CC BY
24
ФАРМАКОЛОГИЯ. ТОКСИКОЛОГИЯ
УДК 615.451.16:615.24:615.322:616.379-008.64-085.24
ИССЛЕДОВАНИЕ ХРОНИЧЕСКОЙ ТОКСИЧНОСТИ НОВОГО АНТИДИАБЕТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ГИМНЕМЫ ЛЕСНОЙ «ДИА-р»
А. А. Спасов, Л. И. Бугаева, М. П. Самохина, А. Е. Буланов *
Кафедра фармакологии, НИИ фармакологии ВолгМУ, * Российский НИИ здоровья, г. Москва
В статье приводятся данные по изучению хронической токсичности нового антидиабетического препарата «Диа-р». Состояние гомеостаза оценивали с помощью функциональных, гематологических, биохимических и пато-морфологических методов. Выявлено, что шестимесячное применение препарата «Диа-р» в терапевтической и субтоксической дозах способствует достоверному снижению уровня глюкозы в крови, массы тела экспериментальных животных и уменьшению площади урежения и частичной потери шерстного покрова. Кроме того, применение препарата «Диа-р» в дозах 50; 280; 2800 мг/кг не вызывает патологических изменений в ЦНС, сердечно-сосудистой, детоксицирующей и выделительной системах, не изменяет качественного и количественного состава периферической крови, а также не влияет на биохимические показатели плазмы крови крыс.
Ключевые слова: диабет, Гимнема лесная, хроническая токсичность.
Новый потенциальный антидиабетический препарат «Диа-р» (' патента 2289419 приоритет от 20.12.2004), представляющий собой лекарственную композицию на основе сухого экстракта Gymnema sylvestre (в сочетании с экстрактами гребней Винограда и Девясила Высокого). Результаты исследований антидиабетической активности субстанции препарата «Диа-р» позволяют предполагать наличие у него инкретиномиметического механизма гипогликемизирующего действия [3, 4]. Новое средство планируется использовать в составе комплексной терапии СД в течение длительного времени для лечения и профилактики развития поздних диабетических осложнений.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучить хроническую токсичность препарата.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Субстанция препарата «Диа-р» [' сертификата анализа GYM-030706 от 1.06.2003]. Препарат, содержащий 54,8 % сухого экстракта Гимне-мы лесной, 33,3 % сухого экстракта Девясила и 11,9 % сухого экстракта гребней Винограда, исследовался в дозах 50; 280 и 2800 мг/кг. Эксперименты проводились на 160 половозрелых крысах обоего пола массой тела 180—200 г, доставленных из питомника НИИГТиП (г. Волгоград) и прошедших двухнедельный карантин в виварии
НИИ фармакологии ВолГМУ. Температура воздуха в виварии поддерживалась от +20 до +24оС, освещение — совмещенное. В период проведения экспериментов животные находились в стандартных пластмассовых клетках по 5 особей в каждой, обеспечивались полноценными кормами.
Группам экспериментальных животных (п=20) вводили препарат «Диа-р» внутрижелудочно в течение 6 месяцев. Общая продолжительность хронического эксперимента составляла 7 месяцев (включая 1 месяц отставленных опытов — «отмены»). По ходу эксперимента проводили наблюдения за общим состоянием и поведенческой активностью животных, потреблением корма и воды, состоянием шерстного покрова, динамикой массы тела, регистрируемой два раза в месяц. Состояние гомеостаза оценивали с помощью функциональных, гематологических, биохимических и патомор-фологических методов. Эксперименты проводились в соответствии с методическими рекомендациями проведения доклинических (токсикологических) исследований [1, 2] и правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ 1 267от 19 июня 2003 г., ГОСТ 3 51000.3-96 и 51000.4-9).
Поведенческую активность у животных изучали по методу Я. Буреш, О. Бурешовой (1991) в тесте «открытое поле». Состояние сердечно-сосудистой системы оценивали по электрокардиограмме во втором стандартном отведении. Для опенки
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН 2-2008
функционального состояния печени, почек, сердца использовали комплекс биохимических методов исследований плазмы крови с использованием наборов «Био-Ла Тест» (Чехия, Лахема диагностика) и определяли содержание глюкозы, количество общего белка (биуретовая реакция), мочевины (диа-цетилмоноксимным методом), креатинина (цветная реакция Яффе), а также трансаминаз методом Райтмана в реакции 2,4-динитрофенилгидразином с помощью наборов «АлАТ-» и «АсАТ-Импапакт» (г. Москва). Проводили тестовые диагностические пробы — с бромсульфалеином по методу Л. И. Из-райлет (1976), феноловым красным по рекомендациям Е. Б. Берхина и Ю. И. Иванова (1972) и в тесте «гексеналовый сон» по методу М. С. Гижла-рян (1976). В периферической крови у крыс подсчитывали количество эритроцитов и лейкоцитов (мкл), лейкоцитарную формулу по методу Романовского (Е. А. Кост, 1968), измеряли уровень гемоглобина (цианметогемоглобиновый метод, гр/л), цветной показатель эритроцитов (у.е). Влияние препарата на свертывающую систему крови оценивали по методу Мас-Магро (Кост Е. А., 1968) и определяли время свертываемости крови (с).
