CC BY
18
УДК 663.053
ЗАВИСИМОСТЬ СТЕПЕНИ ГИДРОЛИЗА БЕЛКА И ИНТЕНСИВНОСТИ ДЕПРОТЕИНИЗАЦИИ ПАНЦИРЬСОДЕРЖАЩИХ ОТХОДОВ ОТ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОГО СУСПЕНЗИРОВАНИЯ ХИТИНО-МИНЕРАЛЬНОГО СУБСТРАТА
М. В. Самсонов, М. Л. Винокур
DEPENDENCE OF THE DEGREE OF PROTEIN HYDROLYSIS AND DEPROTEINIZATION INTENSITY OF CRUSTACEANS WASTE FROM PRELIMINARY SUSPENSION OF CHITINOUS-MINERAL SUBSTRATE
M. V. Samsonov, M. L. Vinokur
Существующие технологии переработки панцирьсодержащих отходов (ПСО) позволяют получать белковые концентраты для дальнейшего производства кормов или пищевых (в меньшей степени) продуктов. Ограниченность применения белковых экстрактов пищевого назначения связана в первую очередь со значительной концентрацией липидов (на сухое вещество) или высокой стоимостью технологии их выделения. Возможное решение существующих проблем связывается с внедрением на начальном технологическом этапе предварительного сус-пензирования, проходящего при 10 град. С, и применением утилитарных протео-литических модификаторов хитино-минерального сырья, где в качестве недорогого ферментного препарата микробиологического происхождения предлагается использовать Протосубтилин Г3х-70 нейтральный. Снижение массовой доли ли-пидов в получаемых концентратах возможно при достижении необходимой степени протеолитической деструкции белковых взвесей, отщеплённых от ПСО, вследствие чего происходит ослабление белково-липидных связей с последующим высвобождением жира. Однако высокая степень протеолитической деструкции извлечённого из ПСО белка увеличивает дальнейшие технологические издержки на осаждение компонентов гидролизата (пептидов, астаксантина). В работе показано, что применение предварительного суспензирования не только улучшает последующую депротеинизацию хитино-минерального субстрата, но и гарантирует необходимую степень протеолитической деструкции отщеплённых белковых взвесей уже в течение первых 120 мин протеолиза. Невысокая температура проведения суспензирования обеспечивает выделяемый белковый концентрат большим содержанием астаксантина. Внедрение предварительного суспен-зирования перед протеолизом позволяет удалять легкодоступные белки клеточного слоя ПСО, что в дальнейшем дает возможность косвенно регулировать воздействие протеолитического модификатора на часть отщеплённого от ПСО белка.
протеолиз, азот концевых аминогрупп, белок, гидролизат, панцирные отходы креветок, предварительное суспензирование
Existing technologies of processing crustaceans waste allow to obtain protein concentrates for further production of feed or food (to a lesser extent) products. The limited use of protein extracts for food purposes are primarily associated with a signify-cant concentration of lipids (on a dry basis) or high cost of its (extract) isolation technology. A possible solution of the existing problems is to introduce at the initial technological stage of pre-suspension passing at 10 degrees C and the use of inexpensive pro-teolytic modifiers of chitin-mineral raw materials, where as an inexpensive enzyme preparation of microbiological origin, it is proposed to use Protosubtilin G3x-70 neutral. The decrease in the mass fraction of lipids in the resulting concentrates are possible while still achieving the desired degree of proteolytic degradation of the protein suspensions cleaved from the crustaceans waste, resulting in the weakening of protein-lipid relations, with the subsequent release of fat. However, a high degree of proteolytic destruction of the protein extracted from the crustaceans waste increases the technological costs of precipitation of the components of the hydrolysate. It has been shown that the use of pre-suspension not only improves the subsequent deproteinization of the chitinmineral substrate, but also provides a significant degree of proteolytic destruction of the separated protein suspensions during the first 120 minutes of proteolysis. The low temperature of the suspension allows provision of the released protein concentrate with a high content of astaxanthin. Introduction, before proteolysis, of pre-suspension will remove readily available proteins of the cell layer of the crustaceans waste, which in the future will indirectly regulate the effect of the proteolytic modifier on the part of the protein separated from the crustaceans waste.
