Использование панели cytodifftm для мониторинга эффективности антивирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц

Квятковская С.В.; Сухачева Е.А.; Решетников И.В.; Долгова Н.В.; Цейликман О.Б.; Цейликман Вадим Эдуардович

МИКРОБИОЛОГИЯ

УДК 616.98:578.828.6]-092:612.017.1.064]-085.281.8-036.8-074

Квятковская С.В.1, Сухачева Е.А.2, Решетников И.В.1, Долгова Н.В.1, Цейликман О.Б.3, Цейликман В.Э.1

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПАНЕЛИ CYTODIFF™ ДЛЯ МОНИТОРИНГА ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ

ТБОУ ВПО Южно-Уральский государственный медицинский университет Минздрава России, 2Beckman Coulter Eurocenter Nyon, Switzerland, 3ГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный университет, Национально-исследовательский университет

В ходе исследования ВИЧ-инфицированных лиц с использованием новой пятицветной панели CytoDiffM для проточной цитофлюориметрии обнаружен дисбаланс в субпопуляциях лейкоцитов. Это проявлялось значительным снижением общего количества лимфоцитов, а также CD 16+-лимфоцитов, В-лимфоцитов и эозинофилов с одновременным повышением уровня CDM+^оноцитов, нейтрофилов и незрелых В-лимфоцитов. После проведения высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ) у пациентов наблюдалось снижение вирусной нагрузки при одновременном повышении общего уровня лимфоцитов, CD16+-лимфоцитов, В-лимфоцитов, а также уменьшение количества CD16+-моноцитов, нейтрофилов и незрелых В-лимфоцитов.

Ключевые слова: ВИЧ; панель; CD16+-моноциты; CD4+-лимфоциты.

S.V. Kviyatkovskaya1, E.A. Sukhatcheva2,I.V. Reshetnikov1, N.V. Dolgova1, O.B. Tseiylikman3, V.E. Tseiylikman1 THE APPLICATION OF PANEL CYTODIFF FOR MONITORING OF EFFECTIVENESS OF ANTIVIRAL THERAPY IN HIV-INFECTED PATIENTS

1The Southern Ural state medical university of Minzdrav of Russia, Chelyabinsk, Russia; 2The Beckman Coulter Eurocenter, Nyon, Switzerland; 3The Southern Ural state university, Chelyabinsk, Russia

The study of HIV-infected patients using new five-color panel CytoDiff for flow cytofluorometry revealed the imbalance in subpopulations of leukocytes. The manifestations consisted in significant decrease of total amount of lymphocytes and also CD16+ lymphocytes, B-lymphocytes and eosinocytes with synchronous increase of level of CD16+ monocytes, neutrophils and immature B-lymphocytes. After application to patients of highly active anti-retroviral therapy occurred decrease of viral load under synchronous increase of total level of lymphocytes, CD16+ lymphocytes, B-lymphocytes and also decrease of amount of CD16+ monocytes, neutrophils and immature B-lymphocytes.

Keywords: HIV, panel, CD16+ monocytes, CD4+ lymphocytes.

Борьба со СПИДом является одной из наиболее глобальных проблем современного человечества, так как в настоящее время на планете насчитывается до 34 млн ВИЧ-инфицированных лиц [1, 2, 12]. Среди апробированных терапевтических подходов лучше всего зарекомендовала себя высокоактивная антиретровирусная терапия (ВААРТ), которая увеличивает продолжительность и повышает качество жизни ВИЧ-инфицированных людей, одновременно снижая дальнейшее распространение вируса [15]. Однако среди наркоманов и алкоголиков наряду с восприимчивыми пациентами встречаются и резистентные к ВААРТ лица [5]. С одной стороны, это связано с особенностями фармакокинетики и фармакодинамики нуклеозидных компонентов ВААРТ, метаболизм которых осуществляется через цитохром Р450-зависимые монооксигеназы [7]. С другой стороны, потребление алкоголя и наркотиков может быть причиной увеличения количества ошибок при репликации вируса и способствовать появлению резистентности ВИЧ к проводимой ВААРТ [12]. Поскольку в настоящее время оценка эффективности антивирусной терапии в основном базируется на показателях периферической крови, требуется более информативный субпо-

Для корреспонденции:

Цейликман Вадим Эдуардович, д-р биол. наук, проф., зав. каф. биологической химии

Адрес: 454092, Челябинск, ул. Воровского, 64 E-mail: vadimed@yandex.ru

пуляционный анализ лейкоцитарных клеток. В диагностике и прогнозировании заболеваний, обусловленных иммунодефицитом, в частности ВИЧ-инфекции, чрезвычайно большое значение имеет определение точных относительных и абсолютных концентраций Т-лимфоцитов (С03+), Т-хелперов (СВ3+СВ4+) и цитотоксических Т-лимфоцитов (003+008+) для уточнения стадии заболевания и принятия решения о назначении пациенту терапии [14]. Возможности этого методического подхода в анализе субпопуляционного состава лейкоцитов ограничиваются использованием моноклональ-ных антител только к субпопуляциям Т-лимфоцитов. В этом контексте по сравнению с используемым на практике одно-платформенным методом применение в оценке иммунного статуса у ВИЧ-инфицированных лиц системы Су1о01й™ имеет преимущество, так как реагенты Су1о01££ представляют собой пятицветную комбинацию из 6 моноклональных антител, которая позволяет с помощью проточной цитоме-трии определить 10 гематологических параметров в образце цельной крови [18]. Поэтому мы посчитали целесообразным оценить перспективу использования панели Су1о01й™ для мониторинга эффективности антивирусной терапии.

Материалы и методы. В исследование было включено 184 ВИЧ-инфицированных. Диагноз ВИЧ-инфекции был поставлен врачом-инфекционистом после лабораторного обследования (выявление антител к ВИЧ в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) и метода иммунного блоттинга) в центре по профилактике и борьбе

со СПИДом и инфекционными заболеваниями Клиники ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, где впоследствии все пациенты находились на диспансерном учете.

Среди обследованных нами пациентов 4 человека находились в стадии 2 ВИЧ-инфекции [3] (согласно Российской классификации ВИЧ-инфекции), 81 - в стадии 3, 99 - в стадии 4. Российская классификация основывается лишь на клинических критериях без учета числа Т-хелперов и вирусной нагрузки. Стадия 2 - стадия первичных проявлений, 3 -субклиническая стадия, 4 - стадия вторичных заболеваний. Контрольную группу составили 32 условно здоровых донора. Для определения общего количества лейкоцитов, расчета абсолютного и относительного соотношения лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов, а также популяционного и суб-популяционного состава лимфоцитов методом проточной цитометрии брали кровь из локтевой вены в вакуумную пробирку, содержащую антикоагулянт K3EDTA (1,5 ± 0,15 мг на 1 мл крови). Тщательное перемешивание осуществляли путем 8-кратного осторожного переворачивания пробирки.

Для получения плазмы с целью определения вирусной нагрузки кровь брали из локтевой вены в вакуумную пробирку, содержащую антикоагулянт K3EDTA (1,5 ± 0,15 мг на 1 мл крови) и центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин.

Использовали реагент CytoDiff™ производства компании "Beckman Coulter", который представляет собой пятицветный реагент для анализа на проточном цитометре Cytomic FC500 и включает следующие моноклональные антитела (МА): МА к CD36, конъюгированные с флюоресцеин а-изотиоцианатом (CD36-FITC), МА к CD2, конъюгированные с фикоэритри-ном (CD2-PE), МА к CRTH2, конъюгированные с фико-эритрином (CRTH2-PE), МА к CD19, конъюгированные с фикоэритрином - техасским красным (ECD) (CD19-ECD), МА к CD16, конъюгированные с фикоэритрином-циани-ном 5 (CD16-Cy5) и МА к CD45, конъюгированные с фико-эритрином-цианином 7 (CD45-Cy7). Для прямого окрашивания антителами использовали 10 мкл реагента CytoDiff и 100 мкл периферической цельной крови. С помощью данного реагента возможно определение следующих субпопуляций лейкоцитов в периферической крови: В-лимфоцитов, T- и NK-лимфоцитов, общего количества лимфоцитов, моноцитов, зрелых нейтрофилов, незрелых гранулоцитов, общего количества нейтрофилов, эозинофилов, базофи-лов, бластов. Помимо этих 10 популяций, которые одобрены для клинического использования, возможен подсчет дополнительных исследовательских параметров, предназначенных для вну-трилабораторного использования: лимфоцитов T и NK CD16-позитивных, лимфоцитов T и NK CD16-негативных, моноцитов CD16-позитивных, моноцитов CD16-негативных. Кроме того, для незрелых клеток возможно определение их линейной принадлежности и подсчет количества предшественников B-лимфоцитов, предшественников Т-лимфоцитов, предшественников моноцитов, а также незрелых клеток, не относящихся ни к T- и B- лимфоцитам, ни к моноцитам. В большинстве случаев это миелоидные предшественники.