Статистическую обработку данных проводили с помощью парного ^критерия Стьюдента для сравнения двух или более экспериментальных групп с использованием пакета программ <^а1Мюа 6,0».
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При наблюдении за животными в период шестимесячного внутрижелудочного введения препарата «Диа-р» крысам выявлено их удовлетворительное состояние в течение всего хронического эксперимента. Гибели среди подопытных групп не обнаружено. У испытуемых животных отсутствовали пониженные реакции на звук и тактильные воздействия. Внешнее состояние животных (частота шерстного покрова, состояние слизистых) в течение первых двух месяцев введения препарата не отличалось от группы крыс, находящихся в контроле. Начиная с третьего месяца и в течение 4—5 месяцев эксперимента, как у самок, так и у самцов в группе, получавшей максимальную дозу препарата, превышающую суточную в 10 раз (2800 мг/кг), фиксировались потускнение, постепенное урежение и частичная потеря шерстного покрова. Так, к концу шестого месяца эксперимента аллопеции обнаруживались у 35 % крыс этой группы в области головы, холки, задних конечностей. После отмены введения изучаемого препарата внешний вид экспериментальных животных соответствовал экстерьеру контрольных животных.
При анализе результатов измерений массы тела крыс в трехмесячный период хронического эксперимента было отмечено замедление темпов
прироста массы тела у животных получавших дозы 50 и 280 мг/кг на 10 и 15 % соответственно, р<0,05. Начиная с 4-го месяца эксперимента, масса тела крыс практически не изменялась и была аналогична уровню интактного контроля. В исследованиях, проведенных после отмены введения препарата «Диа-р», темпы прироста массы тела крыс существенно изменились, превалируя над контрольными значениями в 1,5—2 раза.
Поведенческая активность животных несущественно изменялась в группах, получавших вещество в дозах 50 и 280 мг/кг. Прослеживались тенденции ее активации у животных в первый месяц эксперимента (повышение горизонтальной и норковой активности в 2 раза), тогда как в последующие периоды исследований все изменения были на уровне контрольных величин. В исследованиях, проведенных на 3-й и 6-й месяцы эксперимента, достоверных изменений не обнаружено.
При анализе данных исследований электрокардиограмм крыс, получавших изучаемый препарат, в хронических экспериментах существенных изменений не обнаружено.
По результатам исследований периферической крови, отчетливо прослеживается отсутствие существенного влияния на периферическую кровь крыс, получавших препарат в дозах 50, 280 и 2800 мг/кг. В исследованиях, проведенных на 6-й месяц, выявлено, что препарат «Диа-р» в дозе 280 и 2800 мг/кг способствует дозозависимому снижению уровня гемоглобина и росту общего числа лейкоцитов. Вместе с тем данные сдвиги в составе периферической крови оказались в пределах порога физиологической нормы и восстанавливались в исследованиях «после отмены» препарата.
Также не отмечено существенных изменений и по результатам биохимических исследований. Однако под действием препарата «Диа-р» у крыс выявлено достоверное снижение уровня глюкозы во всех опытных группах. Так, в первый месяц исследований в крови крыс-самок зафиксировано (в пределах физиологической нормы) понижение уровня глюкозы (р<0,05). Аналогичные сдвиги наблюдались у самок и на 6-й месяц исследований. Данный показатель у крыс-самцов достоверно снижался (на 12 %) лишь в первый месяц эксперимента, тогда как в остальные периоды исследований содержание у самцов глюкозы соответствовало контрольным значениям. В исследованиях, проведенных «после отмены», не обнаружено достоверных изменений в величине активности трансами-наз, уровня белка, мочевины, креатинина и холестерина.
