CC BY
0Ветеринарный врач. 2024. № 5. С. 73 - 79
The Veterinarian. 2024; (5): 73 - 79
Научная статья
УДК 619.615.2/661.155.3
DOI: 10.33632/1998-698Х 2024 5 73
ИССЛЕДОВАНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНОЙ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСОВ ЯЩУРА, ПОЛУЧЕННЫХ НА КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК BHK-21 НА БЕССЫВОРОТОЧНОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
Наталья Владимировна Хаустова, khaustovanv@biocombinat.ru
Ирина Юрьевна Литенкова, кандидат ветеринарных наук, litenkovaIY@biocombinat.ru
Светлана Владимировна Гладилина, gladilinaSV@biocombinat.ru
Илья Валерьевич Стоянов, stoyanoviv@biocombinat.ru
Инга Евгеньевна Стоянова, stoyanovaie@biocombinat.ru
Лилия Алексеевна Буковская, BukovskayaLA@biocombinat.ru
Федеральное казенное предприятие «Щелковский биокомбинат», г.о. Лосино-Петровский, Московская область, Российская Федерация
Автор, ответственный за переписку: Ирина Юрьевна Литенкова.
Аннотация. В настоящей работе представлен анализ опытов по исследованию безопасности, антигенных и иммуногенных свойств экспериментальной серии инактивированной противоящурной вакцины на основе антигенов вирусов ящура серотипа A, O, SAT-2, полученных на бессывороточной питательной среде. Показана безопасность, антигенная активность и протективная эффективность вакцины при введении крупному рогатому скоту и пригодность ее для вакцинопрофилактики ящура. Показано, что введение вакцины легко переносится целевыми животными при введении тройной вакцинальной дозы. Инъекция препарата у животных не вызывает каких-либо местных или системных нежелательных реакций. Средний титр вируснейтрализующих антител в сыворотках крови испытуемых животных составил не менее 2,0 Ig SN5o/cM3 по каждой валентности. Количество протективных доз в вакцинальной дозе составило не менее 6 ПД50 КРС по каждой валентности. Проведенные исследования подтверждают безопасность и специфическую эффективность вакцины на основе антигенов вирусов ящура, полученных на культуре клеток BHK-21 на бессывороточной питательной среде и показывают, что производство вакцины против ящура в бессывороточной химически определенной среде осуществимо и не изменяет иммуногенные детерминанты антигенов.
Ключевые слова: вакцинные штаммы вируса ящура, вакцина против ящура, бессывороточная питательная среда, культура клеток, сыворотка крови крупного рогатого скота, безопасность, антигенная активность, протективность
Для цитирования: Хаустова Н.В., Литенкова И.Ю, Гладилина С.В, Стоянов И.В., Стоянова И.Е., Буковская Л.А. Исследование безопасности и эффективности противоящурной вакцины на основе антигенов вирусов ящура, полученных на культуре клеток BHK-21 на бессывороточной питательной среде //Ветеринарный врач. 2024. № 5. С. 73 - 79. DOI: 10.33632/1998-698Х_2024_5_73
STUDIES ON THE SAFETY AND EFFICASY OF FMD VACCINE BASED ON ANTIGENS OBTAINED ON BHK-21CELLS IN A SERUM-FREE NUTRIENT MEDIUM
Natalia V. Khaustova, khaustovanv@biocombinat.ru
Irina Yu. Litenkova, candidate of veterinary sciences, litenkovaIY@biocombinat.ru
Svetlana V. Gladilina, gladilinaSV@biocombinat.ru
Ilya V. Stoyanov, stoyanoviv@biocombinat.ru
Inga E. Stoyanova, stoyanovaie@biocombinat.ru
Lilia A. Bukovskaya, BukovskayaLA@biocombinat.ru
74
Federal State Enterprise Schelkovskiy biocombinat, Losino-Petrovsky, Moscow region, Russian Federation
Corresponding author: Irina Yurevna Litenkova.