Proteolysis, nitrogen of amino end-groups, protein, hydrolysate, shell waste of shrimps, preliminary suspension
ВВЕДЕНИЕ
Современные направления развития рыбоперерабатывающего комплекса включают внедрение ресурсосберегающих и комплексных технологий переработки водно-биологических ресурсов. Особый интерес представляет переработка белково-минерального сырья, полученного при разделке панцирьсодержащих гидробионтов. Подобное сырьевое ориентирование позволяет получать высококонцентрированные питательные вещества (обезвоженные белковые гидролизаты, пищевые астаксантиносодержащие белковые концентраты, астаксантин и т.д.), обладающие заданными свойствами, в том числе и функциональными [1].
Существующие технологии переработки ПСО позволяют получать обезвоженные белковые гидролизаты и изоляты. Однако конечные концентраты могут характеризоваться высоким содержанием жира (до 5-6 % от массы сухого вещества), что значительно снижает направления их дальнейшего применения в пищевой промышленности, в том числе для выработки функциональных продуктов
[2]. Технологии повышения степени обезжиренности концентратов могут включать физические (воздействие температуры, давления), химические (применение органических/неорганических растворителей) и биохимические (применение ферментных препаратов или специальных штаммов м/о) воздействия на субстрат
[3]. Существенным недостатком таких способов являются дополнительные затраты на технологические операции (нагрев, мембранное фильтрование) или расходные материалы (органические/неорганические растворители, ферменты), а также
частичная и полная потеря нутриентов (астаксантина, жирорастворимых витаминов, частично белка) посредством температурной деструкции, окисления или «вымывания» их спиртами/кислотами/щелочами [4].
Один из возможных вариантов решения существующих проблем - применение недорогого протеолитического модификатора сырья микробного происхождения и внедрение предварительного суспензирования ПСО перед протеоли-зом [5-7].
Использование подобных методов при проведении протеолиза ПСО позволяет сократить затраты, связанные с дополнительными технологическими операциями и материалами. Внедрение предварительного суспензирования в технологию протеолиза позволит обеспечить лучшую депротеинизацию ПСО и необходимую степень гидролиза отщеплённых (от ПСО) белковых взвесей. Степень гидролиза и интенсивность депротеинизации влияют на массовые соотношения и распределения основных компонентов протеолиза (белок, липид, астаксантин) после разделения на фракции (центрифугирования), так как часть компонентов протеолиза может находиться в дисперсной, водородной или Ван-дер-Ваальсовой связи. При увеличении степени протеолитической деструкции белковых взвесей происходит оптимальное ослабление белково-липидных связей на участках боковых цепей аминокислот и гидрофобных частей липидов [8, 9], тем самым улучшается обезжиренность нижней фракции (белковой пасты) после центрифугирования. Введение суспензирования на начальном этапе протеолиза ПСО позволит получать белок с большей степенью протеолитической деструкции, так как часть легкодоступного белка (слабо связанного с хитино-минеральным матриксом) удаляется посредством гидромеханического извлечения. Однако глубокий уровень протеолиза отщеплённых белковых взвесей снижает молекулярный вес длинно-цепочечных азотсодержащих веществ (АСВ), снижая возможность их дальнейшего концентрирования в нижнем слое при центрифугировании, что объясняется возможным их переходом в растворенное состояние или в состав эмульгированных образований среднего слоя (образовавшегося после центрифугирования). Ещё одна проблема существующих технологий выделения белковых концентратов - это проведение предварительного суспензирования при относительно высоких температурах - 45-50° С (при таких температурных значениях улучшается во-дорастворимость некоторых белков с параллельным уменьшением вязкости липи-дов), подобные режимы не способствуют сохранности некоторых компонентов протеолиза (астаксантина, витаминов) в конечном обезвоженном концентрате.
