью GraphPad QuickCalcs, значения при p < 0,05 считали статистически значимыми.

Достоверные отличия группы здоровых лиц от общей группы пациентов с ММ установлены для следующих генов: IL-1a -889 C/T и IL-1P +3962 C/T, тогда как распределение частот встречаемости различных генотипов генов IL-1P -511C/T, IL-1R pst 1 +1970 C/T и IL-1RA mspa1 11100 C/T было практически одинаковым во всех обследованных группах. Гомозиготы IL-1a -889 TT у здоровых встречались заметно реже (0,02), чем в группах пациентов (0,21 - II ст. и 0,24 - III ст. ММ),Р < 0,05. Различия в частоте встречаемости гетерозигот IL-1a -889 CT были выявлены между группами здоровых лиц (0,50) и пациентов с II стадией ММ (0,24; p < 0,05). Частота гомозигот IL-1P +3962 TT в обеих группах пациентов (0,21) была в 2 раза выше, чем у здоровых лиц (0,04;p < 0,05). Интересно, что гетерозиготы IL-1P +3962 CT у пациентов со II ст. ММ выявлялись реже (0,17), чем в 2 других группах (0,42 - III ст. и 0,38 - доноры; p < 0,05), тогда как частота IL-1P +3962 СС у пациентов с III ст. ММ была ниже, чем у пациентов с II ст. и здоровых лиц (0,37 к 0,62 и к 0,58 соответственно,p < 0,05). Также нами была проанализирована частота встречаемости различных генотипов в генах изучаемых цитокинов среди пациентов с разными стадиями заболевания (II и III по Durie-Salmon). Достоверные отличия среди двух групп пациентов были выявлены для таких генотипов как, IL-1a -889 CT - 0,24 у пациентов с II стадией ММ к 0,45 у пациентов с III стадией ММ и IL-1a -889 CC - 0,55 у больных со II стадией ММ к 0,32 для пациентов с III ст. ММ (p < 0,05). Также достоверные отличия были выявлены для генотипа IL-1P +3962 C/T: IL-1P +3962 CT встречался на-

много чаще у пациентов с III ст. ММ (0,42) по сравнению с пациентами со II стадией заболевания (0,17;p < 0,05). Однако частота встречаемости гомозиготы IL-1P +3962 CC у пациентов со II стадией выявлялась в 2 раза чаще (0,62), чем у пациентов с III стадией ММ (0,37, p < 0,05).

Таким образом, полученные нами результаты позволяют расценивать генотипы IL-1a -889 TT и IL-1P +3962 TT как маркеры, предрасполагающие к развитию ММ, тогда как генотипы IL-1a -889 CT и IL-1P +3962 CT у больных ММ ассоциированы с более тяжелым течением заболевания.

М.Ю. Первакова, С.В. Лапин, А.А. Шумилов, Н.А. Шкля-ревич, В.Л. Эмануэль, О.Н. Титова. Выявление дефицита альфа-1-антитрипсина у больных хронической обструк-тивной болезнью легких и сопоставление его с клинической картиной заболевания. ГБОУ ВПО ПСПбГМУ имени акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург

Дефицит альфа-1-антитрипсина (А1АТ) является наиболее распространенной причиной генетической предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). В результате полиморфизма гена Pi (англ.proteаse inhibitor) возникают патогенные аллельные формы А1АТ, или фенотипы. Фенотип А1АТ более информативен, чем его концентрация, которая нередко остается в пределах референс-ных значений. Распространенность и клиническое значение различных фенотипов А1АТ при ХОБЛ в нашем регионе изучены недостаточно, а поздняя диагностика дефицита А1АТ не позволяет принять своевременные профилактические и терапевтические меры при данном состоянии.

Целью нашего исследования являлось изучение встречаемости и клинического значения патогенных фенотипов А1АТ у больных ХОБЛ.

Мы собрали 100 образцов сыворотки крови и клинические данные больных со II-IV стадиями ХОБЛ, 4 образца больных с выявленным PiZZ фенотипом, а также 46 образцов здоровых доноров. В полученном биоматериале мы выполнили фенотипирование А1АТ методом изоэлектрофоку-сирования и определили концентрации А1АТ. Мы собрали и проанализировали следующие клинические данные: результаты спирометрии, бодиплетизмографии, перфузионной сцинтиграфии легких и другие аппаратные и лабораторные исследования.

Среди 100 больных ХОБЛ патологические фенотипы А1АТ были обнаружены у 14% (14/100) и были представлены следующими вариантами: 1 PiMS, 2 PiSS, 2 PiZZ, 8 PiMZ и 1 PiML. Среди здоровых доноров был обнаружен 1 PiMZ гетерозиготный фенотип.

При этом больные с гомозиготным PiZZ фенотипом были моложе (p < 0,01**) и отличались более низким уровнем сатурации кислорода (p < 0,01**) и выраженной дыхательной недостаточностью. Количественный дефицит А1АТ был выражен только у носителей PiZ аллеля и сопровождался достоверным снижением спирографических показателей обструктивных нарушений при ХОБЛ: индекса Тиффно (p < 0,05*), максимальной объемной скорости на уровне выдоха 50% и 75% ФЖЕЛ (МОС50 и МОС75,p < 0,05*), средней объемной скорости (СОС25-75, p < 0,05*). Параметры снижения эластической функции легких: общая емкость легких (ОЕЛ), остаточный объем (ООЛ) и отношение ООЛ/ОЕЛ были также достоверно (p < 0,05*) выше при данном фенотипе по сравнению с нормальным PiMM фенотипом. Сцинтиграфическая картина легких при PiZZ фенотипе отличалась более высоким (p < 0,05*) процентом снижения перфузии крови и большим количеством очагов нарушения кровотока (p < 0,01**). Наши результаты свидетельствуют о том, что при наличии патологического фенотипа А1АТ ухудшение показателей обструктивных нарушений и эмфизематозного ремоделиро-вания легочной ткани, а также развитие тяжелой дыхатель-

ной недостаточности происходят быстрее, поэтому дефицит А1АТ следует выявлять на ранних стадиях заболевания с использованием метода фенотипирования.

А.Г. Приходько1, Е.А. Бородин12, М.А. Штарберг2, ЮМ. Перельман1, Н.В. Ульянычев1, Д.Е. Наумов1. Межсуточная вариабельность показателей перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха у больных бронхиальной астмой. 'Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания, Благовещенск; 2Амурская государственная медицинская академия, Благовещенск

Метаболитам перекисного окисления липидов (ПОЛ) отводится важная роль в поддержании воспаления дыхательных путей и утрате контроля над бронхиальной астмой.

Цель исследования: оценить трехдневную вариабельность показателей перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха у больных бронхиальной астмой.

На протяжении 3 дней у 32 больных с легким персисти-рующим течением БА (средний возраст 41,7±1,4 лет; ОФВ1

- 94,6±3,2%) исследовали содержание продуктов перекис-ного окисления липидов (ПОЛ) в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) в утреннее время. Сбор КВВ выполнялся при помощи аппарата ECoScreen II (Erich Jaeger, Германия). Пробирки с полученным материалом немедленно помещали в морозильную камеру при температуре -70oC, где они хранились до проведения биохимических исследований. Содержание в КВВ продуктов ПОЛ - конъюгированных диенов и триенов (кетодиенов) - исследовали по ультрафиолетовым спектрам поглощения липидных экстрактов, регистрацию которых проводили на спектрофотометре Unico 2804 по двухлучевой схеме в диапазоне длин волн 200-500 нм против этанола. Содержание диеновых конъюгатов выражали в единицах оптической плотности при 233 нм (Е233), а содержание конъюгированных триенов (кетодиенов) - в единицах оптической плотности при 278 нм (Е278). Максимум пика поглощения неокисленных липидов приходился в анализируемых образцах на 206 нм (Е206). Для расчета индекса окисленности липидов по первичным и вторичным продуктам ПОЛ использовали отношение поглощения при 233 нм к 206 нм (Е233/Е206) и отношение поглощения при 278 нм к 206 нм (Е278/Е206) соответственно. Для определения достоверности различий использовали парный критерий t (Стьюдента), в случаях негауссовых распределений

- парный критерий Уилкоксона, для оценки межсуточного разброса показателей вычисляли коэффициент вариации (КВ) как отношение стандартного отклонения к среднему значению.

По данным анализа значение Е206, отражающее уровень неокисленных липидов, в среднем по группе у больных БА составило в первый день исследования 0,21 (0,14; 0,26) нм, в последующие 2 дня: 0,21 (0,13; 0,32) и 0,21 (0,15; 0,24) нм соответственно, коэффициент вариации между 1 и 2 визитами составил - 6,89, между 1 и 3 - 6,40. Содержание в КВВ конъюгированных диенов и триенов (кетодиенов) значимо разнилось в визитах, в разные дни забора биоматериала. Межсуточные значения показателя Е233, характеризующие уровень диеновых конъюгатов в КВВ, в среднем по группе составляли: 0,027 (0,019; 0,041); 0,035 (0,027; 0,043) и 0,048 (0,041; 0,057) нм; КВ - 3,54; 1,86 (по отношению к 1 визиту); вероятность различий рядов по критерию Уилкоксона между 1 и 2 визитами - 90,01%; между 1 и 3 - 99,4%. Показатель Е278, отражающий уровень содержания конъю-гированных триенов (кетодиенов), составил: 0,005 (0,002; 0,01), 0,011 (0,005; 0,015) и 0,012 (0,010; 0,015) нм соответственно, КВ - 2,33; 2,22, вероятность различий рядов по критерию Уилкоксона - 99,4 и 99,3% соответственно. Индекс окисленности липидов, определяемый по соотношению Е233/Е206, составил 0,14±0,01; 0,18±0,02 (р = 0.04);

0,24±0,01 (р = 0,0001; р = 0,004) соответственно. Соотношение Е278/Е206 составило 0,03±0,003; 0,05±0,006 (р = 0,018); 0,08±0,016 (р = 0,005; р = 0,038). Разность парных значений (Д) Е233/Е206 при 2 и 3 визитах по отношении к 1 визиту в среднем по группе составила 0,04±0,04 и 0,10±0,02 нм, КВ - 2,67 и 0,91; для Е278/Е206 - 0,02±0,01 и 0,05±0,02 нм; КВ - 2,27 и 1,86.

Таким образом, у больных БА отмечается высокая межсуточная вариабельность показателей ПОЛ в КВВ, что может быть обусловлено как особенностями течения болезни, так и методическими погрешностями забора биоматериала, что требует разработки унифицированных подходов и стандартизации исследования.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант № 14-25-00019).

И.В. Пронина1,2, Э.А. Брага12, В.И. Логинов12, А.М. Бур-денный1, Е.А. Переяслова1, Т.П. Казубская3, Н.Е. Кушлин-ский3. Новые микроРНК, вовлеченные в регуляцию экспрессии генов RASSF1A и APAF1, как потенциальные мишени для таргетной терапии при раке молочной железы. 'ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 2ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», Москва; 3ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Рак молочной железы (РМЖ) - самая распространенная форма онкологии у женщин. В мире ежегодно регистрируют 1,6 млн случаев РМЖ и с летальным исходом около 500 тыс. В России выявляют более 50 тыс. новых случаев РМЖ в год, причем в последние годы наблюдается тенденция к омоложению заболевания. Так, в России в настоящее время средний возраст женщин, больных РМЖ, составляет 53 года, тогда как 10 лет назад он составлял 65 лет.

Изучение механизмов нарушения регуляции генов и сигнальных путей при РМЖ позволяет выявлять новые маркеры прогноза и потенциальные мишени терапии. МикроРНК (миРНК) играют важную роль в регуляции экспрессии многих генов и сигнальных путей, задействованных в патогенезе онкологических заболеваний, и миРНК, ингибирующие экспрессию онкогенов или онкосупрессорных генов, рассматривают как перспективные мишени для таргетной терапии онкологических заболеваний.

Цель данной работы - исследовать и сопоставить изменения уровня мРНК двух онкосупрессорных генов RASSF1A и APAF1 c изменением содержания биоинформатически предсказанных миРНК и выявить миРНК, потенциально взаимодействующие и потенциально ингибирующие экспрессию этих двух генов, связанных с апоптозом или его инициацией.

