CC BY
12
Hay^suu вicнuк ЛHУBМБT Шет С.З. fжuцькoгo
Tom 16 № 3 (60) 4acmuna 2, 2014
УДК 619:576.8.078:616-025
Власенко В.В., Блащук М.В., Блащук В.В., Войцщька О.М. ©
Biннuцькuй нaцioнaльнuй aгрaрнuй yнiверcumеm (вул. ^нячш 3, м. Biннuця, Укрaïнa, 21008)
ВИКОРИСТАННЯ ПОЛ1САХАРИД1В РОСЛИННОГО ПОХОДЖЕННЯ ДЛЯ ПРИГОТУВАННЯ ПОЖИВНОГО СЕРЕДОВИЩА АПМ-В1НТУБ
Зaхвoрювaння myберкyльoзoм в ocmaннi pom oднa nереmвoрuлocя нa oднy з дpaмamuчнuх cmopiнoк icmopiï людcmвa. B003 npoгнoзye, щo cмеpmнicmь вiд цьoгo недyгy cклaде пр^лт^ 30 млн. людей. Toму неoбхiднo mеpмiнoвo npoвoдumu ефекmuвнi зaхoдu no бopomьбi з myбеpкyльoзoм.[Мельнuк, 2009; Фещен^, 1998; Dolin, 1994].
B 1990 poц вiдбyвaemьcя nеpелoмнuй мoменm в еniдемiчнiй cumya^ï. Щopiчне зшження зaхвopювaнocmi npunuняemьcя, нamoмicmь noчuнaemьcя ïï зpocmaння, npuчoмy в 1995 р. cumyaцiя нaбyлa еniдемiчнoгo хapaкmеpy i Укpaïнa з цьoгo чacy yвiйшлa в чucлo ^arn, oхonленuх еniдемieю myбеpкyльoзy [Мельшк, 2009; Гpaщенкoвa, 1998].
Быьш тж 100-лжнт дocвiд шу^вщв вcьoгo œimy noкaзaв, щo "зoлomuм" cmaндapmoм вuявлення мiкoбaкmеpiй e клacuчне noeднaння кyльmypaльнoгo ma мiкpocкoniчнoгo меmoдiв дocлiдження, яю зaлuшaюmьcя aкmyaльнuмu, не джлячжь нa тяву велuкoï кiлькocmi aльmеpнamuвнuх меmoдiв [Пеpелaмaн, 1995].
Але медuчнiй мiкpoбioлoгiï вiдoмi нoвi cnoco6u вuдiлення збудтт myбеpкyльoзy, щo nompебyюmь ятшш ma нaдiйнuх жжтьшх cеpедoвuщ ma cmuмyляmopiв pocmy для вuдiлення збудтт myбеpкyльoзy. Удocкoнaлення меmoдiв npucкopенoï i^urn^ï мiкoбaкmеpiй myбеpкyльoзy ведеmьcя no шляху дocлiдження нoвuх, быьш здiйcненuх i дешевш жжтьнш cеpедoвuщ. Оcoблuвy yвaгy неoбхiднo npuдiляmu якocmi ma npuдamнocmi iнгpедieнmiв, щo вхoдяmь дo cклaдy жжтьнш cеpедoвuщ.
Biдoмo, щo для нopмaльнoгo poзвumкy мiкoбaкmеpiй nompiбнi cnецiaльнi жжтьт cеpедoвuщa, щo мктять вуглець, aзom, кжень, вoдень, фocфop, мaгнiй, шлт, нampiй, зaлiзo, хлop ma 0рку. Щ мiкpoopгaнiзмu nompебyюmь i деятх фaкmopiв pocmy, дo чucлa якш вiднocяmьcя cnoлyкu, cnopiдненi вimaмiнaм грут B, бiomuн, m^mu^ puбoфлaвiн ma т. Фaкmopu pocmy в мiнiмaльнuх юль^^ях noкpaщyюmь р^т мiкoбaкmеpiй нa cеpедoвuщaх, щo мктять ocнoвнi тжжт pечoвuнu ma не вхoдяmь дo cклaдy ферментшх cucmем ^imum, aле вuкopucmoвyюmьcя для ïхnoбyдoвu [Хoменкo, 1996]. Ha cеpедoвuщaх без цш pечoвuн прu no^i мamеpiaлy з мaлoю кшькктю мiкoбaкmеpiй pocmy npaкmuчнo немae, щo noяcнюemьcя недocmamнiм вupoбленням бaкmеpiямu фaкmopiв pocmy.
