CC BY
71
Лекарственные растения
© НИКОЛАЕВ С.М., АЖУНОВА Т.А., УБАШЕЕВ И.О., ЛОНШАКОВА К.С., НИКОЛАЕВА И.Г., ЦЫРЕНЖАПОВА О.Д., АРЬЯЕВА М.М. -УДК 615.322:633.88.03 + 615.9
ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭКСТРАКТА ПЯТИЛИСТНИКА КУСТАРНИКОВОГ О
С.М. Николаев, Т.А. Ажунова, И.О. Убашеев. КС. Аоншакова, ИГ. Николаева,
О.Д. Цыренжапова, М.М. Аръяева.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - чл.-корр. РАН, проф. В.М. Корсунов, отдел биологически активных веществ, зав. - д.м.н., проф. С.М. Николаев)
Резюме. Проведено доклиническое изучение безопасности сухого экстракта побегов пятили-стника кустарникового. При однократном введении лабораторным крысам и мышам обоего пола фитоэкстракт оказался нетоксичным лекарственным средством. Введение экстракта пяти-листника кустарникового в течение 6 месяцев крысам в дозах 276, 346 и 553 мг/кг и собакам в дозах 300 и 500 мг/кг не вызывало функциональных и морфологических изменений в кроветворных и лимфоидных органах, печени, почках, сердце, пищеварительной и центральной нервной системе. Применение указанного растительного экстракта в дозах 276, 346 и 553 мг/кг приводило к дозозависимым изменениям отдельных показателей гемокоагуляции. Экстракт пятилистника кустарникового не влияет на выраженность аллергических реакций, не обладает иммунотоксическим свойством. .
В Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по оригинальной технологии создано лекарственное средство из побегов пятилистника кустарникового. В экспериментах на животных с ал-локсановым и дитизоновым диабегом и адреналиновой гипергликемией наблюдалось выраженное гипогликсмичсское действие этого лекарственного средства [1,6].
Целыо настоящей работы явилось экспериментальное изучение хронической и специфической токсичности сухого экстракта, полученного из побегов пятилистника кустарникового.
Материалы н методы
Объектом исследования служил сухой экстракт, полученный из побегов пятилистника кустарникового (субстанция). Субстанция представляет сыпучий аморфный гигроскопичный порошок светло-коричневого цвета, полученный из растительного сырья - побегов пя тилис тника кустарникового [7].
Острую токсичность сухого экстракта, полученного из побегов пятилистника кустарникового, определяли при однократном введении в желудок через зонд в виде водного раствора половозрелым беспородным белым крысам и белым мышам (самки и самцы). Хроническую токсичность субстанции пятилистника кустарникового исследовали на 180 белых беспородных крысах (90 самцов и 90 самок) и 12 собаках обоего пола (возраст 12 года). Фитоэкстракт вводили в течение 6 месяцев крысам в желудок через зонд в дозах 276, 346 и 553 мг/кг (в 5, 15 и 30 раз выше доз, рекомендуемых для человека), собакам - в дозах 300 и 500 мг/кг. Через 2, 4 и 6 месяцев введения экстракта пятилистника кустарникового и через 2 нс-
дели после его отмены у крыс проводили исследование общего состояния, динамики общей массы, показателей периферической крови, костного мозга, функции печени, почек, центральной нервной системы (ЦНС), сердечно-сосудистой системы. Кроме того исследовали массу и морфологию внутренних органов (головной мозг, сердце, печень, легкие, желудочно-кишечный тракт, почки, надпочечники, тимус, селезенка, лимфатические «узлы, половые железы, щитовидная железа). Состояние собак изучали через 6 месяцев введения экстракта пя тилис тника кустарникового [8].
Гематологические исследования (в периферической крови - гемоглобин, эритроциты, ретику-лоциты, тромбоциты, лейкоциты, лейкограмма; показатели гемокоагуляции) - проводили общепринятыми методами. Биохимические исследования сыворотки крови (общий белок, глюкоза, крс-атинин, мочевина, аланин- и аспартатаминотранс-фераза, щелочная фосфатаза) проводили с использованием наборов фирмы "Лахсма" (Чехия). Об антитоксической функции печени судили по гек-сеналовой пробе. Состояние выделительной системы (почек) оценивали на фоне водной нагрузки (2% от массы тела), определяя суточный диурез, pH, наличие белка, глюкозы в моче, концентрацию и суточную экскрецию креатинина и мочевины с помощью экспресс-методов и стандартных наборов [2].