В работе использовали 28 парных образцов (опухоль - гистологически неизмененная ткань молочной железы) от женщин, больных РМЖ и не подвергавшихся ранее лучевой или химиотерапии. Изменения уровня мРНК белоккодирующих генов определяли с помощью количественной SYBR Green ПЦР в реальном времени и гена B2M в качестве контрольного. Для анализа уровня экспрессии генов миРНК применяли ПЦР в реальном времени с использованием сертифицированных наборов фирмы Applied Biosystems и RNU6 и RNU48 в качестве контролей. Статистический анализ полученных результатов проводили с применением непараметрической ранговой корреляции Спирмена.

В рамках данной работы проведен биоинформатический анализ и отбор миРНК, предсказанных как потенциально участвующих в регуляции экспрессии белоккодирующих генов RASSF1A и APAF1 с привлечением алгоритмов, содержащихся в базе данных miRWalk 2.0 (http://www.ma.uni-Heidelberg. de/apps/zmf/mirwalk/), включая miRWalk, Microt4, miRanda, miRMap, RNA22, RNAhybrid, Targetscan. При этом, отобра-

ны 10 миРНК: miR-125b-5p, 129-5p, 127-5p, 193a-5p, 203a, 375, 17-5p, 24-2-5p, 9-5p, 34a-5p. В результате проведенного экспериментального исследования выявлена значимая отрицательная корреляция между изменением уровня экспрессии двух пар: мРНК APAF1 и miR-193а-5p (Rs = -0,39; p = 0,04), а также мРНК RASSF1A и miR-375 (Rs = -0,37;p = 0,05). Обратная зависимость между уровнем экспрессии гена миРНК и потенциального гена-мишени согласуется с известным механизмом подавления экспрессии белок-кодирующих генов под действием миРНК.

Таким образом, гены APAF1 и RASSF1A при РМЖ являются потенциальными мишенями miR-193а-5p и miR-375 соответственно, что важно для выяснения способов регуляции этих генов и поиска новых средств комбинированной терапии РМЖ.

Работа выполнена при поддержке грантом Российского Научного Фонда 14-15-00654.

Е.В. Проскурнина', М.М. Созарукова', И.В. Образцов2, М.А. Годков3, Ю.А. Владимиров'. Новый хемилюминесцент-ный метод оценки функциональной активности фагоцитов крови. 'Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, факультет фундаментальной медицины, Москва; 2ФГБУ «Государственный научный центр колопрок-тологии им. А.Н. Рыжих» Минздрава РФ, Москва; 3Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Скли-фосовского, Москва

Проблема оценки функциональной активности нейтро-фильных гранулоцитов в настоящее время является актуальной, прежде всего при воспалительных процессах, в том числе аутоимунных. Существующие методики трудоемки и субъективны или требуют использования сложного дорогостоящего оборудования. Хемилюминесцентные методы широко используются для изучения респираторного взрыва нейтрофилов. Достоинствами этих методов являются высокая чувствительность, специфичность отклика и относительная простота эксперимента.

В исследовании разработана новая методика хемилю-минесцентного анализа функциональной активности фагоцитов цельной крови, основанная на последовательном внесении 4ß-форбол-12-миристат-13-ацетата и N-формил-метионил-лейцил-фенилаланина в клеточную суспензию и последующей регистрации активированной люминолом хемилюминесценции. Обследована контрольная группа доноров для использования в качестве базы сравнения при диагностическом использовании хемилюминограмм. Показаны различия в ХЛ-граммах, полученных от доноров, пациентов с термической травмой, пациентов с системными заболеваниями (системная красная волчанка, системные васкулиты), с акушерско-гинекологическими патологиями. Предложены новые диагностические и прогностические параметры.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Л.В. Родионова1, 2, В.А. Сороковиков1, 2, Л.Г. Самойлова', Негреева М.Б.'. Экспрессия генов, кодирующих рецепторы к эстрадиолу в образцах желтой связки больных со стенозами позвоночного канала. 'ФГБНУ «Иркутский научный центр хирургии и травматологии», г. Иркутск; 2ГБОУ ДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Минздрава РФ, Иркутск

Метаболическое действие эстрадиола не ограничено исключительно репродуктивной сферой. Описана регуляция эстрадиолом хондрогенеза, его влияние на апоптоз остеобластов и остеокластов, а также на ремоделирование кости (Grumbach M.M., 2000). Известно повреждающее действие дефицита эстрадиола на минеральную плотность костной ткани (Katulski K., Slawek S., Czyzyk A., et al., 2014; Popat V.B., Calis K.A., Kalantaridou S.N., 2014), есть работы описывающие эффекты эстрадиола на гиппокамп и консолида-

цию памяти (Frick K.M., 2013), а также его влияние на се-ротониновые рецепторы головного мозга (Файзуллина Г.И., Нургалина Э.М., Валеева Л.А., 2008). Гены, кодирующие рецепторы эстрадиола, особенно активно экспрессируются в эндометрии и тканях молочной железы при онкологических заболеваниях, что обуславливает широкое их применение в диагностических целях. Однако практически нет информации об участии эстрадиола и его рецепторов в возникновении и прогрессировании дегенеративно-дистрофических заболеваний позвоночника.

Появляются лишь единичные работы по выявлению роли эстрадиола в патогенезе стенозирующих процессов позвоночного канала. Так, Mei-Hsiu Chen с соавт. обнаружили в культуре тканей желтой связки рецепторы к эстрадиолу как у женщин, так и у мужчин и выявили важную роль эстрадиола в регуляции метаболизма коллагена (Mei-Hsiu Chen, Chao-Kai Hu, Pei-Ru Chen et al., 2014). В их работе показано, что дефицит эстрадиола вызывает дегенерацию соединительной ткани, изучена дозо-зависимая регуляция эстрадиолом клеточной пролиферации и деградации коллагена в желтой связке; авторы предполагают, что эстрадиол регулирует экспрессию ММР-3 через путь PI3K и способствует гомеостазу внеклеточного матрикса в ligamentum flavum (Mei-Hsiu Chen, Chao-Kai Hu, Pei-Ru Chen et al., 2014).

Нами исследованы образцы желтой связки, взятые у 12 больных со стенозами позвоночного канала (5 мужчин, 7 женщин). Образцы забирали интраоперационно в раствор, предотвращающий гидролиз нуклеиновых кислот. Затем биоптаты подвергались глубокой заморозке с помощью жидкого азота, деградации и гомогенизации с последующим выделением общей РНК (Promega), синтезом кДНК и постановкой ПЦР (real time, CFX96, Biorad) с праймерами (Real-TimePrimers.com). В качестве генов домашнего хозяйства применяли ACTB, GADP, RPL13A, B2M, GUSB, PGK, PPIA. Выявлено, что в желтой связке больных со стенозами позвоночного канала наблюдалась выраженная экспрессия генов, кодирующих рецепторы к эстрадиолу (ESR1 и ESR2), причем статистически значимых различий между женщинами и мужчинами не обнаружено. Ген ESR2 амплифицировался в среднем на 10% слабее, чем ESR1.

Наши исследования согласуются с работой Mei-Hsiu Chen с соавт. (Mei-Hsiu Chen, Chao-Kai Hu, Pei-Ru Chen et al., 2014) и подтверждают присутствие рецепторов к эстрогену ESR1 и ESR2 в желтой связке больных со стенозами позвоночного канала с использованием других методов исследования, чем применены в вышеприведенной работе. Дальнейшее исследование гормональных аспектов в совокупности с другими клинико-лабораторными данными может дать полезную информацию для понимания фундаментальных основ патогенеза стенозирующих процессов позвоночного канала.

Л.В. Родионова1, 2, В.А. Сороковиков1, 2, Л.Г. Самойлова1, А.В. Невежина1. Ключевые факторы периферической конверсии йодтиронинов в желтой связке больных со стенозами позвоночного канала. 'ФГБНУ «Иркутский научный центр хирургии и травматологии», Иркутск; 2ГБОУ ДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Минздрава РФ, Иркутск

Йодтиронины участвуют в регуляции практически всех видов обмена в организме и, следовательно, играют важную роль в метаболизме соединительной ткани. Связываясь с рецепторами, тиреоидные гормоны усиливают транскрипцию необходимых в конкретный момент времени для каждого вида тканей иРНК (Литвицкий П.Ф., 2002; Марова Е.И. и др., 1999; Николаев А.Я., 2004).

Трийодтиронин (Т3) имеет в среднем в 10 раз более выраженное метаболическое действие, поэтому в организме существуют механизмы дейодирования тироксина (Т4), кото-

рый считают прогормоном, обеспечивающим резерв в малоактивной форме (Malik R., Hodgson H., 2002). В тканях работают три типа ферментов дейодиназ (D): два вида дейодиназ (D1 и D2) наружного кольца с образованием Т3 и дейодиназа внутреннего кольца (D3) с образованием реверсивного Т3, который не соединяется с рецепторами и поэтому не вызывает физиологического эффекта. Такой механизм позволяет тканям самим частично регулировать действие на них йодтиро-нинов (Malik R., Hodgson H., 2002; Мохорт Е.Г., 2003).

Дейодирование важно не только для деактивации и выведения гормона из организма, но и для достижения им оптимального биологического эффекта. Предполагают, что короткий период полураспада D2 и D3 (менее 1 ч), с относительно более длинным периодом полураспада D1 (более 8 ч) способствует их важной роли в быстрой регуляции периферического метаболизма тиреоидных гормонов (Van der Geyten S., Segers I., et al., 2001).

Дейодиназа 1 типа, кодируемая геном Diol в печени и почках обеспечивает приблизительно 30-40% внетиреоидной продукции Т3. Дейодиназа 2 типа (кодируется геном Dio2) наиболее активна в гипофизе, центральной нервной системе, мышцах и обеспечивает 60-70% внетиреоидной продукции ТЗ (Malik R., Hodgson H., 2002).

Целью нашей работы было выявление ключевых факторов периферической конверсии йодтиронинов в желтой связке больных со стенозами позвоночного канала. Для этого интраоперационно, в раствор, предотвращающий гидролиз нуклеиновых кислот, отбирали биоптаты желтой связки 12 пациентов со стенозами позвоночного канала (5 мужчин, 7 женщин). Замороженные с помощью жидкого азота образцы деградировали и гомогенизировали с последующим выделением общей РНК реагентами фирмы Promega. Затем проводили обратную транскрипцию (Promega) и с кДНК ставили real time ПЦР (Promega; CFX96, Biorad) с праймерами (Re-alTimePrimers.com). В качестве генов домашнего хозяйства применяли ACTB, GADP, RPL13A, B2M.

При отсутствии гендерной разницы у 83% больных в желтой связке обнаружена экспрессия гена Diol, в то время как ген Dio2 был амплифицирован только у 58% пациентов, а Dio3 - у 67% обследованных больных. Выявлены четкие различия в экспрессии генов дейодиназ: все три гена экс-прессировались в желтой связке только у 4 больных (33%), одновременная амплификация Diol и Dio2 наблюдалась у 5 (42%) человек, Diol и Dio3 - у 3 (25%) человек. Парное сочетание экспрессии генов Dio2 и Dio3, не сопровождаемое экспрессией Diol, не было выявлено ни разу, а у 1 женщины были неактивны все три гена, кодирующие дейодиназы.

Полученные данные свидетельствуют о различных вариантах периферической конверсии йодтиронинов в желтой связке больных со стенозами позвоночного канала. Причины такого различия тканевого метаболизма йодтиронинов и место в патогенезе стенозирующих процессов предстоит выяснить.

Н.Е. Рукосуев, Л.А. Пестряева, Т.Б. Третьякова, Е.А. Шипицына, С.В. Борисова. Изменчивость полиморфных вариантов генов тромбофилии у жителей Уральского региона. ФГБУ «НИИ охраны материнства и младенчества» Минздрава РФ, Екатеринбург

Полиморфные варианты генов тромбофилии вовлечены в формирование наследственных основ различных мульти-факториальных заболеваний (МФЗ). К настоящему времени накоплены многочисленные сведения об ассоциации аллель-ных вариантов данных генов с различными патологическими состояниями, но результаты, полученные авторами, не всегда однозначны. Одной из причин противоречивости результатов ассоциацивных исследований является этноспецифичность подверженности МФЗ. В связи с этим изучение распростра-

ненности в разных этнических группах полиморфных вариантов генов-кандидатов МФЗ является важным для планирования генетико-эпидемиологических исследования, особенно для таких многонациональных регионов как Уральский

Цель - изучение распространенности и оценка гетерогенности аллельных вариантов 6 генов-кандидатов МФЗ у жителей Свердловской области.