Abstract. This paper presents an analysis of experiments on the study of safety, antigenic and immunogenic properties of an experimental series of inactivated foot-and-mouth disease vaccine based on antigens of foot-and-mouth disease viruses of serotypes A, O, SAT-2, obtained on a serum-free nutrient medium. The safety, antigenic activity and protective efficacy of the vaccine when administered to cattle and its suitability for vaccinal prevention of foot-and-mouth disease are shown. It is shown that the introduction of the vaccine is easily tolerated by target animals when administered a triple vaccine dose. Injection of the drug in animals does not cause any local or systemic adverse reactions. The average titer of virus-neutralizing antibodies in the blood serum of the test animals was at least 2.0 lg SN50/cm3 for each valence. The number of protective doses in the vaccine dose for cattle was at least 6 PD50 for each valence. The conducted studies confirm the safety and specific efficacy of the vaccine based on foot-and-mouth disease virus antigens obtained in the BHK-21 cell culture on a serum-free nutrient medium and show that the production of a vaccine against foot-and-mouth disease in a serum-free chemically defined medium is feasible and does not change the immunogenic determinants of the antigens.
Keywords: FMD vaccine strains, FMD vaccine, serum-free medium, cell culture, bovine serum, safety, antigenic activity, protection
Введение. Вирус ящура по-прежнему является эндемичным для большинства стран и основой искоренения этого высококонтагиозного и экономически разрушительного заболевания является вак-цинопрофилактика с использованием безопасных и эффективных противоящурных вакцин. Учитывая вирусную этиологию этого заболевания, ключевым этапом при получении противоящурных вакцин является культивирование клеток для последующего заражения вирусами.
Важнейшими условиями успешного культивирования вирусов ящура следует считать подбор соответствующей чувствительной клеточной системы и обеспечение ее высокой жизнеспособности и продуктивности в течение всего срока, необходимого для наработки вируссодержащего материала [1, 3]. Суспензионная линия клеток BHK-21 является основным звеном в производстве вакцин против ящура. Технология производства вакцины против ящура основана на использовании питательных сред для суспензионного культивирования клеток с добавлением сыворотки КРС [6]. Сыворотка, как продукт животного происхождения, остается малоизученным комплексом различных компонентов, создает нестандартные условия для роста и размножения клеток и вирусов. Кроме того, существуют проблемы, связанные с потенциальной возможностью контаминации сыворотки бактериями, грибками, микоплазмами, вирусами, возбудителями прионных инфекций [7]. При использовании сыворотки велика вероятность попадания пирогенов и остаточных элементов сыворотки в конечный продукт, что может приводить к аллергическим и анафилактическим реакциям у животных. Поэтому требования чистоты и безопасности биологических продуктов, которые необходимы потребителю, могут быть эффективно достигнуты только с помощью бессывороточных технологий. Все перечисленные проблемы заставляют производителей иммунобиологических препаратов переходить на бессывороточные питательные среды с химически определенным составом, совершенствуя технологические схемы и оборудование [3]. Использование бессывороточной питательной среды для культивирования клеток BHK-21 позволяет сделать процесс более контролируемым и значительно уменьшить риск контаминации.
ФКП «Щелковский биокомбинат» является ведущим производителем противоящурных вакцин, обеспечивая защиту буферной зоны Российской Федерации, сопредельных стран и эндемичных стран Африки и Ближнего Востока от ящура. Учитывая циркуляцию новых генетических линий вируса ящура в сопредельных государствах, существуют риски заноса экзотических для страны вариаций вируса, отличающихся от вакцин, применяющихся на территории России, против которых применяемая в настоящее время вакцина не может дать соответствующую защиту: O/ME-SA/Ind2001e, A/ASIA/G-VII, SAT-2/XIV [4,6]. Для оптимизации процесса культивирования клеток и вирусов ящура разных серотипов было принято решение отработать технологию репродукции вируса ящура типов O, A, SAT-2 в суспензии клеток BHK-21, выращенных на бессывороточных питательных средах c использованием биореакторов с последующим контролем экспериментальной серии вакцины на безопасность, антигенную и протективную активность, выявление антител к неструктурным белкам вируса ящура [2, 8].
