CC BY
24
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
ВЛИЯНИЕ ИНГИБИТОРОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ВИРУСОВ ГРИППА ТИПА А И В НА ПОКАЗАТЕЛИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА
Е.А. Федорова, Е.А. Баженова, С.А. Кузнецова, И.А. Дубровина, Е.В. Иванова, Н.В. Ларионова, И.В. Киселева
ФГБУ НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург
Сыворотки крови и секреты слизистых различных видов животных содержат неспецифические ингибиторы вирусов гриппа. В зависимости от класса ингибиторов, устойчивость к ним может быть связана с рецеп-торной специфичностью гемагглютинина, субстратной специфичностью нейраминидазы, характером глико-зилирования данных белков и их структурой.
Для исследования были выбраны пары вирусов, отличавшиеся по степени чувствительности к сывороточным ингибиторам в зависимости от характеристик НА (гемагглютинин) или МЛ (нейрами-нидаза). Ингибиторочувствительность оценивалась в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с нативными сыворотками лошади и морской свинки. Исследовались вирусы гриппа А подтипов Н2М2 и Н3М2, а также вирусы гриппа В. Вируссодержащую аллантоисную жидкость куриных эмбрионов вводили интраназально морским свинкам и оценивали иммуногенность в сроки 2, 4, 8 недель после заражения методами РТГА, микронейтрализации, а также определением содержания иммуноглобулинов класса G в сыворотках крови методом ИФА.
Было показано, что вирусы с разными показателями ингибиторочувствительности отличались анти-генно — титры сывороток при учете с гомологичным антигеном были выше. При учете прироста антител методами РТГА, микронейтрализации более высокие титры были выявлены с использованием ингибито-рочувствительного антигена. Видимо играло роль неспецифическое подавление активности вируса.
Замена в составе генома МЛ от ингибиторочув-ствительного вируса на МЛ от устойчивого оказывала значительное влияние на показатели ингиби-торочувствительности и результаты РТГА. При этом иммуногенность изученных пар штаммов по показателям прироста сывороточных иммуноглобулинов класса G, определенная методом ИФА, была сходной на сроках 2, 4, 8 недель.
Таким образом, при детекции гуморального иммунного ответа необходимо следить, чтобы показатель чувствительности вируса к неспецифическим ингибиторам не изменялся, поскольку данное свойство тесно связано с антигенными характеристиками вируса. Чувствительность вирусов гриппа к неспецифическим ингибиторам сыворотки крови оказывает влияние на результаты оценки показателей гуморального ответа методами РТГА и микронейтрализации.
ВИДОВАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ШИГЕЛЛ И ИХ АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ У БОЛЬНЫХ ДИЗЕНТЕРИЕЙ ПО ДАННЫМ КИБ им. С.П. БОТКИНА
Е.А. Черноземова, А.Г. Дьячков
ГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ
Проанализированы результаты бактериологического исследования испражнений больных дизентерией, находившихся на лечении в Санкт-Петер-
бургской Клинической инфекционной больнице им. С.П. Боткина в 2011—2013 гг., а также результаты исследования антибиотикорезистентности шигелл, выделенных у пациентов в 2013 г. При бактериологическом исследовании кала в 2011, 2012 и 2013 гг. было выделено 136, 146 и 109 копрокультур шигелл соответственно.
В 2011 г. в этиологической структуре шигеллезов Shigella flexneri (S. flexneri) преобладали над Shigella sonnei (S. sonnei) — 93 (68,4%) и 43 (31,6%) копрокультур. Схожая тенденция сохранялась и в 2012 г. — 96 (65,8%) и 50 (34,2%) копрокультур соответственно. Однако в 2013 г. отмечено значительное снижение доли S. flexneri до 56% (61 случай) и увеличение доли S. sonnei до 44% (48 случаев) копрокультур. В 2011 и 2012 гг. были выделены единичные штаммы S. boydii и S. dysenteriae.