Было обследовано 4872 представительницы Уральского региона. Всем обследованным было проведено молекулярно-генетическое типирования аллельных полиморфизмов генов тромбофилии: FGB: -455G>A, FV: G1691A, FП: G20210A, РА1-1: 6755G/4G, 1ШВ3:1565Т>С, МГН^: 677С>Т, МГН-FR: 1298 А>С. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета статистических программ «Statistica 10.0».

Для межпопуляционных сравнений использовались следующие показатели:

1) гетерогенность по частотам генотипов (оценивалось согласно GH-тесту).

2) генетические расстояния (по методы Нея).

Соответствие распределения частот аллелей и генотипов

равновесию Харди-Вайнберга проверяли по критерию %2. Различие двух сравниваемых величин считали статистически значимыми при достижениир < 0,05.

По результатам этого исследования было выявлено, что обследованная группа жительниц Свердловской области и представители европеоидной и монголоидной популяций различаются между собой по генетической структуре 3 исследованных локусов генов - кандидатов: ГГОВ3:1565Т>С, MTHFR: 677С>Т и МГН^: 1298 А>С. Жители Свердловской области в большей степени отличаются от монголоидной популяции (Э = 0,0176), чем от европеоидной (Э = 0,0038). Наиболее удалены по генетической структуре кан-дидатных генов тромбофилии представители европеоидной и монголоидной популяций (Э = 0,0247).

Полиморфизм Сравниваемые популяции

Ур - Евро Ур - Монг Евро - Монг

Х2 P Х2 P Х2 P

MTHFR 677 0,ll 0,73 ll,ll < 0,0l l3,4l < 0,0l

MTHFR l298 0,0l 0,9l 8,78 < 0,0l 9,4l < 0,0l

FGB 2,8l 0,09 0 1 2,8l 0,09

F2 0,2 0,65 0,2 0,65 0 1

F5 0 1 0,l4 0,7 0,l5 0,7

PAI-l 5,3l 0,02 0,04 0,84 6,29 0,0l

ITGB3 0,l8 0,67 27,77 < 0,0l 24,36 < 0,0l

А.А. Савченко', А.Г. Борисов', Д.Э. Здзитовецкий2. Биолюминесцентный метод определения активности внутриклеточных ферментов лимфоцитов в прогнозе исхода распространенного гнойного перитонита. 'ФГБНУ «НИИ медицинских проблем Севера», Красноярск; 2ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого», Красноярск

Целью исследования явилось изучение уровней активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови у больных распространенного гнойного перитонита (РГП) при благоприятном и неблагоприятном исходе заболевания.

Обследован 51 больной с РГП (23 мужчины и 28 женщин) внебольничного и госпитального происхождения, проходивших лечение в отделении гнойной хирургии и отделении реанимации и интенсивной терапии МУЗ «ГБСМП

имени Н.С. Карповича» г. Красноярска. Средний возраст больных составил 54,2±19,2 года. Из исследования были исключены больные, у которых перитонит был осложнением панкреонекроза, неоперабельных онкологических заболеваний органов брюшной области и неоперабельного нарушения мезентериального кровообращения. В качестве контроля обследовано 75 здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Метаболизм лимфоцитов оценивали с помощью биолюминесцентного метода по активности следующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ), малик-фермента (НАДФМДГ), НАД- и НАДН-зависимой реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ и НАДН-ЛДГ), НАД- и НАДН-зависимой реакции малатдегидрогеназы (МДГ и НАДН-МДГ), НАДФ- и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФГДГ и НАДФН-ГДГ), НАД- и НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ и НАДН-ГДГ), НАД- и НАДФ-зависимых изоцитратдегидрогеназ (НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ соответственно) и глутатионредуктазы (ГР). Исследование проводили на ферментативном препарате NАD(Р):FMNоксидоредуктаза-люцифераза из Photobacte-пит 1е^паШ.

При исследовании уровней активности НАДФ-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови у больных РГП в зависимости от исхода заболевания обнаружено, что активность НАДФМДГ в лимфоцитах крови больных перитонитом снижена относительно контрольных значений, как при благоприятном, так и при неблагоприятном исходе. Однако у больных с неблагоприятным исходом понижение уровня активности более выражено, чем при благоприятном исходе. Уровни активности Г6ФДГ, НАДФГДГ, НАДФИЦДГ, ГР и НАДФН-ГДГ в лимфоцитах у больных РГП снижены относительно контрольных значений независимо от исхода заболевания. При исследовании уровней активности НАД-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови у больных перитонитом обнаружено, что активность Г3ФДГ повышена, тогда как активность ЛДГ, МДГ и НАДГДГ снижена относительно контрольных уровней независимо от исхода заболевания.

Исход заболевания в значительной степени определяется интенсивностью системного воспаления и уровнем полиорганной недостаточности. Следствием этого, является изменение содержания в периферической крови ряда ци-токинов и других биологически активных веществ. Можно предположить, что регуляторное влияние всего комплекса биологически активных веществ на лимфоциты модулирует их метаболизм и тем самым формирует характерный для исхода заболевания спектр активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ. Мы предлагаем рассчитывать метаболический коэффициент (МК), характеризующий соотношение активности реакций НАДФН-зависимого восстановления к уровням реакций НАД-зависимого окисления: МК = (ГР х НАДФН-ГДГ) / (ЛДГхМДГ). При величине коэффициента ниже 0,005 прогнозируется неблагоприятный исход заболевания, при величине коэффициента равном и выше 0,005 -благоприятный.

М.А. Степанова2, Ю.С. Медведева1, О.Ю. Куклева2, Э.Н. Эскина2, М.Ю. Карганов1. Применение лазерной корреляционной спектроскопии в анализе субфракционного состава слезной жидкости у пациентов после эксимерла-зерных операций по методам ФРК и Транс ФРК. 'ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; 2Кли-ника лазерной медицины «Сфера», Москва

Увеличение частоты случаев развития близорукости у лиц молодого возраста в популяции объясняет большой интерес, который проявляется в последние годы к различным методам коррекции аметропий. На сегодняшний день суще-

ствует несколько методик эксимерлазерных вмешательств и их вариации для получения максимальной остроты зрения для данного пациента. В нашей работе мы акцентируем свое внимание на операции типа фоторефракционной кератэкто-мии (ФРК), а именно стандартная ФРК и трансэпителиальная ФРК (Транс ФРК). В основе всех методик эксимерлазер-ной коррекции зрения лежит один и тот же принцип: под воздействием эксимерного лазера происходит фотохимическая абляция слоев роговицы.

Цель исследования: оценить степень изменения молекулярного состава слезной жидкости (СЖ) у групп пациентов после операции по методике ФРК и одномоментной Транс ФРК при нормальном течении послеоперационного периода.

Задачи: оценить применение метода лазерной корреляционной спектроскопии в анализе локального метаболизма и выявление изменений в составе СЖ у пациентов в раннем послеоперационном периоде.

У всех обследуемых были взяты образцы СЖ посредством получения смывов с глаз 0,9% раствором хлорида натрия. Образцы замораживали при температуре -20oC на срок не более 5 суток, в течение которого проводился их анализ методом лазерной корреляционной спектроскопии (ЛКС). Непосредственно перед измерением собранный материал размораживали и центрифугировали 15 минут 3000 об/мин для получения прозрачного супернатанта.

У 1-й группы пациентов была проведена операция на экси-мерлазерной установке Schwind Amaris ® 500E по методике ФРК, у 2-й группы - Транс ФРК. Критические точки исследования - на 1-й день после операции и в день эпителизации после проведения поверхностной эксимерлазерной абляции. В каждую группу исследования вошло по 26 человек (52 глаза) с диагнозом миопия средней и высокой степени.

Критериями включения в группу исследования являлись: 1. Использование мягких контактных линз (МКЛ) от 1 года (6 лет); 2. Возраст обследуемых составил от 18 до 28 лет (средний возраст пациентов 23,5 года); 3. Проведение операции в стандартных условиях; 4. Миопия средней и высокой степени; 5. Контактные линзы (КЛ) были сняты не менее чем за 14 дней до операции; 6. Отсутствие сопутствующей соматической патологии; 7. Проведение эксимерлазерной коррекции зрения по методике ФРК или Транс ФРК.

В ходе исследования пациентов в раннем послеоперационном периоде через сутки после операции во второй группе нами был выявлен больший процент низкомолекулярных фракций по сравнению с пациентами первой группы, однако ко дню эпителизации данный процент вклада в светорассеяние уравнивался до одного уровня в обеих группах исследования. Также стоит отметить небольшое различие процентного вклада в светорассеяние среднемолекулярных частиц (200-500 нм) между группами исследования и между контрольными точками исследования. Преобладание крупных глико-липопротеиновых фракций радиусом 600-900 нм во второй группе, возможно, обусловлено присутствием интер-лейкинов противовоспалительного характера. Общая картина спектра в день эпителизации стремится к изначальному уровню, что тем не менее далеко от нормы.

Таким образом, нами было установлено незначительное относительно первой группы, преобладание в смывах слезной жидкости альбуминов и глобулинов у пациентов второй группы в 1 день после операции и в день эпителизации, что свидетельствует о тенденции к катаболическим и дистрофическим процессам, которые могут быть вызваны повышением активности гидролаз и обусловлены хронической травматизацией КЛ и повреждающим воздействием лазера, непосредственно на коллагеновые волокна роговицы, разрушенные во время абляции, мелкие части которых и дают данное преобладание

в спектрах слезной жидкости. Поскольку процесс деэпители-зации у пациентов первой группы производится механическим путем, таких частиц в первой группе несколько больше в первый день после операции, чем у пациентов после Транс ФРК. В день эпителизации было выявлено увеличение глико-липопротеиновых комплексов и альбуминовых и глобулино-вых фракций в смывах глаз обоих групп, что говорит о нарастании воспалительной реакции различной природы, в том числе эндогенного характера, которое может быть обусловлено перенесенной операцией и протекающими репаративными процессами после абляции роговицы.

М.А. Столяр2,3, М.Л. Филипенко6, И.А. Ольховский12, А.С. Горбенко2, Е.В. Васильев4, М.А. Михалев5. Оценка уровня микроРНК miR-155 в пробах венозной крови пациентов с миелоидными опухолями. 'ФГБУН «Красноярский научный Центр» Сибирского отделения РАН; ^Красноярский филиал ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава РФ; 3ФГАОУ ВПО «Сибирский федеральный университет», Красноярск; 4КГБУЗ «Краевая клиническая больница», Красноярск; 5МБУЗ «Городская клиническая больница» № 7, Красноярск; 6ФГБУН «Институт химической биологии и фундаментальной медицины» Сибирского отделения РАН, Новосибирск

Хронические миелоидные опухоли (ХМО) - группа кло-нальных заболеваний кроветворной ткани, диагностическим маркером которых в 80% случаях являются соматические мутации в генах янус-киназы 2 (JAK2), рецептора тромбопоэти-на (MPL) и кальретикулина (CALR). В настоящее время не-кодирующие микроРНК относят к перспективным маркерам, отражающим особенности патогенеза опухолевого процесса, однако до сих пор валидированные методы клинической лабораторной диагностики, основанные на измерении уровня микроРНК и доказательствах их диагностической значимости при ХМО. Недавно описано (Tombak A. et al., 2015) увеличение уровня микроРНК miR-155 в пробах венозной крови пациентов с ХМО. Вместе с тем, известно, что микроРНК miR-155 выполняет разные функции в разных клеточных линиях, в том числе вовлечение ее в регуляцию иммунных реакций лимфоцитов может существенно сказываться на общем пуле в цельной крови. Данных об уровне микроРНК miR-155 в тромбоцитах при ХМО не опубликовано, в то время как эти форменные элементы наиболее точно отражают уровень микроРНК в мегакариоцитах костного мозга.