Меmoю нaшoгo дocлiдження бyлo cmвopення жuвuльнoгo cеpедoвuщa АИМ^^УБ для вuдiлення збудтт myбеpкyльoзy з вuкopucmaнням cyчacнuх фiзuкo-хiмiчнuх niдхoдiв, в я^му зa paхyнoк нoвoгo cклaдy кoмnoненmiв, ïx кiлькicнoгo cniввiднoшення дocягaemьcя мoжлuвicmь cкopomumu mpuвaлicmь
© Власенко В.В., Блащук М.В., Блащук В.В., Войцщька О.М., 2014
47
¡нкубуеання матер1алу до 24 годин, а час дгагностики туберкульозу бактерюлог1чним способом зменшити на 30-90 д1б.
Ключовi слова: мжобактерп, фактори росту, пожиене середоеище, агар, полкахариди, д1агностика, АПМ-В1НТУБ, магс, стимулящя, артроспора
УДК 619:576.8.078:616-025
Власенко В.В., Блащук М.В., Блащук В.В., Войцицкая О.М.
Винницкий национальный аграрный университет (ул. Солнечная 3, г. Винница, Украина, 21008)
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛИСАХАРИДОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ
АПМ-ВИНТУБ
Заболеваемость туберкулёзом е последние годы превратилась е одну из драматических страниц истории человечества. За прогнозами ВООЗ, смертность от данного заболевания составит около 30млн людей. Поэтому необходимо срочно принимать эффективные меры по борьбе с туберкулёзом. В 1990 году произошел переломный момент е эпидемической ситуации, когда вместо ежегодно снижения заболеваемости, началось ежегодное увеличение. В 1995 году ситуация приобрела эпидемический характер, а Украина вошла е число стран охваченных эпидемией туберкулеза.
Более чем столетний опыт ученых всего мира показывает, что золотым стандартом обнаружения микобактерии туберкулеза является классическая комбинация культурального та микроскопического методов исследования, которые остаются актуальными, не смотря на появление большого количества альтернативных методов.
Но в медицинской микробиологии известны новые способы выделения возбудителя туберкулеза, которые нуждаются в качественных и надёжных питательных средах и стимуляторах роста. Усовершенствование методов ускоренной индикации микобактерий туберкулеза идет по пути исследования более осуществимых и дешевых питательных сред. Особое внимание следует уделить качеству и пригодности ингредиентов, которые входят в состав питательных сред.
Известно, что для нормального развития микобактерии необходимы специальные питательные среды, которые состоят из углерода, азота, кислорода, водорода, фосфора, магния, калия, натрия, железа, хлора и серы. Эти микроорганизмы нуждаются и е некоторых факторах роста, е число которых входят соединения, родственные витаминам группы В — биотин, никотин, рибофлавин и др. Факторы роста е минимальных количествах улучшают рост микобактерий на средах, содержащих основные питательные вещества, которые не входят в состав ферментных систем клеток, но используются для их построения. На средах без этих веществ при посеве материала з малым количеством микобактерий, рост практически отсутствует, что объясняется недостаточной выработкой бактериями факторов роста.
Целью нашего исследования было создание питательной среды АПМ-В1НТУБ для выделения возбудителя туберкулеза з использованием современных
48
физико-химических подходов, в которих за счет нового состава компонентов, их количественного соотношения достигается возможность сократить длительность инкубирования материала до 24 часов, а время диагностики туберкулеза бактериологичным способом уменьшить на 30-90 суток.