Следовательно, цель исследовательской работы заключается в изучении влияния низкотемпературного предварительного суспензирования на интенсивность депротеинизации ПСО и степень гидролиза отщеплённых от ПСО белковых взвесей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Объектом исследования являлись панцирные отходы северной креветки (ТУ 10.20.31-296-00472093-2018), полученные в результате механической очистки варено-мороженых креветок (ГОСТ 51496-99). Размораживание ПСО осуществлялось в воздушной среде при температуре 6оС. Измельчение панцирных отходов производилось на волчковом устройстве. Продолжительность предварительного суспензирования ПСО составляла 4-5 мин при температуре 10 С, соот-
ношение воды и ПСО - 5/1. Концентрация протезы - 0,5 % от массы белка ПСО, гидромодуль - 10:1. Скорость вращения ротора центрифуги - не менее 5000 об/мин, продолжительность - 10-15 мин. Использовался ферментативный препарат микробиологического происхождения - Протосубтилин Г3х нейтральный фирмы «СибБиоФарм» с протеолитической активностью 70 ед/г.
Определение концентрации азотистых веществ осуществлялось по методу Кьельдаля. Концентрация протеина в 1 г исследуемого сырья вычислялась по формуле (1):
Б = ^^ х 100%, (1)
п х /
где п - навеска веществ, г; 6,25 - коэффициент пересчёта.
Определение формольно-титруемого азота (ФТА) проводилось по методике Черногорцева. Содержание ФТА в мг на 100 г продукта вычислялось по формуле (2):
-.-гт,» (а-Ь-с)хКх1,4хУ „__
ФТА = ----,-х 100, (2)
тхУ1 4 у
где а - количество щелочи, пошедшей на титрование первой колбы, мл; Ь - количество щелочи, пошедшей на титрование второй колбы, мл; с - количество щелочи, пошедшей на титрование третьей колбы, мл; К - поправочный коэффициент для 0,1 н раствора щелочи; 1,4 - количество азота, эквивалентное 1 мл точно 0,1 н раствора щелочи, мг; V - объем колбы разведения, мл; V1 - объем фильтрата, взятый на титрование; m - масса навески, г.
Количество небелкового азота (НБА) определялось по соответствующей формуле (3):
НБА = 2хах*х0Ш8х7 х 100, (3)
тхУ1 4 у
где 2 - коэффициент, учитывающий разведение вытяжки трихлоруксусной кислотой; а - количество определённого азота, мл; К - поправочный коэффициент; 0,028 - количество азота, эквивалентное 1 мл точно 0,02 н раствора щелочи, мг; V - объем колбы разведения, мл; VI - объем фильтрата, взятый для минерализации, мл; т - масса навески, г.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Для установления возможного влияния низкотемпературного предварительного суспензирования на интенсивность депротеинизации измельчённых ПСО определена интенсивность накопления белковых взвесей (АСВ), отщеплённых от ПСО и перешедших в отфильтрованный от панциря гидролизат (рис. 1).
Обработанные результаты (рис. 1) показывают, что применение предварительного суспензирования (образец 2) снижает дальнейшую протеолитическую экстракцию АСВ из ПСО (по сравнению с образцом 1), так как под воздействием
гидромеханических сил при предварительном суспензировании происходит ча-
стичное удаление эпителиально-клеточного минерального матрикса.
слоя с поверхности хитино-
Рис. 1. Динамика накопления АСВ в отфильтрованном гидролизате Fig. 1. Dynamics of accumulation of nitrogen-containing substance in the filtered hydrolysate
Интенсивность перехода и накопления АСВ в гидролизате для образца 1 можно характеризовать четырьмя этапами. Первый этап (до 1 ч протеолиза) - это частичное разрушение связей эпителиального слоя ПСО и хитино-минеральной основы посредством механического измельчения. Второй этап (1,5-2 ч протеолиза) - значительное отщепление белка, 55-60 % от ПСО (полное снятие клеточного слоя посредством протеолитической модификации ПСО) с последующим накоплением АСВ в гидролизате. На третьем этапе (2,5-3,5 ч протеолиза) происходит частичное распределение раствора протеазы по внутренним слоям кутикулы ПСО до пигментного слоя, предположительно, за счёт диффузионно-осмотических процессов, где в качестве транспортирующего пространства используются поро-вые каналы и частично гидролизованные плотноупакованные фибриллы, а смещение кинетического параметра в сторону кинетического или диффузионно-кинетического характера гидролиза косвенно отображает возможное распределение ПГ3х по внутренним слоям кутикулы. Четвёртый этап (3,5-4,5 ч протеолиза) характеризуется замедлением динамики извлечения и накопления АСВ, что объясняется дальнейшей невозможностью протеолиза внутренних слоёв ПСО, так как последующему распределению раствора ПГ3х препятствуют особенности гистохимического строения панциря кутикулы [9, 10].