Цель работы - разработка метода измерения уровня циркулирующей микроРНК miR-155 и оценка ее уровня в тромбоцитах венозной крови при ХМО.

Был обследован 51 пациент с диагнозом ХМО (34 с ИП, 9 с МФ, 6 с ЭТ), 8 здоровых добровольцев включены в группу контроля. Количественный анализ микроРНК miR-155 проводили в тромбоцитах, выделенных методом двухэтапного центрифугирования цельной крови. Выделение микроРНК из тромбоцитов проводили методом, разработанным в ИХБФМ СО РАН, лаб. Фармакогеномики (зав. к.б.н. Филипенко М.Л.) с использованием фенол-хлороформной экстракции. Для нормализации результатов использовали синтетическую ми-кроРНК cel-miR-39. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в режиме реального времени проводили на приборе Юус1ег iQ5 («Bio-Rad») c помощью оригинальных прямого и обратного праймеров, комплементарных соответствующим последовательностям кДНК, детекция результата проводилась с использованием TaqMan зондов, специфических к каждой микроРНК. Относительное содержание miR-155 в образцах вычисляли по методу ДС(.

В процессе отработки метода достигнута приемлемая для количественного анализа эффективность реакции: для miR-155 она составила 102%, для cel-miR-39 - 88%. Среднее значение Ct cel-miR-39 составило 24,8, коэффициент вариации

Ct между пробами составил 3%, что свидетельствует о хорошей воспроизводимости методики выделения РНК. Продемонстрировано, что в пробах плазмы крови всех обследованных циркулирующая miR-155 отсутствует, что соответствует данным, известным для здоровых пациентов. Уровень экспрессии микроРНК miR-155 в тромбоцитах статистически не отличался между группами, но среди пациентов с мутацией в гене JAK2 чаще, чем в других группах, наблюдались повышенные значения экспрессии miR-155. Оценка диагностического значения miR-155 при ХМО требует дополнительных исследований, в том числе определения ее экспрессии в отдельных форменных элементах.

В.А. Сумеркина, Вл.С. Чулков, В.С. Чулков, Е.С. Головне-ва. Состояние гемостаза у мужчин с избыточной массой тела и метаболическим синдромом. ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава РФ, Челябинск

Метаболический синдром (МС) характеризуется многочисленными изменениями обмена веществ - дислипидемией, гипергликемией, артериальной гипертензией, гиперурикеми-ей и относится к состояниям с повышенным риском тромбо-образования. Цель работы - исследовать состояние системы свертывания крови у молодых мужчин с избыточной массой тела и ожирением в сочетании с метаболическим синдромом. Изучали показатели плазменного, антикоагулянтного и фи-бринолитического звеньев гемостаза у мужчин при сочетании избыточной массы тела и МС (группа 1), при сочетании ожирения и МС (группа 2). Группа сравнения (группа 3) -мужчины без МС с индексом массы тела < 25,0 кг/м2.

У мужчин 1 группы установлено повышение концентрации фибриногена, РФМК и уровня Д-димера по сравнению с мужчинами без МС. В группе 2 выявлены изменения в плазменном звене (повышение уровня фибриногена) и фи-бринолитической системе (рост РФМК, замедление эугло-булинзависимого фибринолиза, повышение концентрации Д-димера и PAI-1). Уровень РФМК у мужчин 1 и 2 группы коррелировал с индексом массы тела (r = 0,67 и r = 0,63 соответственно), концентрация фибриногена при сочетании МС и ожирения была взаимосвязана с индексом массы тела (r = 0,60) и окружностью талии (r = 0,61). Обнаруженные изменения в системе гемостаза взаимосвязаны с уровнем адипоки-нов сыворотки крови - в группе 1 концентрация фибриногена коррелировала с содержанием адипонектина (r = -0,74), в группе 2 уровень лептина был взаимосвязан с концентрацией фибриногена и РФМК (r = 0,60 и r = 0,53 соответственно).

Э.Д. Сурдина, М.Я. Малахова, А.И. Каспина. Роль липо-протеидов в развитии воспаления у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки ротовой полости. ФГБОУ ВО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И.Мечникова» Минздрава РФ, Санкт-Петербург

Красный плоский лишай (КПЛ) - хроническое воспалительное заболевание, характеризующееся нарушениями кера-тинизации кожи и/или слизистых оболочек и сопровождающееся высыпанием папул. Заболевание часто проявляется на слизистой оболочке рта (КПЛ СОР). Этиология и патогенез изучены недостаточно. Лечение направлено, в основном, на подавление воспаления. По нашим данным гепатобилиар-ные расстройства и гиперхолестеринемия - основной фон, на котором развивается КПЛ СОР. Возникло предположение о том, что КПЛ СОР может быть инициирован появлением и активизацией модифицированных липопротеидов и апо-протеином В (апо В) - содержащих макрофагов в слизистой оболочке ротовой полости (по подобию развития атероскле-ротических бляшек).

Исследованы биоптаты слизистой оболочки щек 10 здоровых лиц и 15 больных КПЛ СОР. После фиксации и изготовления криостатных срезов проводили исследование

экспрессии маркеров методом непрямой иммуногистохимии с применением системы экстравидин-биотин-щелочная фос-фатаза. Для определения макрофагов, содержащих апо В и общего количества макрофагов CD68 использовали моно-клональные антитела и красители фирмы Sigma (США) и Novocastra(США). Подсчет клеток проводили на трех срезах в трех полях зрения под световым микроскопом «Leica DMLB».

СD68-позитивные и апо В-содержащие макрофаги были выявлены во всех препаратах собственной пластинки СОР. При КПЛ СОР они определялись под полосовидным лимфо-цитарным инфильтратом, являющимся одним из характерных гистоморфологических признаков этого заболевания. Однако, если в группе контроля и у больных с локализованной и малоинтенсивной формой КПЛ макрофаги, содержащие апоВ модифицированных липопротеидов определялись только в единичных количествах (0,8-3 клеток в одном поле зрения), то у больных с более тяжелыми формами заболевания количество таких же клеток и общее количество CD68 было большим (3,1-9 клеток в одном поле зрения). Безъядерные «пенистые» клетки ни в одном случае найдены не были, что может говорить о меньшем насыщении макрофагов апо-протеинами В в микроциркуляторном русле СОР в отличие от крупных сосудов.

Выводы:

1. Впервые, в результате иммуногистохимического исследования с использованием моноклональных антител, в слизистой оболочке рта у здоровых лиц (без КПЛ СОР) и у больных КПЛ СОР были выявлены макрофаги CD68, содержащие аполипопротеины В.

2. Тяжесть проявления воспалительного процесса КПЛ СОР коррелирует с количеством макрофагов CD68, содержащих апопротеины В.

3. Увеличение числа макрофагов, нагруженных липопро-теидами, указывает как на активизацию процессов, приводящих к появлению модифицированных липопротеидов (в частности, ПОЛ), так и на то, что апопротеины В модифицированных липопротеидов могут быть антигенами, способствующими развитию иммунопатологического процесса в слизистых оболочках и коже больных КПЛ с характерной гистоморфологической и клинической картиной.

Е.А. Тен. Фактор роста фибробластов первого типа у больных саркомами костей. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Известно, что дифференцировка остеобластов, основных клеток кости, находится под контролем факторов роста, среди которых факторы роста фибробластов (FGF). При этом, FGF первого и второго типа (FGF-1, FGF-2) принимают участие не только в дифференцировке остеобластов, но и в минерализации костной ткани. Дисбаланс в их экспрессии может быть одной из причин опухолевого роста. Экспериментальные исследования свидетельствуют о том, что клетки остеосаркомы человека U2OS способны экспрессировать FGF-2, а SaOS-2 -рецепторы, связывающие и FGF-1, и FGF-2. В экспериментах обнаружено, что FGF-2 оказывает супрессивное действие на рост опухолевых клеток, которые входят в состав саркомы Юинга и недифференцированной плеоморфной саркомы.

Цель настоящего исследования - сравнительный анализ содержания FGF-1 в сыворотке крови больных злокачественными, пограничными новообразованиями костей и у практически здоровых людей для выявления возможной взаимосвязи маркера с гистологическим строением опухоли.

Обследовали 58 пациентов с опухолями костей (остеосар-кома - 22, хондросаркома -14, саркома Юинга - 10, гиганто-клеточная опухоль кости (ГКО) - 6, недифференцированная плеоморфная саркома - 6) в возрасте от 14 до 59 лет. Группу

контроля составили 21 человек (практически здоровые люди соответствующего возраста). У всех больных опухоль кости выявлена впервые и подтверждена данными гистологического исследования. FGF-1 определяли ИФА реактивами фирмы «R&D» (США).

Частота выявления FGF-1 у практически здоровых людей была в 2,5 раза достоверно ниже, чем у пациентов с опухолями костей и составила 29% и 72% соответственно (p = 0,004). Значимый уровень FGF-1 выявлен у 6 практически здоровых людей и у 42 пациентов с опухолями костей. Средний уровень FGF-1 у здоровых людей составил 43,9±15,6 пг/мл (медиана - 26,1 пг/мл), а у пациентов с опухолями костей он был значительно выше, как по среднему содержанию, так и по медиане, и составил 75,6±13,9 и 54,3 пг/мл соответственно. Однако статистический анализ достоверных различий не выявил. Среди пациентов с опухолями костей FGF-1 выявлен в сыворотке крови у 17/77% больных остеосаркомой, 9/64% - хондросаркомой, 8/80% - саркомой Юинга, 6/100% - ГКО, 2/33% - ПНС. При остеосаркоме среднее содержание было равно 96,3±32,2 пг/мл, при хондросаркоме - 38,2±6,9 пг/мл, при саркоме Юинга - 71,2±12,4 пг/мл, при ГКО - 66,6±15,5 пг/мл. Только у двух больных ПНС уровень FGF-1 в сыворотке крови был отличен от нуля и равнялся 52,4 и 74,9 пг/мл. Достоверные различия получены только при сравнении средних показателей у больных остеосаркомой и хондросаркомой (p = 0,04). Следует отметить, что при остеосаркоме выявлены достоверные различия в содержании FGF-1 в сыворотке крови с учетом пола. У мужчин содержание этого фактора роста было в 2 раза достоверно ниже, чем у женщин (61,4±7,3 и 121,3 пг/мл соответственно; р = 0,034). При локализации опухоли в трубчатых костях уровень FGF-1 был выше, чем при локализации опухоли в плоских костях, 81,6±17,9 и 56,7±10,9 пг/мл соответственно, однако статистический анализ достоверных различий не выявил. У пациентов с опухолями костей содержание указанного фактора роста было достоверно выше у пациентов в возрасте до 30 лет (116,7±41,4 пг/мл), по сравнению с больными старше 50 лет (42,7±7,6 пг/ мл). Достоверных различий в содержании FGF-1 в сыворотке крови больных опухолями костей с их локализацией в плоских и трубчатых костях, а также с учетом размера опухоли не выявлено. Однако следует отметить, что при саркоме Юинга отмечено увеличение содержания FGF-1 с увеличением размера опухоли (r = 0,70, р = 0,081).

Таким образом, нами отмечено снижение концентрации FGF-1 в сыворотке крови больных опухолями костей с возрастом. При саркоме Юинга выявлена положительная корреляционная связь между размером опухоли и FGF-1. Уровни FGF-1 связаны с гистологическим строением сарком костей: при остеосаркоме FGF-1 достоверно выше, чем при хондросаркоме.

Ю.С. Тимофеев, Ю.Н. Соловьев, И.В. Булычева, Н.Е. Кушлинский. Система инсулиноподобного фактора роста в диагностике и прогнозе новообразований костей. ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Бло-хина» Минздрава РФ, Москва

Опухоли костей - редко встречающаяся группа новообразований, по сравнению с другими онкологическими заболеваниями. Эти опухоли поражают преимущественно пациентов детского возраста, отличаются крайне агрессивным клиническим течением и требуют комплексного подхода к лечению с использованием радикального хирургического удаления опухоли, лучевой терапии и химиотерапии. Влияние системы-ИФР на развитие новообразований костей изучали в ряде преклинических и клинических исследований. Остаются до конца не разработанными методы неинвазивной лабораторной диагностики и оценки прогноза опухолей костей с применением сывороточных уровней компонентов системы-ИФР.

