CC BY
173
УДК 618.15-002-085.28.37.454.1:547.854.4:615.014.41.076
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПАРАБЕНОВ В ВАГИНАЛЬНОМ ГЕЛЕ С
ОКСИМЕТИЛУРАЦИЛОМ
А.А. ФЕДОТОВА Г.В. АЮПОВА Г.Р. ИКСАНОВА В.А. Микробиологическим методом определено uhthed оптимальное соотношение консервантов в
ТА БашКирскии государственпь1и вагинальном геле. Методом тон-кослойной
медицинский университет e-mail .
:Fed<rtovaBGMU@rambler.ru хроматографии проведено количестаенное
опреде-ление парабенов в вагинальном геле с
оксиметилурацилом. Ключевые слова: вагинальный гель, бактериальный ваги-ноз, оксиметилурацил, консерванты, нипагин, нипазол, тон-кослойная хроматография. Сегодня одной из самых распространенных патологий в акушерско-гинеколо-гической практике остается бактериальный вагиноз (БВ), занимающий 30-50% от об-щей заболеваемости вульвовагинальными инфекциями, сопровождающийся усилен-ным ростом преимущественно облигатно-анаэробных бактерий и резким снижением концентрации лактобактерий [1, 2]. Основную роль в возникновении БВ отводят нарушениям биоценоза влагалища в результате воздействия как эндогенных, так и экзогенных триггерных факторов. К эндо-генным факторам относятся гормональные сдвиги при половом созревании, беременно-сти, после родов, абортов; нарушения общего и местного иммунитета; изменение анти-биоза между влагалищными микроорганизмами; снижение количества №02-продуци-рующих лактобацилл и концентрации Н2О2 в содержимом влагалища; образование в же-лудочно-кишечном тракте резервуара микроорганизмов, ассоциированных с БВ [7]. Экзогенные факторы включают терапию антибиотиками, цитостатиками, корти-костероидами, противовирусными, противогрибковыми препаратами, лучевую терапию; частые и чрезмерные влагалищные души, спринцевания; пороки развития и анатомиче-ские деформации после разрывов в родах, хирургических вмешательств и/или лучевой терапии; инородные тела во влагалище, матке: влагалищные тампоны или диафрагмы, пессарии, внутриматочные спирали (ВМС); использование спермицидов [6]. Общеизвестно, что бактериальный вагиноз сопровождается нарушениями в системе местного иммунитета (уменьшение концентрации IgA, sIgA, IgG и увеличение концентрации IgM, дисфункция нейтрофилов вагинального содержимого). Нарушения в системе общего иммунитета заметны лишь при длительнотекущем заболевании (бо-лее 5 лет) [5]. Учитывая наличие местного иммунодефицита у таких больных, перспективно использование иммуномодуляторов для интравагинального применения. Наибольший интерес представляют те препараты, иммуномодулирующее действие которых обу-словлено несколькими механизмами действия. Такое поливалентное действие харак-терно для пиримидинов, и в частности, для оксиметилурацила, обладающего иммуно-стимулирующим, противовоспалительным, анаболическим, антиоксидантным и репа-ративным свойствами [3]. Нами разработан иммуномодулирующий гель оксиметилурацила для вагиналь-ного применения с целью коррекции местного иммунитета у больных с бактериальным вагинозом. Для обеспечения качества лекарственной формы при хранении необходимо по-добрать консервант и его концентрацию. Часто в качестве консервантов для гелей ис-пользуются парабены - нипагин и нипазол в различных соотношениях. Нами выбрана концентрация консерванта 0,2 %, соотношение нипагин-нипазол 1:1 и 4:1.
