CC BY
33
УДК 663.053
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОТОСУБТИЛИНА Г3х ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ОБРАЗОВАНИЙ МИКРОЭМУЛЬСИЙ ПРИ ГИДРОЛИЗЕ ПАНЦИРНЫХ ОТХОДОВ СЕВЕРНОЙ КРЕВЕТКИ
М. В. Самсонов
USING PROTOSUBTILIN G3x TO PREVENT THE FORMATION OF MICROEMULSIONS UNDER HYDROLYSIS OF CRUSTACEAN WASTE OF
NORTHERN SHRIMP
M. V. Samsonov
В данной статье представлены результаты теоретических и экспериментальных исследований влияния протеолиза на панцирные отходы северной розовой креветки Pa.nda.lus Ъorealis в присутствии мультиферментного препарата Протосубтилин Г3х. Гидролиз проходил в термостате четыре часа при постоянной температуре 37 0С и отсутствии света.
Анализ полученных данных по гидролизу ферментно-субстратной системы с различной начальной концентрацией протеаз (0,3; 0,5 и 0,7% от массы сырья) свидетельствует о возможной зависимости, при которой увеличение азота концевых аминогрупп связано с нарастанием эмульгирующих свойств азотосодержащих веществ (АСВ) различной молекулярной массы. При этом установлено, что значительная концентрация гидрофобных низкомолекулярных АСВ влияет на образование многофазных микрогетерогенных систем (микроэмульсии), не позволяющих эффективно фракционировать белковые взвеси и липиды.
Экспериментальные исследования показали, что концентрация ферментного препарата 0,7% в течение первого этапа протеолиза повышает степень депротеинизации панцирьсодержащих отходов (ПСО) до максимального уровня при одинаковом значении АСВ с эмульгирующими свойствами. Это объясняется отщеплением белковых взвесей с гидрофильными аминокислотами на концах от субстрата. Увеличенная концентрация протеазы дает возможность проводить параллельные реакции гидролиза субстрата и белковых взвесей, перешедших в бульон, с высвобождением липидов. Установлено, что при меньших концентрациях (0,5 и 0,3%) ферментного препарата количество эмульгированных липидов в гидролизате увеличивается.
Использование хитозана в качестве осаждающего агента позволило определить оптимальное время гидролиза (2 ч), при котором достигается максимальное осаждающее значение для АСВ в эмульгированном и свободном виде (96%). Доказано, что соотношение эмульгированных липидов среднего слоя к общему значению жира в гидролизате обусловливает динамику образования микроэмульсий.
протеолиз, белок, протосубтилин Г3х, азот концевых аминогрупп, динамика, расщепление, эмульсия
This article presents the results of theoretical and experimental studies on the influence of proteolysis in crustacean wastes of the Northern pink shrimp Pandalus borealis in the presence of a multi enzyme preparation protosubtilin G3x. The hydrolysis took place in the thermostat, four hours at a constant temperature of 370 and absence of light.
Analysis of experimentally obtained data on the hydrolysis of enzyme-substrate systems with different initial protease concentration (0,3%, 0,5% and 0,7% by weight of raw material) shows possible dependence of the buildup of nitrogen terminal amino groups with increasing hydrophobic aspirations of nitrogen containing substances (NCS) of different molecular weight. Significant concentration of hydrophobic low-molecular NCS influences the formation of multi-phase microheterogeneous systems (microemulsions) that does not allow effective fractionation of protein suspension and lipids.
A large concentration of enzyme preparation allows us at the first stage of proteolysis to increase the degree of PRS deproteinization to the maximum level, with the same value of NCS with a hydrophobic aspiration. This is achieved by chipping off of the substrate protein suspensions with hydrophilic amino acids at the ends. The increased concentration of the protease allows for parallel reactions of hydrolysis of substrate and protein suspensions that have fallen into the broth, with the release of lipids. A smaller value of the enzyme preparation increases the number of emulsified lipids in the hydrolysate.