После 15-минутной инкубации в темноте эритроциты лизировали с помощью ферментного реагента Versalyse™ ("Beckman Coulter", Бреа, США) с добавлением фиксирующего реагента IOTest 3 Fixative Solution ("Beckman Coulter", Бреа, США) в соответствии с инструкциями изготовителя без отмывки. Для анализа использовали проточный цитофлюориметр FC500 производства компании "Beckman Coulter", позволяющий проводить исследование по 5 цветам. Настройку напряжений и компенсацию флюоресценции выполняли автоматическим методом (Advanced Digital Compensation компании 0ПРимечание. * - указаны тольш стагистич^и шачимью показатели,

"Beckman Coulter") в соответствии с протоколом поставщика. Анализ и подсчет абсолютного количества клеток проводили после регистрации по меньшей мере 50 тыс. событий. Перед каждой серией измерений настройки фотоумножителей проверяли с помощью флюоресцирующих калибровочных частиц (флюоросфер Flow-Set, "Beckman Coulter"). Коррекцию вариации мощности лазеров выполняли согласно рекомендациям изготовителя.

Использовали пакет программ Statistica for Windows 8.0. Для оценки статистически значимых различий между контрольной группой и группами ВИЧ-инфицированных лиц до и после ВААРТ использовали непараметрический критерий Краскела-Уоллиса. Значимость различий между двумя группами определяли с помощью критерия Манна-Уитни.

Результаты и обсуждение. В ходе сравнительного анализа относительных и абсолютных показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц и условно-здоровых доноров (табл. 1) было установлено, что по сравнению с контрольной группой у исследованной когорты пациентов снижено относительное и абсолютное содержание Т-хелперов при одновременном увеличении относительного количества Т-лимфоцитов. С помощью системы CytoDiff было показано, что для больных с ВИЧ-инфекцией характерно снижение содержания В-лимфоцитов при одновременном увеличении содержания предшественников В-клеток в крови. При этом наблюдалось увеличение процентного содержания "провос-палительных" CD16-позитивных моноцитов при одновременном снижении общего количества моноцитов. Кроме того, для ВИЧ-инфицированных лиц также характерно повышение относительного и абсолютного количества незрелых гранулоци-тов. Было выявлено и снижение абсолютного количества эо-зинофилов. Кроме того, у больных ВИЧ-инфекцией снижено общее количество как лейкоцитов в целом, так и популяции лимфоцитов. Примечательно, что это сопровождалось снижением содержания CD16-позитивных Т- и NK-клеток, а также снижением уровня CD16-негативных Т- и NK-клеток.

Для сравнительного анализа показателей иммунной си-

Таблица 1

Сравнительный анализ относительных и абсолютных показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц и условно-здоровых доноров

Показатель Условно-здоровые доноры («=32) ВИЧ-инфицированные лица (n=184)