В этой связи актуальным является дальнейшее изучение и внедрение эффективных лабораторных иммуноферментных и генетических маркеров, характеризующих систему-ИФР в диагностике и прогнозе первичных опухолей костей.

Цель настоящего исследования - оценка возможности использования компонентов системы-ИФР (ИФР-I, ИФР-II, ИФРСБ-1, ИФРСБ-3) в сыворотке крови больных новообразованиями костей для оптимизации их диагностики и прогноза.

В исследование включено 113 больных злокачественными, пограничными и доброкачественными новообразованиями костей. Опухоль у обследованных пациентов выявлена впервые и все они в период взятия образцов сыворотки крови не получали специфического лечения. В контрольную группу включили 50 практически здоровых людей соответствующего возраста и пола. В группу из 74 больных злокачественными опухолями костей вошли 47 мужчин и 27 женщин в возрасте от 15 до 69 лет со следующими гистологическими вариантами: остеосаркома (n = 25), хондросаркома (n = 21), саркома Юинга (n = 18), недифференцированная плеоморф-ная саркома (n = 5) и хордома (n = 5). Определение маркеров системы-ИФР проводили иммуноферментным методом «сэндвичевого типа» с помощью наборов реактивов фирмы «Diagnostic System Laboratories, Inc». (США).

Уровни ИФР-I в сыворотке крови больных злокачественными, пограничными и доброкачественными опухолях костей не различались, но достоверно отличались от контрольной группы. Уровни ИФР-II в сыворотке крови больных саркомами и пограничными опухолями достоверно превышали его показатели при доброкачественных новообразованиях и в контроле. Уровни ИФРСБ-1 не различались между группами больных саркомами костей, но отличались от контроля. Уровни ИФРСБ-3 в сыворотке крови при доброкачественных новообразованиях костей с высокой степенью достоверности превышали его медианы в группах больных пограничными и злокачественными опухолями костей, а также в контрольной группе. Медианы уровней ИФРСБ-3 в сыворотке крови пациентов со злокачественными и пограничными опухолями костей были также достоверно выше, чем в контрольной группе. Диагностическая чувствительность ИФР-I у пациентов мужского пола с остеосаркомой составила 84%, с хондросаркомой - 62,5%, с саркомой Юин-га - 75%, при специфичности 95%, что позволяет использовать ИФР-I для диагностики этих опухолей в данной гендерной группе. Диагностическая чувствительность ИФР-II достигала 75% при злокачественных опухолях костей при специфичности 88,8% вне зависимости от пола, при этом наибольшая чувствительность маркера имела место при хондросаркоме - 90% и саркоме Юинга - 77,8%. Сывороточные уровни ИФР-I > 243 нг/ мл были связаны с неблагоприятным прогнозом безрецидивной выживаемости больных хондросаркомой и общей выживаемости при саркоме Юинга; уровни ИФР-II > 1968 нг/мл - с менее благоприятным прогнозом при остеосаркоме; уровни ИФРСБ-1 > 31 нг/мл - с менее благоприятным прогнозом общей и безрецидивной выживаемости больных саркомой Юинга; уровни ИФРСБ-3 > 5845 нг/мл - с неблагоприятным прогнозом безрецидивной и общей выживаемости больных остеосаркомой и саркомой Юинга.

В.Н. Титов', В.Л. Эмануэль2. Патогенез атеросклероза активирован, когда филогенетически травоядные животные начинают в избытке поедать мясную (плотоядную) пищу. 'ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава РФ, Москва; 2ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова» Минздрава РФ, Санкт-Петербург

Согласно филогенетической теории общей патологии, избыточное потребление травоядными животными мясной пи-

щи приводит к формированию одновременно атеросклероза и атероматоза интимы артерий. Этиологическими факторами атеросклероза и атероматоза, которые сформировались на ступенях филогенеза, являются: а) поглощение травоядными животными насыщенных + ненасыщенных жирных кислот (НЖК + ННЖК ЖК) и полиеновые ЖК (ПНЖК) последовательно в составе ЛПНП путем апоВ-100 эндоцитоза; б) клетки плотоядных животных поглощают НЖК + ННЖК так же, как травоядные, но ПНЖК клетки поглощают по-иному, параллельно (независимо) в ЛПВП путем апоЕ/А-I эндоцитоза; в) клетки травоядных и Homo sapiens, не могут in vivo экзогенную, пальмитиновую НЖК превратить в олеиновую мононенасыщенную ЖК (МЖК); г) поздние в филогенезе моноциты^макрофаги слабо гидролизуют ПНЖК, которые этерифицированы спиртом холестерином в поли-ЭХС.

Патогенетическим фактором атеросклероза и атероматоза является влияние внешней среды, нарушение биологической функции трофологии (питания), биологической реакции эк-зотрофии (внешнего питания). Это - афизиологично высокое содержание в мясной пище пальмитиновой НЖК, пальмитиновых триглицеридов и спирта холестерина (ХС).

Ключевой этап патогенеза - избыточное содержание пальмитиновой НЖК, пальмитиновых ТГ и спирта ХС в составе пальмитиновых ЛПОНП не позволяет им физиологично осуществить оптимальный гидролиз триглицеридов и выставить на поверхность апоЕ/В-100 лиганд. В крови формируются безлигандные пальмитиновые ЛПОНП^ЛПНП, которые не могут поглотить зависимые от инсулина клетки путем апоЕ/В-100 эндоцитоза; за этим следует блокада поглощения клетками и ПНЖК путем апоВ-100 эндоцитоза.

Как в таких условиях: а) утилизировать in vivo массу без-лигандных, пальмитиновых ЛПОНП ^ ЛПНП; они «замусоривают» локальный пул внутрисосудистой среды, нарушают биологическую функций эндоэкологии - это основа патогенеза атероматоза;

б) как теперь клеткам продолжать функцию при невозможности поглощать из межклеточной среды полиеновые ЖК; это основа атеросклероза.

После физиологичной денатурации, опсонизации в крови и трансцитоза через монослой эндотелия, безлигандные пальмитиновые ЛПОНП ^ ЛПНП утилизируют в интиме артерий редкие оседлые макрофаги и большое количество моноцитов^макрофагов гематогенного происхождения; все они формируют биологическую реакцию воспаления в интиме артерий только эластического типа. Моноциты^макрофаги в малой мере экспрессируют синтез кислых гидролаз и не могут гидролизовать все поли-ЭХС; они превращают их в ате-роматозные массы - частично катаболизированные ПНЖК, поли-ЭХС.

Лишенные ю-6 и ю-3 ПНЖК - физиологичных субстратов для синтеза аминофосфолипидов, биологически активных эйкозаноидов (простациклины, тромбоксаны, лецкотиены и резольвины), клетки, активируя биологическую функцию адаптации, биологическую реакцию коменсации, начинают синтезировать все эйкозаноиды из ю-9 эндогенной ННЖК. Функцинально все они являются афизиологичными; дефицит в клетках ПНЖК, афизиологичная регуляция метаболизма и есть основа патогенеза атеросклероза.

Основа первичной профилактики инфаркта миокарда -прекращение потребления пациентами избыточного количества животной пищи. Физиологичная пища Homo sapiens состоит в основном из углеводов. Синтезированную in situ de novo из глюкозы пальмитиновую НЖК, инсулин полностью превращает в олеиновую МЖК; митохондрии окисляют ее с наиболее высокой эффективностью. При низком содержании в пище пальмитиновой НЖК, инсулин формирует оптимальный олеиновый вариант метаболизма ЖК, обеспечивая вы-

сокие «кинетические параметры» организма и эффективный синтез АТФ. Согласно единению патогенеза атеросклероза и атероматоза, не следует допускать образования в крови без-лигандных, пальмитиновых ЛПОНП. Не станет их в крови, не будет ни атеросклероза, ни атероматоза.

В.Н. Титов. Резистентность к инсулину - различие регуляции метаболизма в филогенетически ранних висцеральных жировых клетках сальника и поздних инсу-линзависимых подкожных адипоцитах. ФГБУ Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

Биологическое предназначение позднего в филогенезе гуморального медиатора инсулина состоит в обеспечении субстратами для наработки энергии биологической функции ло-комоции, движения за счет сокращения поперечнополосатых миоцитов. Инсулин призван реализовать эволюционное развитие - повысить кинетические параметры организма за счет эффективной наработки АТФ митохондриями. Субстратами же для синтеза АТФ являются в первую очередь экзогенные жирные кислоты, оптимальные эндогенные жирные кислоты, синтезированные из экзогенной глюкозы, и сама глюкоза. При действии инсулина клетки из глюкозы синтезируют ш-9 С18:1 олеиновую жирную кислоту; митохондрии окисляют ее с более высокой скоростью, чем экзогенную и эндогенно синтезированную С16:0 пальмитиновую жирную кислоту. При физиологичном действии инсулина и нормальной функции митохондрий наиболее частой причиной формирования резистентности к инсулину являются неоптимальные свойства экзогенных жирных кислот пищи для окисления их в митохондриях. Превышение в пище содержания пальмитиновой насыщенной жирной кислоты, над олеиновой мононенасыщенной жирной кислотой - условие формирования синдрома резистентности к инсулину. Основа синдрома резистентности к инсулину - хроническое состояние дефицита in vivo энергии, недостаточная продукция АТФ для реализации биологической функции адаптации, биологической реакции компенсации. Поздний в филогенезе инсулин эффективно ингибирует липолиз только в филогенетически поздних инсу-линзависимых подкожных адипоцитах, но не в более ранних в филогенезе висцеральных жировых клетках сальника. Несогласованность регуляции метаболизма субстратов энергии в разных депо жировых клеток in vivo на фоне кажущегося «относительного биологического совершенства» и составляет этиологическую основу резистентности к инсулину. Инсулин регулирует в первую очередь метаболизм жирных кислот и только во вторую - метаболические превращения глюкозы, инициируя кинетическое совершенство организмов.

И.Е. Трубицына1, А.С. Гуляев1 2, Л.В. Винокурова1, А.В. Смирнова1, М.В. Рудь1. Ацетилхолин и уровень холин-эстеразной активности в сыворотке крови у больных язвенной болезнью желудка, двенадцатиперстной кишки и хроническим панкреатитом алкогольной этиологии. 'Государственное бюджетное учреждение города Москвы Московский клинический научный центр Департамента Здравоохранения города Москвы (МКНЦ ДЗ г Москвы); 2Институт биологии гена РАН, Москва

В механизмах зарождения и развития болезней органов пищеварения и отдельных ее проявлений переплетено множество равных между собой факторов повреждения. Аце-тилхолин, являясь медиатором первого порядка, часто играет основную роль в поддержании патологического процесса. В тезисах представлены данные, полученные при определении концентрации ацетилхолина (АХ) и холинэстеразной активности (ХЭ) в сыворотке крови пациентов с язвенной болезнью желудка (ЯБЖ), язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБДК) и хроническим панкреатитом алкогольной (АХП) этиологии. Целью исследования было установить различия в