Ключевые слова: микобактерии, факторы роста, питательная среда, агар, полисахариды, диагностика, АПМ-ВИНТУБ, маис, стимулящя, артроспора.
UDC 619:576.8.078:616-025
Vlasenko V.V., Blashchuk M.V., Blashchuk V.V., Voitsitskaya O.M.
National Agrarian University, Vinnytsya (3 Sonyachna street, Vinnytsya, Ukraine, 21008)
USING OF VEGETABLE ORIGIN POLYSACCHARIDES FOR PREPARING NUTRIENT MEDIUM APM-VINTUB
Last years tuberculosis became one of the most dramatic pages in human history. According to WHO"s predictions, mortality from this disease can be over 30 million people in whole world every year.
Since 1990 there was a turning point for the epidemic situation, when instead of annual decrease morbidity there was its growth. In 1995 the situation has become epidemic.
It has been showed by the more 100 years of science experience that "golden " standard of identification of Mycobacterium is classical combination of cultural and microscopic methods of study. Despite of the new methods that appeared last years, this classical combination are actual.
New method of determination and identification of Mycobacterium tuberculosis are known in medical microbiology. New reliable and quality nutrient media are necessary for this methods. Improvement of methods for rapid indication of Mycobacterium tuberculosis is providing by studying of new, cheaper nutrient media. There is need to pay special attention to the quality and suitability of medium ingredients.
It is known, that normal growth of Mycobacterium tuberculosis is needed special nutrient media, that consist of carbon, nitrogen, oxygen, hydrogen, phosphorus, manganese, sodium, potassium, iron, chlorine and sulphur. This microorganisms require some growth factors such as compounds related to B group vitamins, biotin, nicotine, riboflavin etc.
The aim of our study was to create nutrient media APM-VINTUB for determination of Mycobacterium tuberculosis using modern physical and chemical approaches, which due to new components, their quantitative ratio are possible to decrease duration of incubation up to 24 hours, and duration of tuberculosis diagnostic by bacteriological method reduce to 30-90 days.
Key words: mycobacterium, growth factor, nutrient media, agar, polysaccharides, diagnostic, APM-VINTUB, mais, stimulation, arthrospora.
Матер1ал та методи дослщження. Контролем служили тест-культури MiKpoopraHi3MiB: Mycobacterium tuberculosis Н37 RV - збудник туберкульозу людей, Mycobacterium bovis - збудник туберкульозу велико! рогато! худоби. В
49
якост супутньо! мжрофлори мжрофлору використовували тест-культури Е. Coli (К 12), B.subtilis, S. epidermitidis (1225).
За контрольне живильне середовище брали Левенштейна — Йенсена.
Пщготовлений контрольний поЫвний матерiал перед виЫвом обробляли антисептиком з послщуючим iнкубуванням при температурi 37±1°С протягом 22-24 годин i висiвали на живильш середовища.
Основними методами дослщження були бактерiоскопiчний та культуральнi методи дослщження поживного середовища .
Результати дослщження. Для приготування середовища ми використали спещальну бiологiчну добавку "Ма1с", що мiстить: бiлок - 3,2%, жири — 1,2%, полкахариди — 19%. Крiм того 100г компоненту мктить такi бiологiчнi речовини: ретинол -10 мкг , таамш — 0,2 мг , шацин — 1,7 мг , фолацин 46 мкг , аскорбшова кислота 7 мг , а також залiзо - 0,5 мг, магнш — 37 мг та калш - 270 мг. ( За даними USDA Nutrient database).
При порiвняннi ростових властивостей середовища АПМ-ВШТУБ i3 ростовими властивостями середовища Левенштейна — Йенсена нами були отримаш результати, що наведенi у таблищ 1.
Таблиця 1
По|Мвняльна характеристика поиживних середовищ АПМ-В1НТУБ та
Левенштейна -Йенсена.
Термш шкубування Наявшсть та ознаки росту
АПМ-В1НТУБ Левенштейна -Йенсена
12 годин Р1ст ввдсуттй Р1ст ввдсуттй
24 годин Наявний р1ст Р1ст ввдсуттй
2 доби 1нтенсивний газоний рют, наявш характерш колони Р1ст ввдсуттй
На середовищi Левенштейна-Йенсена позитивнi результати були отриманi через 20-60 дiб.