В-лимфоциты, % 4,86 ± 0,18 3,18 ± 0,19*

Т- и Ж-клетки СЭ16+, % 5,11 ± 0,19 3,74 ± 0,24*

Т-лимфоциты, % 75,06 ± 0,48 80,11 ± 0,94*

Т-хелперы, % 43,07 ± 0,62 22,57 ± 0,99*

Моноциты СЭ16+, % 0,73 ± 0,05 1,07 ± 0,08*

Незрелые гранулоциты, % 0,20 ± 0,02 0,51 ± 0,09*

Предшественники В-лимфоцитов, % 0,07 ± 0,01 0,15 ± 0,04*

Общее количество лейкоцитов, кл/мкл 6017,07 ± 188,39 5405,91 ± 200,58*

В-лимфоциты, кл/мкл 293,64 ± 15,36 163,75 ± 10,4*

Т- и КК-клетки СЭ16-, кл/мкл 1688,32 ± 53,55 1463,12 ± 70,32*

Т- и КК-клетки СЭ16+, кл/мкл 305,29 ± 13,28 197,42 ± 14,31*

Т-хелперы, кл/мкл 917,03 ± 32,66 436,73 ± 24,41*

Т- и КК-клетки, кл/мкл 1993,60 ± 62,94 1660,54 ± 76,14*

Общее количество лимфоцитов, кл/мкл 2287,24 ± 75,38 1824,29 ± 79,76*

Моноциты СЭ16-, кл/мкл 521,42 ± 25,2 437,73 ± 16,54*

Незрелые гранулоциты, кл/мкл 12,05 ± 1,45 26,44 ± 4,02*

Эозинофилы, кл/мкл 241,92 ± 23,63 157,38 ± 12,16*

стемы у ВИЧ-инфицированных лиц в зависимости от проводимой ВААРТ (табл. 2) сопоставляли 2 подгруппы больных: получавших и не получавших высокоактивную антивирусную терапию ("ВААРТ+" и "ВААРТ-" соответственно). Эффективность терапии определяется прежде всего снижением количества копий РНК вируса в крови пациентов. На этом фоне в подгруппе "ВААРТ+" выявлено снижение относительного количества Т-лимфоцитов при повышении относительного количества Т-хелперов. Для подгруппы "ВААРТ+" также характерно повышение относительного и абсолютного числа В-лимфоцитов при одновременном снижении абсолютного числа клеток-предшественников В-лимфоцитов в крови. Кроме того, зафиксировано снижение относительного и абсолютного числа моноцитов С016+. Также снижено относительное количество незрелых гранулоцитов.

Не вызывает сомнений, что течение ВИЧ-инфекции зависит от свойств как возбудителя, так и макроорганизма. Течение этой инфекции отличается крайним непостоянством: у одних лиц инфекция прогрессирует быстро, у других - медленно даже при заражении от одного и того же источника [13]. У некоторых ВИЧ-инфицированных число лимфоцитов С04 не снижается и СПИД не развивается в течение 7 и более лет, в таких случаях (~ 5%) говорят о длительном непрогрессирующем течении инфекции. В некоторых из этих случаев обнаружены дефектные вирусы с ослабленной способностью к репликации [11]. Однако у большинства ВИЧ-инфицированных вирус активно реплицируется, а различия в скорости развития иммунодефицита объясняются особенностями макроорганизма. В диагностике и прогнозировании ВИЧ-инфекции чрезвычайно большое значение имеет определение относительных и абсолютных концентраций различных субпопуляций Т-лимфоцитов как основных клеток-мишеней, которые повреждаются вирусом, в результате чего формируется патологический процесс, получивший название СПИДа.

Важную роль в патогенезе ВИЧ-инфекции играют анти-генпрезентирующие клетки [16]. Известна роль моноцитов в распространении в формировании резервуаров ВИЧ в организме [1, 2]. Подобно Т-лимфоцитам моноциты/макрофаги обеспечивают поляризацию иммунного ответа и в зависимости от условий могут усиливать иммунный ответ. Однако дизрегуляция между дифференциацией и активацией моноцитов/макрофагов провоцирует иммунную дисфункцию у ВИЧ инфицированных. Установлено, что в моноцитах ВИЧ-инфицированнных коэкспрессия С0163/С016 является биомаркером прогрессирования СПИДа [8]. В этой работе были получены отрицательные корреляции между количеством С016+-моноцитов, а также С0163+-моноцитов и количеством С04+-лимфоцитов у больных СПИДом. Кроме того, у ВИЧ-инфицированных увеличение количества С016+-моноцитов ассоциируется с повышенным кардиоваскулярным риском [9].

В нашем исследовании мы впервые использовали реагент Су1»01£:£тм для анализа субпопуляционного состава лейкоцитов ВИЧ-инфицированных пациентов.

В последнее время был опубликован ряд работ, показавших клиническую значимость субпопуляций, определяемых Су1о01£Г™ на примере пациентов с лим-фоцитозом [10], сепсисом [17, 19], метастатической карциномой [17].