Цель данного исследования заключалась в определении безопасности, антигенной и протектив-ной эффективности вакцин, созданных на основе антигенов вирусов ящура актуальных генетических линий серотипа A, O и SAT-2, полученных на бессывороточной питательной среде для суспензионного культивирования клеток BHK-21.
75
Материалы и методы. В соответствии с требованиями ВОЗЖ к производству вакцин против ящура в условиях ФКП «Щелковский биокомбинат» были проведены исследования по изучению безопасности, наличие неструктурных белков вируса ящура, антигенной и иммуногенной активности экспериментальной серии противоящурной вакцины на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте. Материалом для исследования служили экспериментальная серия противоящурной вакцины с антигенами вируса ящура серотипа A, O и SAT-2, репродуцированными в суспензии клеток ВНК-21/13-13с, выращенными на бессывороточной питательной среде. Использовалась бессывороточ-ная питательная среда «Cosmos» (производство FloraBio, Турция) и монослойно-суспензионный тро-фовариант клеток ВНК-21/13-13с, адаптированный к этой среде. Для изготовления антигенов были взяты посевные рабочие (WS) расплодки вирусов: тип A, штамм A/G-VII восьмого пассажа; тип O, штамм O/IND2001 девятого пассажа; тип SAT-2, штамм SAT-2/XIV девятого пассажа, адаптированные к репродукции на полученном трофоварианте клеток. При составлении вакцины использовали следующие компоненты:
—
—
—
антигены вируса ящура, очищенные от балластных белков, с содержанием в дозе 146S компонента: A/G-VII - 3,5 мкг/доза, SAT-2/XIV - 4,5 мкг/доза, O/IND2001 - 3,5 мкг/доза;
сапонин 1,5 мг/доза;
6% гидроокиси алюминия - 45 мг/доза.
Вакцинальная доза по каждой валентности была отработана, исходя из показаний протективной
защиты на уровне не менее 6 ПД50 КРС.
Для проведения испытаний использовали клинически здоровый крупный рогатый скот в возрасте не моложе 18 месяцев, массой не менее 250 кг, серонегативный к вирусу ящура типов A, O, SAT-2. Оценку стерильности проводили по ГОСТ 28085, используя твердые и жидкие питательные среды. Определение авирулентности после десорбции вакцины, выделении антигена и инокуляции его на чувствительную перевиваемую монослойную клеточную линию IB-RS-2 (три последовательных пассажа).
Определение безопасности экспериментальной серии вакцин проводили на восьми головах КРС. Иммунизацию проводили подкожно в область средней трети шеи двойной вакцинальной дозой (4 см3) с повторной вакцинацией однократной дозой (2 см3) через 14 дней. При анализе безопасности вакцин использовали метод визуального наблюдения за животными, а также изучали токсичность и место введения.
Определение антигенной активности экспериментальной серии вакцины по титрам вирус-нейтрализующих антител от вакцинированных животных (пять голов КРС) проводили, используя реакцию микронейтрализации на культуре клеток. Экспериментальные образцы вакцины вводили подкожно в область средней трети шеи в дозе 2 см3, рекомендованной для применения. Через 21 день у вакцинированных животных брали кровь для определения уровня вируснейтрализующих антител в реакции серонейтрализации микрометодом по подавлению цитопатического действия, вызванного вирусом ящура на монослое клеток IB-RS-2. В качестве контрольного вируса использовали вирусы ящура, гомологичные вакцинным штаммам, адаптированным к культурам клеток, в дозе 100 ТЦД5о/О,1 см3.
Для определения протективной эффективности использовали по 17 голов КРС на каждую валентность, из них две головы контрольные. Экспериментальные образцы вакцины вводили подкожно
в область средней трети шеи по пять голов на каждую группу соответственно: 2 см3
1 доза; 0,5 см3 -
^ дозы; 0,2 см3 - 1/10 доза. Через 21 день вакцинированных и контрольных животных заражали контрольным вирусом ящура, гомологичным вакцинному, интрадермолингвально в дозе 104 ИД50/0,2 см3 (в 2 точки по 0,1 см3). За подопытными животными вели наблюдение в течение восьми дней. Через 8 дней после заражения всех животных подвергали убою и проводили патологоанатомический осмотр. Протективность подсчитывали с помощью метода Кербера.