Накопление АСВ в гидролизате образца 2 можно характеризовать тремя стадиями. На первой стадии (от 0 до 2 ч протеолиза) происходит отщепление АСВ от ПСО и их последующее накопление в гидролизате. Данный промежуток протеолиза характеризуется полной депротеинизацией поверхностного слоя кути-
кулы (т. е. полностью удаляется эпителиально-клеточный слой). Вторая стадия (2-3,5 ч протеолиза) описывается последующим распределением протеазы по внутренним слоям ПСО [10], при этом динамика извлечения АСВ из ПСО и их накопления в гидролизате замедляются. На третьей стадии (3,5-4,5 ч протеолиза) слабеет (до минимального уровня) интенсивность накопления АСВ в гидролизате, так как снижается дальнейшее проникновение и распределение раствора протеазы по слоям хитино-минерального субстрата.
Сравнительная характеристика гидролизатов двух образцов показала прямую зависимость применения предварительного суспензирования и интенсивности депротеинизации ПСО. Предварительно суспензированные ПСО уже на втором часу протеолиза были «очищены» от эпителиально-клеточного (белкового) слоя. Дальнейшая протеолитическая модификация внутренних слоёв ПСО (пигментного слоя, эндо- и экзокутикулы) способствует извлечению каротинопротеи-нов и липидокаротиноидов и их накоплению в гидролизате.
Необходимо учитывать, что накопление в гидролизате высокомолекулярных АСВ, связанных с липидами (недисперсные образования), не обеспечивает необходимую локализацию жира в верхней фракции, при центрифугировании, что, в свою очередь, не способствует выработке конечного пищевого продукта, обладающего приемлемой концентрацией липидов. Для лучшего разделения и фракционирования АСВ и липидов необходимо определить степень протеолити-ческой деструкции белка гидролизата. По достижении необходимого уровня про-теолиза белковых взвесей происходит высвобождение липидов и их последующая миграция в верхний слой при центрифугировании.
Определение степени протеолитической деструкции белка также осуществлялось при сопоставлении показателей гидролизатов с предварительным суспензированием измельчённых ПСО и без него (рис. 2).
Рис. 2. Степень гидролиза белка, перешедшего в отфильтрованный от хитино-минеральных взвесей гидролизат Fig. 2. The degree of hydrolysis of the protein converted into a hydrolysate filtered
from chitin-mineral suspensions
Результаты изучения степени гидролиза белка получаемых образцов косвенно отображают зависимость использования предварительного суспензирова-ния и уровня протеолитической деструкции извлекаемых АСВ отфильтрованного гидролизата. Протеолиз предварительно суспензированных ПСО (образец 2) обеспечивает лучшую степень протеолитической деструкции извлекаемых белков по сравнению с образцом, где предварительное суспензирование не проводилось. При равнозначной концентрации ПГ3х (на белок) и гидромодуле (10/1) соотношение легко извлекаемых высокомолекулярных АСВ в образце 1 выше, так как часть доступных белков не удаляется предварительным суспензированием, как в образце 2, и как следствие -больший расход протеазы на депротеинизацию несус-пензированных ПСО и параллельный гидролиз белка, перешедшего в жидкий гидролизат.
При достижении необходимых значений степени протеолиза белков отфильтрованного гидролизата и уровня депротеинизации хитино-минерального матрикса также увеличивается концентрация НБА по отношению к ОА в гидролизате (рис. 3), что, в свою очередь, снижает возможность дальнейшего фракционирования и концентрирования нутриентов (разноцепочечных пептидов) посредством центрифугирования или с применением осаждающих агентов.
Рис. 3. Динамика накопления НБА к ОА в отфильтрованном гидролизате при протеолизе хитино-минерального субстрата Fig. 3. Dynamics of accumulation of non-protein nitrogen to total nitrogen in the filtered hydrolysate at proteolysis of chitin-mineral substrate
Результаты сопоставления значений НБА к ОА отфильтрованного гидро-лизата для всех образцов можно разделить на две ступени. На первой (от 0 до 2 ч протеолиза) наблюдалось медленное накопление НБА к ОА (с 2,5 до 7,6 % для образца 2 и с 6,1 до 13,4 % для образца 1), что объясняется невысокой степенью протеолитической деструкции белков, отщеплённых ферментом от ПСО, и интенсивностью депротеинизации ПСО.