The use of chitosan as a precipitating agent allowed us to determine the optimal time of hydrolysis, at which the maximum value for the NCS is achieved in emulsified and free condition. To determine the dynamics of the formation of microemulsions we used the dependence of emulsified lipids of the middle layer on the total value in the hydrolyzate.
proteolysis, protein, protosubtilin G3x, nitrogen of the amino end-groups, dynamics, splitting, emulsion
Гидролиз ПСО ракообразных является перспективным направлением переработки гидробионтов. Он позволяет получать высококачественный биологический продукт с большим содержанием протеина, липидов и каротиноидов. Применение протеаз является более предпочтительным способом переработки панцирьсодержащих отходов по сравнению с другими методами проведения гидролиза, так как ферментные препараты имеют значительную специфичность воздействия на субстрат, а протеолиз проходит в "приемлемых" условиях, что дает возможность сохранять биологически активные комплексы (БАК) с разным количественным составом в гидролизате [1].
Изучение ферментативного гидролиза белкового сырья позволяет определять уровень и степень депротеинизации субстратов, которые необходимо учитывать при выборе ферментного препарата, начального состояния и вида сырья, режима и продолжительности процесса гидролиза [1].
При протеолизе образуются моно- и мультикомпонентные БАК с различным распределением по молекулярной массе [2]. Соотношение компонентов получаемых гидролизатов обуславливается применяемыми ферментными препаратами и режимами протеолиза [1, 2].
Под действием ферментов разрушаются связи протеина с липидами и хитино-минеральным матриксом, что облегчает дальнейшее фракционирование компонентов, увеличивая хранимоспособность гидролизатов, а также расширяет ассортимент получаемых БАК. Однако применение ряда ферментных препаратов не позволяет эффективно использовать механические методы (центрифугирование, сепарирование) фракционирования и осаждения, так как связано с появлением устойчивых микроэмульсий (типа вода-липид). Образование эмульсий может быть обусловлено специфичностью субстрата, ферментного препарата, а также режимом проведения протеолиза [3].
Динамика образования эмульсий определяется устойчивым распределением одной жидкости в другой в виде микрокапель. Исследования ученых Л. Я. Кремнева, А. А. Равделя показали, что процесс эмульгирования начинается с механического диспергирования, т.е. микрокапли приобретают форму цилиндра-нити, после этого происходит их распад с последующей стабилизацией осколков, присутствующих в системе эмульгаторов [4].
В качестве эмульгаторов (гидролизата) могут выступать боковые остатки гидрофобных полипептидов, т. е. азотосодержащие вещества (АСВ), несущие заряды и способные к образованию связей (водородных). При этом отрицательно заряженные углероды (связи с водородом неполярные) не образуют водородные связи, значит, углеводородные цепи гидрофобные. Таким образом, происходит выталкивание этих цепей молекулами воды с произвольным образованием ассоциатов. Из-за некоторых аминокислот (Val, Ala, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trt) в белках возникают гидрофобные свойства, способствующие сворачиванию полипептидных цепей в клубок, внутри которого находятся гидрофобные полипептиды со связанными липидами, а на поверхности - гидрофильные группы [5].
Наличие в составе гидролизата стабильных эмульсий ведет к усложнению и удорожанию технологического процесса концентрации и фракционирования или к потерям БАВ. При этом конечный продукт может содержать существенное количество липидов (до 8-9%), снижающих, в свою очередь, возможности его широкого применения и хранимоспособность [6, 7].
Основные способы разрушения эмульсий связаны с применением температурного и рН фактора, дополнительных ферментных препаратов, а также использованием органических растворителей, что приводит к увеличению затрат на переработку ПСО, снижению качественных показателей конечного продукта и усложнению технологического процесса переработки [8, 9].
Существующий способ получения белковых гидролизатов с низким содержанием липидов, предложенный А. П. Черногорцевым и Р. Г. Разумовской, основан на частичном протеолизе (или автопротеолизе) с высвобождением высокомолекулярных белковых комплексов и дальнейшим термическим осаждением [10], что позволяет эффективно отделить липидную фракцию от белкового субстрата, при этом разрушаются каротиноиды и каротинопротеины (КПК) [11].
Возможным способом снижения образования микроэмульсий в гидролизате является предварительное суспензирование [12, 13]. Такое технологическое решение позволяет удалять значительную часть липидов перед гидролизом, снизив начальную их концентрацию в субстрате [13].