Об эмбритоксичности и тератогенности экстракта пятилистника кустарникового судили на основании исследования антенатального и пост-натального развития потомства белых крыс. Изучение антенатального развития проведено на 120 беременных белых беспородных крысах, которым вводили испытуемый фитоэкстракт с 1 по 7, с 7 по
16 и с 16 по 19 день беременности в дозах 276, 346 и 553 мг/кг. Воздействие указанного фитоэкстракта на постнатальное развитие оценивали при изучении потомства от 20 самок, получавших в течение всего периода беременности экстракт пя-тилистника кустарникового в дозе 276 мг/кг [5], Исследование аллергенных свойств испытуемого средства проведено на мышах линии СВА с использованием метода кожных аппликаций, оценивалось влияние экстракта пятилистника кустарникового в дозах 276 и 553 мг/кг на развитие гиперчувствительности немедленного и замедленного типа, а также на реакцию лейкоцитолиза [3], Иммуномодулируюшие свойства исследовали на мышах линии СВА, определяя влияние экстракта пятилистника кустарникового в дозах 276 мг/кг и 553 ,мг/кг на интенсивность гиперчувствительности замедленного типа и на антитело-образование [4],
Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием 1-критерия Стъюдента [Ю].
Результаты и обсуждение
При однократном введении экстракта пятилистника кустарникового в желудок через зонд в максимально технически возможных количествах (по объему и концентрации), 50%-ная гибель мышей наблюдалась при дозе 9245 мг/кг; при введении крысам испытуемого фитоэкстракта в максимально возможных концентрациях и объемах смертности не наблюдалось за весь период наблюдения (14 суток). Таким образом, экстракт пятилистника кустарникового (субстанция) можно отнести к малоопасным веществам IV класса лекарственных средств [9],
В хроническом шестимесячном эксперименте на крысах и собаках экстракт пятилистника кустарникового не вызывал патологических изменений общего состояния, несколько увеличивал процент прироста обшей массы крыс по сравнению с контролем.
Шестимесячное введение фитоэкстракта крысам и собакам не оказывало токсического влияния на показатели периферической крови и костного мозга, В то же время следует отметить, что у крыс, получавших экстракт пятилистника в дозе 276 мг/кг, замедлялось по сравнению с показателями у животных контрольной группы образование протромбина, тромбина и фибринового сгустка на 44, 87 и 80% соответственно, У крыс, получавших фитоэкстракт в дозе 346 мг/кг, образование протромбина замедлялось на 71%, тромбина -на 89%, фибринового сгустка - на 63% по сравнению с показателями у контрольных животных. При анализе коагулограммы животных, получавших испытуемый фитоэкстракт в дозе 553 мг/кг, время образования активного протромбина увеличивалось на 46% по сравнению с показателями у животных, не получавших экстракт.
Исследование биохимических показателей сыворотки крови, функционального состояния печени, почек, сердечно-сосудистой системы не вы-
явило токсического действия экстракта пятилистника кустарникового. Средние величины изученных показателей ориентировочно-исследовательского поведения крыс, независимо от дозы и длительности введения фитоэкстракта и после его отмены существенно не разнились с таковыми у животных контрольной группы.
Макроскопическое и микроскопическое исследование не выявило какой-либо патологии основных внутренних органов крыс и собак всех групп. Лишь в коре больших полушарий, подкорковых образованиях головного мозга и мозгового ствола отдельных крыс в каждой экспериментальной группе было обнаружено незначительное полнокровие капилляров, отмечались нейроны с диффузным хроматолизом, а в подкорковых образованиях и стволовой части мозга выявлялись ги-пер.хромные нейроны. Через две недели после прекращения введения экстракта пятилистника кустарникового указанные изменения исчезали. При изучении специфических видов токсичности было обнаружено, что экстракт пятилистника кустарникового не обладал аллергенными свойствами, не влиял на клеточные иммунные реакции и оказывал стимулирующее действие на антитело-образование при иммунизации мышей тимуезави-симым антигеном.