концентрации АХ и холинэстеразной активности ХЭ при разной локализации и стадии заболевания. В исследование были включены находившихся на лечении в ЦНИИ гастроэнтерологии МКНЦ - 150 больных ЯБЖ, 129 ЯБДК, 108 АХП этиологии с установленным сроком заболевания не меньше года, контрольная группа состояла из 30 добровольцев, регулярно проходящих диспансерный профилактический осмотр. У больных и в контрольной группе кровь брали натощак. Все группы были сопоставимы по возрастным и гендерным различиям. АХ и активность ХЭ в сыворотке крови определяли биохимическим методом Hestrin в собственной модификации (2004). Статистическую обработку результатов, полученных в группах контроля и больных, проводили с помощью непараметрического аналога дисперсионного анализа - теста Краскела-Уоллиса и теста множественных попарных сравнений Неменьи в программной среде для статистических вычислений R (пакеты «PMCMR» и «stats»). Обнаружены статистически значимые различия в концентрации Ах и активности ХЭ у больных АХП и ЯБДК, АХП и ЯБЖ, АХП и контролем, а также на стадиях ремиссии и обострения ЯБЖ и ЯБДК. Установлено, что в зависимости от концентрации Ах в сыворотке крови, практически здоровых лиц можно разделить на три группы: первая группа - с низким содержанием (0,46 до 1 ммоль/л, 60% случаев), вторая - со средним (1,02-1,5 ммоль/л, 30% случаев), третья - с высоким уровнем АХ (> 1,5 ммоль/л, 10% случаев). Острые и хронические заболевания гастродуоденальной зоны рассматривали и рассматривают как локальный патологический процесс. Это результат отсутствия комплексных знаний о биохимических, физиологических, гистохимических изменениях регуляторной деятельности. С накоплением данных стало очевидным, что подобное представление является неправильным. Появление локального повреждения это конечный этап нарушения механизмов регуляции физиологических процессов. Итогом является появление очагов воспаления с локализацией в желудке, двенадцатиперстной кишке, поджелудочной железе. Эндогенный АХ присутствует практически во всех тканях организма, участвует в передаче нервного импульса, помимо этого он действует на метаболические процессы клетки. Принимает участие в передаче нервного возбуждения в ЦНС, вегетативных узлах, окончаниях парасимпатических и двигательных нервов. Установлено, что концентрация АХ и активность ХЭ зависит от локализации и стадии патологического процесса.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Е.Г. Уфимцева1, Н.И. Еремеева2, М.А. Кравченко2, С.Н. Скорняков2. Оценка функционального статуса возбудителя туберкулеза в макрофагах организма-хозяина. 'ФАНО России СОМН ФГБНУ «НИИ биохимии», Новосибирск; 2ФГБУ «Уральский НИИ фтизиопульмонологии» Минздрава РФ, Екатеринбург

В основе развития туберкулеза лежит внутриклеточная персистенция M. tuberculosis (МБТ) в макрофагах организма-хозяина. Макрофаги участвуют в защитной реакции организма, направленной на уничтожение фагоцитированных инфекционных агентов, в том числе МБТ. Однако при заражении микобактериями в некоторых макрофагах не происходит слияния фагосом, содержащих МБТ, с лизосомами клетки-хозяина, в результате происходит выживание и размножение патогена.

Появление и распространение резистентных и мультире-зистентных форм МБТ значительно снизило эффективность существующих режимов химиотерапии туберкулеза, что привело к поиску новых средств его лечения и профилактики. Одним из эффективных подходов, используемых в лечении, туберкулеза является резекция пораженного участка легкого. Резецированные участки легких являются ценным источником информации, позволяющим провести верификацию диагноза и изучить биологические особенности возбудите-

ля туберкулеза, особенно в случаях, когда эта информация не была получена из респираторного материала, что крайне важно для выбора тактики после оперативного этапа лечения больного.

Для оценки зараженности МБТ тканей легкого больных туберкулезом обычно используется бактериологический метод. Этот метод дает только обобщенные данные о количестве МБТ в тканях, не позволяя судить об индивидуальной зараженности клеток человека и функциональном статусе возбудителя туберкулеза в них. Также он характеризуется значительной длительностью, из-за низкой скорости размножения МБТ сделать окончательные выводы о степени инфицированности тканей легкого можно только спустя 1-2 мес после посева. В организме человека МБТ находятся либо внутри клеток-хозяев, либо располагаются в воспаленной и некротизированной ткани, то есть в условиях, существенно отличающихся от хорошо аэрируемых жидких или твердых питательных сред. Соответственно, статус микобактерий в организме больного может существенно отличаться от наблюдаемого in vitro. В гистологических исследованиях тканей легкого из операционного материала больных также невозможно провести точный анализ содержания и функционального состояния M. tuberculosis в клетках-хозяевах из-за ограничений используемого метода.

Для диагностики туберкулеза активно применяются молекулярно-генетические методы, лишенные перечисленных недостатков и обладающие большей чувствительностью. Однако наличие ДНК МБТ в диагностическом материале не позволяет судить о жизнеспособности и метаболическом статусе МБТ, обитающих в клетках хозяина, поскольку известно, что ДНК может существовать достаточно длительное время, после разрушения клетки. Основные сведения о состоянии микобактерий и их метаболическом статусе в клетках-хозяевах получены исключительно в модельных экспериментах с инфицированием МБТ моноцитов крови человека и макрофагов перитонеальной полости мышей или клеток постоянных макрофагоподобных линий RAW 264.7, J774 мыши и THP-1 человека. Исследования показали, что популяции МБТ, растущих как в макрофагах, так и в бесклеточной среде, были морфологически и функционально гетерогенны и содержали бактерии, устойчивые к действию различных химиотерапевтических препаратов.

Следовательно, необходима технология, позволяющая проводить анализ взаимоотношений возбудителя с клетками-хозяевами больных различными формами туберкулеза, для возможной персонализированной корректировки схем лечения, прогноза течения туберкулезной инфекции в постоперационном периоде, эффективности химиотерапии и риска формирования лекарственной устойчивости возбудителя.

Т.А. Ушакова, А.А. Алексеев, В.С. Демидова. Экспрессия м-РНК маркеров СК при тяжелой ожоговой травме. ФГБУ «Институт хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава РФ, Москва

В период бурного развития регенеративной медицины с внедрением в клинику технологий стволовых клеток (СК) актуальны исследования по выявлению показаний к применению данных методов. Для тяжелой ожоговой травмы характерно стремительное развитие системного клеточного дефицита, лежащего в основе угнетения адаптивного воспаления, полиорганной недостаточности и сепсиса.

Цель - мониторинг м-РНК маркеров СК периферической крови при тяжелой ожоговой травме. Периферическая кровь тяжелообожженных пациентов с неблагоприятным прогнозом, но благоприятным или летальным исходом. Полиме-разную цепную реакцию в реальном времени проводили с использованием специфических праймеров к ДНК транскрипционных факторов HIF-1a, MIF-1a и h-TERT, маркеров

СК: Sox-2, Oct-4, Nanog, CD34, l05, l33 - на отечественном анализаторе нуклеиновых кислот АНК-32 с использованием реактивов фирмы «Синтол». Для благоприятного исхода характерно адаптивное повышение экспрессии всех факторов транскрипции, максимальное - фактора гипоксии (HIF-la). А также раннее (ч/неделю после травмы) проявление экспрессии CDl05 (маркера ММСК), которое сохранялось в течение месяца: 0,l9%, 0,2%, 3,6%; значительная однократная экспрессия (до 6% от экспрессии ß-актина) CD34 (маркера ГСК) ч/неделю после травмы; выраженная экспрессия маркера плюрипотентности Sox-2 до 4,78% через l,5 месяца после травмы. При неблагоприятном исходе уже на 3 сутки после травмы отмечено угнетение экспрессии всех исследуемых маркеров, за исключением HIF-la (47%), на фоне проявления экспрессии маркера плюрипотентности Oct-4 (2,28%).

Таким образом, пластические репаративные процессы при тяжелых ожогах начинаются практически сразу после травмы и затрагивают пул плюрипотентных стволовых клеток. При этом для благоприятного исхода характерно превалирование экспрессии маркеров тканевых СК с «поздним» проявлением плюрипотентной активности. При неблагоприятном прогнозе и исходе наступает раннее истощение клеточного пула, обуславливающее «раннюю» мобилизацию плюрипотентных клеток, что является основанием для проведения заместительной клеточной терапии, вплоть до применения донорских ММСК.

Г.А. Цаур1,2 34, А.Е. Друй5, А.Г. Солодовников2 3, А.М. Попов5, Е.В. Шориков6, Л.В. Вахонина1, 2, О.Р. Аракаев1, 2, А.П. Шапочник7, Л.Г. Фечина', Л.И. Савельев1,22,3, С.В. Цвиренко1,2. Отрицательное прогностическое значение делеции гена IKZF1 у детей с острым лимфобластным лейкозом из B-линейных предшественников (ВП-ОЛЛ). Юбластная детская клиническая больница № l, Екатеринбург; 2Инсти-тут медицинских клеточных технологий, Екатеринбург; 3Уральский государственный медицинский университет, Екатеринбург; 4Уральский федеральный университет им Первого президента России Б.Н. Ельцина, Екатеринбург; 5ФНКЦ Детской гематологии, онкологии и иммунологии им Д. Рога-чева, Москва; 6Морозовская детская городская клиническая больница, Москва; 7Оренбургский областной клинический онкологический диспансер, Оренбург

Цель исследования - оценить прогностическое значение делеций IKZF1 у детей с ВП-ОЛЛ, получающих лечение по протоколу ALL-MB 2008. В исследование включено l42 пациента с ВП-ОЛЛ, получавших лечение по протоколу ALL-MB 2008 с апреля 2008 г. по октябрь 20l3 г. В исследуемой группе было 75 мальчиков (52,8%) и 67 девочек (47,2%) с медианой возраста 3,l5 года (диапазон l,l-l6 лет). Определение делеций в гене IKZF1 проводили методом множественной лигазной амплификации зондов c использованием наборов «SALSA MLPA P335 ALL-IKZFl» и «SALSA MLPA P202 IKZFl (IKAROS)» (оба MRC-Holland, Нидерланды) согласно инструкции производителя. Делеции в гене IKZF1 выявлены у l5 (l0,6%) пациентов. Пациенты, у которых выявлены делеции были достоверно старше остальных (медиана возраста 9,7 и 3,2 лет соответственно, p = 0,007), они чаще относились к группе высокого риска протокола ALL-MB 2008 (53,3% и 5,5% соответственно,p < 0,00l) и группе высокого риска NCI (66,7% и 28,4% соответственно, p = 0,007). У пациентов с де-лециями IKZF1 чаще выявлялись инициальный лейкоцитоз выше 30 ■ Ю9/Л (60,0 и 2l,3% соответственно, p = 0,007) и транслокация t(9;22)(q34.qll)/BCR-ABL1 (l3,3 и 0% соответственно, p = 0,003). Наличие делеций IKZF1 сопровождалось замедленным клиренсом опухолевых бластов: М3 статус костного мозга на 15-й день индукционной терапии выявлялся у них чаще, чем у пациентов без делеций (40 и 9,4% соответственно, p = 0,003), также чаще выявлялся высокий уро-

вень минимальной остаточной болезни (МОБ) на 15-й, 36-й и 85-й дни терапии (p = 0,014, p < 0,001, p = 0,001 соответственно). Кроме того, при наличии делеций IKZF1 4 пациента (26,7%) не достигли клинико-гематологической ремиссии к 36-му дню индукционной терапии, что было достоверно чаще, чем в группе без делеций (2,4%, p < 0,001). Пациенты с делециями гена IKZF1 имели достоверно более низкую бессобытийную выживаемость (БСВ) (0,30±0,15 и 0,89±0,03 соответственно, p < 0,001), что в первую очередь было обусловлено более высокой кумулятивной вероятностью развития рецидивов в этой группе (0,67±0,18 и 0,07±0,02 соответственно, p < 0,001). Проведение многофакторного анализа выявило только три прогностически значимых показателя в исследуемой группе: делеции IKZF1 (Отношение опасности (ОО) 15,214 (95% ДИ 2,045-13,292) p = 0,001), инициальный лейкоцитоз выше 50 ■ 109/Л (ОО 3,273 (95% ДИ 1,264-8,476) p = 0,015) и более 25% бластов на 15-й день терапии (ОО 2,711 (95% ДИ 1,612-4,559), p < 0,001). Важно подчеркнуть, что в общей группе пациентов МОБ, оцениваемая на 15-й, 36-й и 85-й дни терапии, утрачивала свое прогностическое значение у пациентов с ВП-ОЛЛ. В то же время, среди пациентов с делециями IKZF1, несмотря на малое количество наблюдений, результаты определения МОБ на 36-й и 85-й дни терапии также позволяли разделить больных на группы с разным прогнозом. Так, при величине МОБ менее 0,1% на 36-й день БСВ составила 0,67±0,27, тогда как при более высокой МОБ - 0 (р = 0,046). Также величина МОБ на 36-й день более 0,1% сохраняла негативное прогностическое значение и в IKZFl-негативной группе (БСВ 0,76±0,12 и 0,97±0,02 соответственно, р = 0,016). При любом позитивном результате на 85-й день БСВ также была существенно ниже (БСВ 0 и 0,69±0,19 соответственно, р = 0,036). В ходе проведенного нами анализа было показано, что делеция гена IKZF1 является независимым фактором, ухудшающим прогноз ВП-ОЛЛ у детей, получавших лечение по протоколу ALL-MB 2008. Хотя пациенты с делециями IKZF1 имели более медленный ответ на терапию ОЛЛ по протоколу ALL-MB 2008, тем не менее, прогноз пациентов в большей степени зависел от наличия делеций IKZF1, нежели от величины МОБ на 15-й, 36-й и 85-й дни терапии.