Полученные нами результаты свидетельствуют о перспективности системы Су1о01££ для мониторинга эффективности ВААРТ. Так, после завершения терапевтического воздействия снижалась выраженность таких иммуногематологических проявлений СПИДа, как уменьшение содержания В-лимфоцитов, повышение содержания их предшественников, а также снижение уровня незрелых нейтрофильных гранулоцитов. Кроме того, уменьшилось содержание С016+-моноцитов. Примечательно, что все перечисленные изменения лейкоцитарного звена системы крови ассоциируются с вирусной нагрузкой. Так, при более высокой вирусной

нагрузке в периферической крови, помимо сниженного уровня Т-хелперов, наблюдается повышенный уровень CD16+-моноцитов. С повышенным уровнем вирусной нагрузки также ассоциируется уменьшение количества зрелых В-лимфоцитов и повышение содержания их предшественников. Вероятно, чувствительность этих субпопуляций лейкоцитарных клеток связана с их активным участием в манифестации СПИДа.

Увеличение вирусной нагрузки сопряжено со снижением уровня В-лимфоцитов на фоне повышенного уровня их предшественников. Это может быть связано с нарушениями диф-ференцировки. На этом фоне возможно нарушение не только клеточного, но и гуморального иммунитета при прогрессиро-вании СПИДа. Аналогично этому нарушение дифференци-ровки наблюдается у нейтрофильных гранулоцитов, когда на фоне уменьшения общего количества этих клеток происходит увеличение количества их предшественников. Снижение уровня нейтрофилов создает условия для нарушений неспецифической резистентности, что усугубляет иммунодефицит.

При обсуждении полученных результатов следует обратить внимание на исходную гетерогенность исследуемой когорты. В нее вошли лица обоего пола, инфицированные ВИЧ как половым путем, так и в результате внутривенных инъекций. Кроме того, в исходной когорте были лица с наличием коморбидного вирусного гепатита С. Поэтому представляются перспективными дальнейшие исследования, в которых был бы определен уровень чувствительности исследованных с помощью системы CytoDiff™ показателей лейкоцитарного звена крови к гендерным различиям, способам заражения, тяжести заболевания, а также наличию коморбидной патологии.

Вместе с тем ассоциация наблюдаемого дисбаланса в лейкоцитарном звене системы крови с уровнем вирусной нагрузки и снижение его выраженности после ВААРТ позволяет рассматривать его как одно из звеньев прогрессирования СПИДа. Поскольку эти данные были получены благодаря аналитическим возможностям системы CytoDiff™, можно считать целесообразным ее использование для оценки мониторинга эффективности ВААРТ терапии.

Выводы. 1. Использование панели CytoDiff™ существенно расширяет аналитические возможности выявления нарушений в лейкоцитарном звене системы крови у ВИЧ-инфицированных лиц. С ее помощью обнаружен дисбаланс в субпопуляционном составе системы крови в виде увеличения процентного содержания "провоспалительных" CD16-позитивных моноцитов при одновременном снижении общего количества моноцитов, а также уменьшения содержания

Таблица 2

Сравнительный анализ относительных показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц со стадией 4 заболевания с учетом проводимой ВААРТ

Показатель Стадия 4 в группе "ВААРТ-" (n=25) Стадия 4 в группе "ВААРТ+" (n=61)

Вирусная нагрузка, мл-1 650154,24 ± 350569,04 50026,04 ± 30270,09*

В-лимфоциты, % 2,65 ± 0,33 3,79 ± 0,28*

Т-лимфоциты, % 83,29 ± 1,83 76,93 ± 1,37*

Т-хелперы, % 15,61 ± 1,70 21,09 ± 1,12*

Моноциты С016+, % 1,47 ± 0,21 0,94 ± 0,09*

Незрелые гранулоциты, % 0,83 ± 0,28 0,32 ± 0,06*

Базофилы, % 0,36 ± 0,06 0,55 ± 0,05*

В-лимфоциты, кл/мкл 132,48 ± 20,39 187,47 ± 15,14*

Моноциты С016+, кл/мкл 67,19 ± 7,95 44,11 ± 4,04*

Предшественники В-лимфоцитов, кл/мкл 6,56 ± 1,44 3,68 ± 0,29*

Базофилы, кл/мкл 15,61 ± 2,04 25,93 ± 2,11*

Примечание. р<0,05.

- указаны только статистически значимые показатели,

*

В-лимфоцитов при одновременном увеличении содержания предшественников В-клеток в крови.