Испытания проводили в соответствии с методикой, рекомендованной ГФ XII изд. - ч. 1, с. 216-219, ст. «Определение эффективности антимикробных консервантов ле-карственных средств» ( ОФС 42-0069-07). Антимикробное действие консервантов определяли в отношении некоторых ви-дов бактерий и грибов: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans. Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1 Антимикробная активность консервантов в вагинальном геле
Критерии оценки эффективности антимикробных консервантов Нипагин:нипазол 4:1 Нипагин:нипазол 1:1
Вид тест-микроорганизма
E. coli S. aureus P. aeruginosa E. coli St. au-reus Ps. aeruginosa
Уменьшение лога-рифма числа бак-терий в 1 мл через 14 сут. должно быть не менее, чем на 2 lg35 отсутствие тест- микроорганизма lg30 lg75 lg53 lg50
С 14 до 28 сут. не должно быть уве-личения числа бактерий снижение числа бактерий отсутствие тест- микроорганизма снижение числа бактерий нет увеличения числа бактерий
Через 14 и 28 сут. не должно быть увеличения числа грибов C. albicans C. albicans
нет увеличения числа грибов
Из результатов исследования видно, что консерванты нипагин и нипазол в соотношениях 4:1 и 1:1 обеспечивают необходимый уровень противомикробной и противогрибковой активности и соответствуют требованиям ГФ XII изд. ОФС 42-0069-07 «Определение эффективности антимикробных консервантов лекарственных средств», категория 2. С целью оптимизации технологии выбрано соотношение консервантов нипа-гин:нипазол 1:1. При стандартизации полученного иммуномодулирующего геля мы проводили количественное определение парабенов методом тонкослойной хроматографии. В ка-честве экстрагентов использовали муравьиную кислоту и метанол, обеспечивающие эффективную экстракцию парабенов из лекарственной формы. Четкое деление между пятнами на хроматограмме достигалось использованием системы элюентов петролей-ный эфир: хлороформ: ледяная уксусная [4]. В стакан вместимостью 50 мл вносили навеску геля массой 1,0 г, приливали 0,5 мл муравьиной кислоты и 9,5 мл метанола и встряхивали на протяжении 1 мин. Экс-тракт оставляли на ночь. На пластинку для ТСХ (Sorbfil) наносили 10 мкл пробы эссле-дуемого экстракта. Рядом для создания шкалы сравнения наносили 2, 3, 4, 5 и 6 мкл раствора, содержащего 0,025 % нипагина и 0,025 % нипазола (концентрация парабе-нов 0,05 %), и компоненты элюента (петролейный эфир: хлороформ: ледяная уксусная кислота в соотношении 20:6:2,5). После развития хроматограммы сравнивали интен-сивность пятен пробы с пятнами шкалы сравнения. Приготовление раствора стандартного образца (РСО), содержа-щего нипагина 0,025 %, нипазола 0,025 % (1:1). По 0,0025 г нипагина и нипазо-ла (точные навески) помещают в сухую коническую колбу вместимостью 50 мл, при-бавляют 7 мл петролейного эфира, 2,1 мл хлороформа, 0,9 мл ледяной уксусной кисло-ты и перемешивают. 1 мкл РСО содержит по 250 нг нипагина и нипазола. Интенсивность пятен пробы идентична интенсивности пятен 4 шкалы сравне-ния (рис. 1). Отсюда содержание парабенов в нанесенной пробе соответствует 2000 нг, а массовая доля консервантов в вагинальном геле равна 0,2 %. Интенсивность пятен метилпарабена и пропилпарабена исследуемой пробы 3 соответствует интенсивности пятен раствора 4, что подтверждает соотношение консервантов нипагин:нипазол в ле-карственной форме 1:1.
Рис. 1. Схема хроматограммы контроля содержания парабенов в вагинальном геле путем сравнения со стандартной шкалой: 3 - проба, 1-2 и 4-6 - стандартные растворы, содержащие нипагин и нипазол в соотношении 1:1 суммарно 1000 нг (1), 1500 нг (2), 2000 нг (4), 2500 нг (5), 3000 нг (6)
В ходе исследований установлено оптимальное соотношение консервантов в ле-карственной форме. Методом тонкослойной хроматографии подтверждены концен-трация парабенов и соотношение нипагин:нипазол в вагинальном геле с оксиметилу-рацилом.
Литература
1. Анкирская, А.С. Бактериальный вагиноз / А.С. Анкирская // Акушерство и гинеко-логия. - 1995. - №6. - С. 13-16.
2. Гомберг, М.А. Терапия трихомониаза и бактериального вагиноза: проблемы и пути решения / М.А. Гомберг // Consilium medicum - 2005. - Т. 7, №3. - С. 210-214.
3. Лазарева, Д.Н. Иммурег / Д.Н. Лазарева [и др.]. - Уфа, 2004. - 103 с.
4. Логинова, Л.П. Контроль содержания n-гидроксибензойной кислоты и парабенов в косметических средствах методом мицеллярной тонкослойной хроматографии / Л.П. Логинова, Д.В. Едаменко, А.Ю. Куликова [и др.] // Вгсник Харьювского нащонального ушверсигету. - 2006. -№ 731. Хiмiя. - Вип. 14(37). - С. 127-134.
5. Олина, А.А. Папилломавирусная инфекция гениталий и бактериальный вагиноз / А.А. Олина, В.М. Падруль // Фарматека. - 2007. - № 1. - С. 49-54
6. Тихомиров, А.Л. Современные принципы лечения бактериального вагиноза / А.Л. Тихомиров, Ч.Г. Олейник // Фарматека. - 2005. - № 15. - С. 1-3.
7. Nugent, R.P. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of Gram stain interpretation / R.P. Nugent, M.A. Krohn, S.L. Hiller // J. Clin. Microbiol. - 1991. - Vol. 29. -P. 297- 301.
STUDY OF PARABENE EFFICASY IN A VAGINAL GEL CONTAINING OXYMETHYLURACIL
A.A. FEDOTOVA G.V. AYUPOVA G.R. IKSANOVA V.A.
KATAEV Bashkir State Medical University e-mail: FedotovaBGMU@rambler.ru
Optimal ratio of conservants was determined in a vaginal gel by means of microbiological method. Parabene composition in a vaginal gel with oxymethyluracil was determined by means of thin-layer chromatography. Key words: vaginal gel, bacterial vaginosis, oxymethlura-cil, nipagin, nipazol, thin-layer chromatography.