Для выявления антител к неструктурным белкам вируса ящура использовали животных из испытания на определение антигенной активности вакцины по титру вируснейтрализующих антител в сыворотках крови. Пять голов КРС повторно вакцинировали через 28 дней после первой вакцинации. Через 28 дней после второй вакцинации у животных брали кровь и получали сыворотки крови по общепринятой методике методом отстоя и исследовали методом ИФА с использованием наборов «AsurDxTM FMDV NS» (фирмы Biostone, США) согласно инструкции производителя. Вакцину считали свободной от неструктурных белков вируса ящура при получении отрицательного результата в исследованиях ИФА.
Для компьютерной обработки полученных результатов использовали программу Microsoft Excel, а также общепринятые способы статистической обработки экспериментально полученных данных. Достоверность различий между показателями (р <0,05) определяли с применением критерия Стьюдента.
76
Результаты исследований и их обсуждение. Определение стерильности. Проведенные испытания показали отсутствие контаминации посторонней микрофлорой, грибками, то есть подтвердили стерильность экспериментальной серии вакцины.
Определение авирулентности. Последовательно инокулированные вакцинными антигенами вируса ящура культуры клеток IB-RS-2 на протяжении трех последовательных пассажей не выявили присутствия вирулентного вируса. Следовательно, экспериментальная серия вакцины авирулентна.
Определение безопасности вакцины на крупном рогатом скоте. На первом этапе работы экспериментальную противоящурную вакцину тестировали на безвредность в процессе наблюдения за состоянием здоровья КРС после инокуляции. По результатам исследования все подопытные животные после первичной вакцинации двойной дозой и повторной вакцинации через 14 дней однократной дозой оставались клинически здоровыми, а при патологоанатомическом осмотре не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Вакцина признаны безвредной, поскольку все животные по итогам наблюдения оставались клинически здоровыми, и на месте введения препарата не отмечено некроза тканей.
Определение антигенной активности по титру вируснейтрализующих антител в сыворотках крови КРС и протективной активности (ПД50 КРС). Эффективность экспериментальной серии вакцины оценивали по устойчивости к контрольному заражению вирулентными вирусами ящура с расчетом протективных доз, а также по результатам серологических исследований.
С целью оценки антигенной активности вакцины были проведены исследования в соответствии с международными требованиями ВОЗЖ, методика которого описана в разделе «Материалы и методы». Постановку реакции микронейтрализации проводили не менее трех раз для исключения погрешностей при постановке реакции. До вакцинации все животные были серонегативны к вирусу ящура. На 21 сутки после вакцинации был проведен забор проб крови от пяти голов крупного рогатого скота, привитых экспериментальной серией вакцины, для проведения реакции микронейтрализации. Учитывая, что для получения протективной активности противоящурной вакцины на уровне не менее 6 ПД50 КРС титр вируснейтрализующих антител должен быть не менее 1,65 Ig SN5o/см3 по каждой валентности, полученные результаты по каждому животному (таблица 1) и средний титр антител по типу
А - 2,085 ± 0,16 Ig SN50/CM3, по типу О
2,115 ± 0,06 Ig SN50/CM3, по типу SAT-2
2,07 ± 0,105 lg
SN50/CM3, подтверждает достаточную антигенную активность экспериментальной серии вакцины, гарантированно обеспечивающую требуемую протективность.