Изучение влияния экстракта пятилистника кустарникового на эмбриональную смертность в период имплантации показало, что она была несколько выше у животных, которым вводили экстракт пятилистника в дозе 553 мг/кг в 1-7 сутки. При снижении дозы испытуемого средства отмеченные токсические эффекты исчезали, Постим-плантационная смертность наблюдалась у животных, получавших экстракт в дозе 553 мг/кг на 716 сутки. Однако показатель обшей эмбриональной смертности в этой группе животных на 716 сутки не превышал таковой у животных контрольной группы. Введение экстракта пятилистника кустарникового во всех исследуемых дозах в период имплантации и органогенеза вызывало появление некоторых тератогенных эффектов (единичные плоды с кровоизлияниями). Назначение фитоэкстракта в последние дни беременности крыс в дозе 553 мг/кг наблюдалось замедление процесса окостенения отдельных частей скелета (отсутствие грудинных костей и костей пястья). Число аномалий костного скелета у эмбрионов во всех группах животных не превышало показателей в контроле, где абсолютное число эмбрионов с отсутствием грудинных костей и костей пястья составило 18,1% от числа обследованных плодов. Самый высокий процент с аномалиями внутренних органов (18,7%) отмечался в группе животных, которые получали указанный фитоэкстракт в дозе 553 мг/кг с 7 по 16 сутки.
Таким образом, сухой экстракт из побегов пятилистника кустарникового при однократном введении белым беспородным крысам и мышам обоего пола малотоксичен и относится к группе малоопасных лекарственных средств (IV класс
лекарственных средств). Экстракт пятилистника кустарникового в хроническом шестимесячном эксперименте на крысах в дозах 276, 346 и 553 мг/ кг (в 5-30 раз превышающих терапевтическую дозу) и на собаках в дозах 300 и 500 мг/кг не влияет на функцию и морфологию основных органов и систем организма, В то же время, ведение экстракта пятилистника кустарникового крысам в до-
зах 276, 346 и 553 мг/кг приводит к дозозависимым изменениям отдельных показателей гемокоагуляции, которые при отмене фитоэкстракта существенно не отличались от данных у животных контрольной группы. Экстракт пятилистника кустарникового не обладает аллергенными и имму-нотоксическими свойствами.
PRE CLINICAL TOXICOLOGICAL RESEARCH OF THE EXTRACT FROM
PENTAPIIYLLOIDES FRUTICOSA L.
S.M, Nikolayev, T.A, Azhunova, I.O, Ubasheyev, K.S. Lonshakova, I.G, Nikolayeva,
O.D, Tsyrenzhapova, M,M, Aryayeva
(Institute of General and Experimental Biology, SD RAS, Ulan-Ude)
The safety of the dry extract from the shoots of Pentaphylhides frutimsa (L.) O,Schwarz has been estimated in the pre-clinical studies, A single-dose administration of the phytoextract to the rats and mice has shown its intoxicity. Administration of the extract from Pentaphylhides frutimsa (L.) O,Schwarz for 6 months to the rats in the doses of 276, 346 and 553 mg/kg and to the dogs in the doses of 300 and 500 mg/kg has not revealed functional and morphological changes in hemopoetic and lymphatic organs, liver, kidneys, heart, digestive and central nervous systems. The intake of the given preparation in the doses of 276, 346 and 553 mg/ kg has resulted in the dose-dependent changes of some hemocoagulation indices. The extract from Pentaphylhides frutimsa (L.) O,Schwarz does not influence on the manifestation of allergic reactions, and has no im-munotoxic property.
Литература
1,Арьяева М,М, Влияние сухого экстракта курильского чая кустарникового на течение экспериментального сахарного диабета: Автореф, дис, ... канд. мед, наук, - Улан-Удэ, 1998,
2, Меньшиков В,В,, Делекторская Л.Н., Золотниц-кая Р,П, и др. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник, - М.: Медицина, 1987, -368 с.
3, Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств, - М„ 1988, - 15 с,
4, Методические рекомендации по изучению имму-номодулируюших свойств фармакологических средств, - М„ 1992, - 17 с,
5, Методические рекомендации по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств, - М„ 1992, - 25 с.
6, Николаев С.М., Асеева Т.А., Арьяева М,М, и др. Гипогликемическая активность экстракта пятилистника кустарникового / Тез, докл. 4 Российского национального конгресса "Человек и лекарство", -М„ 1997, - С,92,
7, Николаева И.Г., Ажунова Т,А„ Арьяева М,М, и др. - Патент РФ №2150952 от 25,02,98, - Бюлл, №17,
8, Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, - М„ 2000, - 26 с,
9, Саноцкий Н,В, Методы определения токсичности и опасности химических веществ, - М.: Медицина, 1970,- 350 с.
10, Серженко В.П., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях, - М.: Медицина, 2001. - 256 с.