На второй ступени (от 2 до 4,5 ч протеолиза) отмечалось более интенсивное, по сравнению с первой ступенью, накопление НБА к ОА (с 7,6 до 12,2 % для образца 2 и с 13,4 до 19,1 % для образца 1). Вторая ступень характеризовалась более интенсивной протеолитической деструкцией разноцепочечных пептидов, пришедших в отфильтрованный гидролизат, так как на данном временном интервале снижается количество легкодоступных пептидов клеточного слоя ПСО, а освободившаяся от протеолиза ПСО часть ПГ3х гидролизует белок, перешедший в отфильтрованный гидролизат.
Однако несмотря на схожие динамики накопления НБА к ОА на первой и второй ступенях протеолиза, в образце 2 часть белка удаляется посредством предварительного суспензирования, что напрямую влияет на концентрацию ПГ3х (в соотношении к легкодоступным белкам клеточного слоя), степень гидролиза и интенсивность накопления разноцепочечных пептидов при сопоставлении с образцом 1. Следовательно, вносимый в образец 2 ПГ3х в равной степени тратится на депротеинизацию ПСО и на протеолитическую модификацию протеинов, перешедших в отфильтрованный от панцирей гидролизат.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Применение предварительного суспензирования (при 10о С и гидромодуле 4/1) перед протеолизом ПСО обеспечивает интенсивную депротеинизацию хити-но-минерального субстрата и позволяет получать пищевой белковый концентрат с лучшей степенью обезжиренности при последующем центрифугировании и концентрировании. Увеличение степени протеолитической деструкции отщеплённых взвесей ослабляет связи между белками и липидами, тем самым улучшая разделя-емость компонентов гидролизата (при центрифугировании). Внедрение низкотемпературного предварительного суспензирования в технологию протеолитической модификации ПСО позволит снизить интенсивность накопления НБА в гидроли-зате, что окажет положительное влияние на массовые значения осаждаемых раз-ноцепочечных пептидов при дальнейшем центрифугировании. Применение невысокой температуры суспензирования измельчённых ПСО позволит сократить потерю астаксантина, что, в свою очередь, повысит функциональную составляющую выделяемых белковых экстрактов.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Пащенко, В. Л. Разработка технологии функционального продукта с применением коллагенового гидролизата / В. Л. Пащенко, С. А. Сторублевцев // Фундаментальные исследования. - 2011. - № 4. - С. 127-135.
2. Неклюдов, А. Д. Свойства и применение белковых гидролизатов (обзор) / А. Д. Неклюдов, А. Н. Иванкин, А. В. Бердутина // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. - Т. 30, № 4. - С. 225-334.
3. Строкова, Н. Г. Биотехнологические аспекты комплексной переработки ракообразных / Н. Г. Строкова, А. В. Подкорытова // Биотехнология: состояние и перспективы: IV Московский междунар. конгресс: материалы. - 2011. - Ч. 2. -С. 241-242.
4. Неклюдов, А. Д. Получение и очистка белковых гидролизатов /
A. Д. Неклюдов, А. Н. Иванкин, А. В. Бердутина // Прикладная биохимия и микробиология. - 2000. - Т. 36, № 4. - С. 371-379.
5. Немцев, С. В. Получение низкомолекулярного водорастворимого хито-зана / С. В. Немцев // Биотехнология. - 2001. - № 6. - С. 37-42
6. Самсонов, М. В. Использование протосубтилина Г3х для предотвращения образований микроэмульсий при гидролизе панцирных отходов северной креветки / М. В. Самсонов // Известия Калининградского государственного технического университета. - 2017. - №47. - С. 123-134.
7. Самсонов, М. В. Выделение каротинопротеинового концентрата из панцирных отходов варено-мороженых креветок / М. В. Самсонов // Известия Калининградского государственного технического университета. - 2018. - № 50. -С. 103-114.