Применение суспензирования и оптимизированного режима протеолиза дает возможность уменьшить потери БАК, однако специфичность и себестоимость
ферментных препаратов не позволяют эффективно и широко внедрять технологию гидролиза ПСО в производство [13]. Решение данной проблемы заключается в поиске механизмов управления процессами образования микроэмульсий, использования протеазы с необходимой специфичностью воздействия на субстрат и применения предварительного суспензирования [14, 15].
В качестве недорогого ферментного препарата может использоваться Протосубтилин Г3х нейтральный. Его особенность - наличие в составе комплекса протеаз (нейтральной и щелочной), что позволяет подбирать желаемые режимы гидролиза и концентрацию фермента [14 - 16].
Цель работы: используя протосубтилин Г3х, выявить закономерности для управления процессами образования микроэмульсий при протеолизе вареных ПСО северной креветки (Pandalus borealis) во время извлечения КПК.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В качестве объекта исследований использовался вареный белково-минеральный субстрат северной креветки, дефростированный на воздухе, с частично удаленным эпителиальным слоем. Химический состав субстрата - белок 11,2 %, липиды 5,5 (в том числе 0,98 % каротиноидов), минеральные вещества 5,2, влага 74 , хитин 4,2%.
Для гидролиза использовалась протеаза микробиологического происхождения - Протосубтилин Г3х нейтральный (protosubtilin G3x), таблица.
Таблица. Характеристика протеолитических ферментов Протосубтелина Г3х Table. Characteristics of Protosubtilin G3x proteolytic enzymes
Наименова- Содержа- mфермента Удель- Опти- Му, Специфичность
ние протеазы ние фер- на 1 г ная ак- мумы кДа действия
в составе мента на препа- тив-
прото- 1 г рата, ность
субтилина препарата, ед. г фермента, ед./г
Способны
разрушать все
типы белковых
Нейтральная 75 -3 x 10- 70 ±7 рН 35- матриксов.
протеаза 12 6,87,2; t 35-50°С 40 Высвобождает аминокислоты с гидрофобными свойствами [17]
Обладает
Щелочная поверхностно-
(сериновая) 45 -1.8 x 1012 До рН 27- активными
протеаза 1100 8,010,0; t 30-60°С 30 свойствами. Двухступенчатая реакция гидролиза[17]
Измельчение ПСО производилось в куттере Ртак 5 к. Суспензирование осуществлялось при температуре 210 С и длилось не более 5 мин. Процесс протеолиза продолжался 4 ч при температуре 37 оС в термостате, концентрация фермента составила 0,3% (образец 3), 0,5 (образец 1) и 0,7% (образец 2) от массы сырья, гидромодуль 1:10 (0,1).
Массовая доля влаги определялась по ГОСТ 13496.3-92 (ИСО 6496-83), сущность метода заключается в высушивании до постоянной массы при температуре 100-105 0С в течение не менее 3 ч.
Массовая доля хитина вычислялась посредством последовательного выдерживания ПСО в концентрированных растворах кислоты, щелочи, промывки, сушки и расчета массовой доли осадка.
Формольно-титруемый азот (ФТА) находился по методу Черногорцева.
Для определения динамики перехода азотосодержащих веществ в бульон использовался ГОСТ Р 54607.7-2016. Отбор и подготовка проб осуществлялись по ГОСТ 26313 и ГОСТ 26671.
Массовую долю жира находили с помощью ГОСТ 13496.15-2016.
Применялись стандартные методы очистки каротиноидов и подготовки анализов по ГОСТ 54058-2010. Содержание астаксантина в образцах, полученных вышеперечисленными способами, определяли на фото-электроколориметре (ФЭК) модели 2МК.
Центрифугирование проводилось при 5000 об/мин в течение 15 мин.
Растворение хитозана осуществлялось в водной среде с кислотным значением рН=4,5, обезвоживание взвесей, концентрированных этим осадителем, -в вакуумной установке на базе лаборатории АтлантНИРО.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Показатели ФТА (рис. 1), использовались для отображения концевых аминогрупп с гидрофильными свойствами [18, 19].
Рис. 1. Динамика нарастания азота концевых аминогрупп в среднем слое (ФТАср) после центрифугирования Fig. 1. Dynamics of the increase of the nitrogen amino end-groups in the middle layer (FTN) after centrifugation
Положительная динамика ФТА каждого образца наблюдается на всех временных этапах гидролиза, что объясняется отщеплением от субстрата крупных белковых взвесей с последующим переходом их в бульон и дальнейшим гидролизом. Интенсивность нарастания азота концевых аминогрупп обуславливается начальной концентрацией фермента в образцах (чем больше начальная концентрация фермента, тем интенсивнее динамика ФТА). При этом максимальное значение ФТА наблюдалось у образца 2.