Таблица 1 - Определение титра вируснейтрализующих противоящурных антител у крупного рогатого скота, иммунизированного экспериментальной серий вакцины
n=3
0
Сутки № живот-
ного
1
2
3
4
5
M ± m
Примечание
A/G-VII
0,15
0,15
0,15
0,25
0,20
0,18 ± 0,07
21
O/IND2001
SAT-2/XIV
A/G-VII
O/IND2001
SAT-2/XIV
0,20
0,15
0,20
0,15
0,15
0,17 ± 0,03
0,15
0,20
0,15
0,20
0,15
0,17 ± 0,03
1,95 2,175 2,025 2,025 2,25
2,085 ± 0,16
2,175
2,175
2,025
2,175
2,025
2,115 ± 0,06
2,175
2,175
1,95 1,875 2,175
2,07 ± 0,105
Номер исследуемой сыворотки соответствует порядковому номеру животного
Для подтверждения протективности были проведены опыты по заражению вакцинированных животных контрольным вирусом ящура разных серотипов. Результаты контрольного заражения животных представлены в таблице 2. Защищенными считались животные без ящурных поражений конечностей. Генерализованная форма ящура наблюдалась у всех контрольных животных по каждому серотипу. По результатам наличия/отсутствия генерализованных признаков ящура у зараженных животных определяли количество протективных доз. Считалось, что вакцина прошла испытание при условии содержания в прививной дозе не менее 6-ти 50%-ных протективных доз (6 ПД50 КРС) по каждой валентности. По типу A протективная активность против гомологичного вируса ящура составила 9 ПД50 КРС/доза; по типу O - 10 ПД50 КРС/доза; по типу SAT-2 - 8 ПД50 КРС/доза. Следовательно, испытуемая вакцина обладала высокой иммуногенностью.
77
Таблица 2 - Определение протективной эффективности противоящурной вакцины на КРС по типу А, O, SAT-2
Доза
№№ КРС
Титр антител до вакцинации
A/G-VII
O/Ind2001
SAT-2/XIV
цельная
1:4
1:10
Контроль штамма
1/18/35
2/19/36
3/20/37
4/21/38
5/22/39
6/23/40
7/24/41
8/25/42
9/26/43 10/27/44 11/28/45 12/29/46 13/30/47 14/31/48 15/32/49 16/33/50 17/34/51
0,25 0,15 0,20
0,20 0,25 0,25 0,20
0,20 0,15 0,25 0,25
0,20 0,20
0,15 0,25 0,25 0,20
0,20 0,15 0,15 0,25
0,25 0,20 0,15
0,20 0,15 0,20 0,20
0,15 0,20 0,15
0,20 0,20 0,15
0,25 0,25 0,20 0,15
0,25 0,15 0,20
0,20 0,20 0,25 0,15
0,20 0,20
0,20 0,25 0,15 0,20
Развитие генерализации
A/G-VII
O/Ind2001
SAT-2/XIV
+
+
+
+
+
+
+
+
Примечания
Номера животных соответствуют типам вируса. «-» - отсутствие генерализованной формы ящура. «+» - наличие генерализованной формы ящура.
Выявление антител к неструктурным белкам вируса ящура в пробах сыворотки крови КРС в ИФА. Сыворотки крови животных из опыта на выявление антител к белкам 3ABC до и после иммунизации исследовали в ИФА. До иммунизации в сыворотках крови КРС антитела, специфичные к неструктурным белкам вируса ящура 3ABC, не были обнаружены. Результаты исследования в блокирующем варианте ИФА сывороток крови после вакцинации представлены в таблице 3. Из данных таблицы 3 следует, что процент ингибирования положительного контроля - больше 70%, что соответствует требованиям теста. Сыворотки крови, полученные от пяти голов КРС после введения 1 дозы (антигенная активность) и 1 дозы вакцины через 28 дней, имели процент ингибирования менее 50%. Таким образом, экспериментальная серия противоящурной вакцины не индуцирует у КРС выработку антител к неструктурным белкам вируса ящура.
Таблица 3 - Определение в ИФА антител к неструктурным белкам вируса ящура в сыворотках крови КРС, иммунизированного экспериментальной серией противоящурной вакцины
Исследуемые сыворотки
Положительный контроль
Отрицательный контроль
1
2
3
4
5
Значение оптической плотности
0,073 0,944
0,888
0,917
0,837
0,868
0,851
Процент ингибирования (PI), ___________%______________ ___________92,3___________ ___________ 0,5___________ ___________529____________ ___________2,9____________ ___________114____________
____________81____________
9,9
Примечание
Номер исследуемой сыворотки соответствует порядковому номеру животного
78
Заключение. Осуществлена оценка безопасности, антигенной и протективной активности экспериментальной серии противоящурной вакцины из штаммов вируса ящура A/G-VII, O/IND2001, SAT-2/XIV, полученных на суспензионной культуре клеток BHK-21/13-13c, адаптированной к бессыворо-точной питательной среде. Разработанная вакцина безопасна и эффективна, при этом не индуцирует формирование антител к неструктурным белкам вируса ящура у привитых животных. Выявлено, что протективная активность противоящурной вакцины имела высокое значение и составила у КРС по каждому серотипу не менее 6 ПД50.