Крiм того рют супутньо! мiкрофлори був вiдсутнiй.
Використання спещально! бюлопчно! добавки "Маю" дозволило отримати стимулюючий ефект на рют тест-культур мiкобактерiй.
В результатi дослщжень встановлено, що на середовищi, яке використовувалося як прототип (середовище Левенштейна — Йенсена ), ркт мжобактерш всiх культур, якi були узят в дослiд з'явився через 20 - 60 дiб. На запропонованому середовищi АПМ-В1НТУБ через 24 години тсля термостатування вiдмiчався рiст уЫх культур. Через 72 години спостеркався газонний рiст колонiй мiкобактерiй.
Виходячи з вище отриманих результатiв нами запропоновано живильне середовище АПМ-ВШТУБ, де в якост одше! i з поживних основ, використали спещальну бюлопчну добавку "Ма1'с"
50
Новим е те, що у запропонованому методi для отримання поживного середовища, що володiе високими ростовими властивостями, у порiвняннi i3 традицшними нами було використано спещальний рослинний компонент i3 вмiстом полiсахаридив до 19%. Компонент е доступним та недорогим.
Ефектившсть запропонованого живильного середовища полягае у його склада який дозволяе збшьшити вихщ - «урожайшсть» мiкобактерiй туберкульозу на живильному середовища що забезпечуе бшьш високу точнiсть дiагностики захворювання.
Запропонований якiсний контроль iнгредiентiв поживного середовища е простим та доступним за способом його проведення. Вс компоненти заявлених складових та обладнання вiтчизняного виробництва, що е досить зручним для виробничих, науково-дослщних лабораторш медичного профiлю. Якiсний та кшьккний вмiст усiх компонентiв в заявлених складах, е необхщними, оптимальними для проявлення !х позитивних властивостей та досягнення техшчного результату.
Висновки:
1. Отримаш культуральнi показники для запропонованого поживного середовища АПМ-В1НТУБ дають змогу визначити придатшсть середовища для прискореного видшення збудника туберкульозу.
2. Для прискорено! дiагностики туберкульозу рекомендуеться використовувати поживне середовище АПМ-В1НТУБ, яке просте в приготуванш i використаннi та забезпечуе ефективну детекцiю збудника туберкульозу
Результати дослщжень поживного середовища АПМ-В1НТУБ окреслюють перспективу створення нового методу дiагностики туберкульозу та скоротити термiн бактерюлопчного дослiдження в 30 разiв.
Л1тература
1.Мельник В.М. Туберкульоз в Укрш'ш на сучасному етапi й прогнозш оцiнки/ В.М. Мельник// Укр. пульм. журн. - 1999. - №3. - С.30-63.
2.Фещенко Ю.1. Туберкульоз легень в перюд епщеми: епщемюлопчш, клiнiко-дiагностичнi, лiкувально-профiлактичнi та органiзацiйнi аспекти / Ю.1. Фещенко, В.М. Мельник. - Кшв: Логос, 1998. - 284 с.
3. Dolin P. Туберкулез: заболеваемость и смертность в мире 1990-2000 гг. / P. Dolin, M. Raviglione, Kochi А.//Бюлл. ВООЗ- 1994. - Т.72, №2. - 27-34.
4. Гращенкова О.В. Основные пути оптимизации эпидемиологического надзора за туберкулезной инфекцией / О.В. Гращенкова // Проблемы туберкулеза. - 1999. №2. - С.13-15.
5. Туберкулез / [ Визель А .А., Гурылева М. Э.] ; под ред. д. м. н. М. И. Переламана. - М. : ГЭТАР Медицина, 1999. - С. 37-38.
6.Туберкулез. Руководство для врачей / под ред. А. Г. Хоменко. - М. : Медицина, 1996. - 496 с.
Рецензент - к.б.н., доцент Турко 1.Б.
51