С.В. Цвиренко,1, В.Н. Мещанинов1, Т.Ю. Вержбицкая1, 2. Цитобиохимические показатели у пациентов с хронической полиморбидной патологией в стадии ремиссии при воздействии пептидов. 'ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава РФ; 2ГАУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий», Екатеринбург

Целью работы было оценить возможности клеточно-метаболической адресно-ориентированной на ЦНС составляющей геропрофилактического механизма действия трипептидов H-лизил-глутамил-аспарагина и H-глутамил-аспарагил-аргинина в отдельности и сочетанно с целью коррекции биологического возраста у пациентов с хронической полиморбидной психоорганической патологией в стадии ремиссии.

Установлено, что биохимические пути реализации эффектов двух изученных трипептидов, представляются различными. Так метаболическая ситуация в периферической крови пациентов, принимавших H-глутамил-аспарагил-аргинин, характеризовалась белковым и парциальным липидным анаболизмом липопротеинов очень низкой плотности, а также гиполактацидемией, что в этих условиях, скорее всего, свидетельствовало об активации аэробного катаболизма и могло способствовать энергообеспечению синтетических процессов. В случае с H-лизил-глутамил-аспарагином мы можем утверждать лишь о сохранении стабильности клеточных мембран по показателю аспартатаминотрансферазы, не-

смотря на некоторую активацию оксидативных процессов в крови по показателю хемилюминесценции. Оба трипептида продемонстрировали улучшение некоторых функциональных показателей организма, что в конечном итоге, привело к замедлению темпов старения по показателям биологического возраста, более выраженному после воздействия H-лизил-глутамил-аспарагина (-11,8%, p < 0,001) и особенно при соче-танном приеме обоих трипептидов (-22,3%,p < 0,001). После приема трипептидов в обеих группах снижался по сравнению с исходным значением маркер гемопоэтических полипо-тентных стволовых клеток в периферической крови CD34+ (H-лизил-глутамил-аспараги -11,1%, р < 0,05; H-глутамил-аспарагил-аргинин -23,8%). Это свидетельствует об уровне стимуляции адаптивных систем организма, не затрагивающих систему гемопоэза в обсуждаемых нами условиях изменившегося метаболизма, при которых были задействованы лишь его метаболические и психофизиологические звенья, чего оказалось достаточно для достижения геропрофилакти-ческого эффекта.

Трипептиды H-лизил-глутамил-аспарагин и H-глутамил-аспарагил-аргинин обладают значительным анаболическим эффектом, улучшают деятельность ЦНС и других жизненно важных органов, что приводит к замедлению темпов старения по показателям биологического возраста, более выраженному в случае использования H-лизил-глутамил-аспарагина и при сочетанном применении обоих пептидов.

Н.А. Цыган, Н.Г. Дубинина. Анализ применения проточной цитометрии в лабораторной диагностике острых лейкозов у взрослых пациентов. ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер № 1» Минздрава КК, Краснодар

Проведен ретроспективный анализ 347 фенотипов взрослых больных острым лейкозом. Результаты лабораторной диагностики острых лейкозов показали, что морфологический и цитохимический анализ бластных клеток вызывал затруднения в 25,0% случаев. Диагностика методом многоцветной проточной цитометрии позволила не только верифицировать виды острых лейкозов почти во всех случаях, но и определить варианты лейкоза. Структура выполненых исследований выглядит следующим образом: преобладали острые миелоидные лейкозы (73,5%), острые лимфобластные лейкозы составили 25,1%, и только в 1,4% случаев не удалось установить вид острого лейкоза, так как бластные клетки не несли на себе никаких линейных маркеров.

Установлена структура вариантов острых миелоидных лейкозов взрослого населения Краснодарского края согласно ФАВ (Франко-американо-британской) классификации. При этом наибольшее количество случаев в совокупности представлено вариантами М1-М2 (47,8%). Самым редким оказался мегакариоцитарный вариант, он встретился один раз за исследуемый период (0,4%), был один случай биклонального лейкоза - 0,4% и один случай бифинотипического миелолим-фолейкоза - 0,4% - варианты, требующие специального подхода при выборе тактики лечения.

Острые лимфобластные лейкозы взрослых пациентов Краснодароского края распределены согласно EGIL классификации, разработанной Европейской группой по иммунологической характеристике лейкемии (European group for the immulogical characterization of leukemiac). Среди лимфо-лейкозов большая часть представлена острыми лейкозами В-клеточной направленности, которые в совокупности составили 75,6%, и 21,4% составили лейкозы Т-клеточной линейной направленности.

Показано, что определение поверхностных и внутриклеточных антигенов методом проточной цитометрии позволяет выявлять дополнительные критерии прогноза, аберрантную коэкспрессию маркеров, фенотип опухолевого клона при рецидивах, минимальную остаточную болезнь.

В результате внедрения проточной цитофлуориметрии в комплекс исследований гематологических больных значительно улучшилась лабораторная диагностика острого лейкоза.

И.С. Черномаз, И.В. Бабкина, А.В. Бондарев, М.Ю. Щу-пак, Ю.Н. Соловьев. Содержание матриксных металлопро-теиназ в сыворотке крови больных саркомами костей.

ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава РФ, Москва

Изучение экспрессии опухолями биологически активных веществ актуально не только для поиска новых потенциальных мишеней химиотерапии, но и в оценке прогноза заболевания.

Цель настоящего исследования - сравнительное изучение содержания металлопротеиназ - ММП-2, -7, -9 и их тканевого ингибитора ТИМП-1 в сыворотке крови больных первичными злокачественными новообразованиями костей и практически здоровых людей для выявления возможной их взаимосвязи с гистологическим строением опухоли и прогнозом заболевания.

Проведено сравнительное изучение содержания металло-протеиназ ММП-2, -7, -9 и их тканевого ингибитора ТИМП-1 в сыворотке крови 54 больных первичными опухолями костей (злокачественные - 4: типичная остеосаркома (21), пе-риостальная остеосаркома (4), саркома Юинга (11), первичная хондросаркома (6), недифференцированная плеоморф-ная саркома (3), пограничные - гигантоклеточная опухоль кости (ГКО) - 9) и 26 практически здоровых людей имму-ноферментным методом с помощью реактивов «Biosource» (США) для ТИМП-1 и «R&D» (США) для ММП-2, ММП-7, ММП-9.

На основании анализа полученных данных обнаружено, что уровни ТИМП-1 при типичной остеосаркоме и особенно при периостальной остеосаркоме были достоверно выше, чем у практически здоровых людей. Различий в содержании ТИМП-1 в сыворотке крови с учетом пола, возраста, локализации и размера первичной опухоли не обнаружили. Не отмечено связи сывороточных уровней ТИМП-1 с показателями общей 5-летней выживаемости при саркомах костей, и в частности, при остеосаркоме.

Не выявлено достоверных различий в содержании ММП-2 в сыворотке крови у практически здоровых людей и больных опухолями костей, а также при сравнении значений с учетом гистологического строения опухоли. У пациентов с саркомами костей общая 5-летняя выживаемость при содержании ММП-2 > 160 нг/мл в сыворотке крови, была в 1,5, а при остеосаркоме в 1,6 раза выше, чем при более низких значениях ММП-2.

Достоверных различий в содержании ММП-7 в сыворотке крови у практически здоровых людей и больных опухолями костей не выявлено. При сравнении значений маркера с учетом гистологического строения опухоли достоверные различия отмечены только при сравнении больных ГКО и саркомой Юинга (p = 0,046). Общая 5-летняя выживаемость при остео-саркоме достоверно не отличалась от показателей в общей группе и составила 55% при низких уровнях ММП-7 < 2,95 нг/мл и 57% при высоких значениях ММП-7 > 2,95 нг/мл.

У больных злокачественными опухолями костей содержание ММП-9 в сыворотке крови было достоверно ниже, чем у практически здоровых людей. Выявлена прямая корреляционная связь между содержанием ТИМП-1 и ММП-9 в сыворотке крови при типичной остеосаркоме, периосталь-ной остеосаркоме и саркоме Юинга.

Не выявлено достоверных отличий в показателях общей 5-летней выживаемости при саркомах костей, и в частности, при остеосаркоме с учетом содержания ТИМП-1 и ММП-2, -7, -9 в сыворотке крови. Однако, при остеосаркоме общая

5-летняя выживаемость при содержании ММП-2 > 160 нг/ мл в сыворотке крови, была в 1,6 раза выше, чем при более низких значениях ММП-2, а при ММП-9 < 377 нг/мл - в 1,4 раза выше, чем при ММП-9 > 377 нг/мл. Минимальные показатели общей 5-летней выживаемости (33%) выявлены у пациентов со следующими уровнями исследуемых протеи-наз ММП-2 < 160 нг/мл и ММП-9 > 377 нг/мл - 33%.

Полученные данные позволяют предположить, что экспрессия ММП-2, ММП-9 и ТИМП-1 может иметь связь с ростом и метастазированием сарком костей, и в частности остеосаркомы, и может служить предметом дальнейших исследований по определению уровней этих показателей и их значимости в прогнозе злокачественных новообразований костей.

О.О. Черняк, Т.Б. Сенцова, И.В. Ворожко. Состояние ренин-ангиотензин-альдостероновой системы у больных с артериальной гипертензией при различных генотипах FokI гена VDR. ФГБУН ФИЦ питания и биотехнологии, Москва

Многочисленные данные клинических исследований показали, что витамин D оказывает влияние на транскрипцию генов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, способствуя развитию сосудистой резистентности и эндотелиальной дисфункции, что обуславливает актуальность исследования полиморфизма гена рецептора витамина D у больных артериальной гипертензией. Целью исследования явилось изучения состояния ренин-ангиотензин-альдостероновой системы у больных с артериальной гипертензией при различных генотипах FokI гена VDR. В исследование были включены 80 больных артериальной гипертензией (48 мужчины и 32 женщины) с артериальной гипертензией в возрасте 38±2,8 лет. Для выделения ДНК использовали набор реагентов «Проба-Рапид-Генетика» фирмы «ДНК-Технология» (Россия). Анализ полиморфного маркера FokI T>C (rs10735810) гена VDR проводили методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием наборов реагентов фирмы «ДНК-технология» (Россия). Исследование содержания ренина, ангиотензина-II и альдостерона проводили методом иммуноферментного анализа с использованием наборов фирмы «RayBiotech Inc.» (США). Проведенное исследование показало, что содержание ренина в плазме крови было статистически достоверно выше у больных артериальной ги-пертензией - носителей гомозиготного генотипа СС в локусе FokI гена VDR (13,82±6,53 пг/мл) по сравнению с носителями гетерозиготного генотипа СТ (3,23±0,98; p < 0,05) и гомозиготного генотипа «дикого типа» ТТ в локусе FokI гена VDR (3,36±0,52; p < 0,05). Исследование уровней ангиотензина-II и альдостерона не выявило достоверных различий у больных артериальной гипертензией с различными генотипами FokI гена VDR. Таким образом, полиморфные генотипы FokI гена VDR могут рассматриваться в качестве прогностических маркеров артериальной гипертензии.

В.Н. Шабалин', Д.С. Уварова', С.Н. Шатохина2. Структуры неклеточных тканей в оценке факторов увеличения продолжительности жизни. 'ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии», Москва; ТБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт», Москва

Для оценки функциональных способностей организма стареющего человека необходимо получение интегральной характеристики возрастной динамики гомеостаза в целом, а также об особенностях функционирования отдельных его органов и систем. В этом плане перспективным является привлечение новых диагностических технологий в оценке системного взаимодействия множества факторов в организме стареющего человека для выявления патологических отклонений, приводящих к укорочению сроков жизни, а также

для выявления особенностей функционирования жизненно важных систем организма долгожителей как наиболее приспособленных к изменяющимся условиям окружающей среды.

