CC BY
61
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
Все изоляты были охарактеризованы методом MLVA-14, который основан на анализе локусных вариабельных тандемных повторов генома возбудителя.
MLVA-профили референтных штаммов были взяты из электронной базы данных MLVABank 5.0 tutorial version 1.6.
Кластерный анализ показал, что штаммы, которые были отнесены к III биовару вида B. melitensis (18 штаммов), группировались в общий кластер, вместе с референтным штаммом B. melitensis Ether 706.
Штаммы I биовара вида B. melitensis (4 штамма) образовали один кластер совместно с референтным штаммом B. melitensis 16M (I биовар).
Штаммы III биовара вида B. abortus (2 штамма) формировали общий, кластер, совместно с референтным штаммов B. abortus Tulya (III биовар).
Было показано, что идентичными по MLVA-генотипу являются изоляты общего географического происхождения. Так, штаммы B. melitensis С-552 и С-553, изолированные в Республики Калмыкия в 2012 г., сформировали отдельную подгруппу в пределах общего кластера, образованного штаммами III биовара вида B. melitensis.
Штаммы, выделенные в Республике Дагестан в 2012 г. и отнесенные к III биовару вида B. melitensis, были объединены в подгруппы, которые включали культуры, изолированные в одних географических точках: штаммы B. melitensis С-556 и С-557 — Хунзахский район (с. Орота), B. melitensis С-543 и С-544 — Левашинский район (с. Арада-Чугли), B. melitensis С-545 и С-546 — г. Каспийск, B. melitensis С-538 и С-539 — Шамильский район (с. Ассаб).
Показано, что метод MLVA-14 может применяться для мониторинга за миграцией бруцеллезного микроба на территории Северо-Кавказского федерального округа, а также граничащих с ним регионов.
МИТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ БЕСКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ДИКИХ И МУЗЕЙНЫХ ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS И ИХ ГЕНОТИПИРОВАНИЕ
А.Ф. Шамсутдинов12, Ю.А. Тюрин2,3, А.А. Тойменцева1
1 Институт фундаментальной медицины и биологии КПФУ, г. Казань
2 ФБУН Казанский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора
3ГБОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет МЗ РФ
Митогены вызывают феномен бласттрансфор-мации клеток, в частности поликлональную активацию лимфоцитов. Это имеет определенную патогенетическую значимость при аллергической патологии. Источником митогенов являются стафилококки. Цель исследования генотипировать штаммы S. aureus на наличие генов суперантигенных токсинов c различной митогенной активностью бесклеточных фракций. Музейный штамм S. aureus И-78. Дикие штаммы с кожи больных атопическим дерматитом в возрасте от 3 до 18 лет. Видовую идентификацию штаммов проводили с применением MALDI-TOF масс-спектрометрии. Митогенная активность (МА) бесклеточных фракций оценивалась по реакции бласттрансформации культивируемых лимфоцитов периферической крови человека (в %). Лимфоциты выделяли методом изопак-фиколовой
сепарации, контроль осуществляли методом проточной цитометрии. Очистка белковых фракций (БФ) и определение состава продуктов жизнедеятельности бактериальных культур проводили методом гель-хроматографии, анализ методом SDS-электрофореза в 12% ПААГ. Бесклеточные фракции вносили в культуру лимфоцитов и инкубировали в клеточном инкубаторе. Генотипирование бактериальной ДНК проводили ПЦР методом с определением генов энтеротоксинов (sae, seb, sec, sed, seh, seg, seo, sel, sem, tst, setl—5). Установлены следующие генотипы у митогеноактивных штаммов: S. aureus И-78 (MatchenPattern: S. aureus ssp. aureus DSM 3463), БФ1 (Мм 19; 21-30 kDa), МА = 43,0+5,0%, генотип sea+. Дикие штаммы: S. aureus № 7 (MP:S. aureus ATCC33862THL), БФ1 (Мм 19; 27 kDa), МА = 53,0+ 5,0%, генотип seg+; S. aureus № 6 (MP: S. aureus ATCC 33862THL), БФ1 (Мм 21; 32 kDa), МА=48,0+5,0%, генотип seh+, S. aureus № 5 (MP: S. aureus ATCC 29213THL), БФ1 (Мм 27; 32 kDa), МА = 38,0+5,0%, генотип seh+, S. aureus № 24 (MP: S. aureus 29213THL), БФ1 (Мм 21; 32 kDa), МА = 29,0+4,0%, генотип set1-3, seb+, S. aureus № 34 (MP: S. aureus DSM 3463 DSM), БФ1 (Мм 19; 27; 32 kDa), МА = 38,0+5,0%, генотип tst+. При генотипи-ровании в геноме митогенактивных диких штаммов стафилококков, выявлены гены суперантигенных токсинов, относящихся к четырем основным филогенетическим группам (A-D) этих белков.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЦР В ДОКЛИНИЧЕСКОМ КОНТРОЛЕ БЕЗОПАСНОСТИ ВАКЦИННОГО ШТАММА ВИРУСА КРАСНУХИ
О.А. Шамсутдинова1, И.Н. Лаврентьева2, М.Г. Чикобава1, А.В. Леонтюк1
1ФГБУ НИИ медицинской приматологии РАМН, г. Сочи 2 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
Краснуха — острое инфекционное заболевание, особенностями которого является убиквитарность, повсеместное распространение и тератогенность возбудителя. В связи с этим Европейское региональное бюро ВОЗ определяет профилактику врожденной краснухи (ВК) как одно из приоритетных направлений. Единственным эффективным методом предупреждения ВК является вакцинация. В Российской Федерации, в связи с отсутствием отечественного препарата, вакцинация против краснухи осуществляется зарубежными вакцинами. Таким образом, разработка национальной вакцины, полученной из эндемичных для территории России штаммов, является актуальной задачей.