Результаты проведенных исследований показали возможность репродукции вируса ящура типов A, O, SAT-2 в культуре клеток BHK-21/13-13c, выращенной на бессывороточной питательной среде.
Результаты проведенных исследований показали, что антигены вируса ящура, полученные в культуре клеток BHK-21/13-13c, выращенной на бессывороточной питательной среде, в составе вакцины обладают выраженными протективными свойствами, защищая вакцинированных животных от ящура. Биопрепарат безопасен, безвреден, авирулентен. Полученные результаты позволяют внести изменения в имеющуюся технологию изготовления противоящурных вакцин в части внедрения бессы-вороточной среды для культивирования клеток и репродукции вирусов.
Список источников
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Бессывороточная питательная среда для культивирования клеток и вирусов / Е. А. Нечаева, И. Ф. Радаева, Н. Б. Думченко [и др.] // Вестник Пермского национального исследовательского политехнического университета. Химическая технология и биотехнология. - 2018. - № 4. - С. 85-97. - DOI 10.15593/2224-9400/2018.4.07. - EDN YUQWAW.
Курченко, Г. А. 906. Изучение иммуногенной активности инактивированной сорбированной вакцины против ящура из штамма А/ВНИИЗЖ/2015 (A/ASIA/G-VII). Елькина Ю.С., Михалишин Д.В., Лозовой Д.А., Стариков В.А., Доронин М.И., Борисов А.В. // Достижения молодых ученых -в ветеринар. практику / Федер. центр охраны здоровья животных. -Владимир, 2019.-С. 7-14.-Рез. англ.-Библиогр.: с.14. Шифр 20-162Б / Г. А. Курченко // Ветеринария. Реферативный журнал. -2020. - № 4. - С. 906. - EDN YANVCU.Официальный сайт https://www.woah.org/en/home/ (дата обращения 19.03.2024).
Применение полиэтиленгликоля и Pluronic F-68 в качестве компонента бессывороточной среды для культивирования клеток линии ВНК-21/Susp/Ariah/ М. Н. Гусева, М. И. Доронин, Д. В. Миха-лишин [и др.] // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2020. - № 3(47). - С. 28-33. - DOI 10.24411/2074-5036-2020-10026. - EDN YUZJLU.
Хаустова, Н. В. Адаптация и внедрение в производство актуальных штаммов вируса ящура / Н. В. Хаустова // Вакцины нового поколения для профилактики особо опасных болезней сельскохозяйственных животных : Сборник трудов Международной научно-практической конференции, Москва, 10 октября 2023 года / Под. общ. ред. С. В. Позябина, Л. А. Гнездиловой; Министерство сельского хозяйства Российской Федерации; Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина». - Москва: Сельскохозяйственные технологии, 2023. - С. 126-131. - EDN PXMVIK.
Яковлева, А. С. Обнаружение антител к неструктурным белкам вируса ящура (обзор) / А. С. Яковлева, А. В. Щербаков // Ветеринария сегодня. - 2023. - Т. 12, № 3. - С. 190-196. - DOI 10.29326/2304-196X-2023-12-3-190-196. - EDN TSKGJL.
Ящур: факторы риска и меры контроля (обзор) / О. А. Бурова, О. И. Захарова, И. В. Яшин [и др.] // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. - 2023. - Т. 24, № 3. - С. 346-358. - DOI 10.30766/20729081.2023.24.3.346-358. - EDN DCTJPK.