Для определения количества АСВ с эмульгирующими стремлениями использовалось соотношение ФТАср /ОА (рис. 2).
Рис. 2. Соотношение ФТАср / ОА гидролизата Fig. 2. Correlation between of FTN and ON hydrolysate
Соотношение ФТАср/ОА для трех образцов находится в пределах 0,28% (рис. 2). Однако при схожих динамиках и режимах гидролиза образцы имели разную концентрацию фермента и разную степень гидролиза субстрата (в зависимости от количества протеазы). Следовательно, они могут иметь одинаковые значения АСВ с эмульсирующими свойствами.
Определение количества низкомолекулярных эмульгированных АСВ осуществлялось с применением осаждающего агента. В качестве осадителя использовался хитозан (выбор обуславливается его высокими осаждающими свойствами и химической инертностью к компонентам гидролизата) [20].
Осаждение хитозаном показывает степень гидролиза АСВ, перешедших в бульон и обладающих эмульгирующими свойствами (рис. 3). Максимальное значение осажденных АСВ для всех образцов соответствовало двум часам гидролиза, это объясняется интенсивным переходом в бульон крупных белковых взвесей и комплексов (КПК), отщепленных от субстрата. Дальнейшие временные этапы гидролиза характеризуются снижением осаждаемых АСВ, которое может
быть связано с распадом эмульгирующих образований на низкомолекулярные осколки, не осаждаемые хитозаном и не образующие эмульсии [19, 20].
Однако образец 2 характеризуется более высоким значением осаждённых АСВ на временном интервале в два часа (-96%), следовательно, оставшиеся 4% -это низкомолекулярные АСВ и прочие (минеральные), не образующие эмульсий, что, возможно, объясняется недостаточным содержанием липидов в среднем слое или отсутствием эмульгирующих стремлений.
Рис. 3. Осаждение хитозаном азотосодержащих веществ среднего слоя Fig. 3. Deposition of the chitosan nitrogen-containing substances of the middle layer
Дальнейшие исследования связаны с изучением эмульгированных липидов гидролизата в сопоставлении с общим количеством извлеченного жира (рис. 4).
Рис. 4. Отношение липидов среднего слоя к сумме липидов верхнего и среднего слоя Fig. 4. Dependence of lipids in the middle layer on the amount of lipids in the upper and middle layer
Соотношение липидов разных слоев варьируется в пределах 3%, однако образец 2 достигает предельного значения в течение первого часа гидролиза (0-60), что объясняется максимальной степенью эмульгированности липидов среднего слоя. Следующий этап (60-180 мин) характеризуется снижением количества эмульсий за счет параллельной реакции распада крупных взвесей АСВ, перешедших в бульон, на низкомолекулярные АСВ с высвобождением липидов и гидролизом субстрата. Завершающий этап отличается нулевым изменением, что объясняется образованием стабильных эмульсий среднего слоя за счет эмульгирующих стремлений АСВ с низкой молекулярной массой.
Образец 1 на начальном этапе (0-90 мин) также характеризуется положительной динамикой и дальнейшей стабилизацией (при достижении максимального значения) эмульгированных липидов среднего слоя на последующих этапах. Однако ферментативная активность по отношению к АСВ, перешедшим в бульон, минимальна.
Образец 3 отличается положительной линейной динамикой на всех этапах протеолиза, что связано с медленным переходом взвесей белка в субстрат из-за недостаточного влияния фермента на него и АСВ, перешедших в бульон.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Обоснованы оптимальные условия гидролиза (2 ч при t=37 оС, рН 7,2) и концентрация ферментного препарата (0,7%).
При варьировании концентрации ферментного препарата протосубтилин Г3х в 0,7 % наблюдается параллельная реакция гидролиза субстрата и АСВ, перешедших в бульон, что позволяет контролировать процессы образования и количество эмульсий в гидролизате. Концентрации в 0,3 и 0,5% недостаточно для проведения параллельных реакций.