Методом клиновидной дегидратации (раздел технологии Литос-система) обобщены результаты анализа структурных параметров биологических жидкостей (сыворотка крови, моча, ротовая жидкость) 240 пациентов трех возрастных групп по 60 человек в каждой: пожилого, старческого возраста и долгожителей; контрольную группу составили 60 здоровых пациентов среднего возраста. У всех пациентов старших возрастных групп диагностирован атеросклероз и его осложнения, а также ряд других хронических возрастассоциирован-ных видов патологии. Критериями отбора пациентов являлись: определенный возраст, отсутствие остро протекающих патологических процессов, а также информированное согласие на обследование.

По системной организации фаций сыворотки крови пациентов старших возрастных групп установлено, что высокая степень выраженности маркера хронической эндогенной интоксикации указывает на снижение функциональной активности организма, которая у долгожителей определялась почти в шесть раз реже (15%), чем у представителей группы старческого возраста (85%) и была сопоставимой с группой людей пожилого возраста (20%). О сохранности физиологического состояния организма и наличии адаптационных резервов свидетельствует гармоническое построение фации и четкая организация ее локальных структур, которая отмечена у 90% долгожителей при 100% в группе здоровых людей среднего возраста, 78,4% - у пожилых и 41,7% представителей старческого возраста.

Системная организация структуры фаций мочи, указывающая на высокий уровень нейтрализации токсических продуктов (минерализация органического детрита), установлена у 100,0% долгожителей (так же, как и в группе представителей среднего возраста), у 96,7% пациентов в группе пожилых и лишь у 30% пациентов старческой возрастной группы.

Физиологическая системная организация фаций ротовой жидкости в виде четкого разделения органических и минеральных структур отмечалась в группе долгожителей в 100% случаев (как и в группе представителей среднего возраста), у пожилых - в 61,7%, а в группе представителей старческого возраста - в 27,6% случаев; это указывало на активную минерализацию органического детрита ротовой жидкости у долгожителей, что блокировало его токсическое действие на организм.

Комплексное морфологическое исследование системной организации сыворотки крови, мочи и ротовой жидкости у пациентов старших возрастных групп в процессе персонифицированного диспансерного наблюдения позволит: дать объективную оценку функционального состояния организма, оценить эффективность выведения из организма продуктов катаболизма, выбрать оптимальный вид корригирующей терапии при различных патологических состояниях.

Е.А. Шипицына, Л.А. Пестряева, С.В. Борисова, Н.Е. Рукосуев. Особенности обмена белка при неразвивающейся беременности. ФГБУ «НИИ охраны материнства и младенчества» Минздрава РФ, Екатеринбург

Цель исследования: выявление особенностей белкового обмена при неразвивающейся беременности. Были обследованы 80 женщин в 1 триместре беременности: 35 женщин с неосложненным течением беременности - основная группа (I), 45 женщин с неразвивающейся беременностью -группа сравнения (II). Контрольная группа (III) - 20 здоровых небеременных женщин. Биохимическое исследование сыворотки венозной крови выполнено на автоматическом

анализаторе с помощью унифицированных тест-систем. Статистический анализ полученных данных выполнен с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 7.0», проверку статистических гипотез осуществляли с помощью /-критерия Стьюдента. Разницу считали достоверной при р < 0,05.

Проведенное исследование выявило достоверное снижение количества общего белка и альбумина у беременных женщин обеих групп по сравнению с небеременными. Концентрация общего белка составила в среднем 75,11±1,11 г/л в контрольной группе (III), в основной группе (I) - 67,76±0,49 г/л (p < 0,001), в группе сравнения (II) - 69,94±1,41 г/л (p

< 0,05 как с группой I, так и с группой III). Аналогичная динамика наблюдалась и по альбумину: достоверное (p < 0,001) снижение концентрации альбумина в основной группе (45,51±0,25 г/л) и в группе сравнения (44,27±0,79 г/л) по отношению к контрольной группе (48,28±0,58 г/л). Однако, несмотря на снижение общего количества, соотношение альбумин/общий белок было достоверно выше в группе женщин с физиологически протекающей беременностью (p

< 0,05) по отношению к контрольной группе и группе сравнения, которые между собой не различались (0,67, 0,64 и 0,64 соответственно). Среднее значение мочевины у женщин I и II групп примерно на 30% ниже, чем в контрольной (p < 0,001 для обеих групп). Достоверных различий по концентрации мочевины между I и II группами выявлено не было.

В группе I наблюдалось достоверное (p < 0,05) снижение креатинина (57,33±1,19 мкмоль/л) по отношению к обеим группам, в то время как содержание креатинина во II группе беременных женщин не отличались от группы небеременных.

Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови достоверно снижалась у беременных женщин (p < 0,001 для обеих групп) по отношению к контрольной группе, при этом достоверных различий между I и II группами не было.

Таким образом, при физиологическом развитии беременности белковый обмен заметно изменяется: уже в первом триместре наблюдается достоверное снижение всех показателей белкового профиля - общего белка, альбумина, мочевины, креатинина, мочевой кислоты по сравнению с небеременными, при этом все показатели оставались в пределах нормального диапазона. Такая динамика может свидетельствовать об усилении пластических (анаболических) процессов. Как известно, в этот период в тканях беременных активизируются процессы биосинтеза белков, и усиливается синтез липидов из глюкозы в жировых депо. У пациенток группы сравнения (с неразвивающейся беременностью) эти изменения менее выражены, а по некоторым параметрам (креатинин, соотношение альбумин/общий белок) не отличаются от контрольной группы.

Н.А. Щелчкова12, М.В. Ведунова2', А.А. Кокая', К.А. Терен-тьева', М.А. Косарева', О.В. Халецкая'. Информативность определения нейротрофических факторов и нейронспе-цифической енолазы в плазме крови новорожденных с перинатальным гипоксическим поражением центральной нервной системы. ТБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Минздрава РФ, Нижний Новгород; 2ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород

Гипоксическое поражение головного мозга в перинатальном периоде представляет собой важную медико-социальную проблему. Однако у новорожденных не всегда возможно объективно оценить состояние ЦНС, так как тяжесть поражения часто не соответствует клинической симптоматике. Перспективным направлением ранней диагностики церебраль-

ных повреждений является иммунохимическое определение специфических белков нервной ткани в крови.

К нейроспецифическим белкам, имеющим ключевое значение для функционирования головного мозга, относят: BDNF (нейротрофический фактор головного мозга), GDNF (глиальный нейротрофический фактор) и внутриклеточный фермент NSE (нейронспецифическая енолаза).

Цель работы - оценить информативность определения BDNF, GDNF и NSE в плазме крови новорожденных с перинатальным гипоксическим поражением центральной нервной системы (ЦНС).

Исследовалась концентрация нейрональных белков в плазме крови новорожденных от матерей с патологическим течением беременности и получивших низкую оценку по шкале Апгар на 5-й минуте после рождения (ниже 7), что является признаками внутриутробной гипоксии плода (группа 1). Вторую группу составили младенцы с судорожными состояниями. В группу 3 вошли дети с признаками тяжелого перинатального поражения ЦНС. Тяжесть поражения ЦНС устанавливалась на основании данных осмотра, оценки динамики неврологического статуса и данных нейросонографического обследования. Контрольную группу составили здоровые новорожденные.

Содержание нейротрофических белков определяли в плазме крови с помощью иммуноферментного анализа коммерческими наборами фирмы R&D System (США), а NSE (Вектор-Бест, Россия).

Обнаружены достоверные изменения концентрации исследуемых нейротрофических факторов при различных патологиях ЦНС. У детей группы 1 выявлено достоверно низкое содержание BDNF (3,70±0,16 нг/мл) по сравнению с контрольной группой (4,20±0,10 нг/мл, р < 0,05), снижение уровня BDNF может рассматриваться как неблагоприятный признак, связанный с низким уровнем адаптации. В плазме крови новорожденных с судорожными состояниями установлено достоверное увеличение концентрации №Е относительно контроля (23,75±5,49 и 10,12±1,27 нг/мл соответственно, р < 0,05), что свидетельствует о гибели большого числа нейронов головного мозга при развитии судорог. У младенцев с признаками тяжелого перинатального поражения ЦНС обнаружено низкое содержания в крови GDNF по сравнению с контрольными значениями (6,43±0,63 пг/мл и 9,55±0,66 пг/мл соответственно, р < 0,05), что может быть обусловлено угнетением процессов роста нервной ткани после перенесенной тяжелой гипоксии.

Полученные данные показали, что определение уровня нейроспецифических белков в плазме крови, может быть использовано в клинической неонатологии в качестве информативного теста для диагностики тяжести поражения ЦНС. Разнонаправленность изменений концентрации маркерных белков может рассматриваться как диагностический, а в ряде случаев и прогностический критерий поражения ЦНС после перенесенного перинатального гипоксического повреждения.

ЗАЛ«ПИРОГОВ»

ДИАЛОГ КЛИНИКИ И ЛАБОРАТОРИИ (Практические вопросы использования результатов лабораторных исследований в клинической практике: назначение, трактовка, принятие клинических решений; эффективные биомаркеры при различных видах патологии)

Р.Ю. Абдуллаев1, О.Г. Комиссарова1 3, Е.С. Чумакова2, В.С. Одинец2. Мониторинг уровня мочевой кислоты в сыворотке крови у больных впервые выявленным МЛУ туберкулезом легких в процессе лечения. 'ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва; 2ГУЗ «Краевой клинический противотуберкулезный диспансер», Ставрополь; 'Российский национальный исследовательский медицинский университет (РНИМУ) им. Н.И. Пирогова, Москва

При лечении впервые выявленного МЛУ туберкулеза легких больные длительное время в составе режима ХТ принимают пиразинамид, который повышает уровень мочевой кислоты (МК) в сыворотке крови. Изучение частоты и выраженности гиперурикемии в процессе лечения этой категории пациентов представляет большой интерес.

Цель: изучение закономерностей изменения уровня мочевой кислоты в сыворотке крови у больных впервые выявленным МЛУ туберкулезом легких до начала и в процессе лечения.

Обследовано 134 больных туберкулезом легких (78 мужчин и 56 женщин) в возрасте от 18 до 75 лет. Определение уровня мочевой кислоты проводили на биохимическом анализаторе со стандартными наборами. Исследование проводили при поступлении больных в клинику и затем повторно - через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 месяцев лечения (интенсивная фаза).

Поскольку нормальные значения мочевой кислоты у здоровых мужчин и женщин существенно различаются, обработку результатов, полученных при исследовании больных тубер-

кулезом легких, проводили раздельно для мужчин и женщин. При анализе частоты различных отклонений от нормы среди больных туберкулезом легких выявилось, что исходно повышение уровня МК наблюдалось у 22 (28,2%) мужчин и у 21 (37,5%) женщины. Низкие по сравнению с нормой значения содержания МК до начала лечения наблюдали только у 10 (12,8%) мужчин. Было установлено, что до начала лечения режимом ХТ, включающим пиразинамид, средние значения МК как у мужчин, так и у женщин достоверно превышали нормальные значения (соответственно у мужчин 577,3±20,6 при норме 309±10,7 мкмоль/л; р < 0,01 и у женщин 415,2±12,2 при норме 240,5±9,8 мкмоль/л;р < 0,01). Амплитуда индивидуальных значений МК была значительно шире у мужчин (133-879 мкмоль/л), чем у женщин (347-498 мкмоль/л). Динамический анализ проводили раздельно у больных с исходно повышенными и нормальными значениями МК. Было установлено, что у больных с изначально повышенными значениями уровня МК, ее содержание в крови резко растет в течение первого месяца лечения. Начиная со второго месяца лечения, концентрация МК начинает достоверно снижаться, выходя к 4-му месяцу на плато в 1,6 раз превышающее нормальные значения, как у мужчин, так и у женщин. Анализ динамики изменений уровня МК у больных с исходно нормальными значениями показал, что первичные случаи повышения уровня МК наблюдались на протяжении всего периода (8 мес) лечения, как у мужчин, так и у женщин. При этом у мужчин гиперурикемия чаще наблюдалась в течение первых 2-х месяцев лечения (соответственно 23,2 и 10,7%). Начиная с 3-го месяца, число больных с пер-

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.