8. Мухин, В. А. Ферментативные белковые гидролизаты тканей морских гидробионтов: получение, свойства и практическое использование / В. А. Мухин,
B. Ю. Новиков // Изд-во ПИНРО. - 2001. - С. 101-102.
9. Dendinger, J. E. Mechanical properties in relation to chemical constituents of postmolt cuticle of the blue crab, Callinectes sapidus / J.E.Dendinger, A. Alterman // Comp. Biochem. arid Physiol. A. - 1983. - 75, N 3. - P. 421-424.
10. Самсонов, М. В. Исследование процесса гидролиза панцирных отходов варёной креветки с использованием протосубтилина / М. В. Самсонов, М. Л. Винокур, М. П. Андреев // Известия Калининградского государственного технического университета. - 2017. - №46. - С.90-101.
REFERENCES
1. Pashchenko V. L. Razrabotka tekhnologii funktsional'nogo produkta s prime-neniem kollagenovogo gidrolizata [Development of functional product technology with the use of collagen hydrolysate]. Moscow, 2011, no. 4, pp. 127-135.
2. Neklyudov A. D. Svoystva i primenenie belkovykh gidrolizatov [Properties and application of protein hydrolysates]. Applied biochemistry and Microbiology, 2000, no. 4, pp. 225-334.
3. Strokova N. G. Biotekhnologicheskie aspekty kompleksnoy pererabotki rakoobraznykh [Biotechnological aspects of complex processing of crustaceans]. Biotechnology: status and prospects, 2011, no. 2, pp. 241-242.
4. Neklyudov A. D. Poluchenie i ochistka belkovykh gidrolizatov [Preparation and purification of protein hydrolysates]. Applied biochemistry and Microbiology, 2000, no. 4, pp. 371-379.
5. Nemcev S. V. Poluchenie nizkomolekulyarnogo vodorastvorimogo khitozana [Preparation of low molecular weight water-soluble chitosan]. Biotechnology, 2001, no. 6, pp. 37-42.
6. Samsonov M. V. Ispol'zovanie protosubtilina G3h dlya predotvrashcheniya obrazovaniy mikroemul'siy pri gidrolize pantsirnykh othodov severnoy krevetki [The use of protosubtilin G3x for the prevention of micro-emulsions formation during hydrolysis of crustacean waste of Northern shrimp]. Izvestiya KGTU, 2017, no. 47, pp.123-134.
7. Samsonov M. V. Vydelenie karotinoproteinovogo kontsentrata iz pantsirnykh otkhodov vareno-morozhenykh krevetok [Recovery of carotene protein concentrate from the shell waste of boiled and frozen shrimp]. Izvestiya KGTU, 2018, no. 50, pp.103-114.
8. Muhin V. A. Fermentativnye belkovye gidrolizaty tkaney morskikh gidrobi-ontov: poluchenie, svoystva i prakticheskoe ispol'zovanie [Enzymatic protein hydroly-sates of marine hydrobiont tissues: preparation, properties and practical use]. PINRO, 2001, pp. 101-102.
9. Dendinger J. E. Mechanical properties in relation to chemical constituents of postmolt cuticle of the blue crab, Callinectes sapidus (Russ. Ed: Dendinger YU. E. Mekhanicheskie svoystva v otnoshenii khimicheskikh sostavlyayushchikh posle linki kutikula sinego kraba, Callinectes sapidus. Comp. Biochem. arid Physiol. A., 1983, no. 3, pp. 421-424).
10. Samsonov M. V. Issledovanie processa gidroliza pancirnykh otkhodov vary-onoy krevetki s ispol'zovaniem protosubtilina [Study of the process of hydrolysis of shell wastes of boiled shrimp using protosubtilin]. Izvestiya KGTU, 2017, no. 46, pp. 90-101.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Самсонов Максим Вячеславович - Калининградский государственный технический университет; аспирант кафедры «Технология продуктов питания»;
E-mail: [email protected]
Samsonov Maxim Vyacheslavovich - Kaliningrad State Technical University; Postgraduate student of the Department of Food Products Technology; E-mail: [email protected]
Винокур Михаил Леонидович - Калининградский государственный технический университет; кандидат технических наук, доцент кафедры «Технология продуктов
питания»; E-mail: [email protected]
Vinokur Mikhail Leonidovich - Kaliningrad State Technical University; PhD, Associate Professor of the Department of Food Products Technology;
E-mail: [email protected]