Выявлено, что при разной степени гидролиза субстрата количественные показатели АСВ с эмульгирующими свойствами могут быть одинаковыми.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Немцев, С. В. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана / С. В. Немцев // Биотехнология. - 2001. - № 6. - С. 37 - 42.
2. Кретович, В. Л. Введение в энзимологию / В. Л. Кретович. - Москва: Наука, 1974. - 270 с.
3. Неклюдов, А. Д. Получение и очистка белковых гидролизатов / А. Д. Неклюдов, А. Н. Иванкин, А. В. Бердутина // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. - Т. 36, № 4. - С. 371 - 379.
4. Мицеллообразование, солюбилизация и микроэмульсии / под ред. К. Миттел. - Москва: Коллоидная химия, 1980. - 154 с.
5. Келети, Т. Основы ферментативной кинетики / Т. Келети. - Москва: Мир, 1990. - 78 с.
6. Бахолдина, Л. П. Исследования технологических характеристик и процессов обработки антарктического криля / Л. П. Бахолдина // Сборник трудов АтлантНИРО. - 2008. - № 3. - С. 27 - 35.
7. Корниш-Боуден, Э. Основы ферментативной кинетики / Э. Корниш-Боуден. - Москва: Мир, 1979. - 139 с.
8. Armenta, E. Amino acid profile and enhancement of the enzymatic hydrolysis of fermented shrimp carotenoproteins/ E. Armenta, I. Guerrero-Legarreta // Journal of Food Chemistry. - 2009. - V.112, No 2. - Р. 310 - 315.
9. Неклюдов, А. Д. Получение и очистка белковых гидролизатов /
A. Д. Неклюдов, А. Н. Иванкин, А. В. Бердутина // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. - Т. 36, № 4. - С. 371- 379.
10. Толстогузов, В. Б. Новые формы белковой пищи. Технологические проблемы и перспективы производства / В. Б. Толстогузов. - Москва: Агропромиздат, 1987. - 303 с.
11. Simpson, B. K. The use of proteolytic enzymes to extract Carotenoproteins from shrimp wastes / B. K. Simpson // Journal of Applied Biochemistry. - 1985. - V. 44, No 1. - P. 212 - 222.
12. Самсонов, М. В. Исследование процесса гидролиза панцирных отходов вареной креветки с использованием протосубтилина / М. В. Самсонов, М. Л. Винокур, М. П. Андреев // Известия КГТУ - 2017. - № 46. - С. 90 - 101.
13. Немцев, С. В. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных / С. В. Немцев. - Москва: Изд-во ВНИРО, 2006. - 107 с.
14. Rawlings, N. D. Proteolytic enzymes: aspartic and Metallopeptidases / N. D. Rawlings, A. J. Barrett // Methods in enzymology. - 1995. - V. 248. -P. 183 - 228.
15. Matthews, B. W. Threedimensional structure of thermolysin /
B. W. Matthews, J. N.Jansonius, P. M. Colman, B. P. Schoenborn // Nature new biology. - 1972. - V. 238. - P. 37 - 41.
16. Stark, W. The structure of neutral protease from Bacillus cereus at 0.2-nm resolution / W. Stark, R. A.Paupit, K. S.Wilson, J. N. Jansonius // Eur. J. Biochem. -1992. - V. 207. - P. 781-791.
17. Rao, M. B. Molecular and biotechnological aspects of microbial proteases / M. B. Rao, A. M. Tanksale, M. S. Ghatge, V. V. Deshpande // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 1998. - V. 62, No 3. - P. 597 - 635.
18. Ferrer, J., Paez, G., Marmol Z., Ramones E., Garcia H., Forster C.F. Acid hydrolysis of shrimp-shell wastes and the production of single cell protein from the hydrolysate [Bioresource Technology]. -1996, Р. 55 - 60.
19. Черногорцев, А. П. Технология получения новых белковых продуктов: учеб. пособие для вузов / А. П. Черногорцев, Р. Г. Разумовская. - Мурманск, 1999. -76 .
20. Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / В. П. Варламов [и др.]. - Москва: Наука, 2002. - 368 с.
REFERENCES
1. Nemtsev S. V. Poluchenie nizkomolekuljarnogo vodorastvorimogo hitozana [Preparation of low molecular water-soluble chitosan]. Biotechnology, 2001, no 6, pp. 37-42.