Доклинический контроль специфической безопасности вакцинного штамма вируса краснухи включает определение остаточной нейровирулент-ности (НВ) при интрацеребральном введении препарата обезьянам. Выполнение патоморфологических исследований ЦНС и внутренних органов животных, получивших новый препарат, является обязательным при изучении остаточной НВ. Для подтверждения результатов морфологического и гистологического методов, нами был использован метод ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией, с целью выявления РНК вируса в иммунной системе и внутренних органах. Материалом для исследования служил аутопсийный материал (лимфатические узлы, кусочки легкого, поджелудочной железы, пе-
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
чени и селезенки) от четырнадцати самцов макак-резусов в возрасте от 3 до 6 лет, зараженных интраце-ребрально опытным препаратом (штамм «Орлов-В»), препаратом сравнения (штамм Wistar RA27/3), а также контрольных животных (группа плацебо). Для подготовки и проведения метода ПЦР использовали набор реагентов «АмплиСенс RubeIIa virus-FL» (ЦНИИЭ, Москва). Проведенное исследование по индикации РНК вируса краснухи в аутопсийном материале не выявило ни одного положительного случая, что соответствует результатам гистологического исследования и является свидетельством безопасности вакцинных штаммов вируса краснухи. Предложенный метод детекции НК вируса может быть использован в качестве подтверждающего теста при контроле остаточной НВ противовирусных вакцинных препаратов.
КОНСТРУИРОВАНИЕ АНТИГЕННОГО
ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА
НА ОСНОВЕ ТЕРМОЭКСТРАКТА, ВЫДЕЛЕННОГО
ИЗ КЛЕТОК БРУЦЕЛЛ В L-ФОРМЕ,
ДЛЯ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ
ДИАГНОСТИКИ
К.Ю. Ястремская, Н.Л. Баранникова, С.Ю. Соловьев, Л.М. Михайлов, Н.М. Андреевская, В.А. Михайлова, С.В. Балахонов
ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора
Бруцеллез — инфекционное заболевание с высокой потенциальной возможностью перехода в хроническую форму. Ранее показано, что в сыворотках крови больных хроническим бруцеллезом людей могут появляться антитела к бруцеллам в L-форме (Михайлов Л.М., 2010). Сложность лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме, связана с отсутствием сертифицированных препаратов, в том числе для реакции пассивной
гемагглютинации (РПГА), которая применяется при исследовании сывороток крови на бруцеллез. Поэтому конструирование диагностикумов на основе специфичных антигенных препаратов из бруцелл в L-форме для усовершенствования лабораторной диагностики актуально.
Цель: конструирование антигенного эритроци-тарного диагностикума на основе термоэкстракта, выделенного из клеток бруцелл в L-форме, и оценка его пригодности для обнаружения специфических антител при постановке РПГА.
Материалы и методы. В работе использовали термоэкстракт, выделенный из клеток культуры L-трансформанта штамма Brucella abortus И-206. Антиген адсорбировали на обработанные формалином эритроциты барана. Постановку РПГА проводили с экспериментальными сыворотками, полученными гипериммунизацией кроликов клетками бруцелл в L-форме. Специфичность сконструированного диагностикума проверяли с коммерческими агглютинирующими сыворотками: поливалентной бруцеллезной, туляремийной, холерной О-агглютинирующей, кишечноиерсиниозными О3 и О9.
Результаты. Сконструирован антигенный эри-троцитарный диагностикум на основе термоэкстракта, выделенного из клеток бруцелл в L-форме. Полученный диагностикум выявлял антитела в бруцеллезных кроличьих L-сыворотках в РПГА в разведении 1:640, с сыворотками против бруцелл в S-форме и гетерологичных микроорганизмов — реакция отрицательная, что свидетельствует о его достаточной чувствительности и специфичности.
Заключение. Показана возможность обнаружения антител к бруцеллам в L-форме в сыворотках крови с помощью полученного эритроцитарного диагностикума при постановке РПГА, что свидетельствует о перспективности использования его для усовершенствования лабораторной диагностики бруцеллеза.