Park S, Kim JY, Ryu KH, Kim AY, Kim J, Ko YJ, Lee EG. Production of a Foot-and-Mouth Disease Vaccine Antigen Using Suspension-Adapted BHK-21 Cells in a Bioreactor. Vaccines (Basel). 2021 May 13;9(5):505. doi: 10.3390/vaccines9050505. PMID: 34068378; PMCID: PMC8153295.
8.
ВОЗЖ:
Всемирная организация
здоровья
животных
[Электронный ресурс]. URL:
https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals/terrestrial-manual-online-access/ (дата обращения: 15.01.2024).
79
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
References
Serum-free nutrient medium for culturing cells and viruses / E. A. Nechaeva, I. F. Radaeva, N. B. Dum-chenko [et al.] // Bulletin of Perm National Research Polytechnic University. Chemical technology and biotechnology. - 2018. - No. 4. - P. 85-97. - DOI 10.15593 / 2224-9400 / 2018.4.07. - EDN YUQWAW. Kurchenko, G. A. 906. Study of the immunogenic activity of the inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease from the strain A / VNIIZh / 2015 (A / ASIA / G-VII). Elkina Yu. S., Mikhalishin D. V., Lozovoy D. A., Starikov V. A., Doronin M. I., Borisov A. V. // Achievements of young scientists - in veterinary practice / Federal Center for Animal Health. - Vladimir, 2019. - P. 7-14. - Res. English. -Bibliography: p. 14. Code 20-162B / G. A. Kurchenko // Veterinary science. Abstract journal. - 2020. -No. 4. - P. 906. - EDN YANVCU. Official website https://www.woah.org/en/home/ (date of access 03/19/2024).
The use of polyethylene glycol and Pluronic F-68 as a component of serum-free medium for culturing BHK-21/Susp/Ariah cells / M. N. Guseva, M. I. Doronin, D. V. Mikhalishin [et al.] // Actual issues of veterinary biology. - 2020. - No. 3(47). - P. 28-33. - DOI 10.24411/2074-5036-2020-10026. - EDN YUZJLU.
Khaustova, N. V. Adaptation and introduction into production of current foot-and-mouth disease virus strains / N. V. Khaustova // New generation vaccines for the prevention of especially dangerous diseases of farm animals: Proceedings of the International Scientific and Practical Conference, Moscow, October 10, 2023 / Under. general ed. S. V. Pozyabin, L. A. Gnezdilova; Ministry of Agriculture of the Russian Federation; Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology - MBA named after K.I. Skryabin". - Moscow: Agricultural technologies, 2023. - pp. 126-131. - EDN PXMVIK.
Yakovleva, A. S. Detection of antibodies to non-structural proteins of foot-and-mouth disease virus (review) / A. S. Yakovleva, A. V. Shcherbakov // Veterinary science today. - 2023. - Vol. 12, No. 3. - P. 190-196. - DOI 10.29326/2304-196X-2023-12-3-190-196. - EDN TSKGJL.
Foot-and-mouth disease: risk factors and control measures (review) / O. A. Burova, O. I. Zakharova, I. V. Yashin [et al.] // Agrarian science of the Euro-North-East. - 2023. - Vol. 24, No. 3. - P. 346-358. - DOI 10.30766/2072-9081.2023.24.3.346-358. - EDN DCTJPK.
Park S, Kim JY, Ryu KH, Kim AY, Kim J, Ko YJ, Lee EG. Production of a Foot-and-Mouth Disease Vaccine Antigen Using Suspension-Adapted BHK-21 Cells in a Bioreactor. Vaccines (Basel). 2021 May 13;9(5):505. doi: 10.3390/vaccines9050505. PMID: 34068378; PMCID: PMC8153295.
ВОЗЖ:
Всемирная организация
здоровья
животных
[Электронный ресурс]. URL:
https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals/terrestrial-manual-online-access/ (date of access 15.01.2024).
Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.
Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
All authors have made an equivalent contribution to the preparation of the publication. The authors declare that there is no conflict of interest.
Принята к публикации / accepted for publication 06.09.2024;
© Хаустова Н.В., Литенкова И.Ю, Гладилина С.В, Стоянов И.В., Стоянова И.Е., Буковская Л.А. 2024