2. Kretovich V. L. Vvedenie v jenzimologiju [Introduction to Enzymology] Moscow, 1974, vol. 1, pp. 250-270.
3. Nekljudov A. D. Poluchenie i ochistka belkovyh gidrolizatov [Obtaining and purification of protein hydrolysates]. Journal of Applied biochemistry and Microbiology, 2000, vol. 34, pp. 371-379.
4. Mittel K. Micelloobrazovanie, soljubilizacia i mikrojemul'sii [Micelle formation, solubilisation and microemulsions]. Moscow, Journal Colloid and surface chemistry, 1980, 154 p.
5. Keleti T. Osnovy fermentativnoj kinetiki [Fundamentals of enzyme kinetics]. Moscow, Izd. tsentr "MIR", 1990, 78 p.
6. Baholdina L. P. Issledovanija tehnologicheskih harakteristik i processov obrabotki antarkticheskogo krilja [Study of technological characteristics and processing of Antarctic krill]. Journal of AtlantNIRO, 2008, vol. 3, pp. 27-35.
7. Kornish-Bouden JE. Osnovy fermentativnoj kinetiki [Basics of enzyme kinetics]. Moscow, Izd. tsentr "MIR",1979, 139 p.
8. Armenta E. Amino acid profile and enhancement of the enzymatic hydrolysis of fermented shrimp carotenoproteins. Journal of Food Chemistry. 2009, vol. 112, no. 2, pp. 310-315.
9. Nekljudov A. D. Poluchenie i ochistka belkovyh gidrolizatov [Production and purification of protein hydrolysates]. Journal Applied biochemistry and Microbiology, 2000, vol. 4, pp. 371-379.
10. Tolstoguzov V. B. Novye formy belkovoj pishehi. Tehnologicheskie problemy i perspektivy proizvodstva [New forms of protein foods. Technological problems and production prospects]. Moscow, Izd. tsentr "Agropromizdat", 1987, 303 p.
11. Simpson B. K. The use of proteolytic enzymes to extract Carotenoproteins from shrimp wastes. Journal of Applied Biochemistry. 1985, vol. 44, no. 1, pp. 212-222.
12. Samsonov M. V. Issledovanie processa gidroliza pancirnyh othodov varenoj krevetki s ispolzovaniem protosubtilina [Study of the hydrolysis process of crustacean waste of boiled shrimps using protosubtilin]. Journal of the proceedings of KSTU, 2017, vol. 46, pp. 90-101.
13. Nemtsev S. V. Kompleksnaja tehnologija hitina i hitozana iz pancirja ra-koobraznyh [Complex technology of chitin and chitosan from the shell of crustaceans]. Moscow, Izd. tsentr "VNIRO", 2006, 107 p.
14. Rawlings N. D. Proteolytic enzymes: aspartic and Metallopeptidases. Journal Methods in enzymology. 1995, vol. 248, pp. 183-228.
15. Matthews B. W. Threedimensional structure of thermolysin. Journal Nature new biology. 1972, vol. 238, pp. 37-41.
16. Stark W. The structure of neutral protease from Bacillus cereus at 0.2-nm resolution. Journal Biochem. 1992, vol. 207, pp. 781-791.
17. Rao M. B. Molecular and biotechnological aspects of microbial proteases. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998, vol. 62, no 3, pp. 597-635.
18. Ferrer J. Acid hydrolysis of shrimp-shell wastes and the production of single cell protein from the hydrolysate. JournalBioresource Technology. 1996, pp. 55-60.
19. Chernogorcev A. P. Tehnologija poluchenija novyh belkovyh produktov: uchebnoe posobie dlja vuzov [Technology of new protein products: textbook for universities]. Murmansk, 1999, 76 p.
20. Varlamov V. P. Hitin i hitozan: poluchenie, svojstva i primenenie [Chitin and chitosan: production, properties and applications]. Moscow, 2002, 368 p.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Самсонов Максим Вячеславович - Калининградский государственный технический университет; аспирант кафедры «Технология продуктов питания»;
E-mail: Samsonov-Sk@ya.ru
SamsonovMaximVyacheslavovich - Kaliningrad State Technical University;
Postgraduate student of the Department of Food Technology;
E-mail: Samsonov-Sk@ya.ru