При анализе данных функциональных испытаний с наркотическим средством «гексенал», красителем «феноловый красный» и «бромсульфалеи-ном» у подопытных животных выявлены эффекты разной степени выраженности, зависимые как от
2-2008
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
дозы вещества и пола крыс, так и от длительности эксперимента. Так, в тесте с гексеналовым наркозом у самцов, получавших исследуемое вещество в течение 3 месяцев, прослеживалось дозозависи-мое увеличение длительности наркотического сна (от 30 % — в дозе 280 мг/кг до 70 % — в дозе 2800 мг/кг, р<0,05). На 6-й месяц исследований достоверное увеличение длительности гексенало-вого сна и укорочение латентного периода зафиксировано практически у всех тестируемых животных. Однако указанные эффекты полностью нивелировались в исследованиях «после отмены». Длительность «гексеналового сна» у крыс самок и самцов практически соответствовала контрольным значениям. В тесте с бромсульфалеином, позволяющем оценить состояние поглотительно-выделительной функции печени в период введения препарата, у подопытных крыс изменений не наблюдалось.
По результатам исследований влияния препарата «Диа-р» на выводящую функпию почек крыс, выявлено увеличение экскреторной функции у крыс, получавших препарат в дозе 50 и 280 мг/кг. При этом в дозе 2800 мг/кг скорость выведения красителя замедлялась только в группе самцов (р<0,05). У самок экскреторная активность была недостоверно снижена, но количество выделяемого почками красителя не изменялось относительно контрольных значений. После отмены введения «Диа-р», во всех исследуемых группах прослеживалось восстановление до уровня контрольных величин скорости выведения фенолового красного.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
На основании проведенных исследований можно заключить, что препарат «Диа-р» относится к классу малотоксичнык (достоверно токсической дозы для препарата «Диа-р» не установлено). Кроме того, шестимесячное применение препарата «Диа-р» в терапевтической и субтоксической дозах способствует достоверному снижению уровня глюкозы в крови, массы тела экспериментальных животных и уменьшению площади урежения и частичной потери шерстного покрова. Применение препарата «Диа-р» в дозах 50, 280, 2800 мг/кг не вызывает патологических изменений в ЦНС, сердечно-сосудистой, деток-сицирующей и выделительной системах, не изменяет качественного и количественного состава периферической крови, а также не влияет на биохимические показатели плазмы крови крыс.
ЛИТЕРАТУРА
1. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/ Под общ. ред. Р. У. Хабриева, И. А. Денисова, В. Б. Герасимова, В. Г. Кукеса. — М., 2005. — 359 с.
2. Саноцкий И. В., Уланова И. П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. — М.: Медицина, 1975. —328 с.
3. Спасов А. А., Самохина М. П., СнигурГ.Л. и др. // Матер. III съезда фармакологов России. — 2007. — Т. 7, 1 2. — С. 1964.
4. Spasov A. A., Kosolapov V. A., Samokhina M. P, et al.// International conference on diabetes. — 2007. — P. 7—12.
УДК 615.3:547.854.4
СИНТЕЗ И ПСИХОФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВЫХ ЦИКЛИЧЕСКИХ
ПРОИЗВОДНЫХ 2-ТИОУРАЦИЛА
А. А. Озеров, М. С. Новиков, А. К. Муриити, Д. Г. Ковалев, Е. В. Дьякова
Лаборатория медипинскойхимии ВНЦ РАМН и Администрапии Волгоградской области
Синтезированы новые циклические производные 2-тиоурацила и исследованы их психофармакологические свойства. Проявили выраженную антидепрессантную активность в опытах на крысах 6-(№Пиперидино)- и 6-(№ морфолино)-производные 7-метил-2,3-дигидро-5Н-[1,3]тиазоло-[3,2-а]пиримидин-5-она. Ключевые слова: производные 2-тиоурацила, психотропные свойства.
Химическая структура 2-тиоурацила представляет собой чрезвычайно интересный объект для дальнейшей направленной модификации, поскольку содержит четыре активных нуклеофильных центра — атомы азота N1 и N3, атом углерода С5 пи-римидиновой системы и экзоциклический атом серы, по которым могут легко протекать реакции замещения и циклизации. Ранее нами с целью синтеза новых потенциальных фармакологически активных веществ были разработаны методы получения цик-
лических производных 2-тиоурацила — частично гидрированных тиазолопиримидинов, пиримидоти-азинов и пиримидотиазепинов [1]. В дальнейшем было установлено, что бромирование этих циклических производных 2-тиоурацила не затрагивает атом серы и протекает исключительно как замещение при атоме углерода С5 пиримидинового ядра, при этом сам атом брома может быть легко замещен на аминогруппу при взаимодействии с циклическими вторичными аминами [3].