Анализ антибиотикорезистентности 18 штаммов S. flexneri и 13 штаммов S. sonnei проводили с помощью автоматического анализатора bioMerieux к 11 антибактериальным препаратам: ампициллину (AM), цефтриаксону (TX), цефепиму (CFP), имипе-нему (IP), тетрациклину (TE), хлорамфениколу (CL), амикацину (AK), гентамицину (GM), налидиксовой кислоте (NLA), ципрофлоксацину (CI), тримето-приму/сульфаметоксазолу (SXT). Согласно полученным данным, выявлена различная резистентность S. flexneri и S. sonnei к антибактериальным препаратам: к АМ — 94,4 и 23,1%, к TE — 93,8 и 61,5%, к CL — 81,3 и 15,4%, к NLA — 43,8 и 92,3%, к CI — 38,9 и 15,4%, к SXT — 41,2 и 61,5% соответственно. Все исследованные штаммы шигелл были резистентны к аминогликозидам, в то же время 100% выделенных культур были чувствительны к имипенему и цефе-пиму. К цефтриаксону были чувствительны 100% штаммов S. flexneri и 86,9% штаммов S. sonnei.
Таким образом, показано нарастание доли S. sonnei среди больных острой дизентерией в 2013 г. Выявлено, что профиль антибиотикорезистентно-сти S. flexneri и S. sonnei имеет существенные различия. Цефтриаксон сохраняет высокую активность в отношении обоих возбудителей, в то же время значительная доля S. flexneri (38,9%) является резистентной к ципрофлоксацину.
К ВОПРОСУ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЗОЛЯТОВ БРУЦЕЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИЯХ РЕСПУБЛИКИ ДАГЕСТАН И РЕСПУБЛИКИ КАЛМЫКИЯ В 2012-2013 гг.
Л.И. Шакирова
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Бруцеллез — эндемичная инфекция для южных регионов России, которые обеспечивают основные показатели заболеваемости по Российской Федерации.
В работе изучены 24 клинических изолята бру-целл, выделенные на территории республик Дагестан и Калмыкия в 2012—2013 гг. Первоначально культуры были охарактеризованы в соответствии с традиционной схемой типирования. Так, из 18 штаммов, изолированных в 2012 г. в Республике Дагестан, три — были отнесены к I биовару вида B. melitensis, 15 штаммов — к III биовару вида B. melitensis, два штамма, выделенные на территории Республики Калмыкия в 2012 г. — к III биовару вида B. abortus, два — к III биовару вида B. melitensis.
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
Все изоляты были охарактеризованы методом MLVA-14, который основан на анализе локусных вариабельных тандемных повторов генома возбудителя.
MLVA-профили референтных штаммов были взяты из электронной базы данных MLVABank 5.0 tutorial version 1.6.
Кластерный анализ показал, что штаммы, которые были отнесены к III биовару вида B. melitensis (18 штаммов), группировались в общий кластер, вместе с референтным штаммом B. melitensis Ether 706.
Штаммы I биовара вида B. melitensis (4 штамма) образовали один кластер совместно с референтным штаммом B. melitensis 16M (I биовар).
Штаммы III биовара вида B. abortus (2 штамма) формировали общий, кластер, совместно с референтным штаммов B. abortus Tulya (III биовар).
Было показано, что идентичными по MLVA-генотипу являются изоляты общего географического происхождения. Так, штаммы B. melitensis С-552 и С-553, изолированные в Республики Калмыкия в 2012 г., сформировали отдельную подгруппу в пределах общего кластера, образованного штаммами III биовара вида B. melitensis.
Штаммы, выделенные в Республике Дагестан в 2012 г. и отнесенные к III биовару вида B. melitensis, были объединены в подгруппы, которые включали культуры, изолированные в одних географических точках: штаммы B. melitensis С-556 и С-557 — Хунзахский район (с. Орота), B. melitensis С-543 и С-544 — Левашинский район (с. Арада-Чугли), B. melitensis С-545 и С-546 — г. Каспийск, B. melitensis С-538 и С-539 — Шамильский район (с. Ассаб).
Показано, что метод MLVA-14 может применяться для мониторинга за миграцией бруцеллезного микроба на территории Северо-Кавказского федерального округа, а также граничащих с ним регионов.
МИТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ БЕСКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ДИКИХ И МУЗЕЙНЫХ ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS И ИХ ГЕНОТИПИРОВАНИЕ
А.Ф. Шамсутдинов12, Ю.А. Тюрин2,3, А.А. Тойменцева1
1 Институт фундаментальной медицины и биологии КПФУ, г. Казань
2 ФБУН Казанский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора
3ГБОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет МЗ РФ
Митогены вызывают феномен бласттрансфор-мации клеток, в частности поликлональную активацию лимфоцитов. Это имеет определенную патогенетическую значимость при аллергической патологии. Источником митогенов являются стафилококки. Цель исследования генотипировать штаммы S. aureus на наличие генов суперантигенных токсинов c различной митогенной активностью бесклеточных фракций. Музейный штамм S. aureus И-78. Дикие штаммы с кожи больных атопическим дерматитом в возрасте от 3 до 18 лет. Видовую идентификацию штаммов проводили с применением MALDI-TOF масс-спектрометрии. Митогенная активность (МА) бесклеточных фракций оценивалась по реакции бласттрансформации культивируемых лимфоцитов периферической крови человека (в %). Лимфоциты выделяли методом изопак-фиколовой
сепарации, контроль осуществляли методом проточной цитометрии. Очистка белковых фракций (БФ) и определение состава продуктов жизнедеятельности бактериальных культур проводили методом гель-хроматографии, анализ методом SDS-электрофореза в 12% ПААГ. Бесклеточные фракции вносили в культуру лимфоцитов и инкубировали в клеточном инкубаторе. Генотипирование бактериальной ДНК проводили ПЦР методом с определением генов энтеротоксинов (sae, seb, sec, sed, seh, seg, seo, sel, sem, tst, setl—5). Установлены следующие генотипы у митогеноактивных штаммов: S. aureus И-78 (MatchenPattern: S. aureus ssp. aureus DSM 3463), БФ1 (Мм 19; 21-30 kDa), МА = 43,0+5,0%, генотип sea+. Дикие штаммы: S. aureus № 7 (MP:S. aureus ATCC33862THL), БФ1 (Мм 19; 27 kDa), МА = 53,0+ 5,0%, генотип seg+; S. aureus № 6 (MP: S. aureus ATCC 33862THL), БФ1 (Мм 21; 32 kDa), МА=48,0+5,0%, генотип seh+, S. aureus № 5 (MP: S. aureus ATCC 29213THL), БФ1 (Мм 27; 32 kDa), МА = 38,0+5,0%, генотип seh+, S. aureus № 24 (MP: S. aureus 29213THL), БФ1 (Мм 21; 32 kDa), МА = 29,0+4,0%, генотип set1-3, seb+, S. aureus № 34 (MP: S. aureus DSM 3463 DSM), БФ1 (Мм 19; 27; 32 kDa), МА = 38,0+5,0%, генотип tst+. При генотипи-ровании в геноме митогенактивных диких штаммов стафилококков, выявлены гены суперантигенных токсинов, относящихся к четырем основным филогенетическим группам (A-D) этих белков.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЦР В ДОКЛИНИЧЕСКОМ КОНТРОЛЕ БЕЗОПАСНОСТИ ВАКЦИННОГО ШТАММА ВИРУСА КРАСНУХИ
О.А. Шамсутдинова1, И.Н. Лаврентьева2, М.Г. Чикобава1, А.В. Леонтюк1
1ФГБУ НИИ медицинской приматологии РАМН, г. Сочи 2 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
Краснуха — острое инфекционное заболевание, особенностями которого является убиквитарность, повсеместное распространение и тератогенность возбудителя. В связи с этим Европейское региональное бюро ВОЗ определяет профилактику врожденной краснухи (ВК) как одно из приоритетных направлений. Единственным эффективным методом предупреждения ВК является вакцинация. В Российской Федерации, в связи с отсутствием отечественного препарата, вакцинация против краснухи осуществляется зарубежными вакцинами. Таким образом, разработка национальной вакцины, полученной из эндемичных для территории России штаммов, является актуальной задачей.
Доклинический контроль специфической безопасности вакцинного штамма вируса краснухи включает определение остаточной нейровирулент-ности (НВ) при интрацеребральном введении препарата обезьянам. Выполнение патоморфологических исследований ЦНС и внутренних органов животных, получивших новый препарат, является обязательным при изучении остаточной НВ. Для подтверждения результатов морфологического и гистологического методов, нами был использован метод ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией, с целью выявления РНК вируса в иммунной системе и внутренних органах. Материалом для исследования служил аутопсийный материал (лимфатические узлы, кусочки легкого, поджелудочной железы, пе-