2. ВААРТ приводит к смягчению дисбаланса между различными субпопуляциями лейкоцитарного звена системы крови, что позволяет рассматривать использование панели CytoDiff™ как перспективный подход к мониторингу противовирусной терапии.

Работа выполнялась в рамках государственного задания на выполнение работ в сфере научной деятельности Минобрнауки ГК № 2014/252.

ЛИТЕРАТУРА

1. Барлет Дж., Галлант Дж. Клинические аспекты ВИЧ-инфекции. М.; 2007.

2. Говорун В.В. ВИЧ-инфекция. М.; 2009.

3. Покровский В.В., Ермак Т.Н., Беляева В.В., Юрин О.Г. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение. М.: ГЭОТАР Мед.; 2000.

4. Casulli S., Elbim C. Interactions between human immunodeficiency virus type 1 and polymorphonuclear neutrophils. J. Innate Immun. 2013; 235—40.

5. Cohen M.S., Chen Y.Q., McCauley M., Gamble T., Hosseinipour M.C. Prevention of HIV-1 infection with early antiretroviral therapy. N. Engl. J. Med. 2011; 365: 493—505.

6. Ellery P.J., Tippett E., Chiu Y.L., Paukovics G., Cameron P.U., Solomon A. et al. The CD16+ monocyte subset is more permissive to infection and preferentially harbors HIV-1 in vivo. J. Immunol. 2007; 178(10): 6581—9.

7. Gupta R., Hil A., Sawyer A.W., Pillay D. Emergence of drug resistance in HIV type 1-infected patient safer receipt of first-line highly active antiretroviral therapy: a systematic review of clinical trials. Clin. Infect. Dis. 2008; 47: 712—22.

8. Fischer-Smith T., Tedaldi E., Rappoport J. CD163/CD16 coexpres-sion by circulating monocytes/macrophages in HIV: Potential bio-markers for HIV infection and AIDS progression. AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2008; 24: 417—21.

9. Funderburg, N.T., Zidar D.A., Shive C., Lioi A., Mudd J., Mussel-white L.W. et al. Shared monocyte subset phenotypes in HIV-1 infection and in uninfected subjects with acute coronary syndrome. Blood. 2012; 120 (23): 4599—608.

10. Jean A., Boutet C., Lenormand B., Callat M.P., Buchonnet G., Leclerc C., Vasse M. Combination of cellular population data and CytoDiff analyses for the diagnosis of lymphocytosis. Clin. Chem. Lab. Med. 2011; 49(11): 1861—8.

11. Kirchhoff F., Greenough T.C., Brettler D.B. et al. Brief report: Absence of intact nef sequences in a long-term survivor with nonprogressive HIV-1 infection. N. Engl. J. Med. 1995; 332: 228—32.

12. Kumar S., Jin M., Ande A., Sinha N., Silverstein P.S., Kumar A. Alcohol consumption effect on antiretroviral therapy and HIV-1 pathogenesis: role of cytochrome P450 isozymes. Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 2012; 11: 1363—75.

13. Liu S.L., Schacker T., Musey L. et al. Divergent patterns of progression to AIDS after infection from the same source: HIV type 1 evolution and antiviral responses. J. Virol. 1997; 71: 4284—95.

14. Lodi S., Phillips A., Touloumi G., Pantazis N., Bucher H.C. et al. CD4 decline in seroconverter and seroprevalent individuals in the precom-bination of antiretroviral therapy era. AIDS. 2010; 24: 2697—704.

15. Lodi S., Phillips A., Fidler S., Hawkins D., Gilson R., McLean K. et al. Role of HIV infection duration and CD4 cell level at initiation of combination anti-retroviral therapy on risk of failure. PLoS One. 2013; 9.

16. Pantaleo G., Graziosi C., Fauci A.S. The immunopathogenesis of human immunodeficiency virus infection. N. Engl. J. Med. 1993; 328: 327—35.

17. Park S.H., Park B.G., Park C.-J., Kim S., Kim D.-H., Jang S. et al. An extended leukocyte differential count (16 types of circulating leukocytes) using the cytodiff flow cytometric system can provide information for the discrimination of sepsis severity and prediction of outcome in sepsis patients. Cytometry B. Clin. Cytom. 2013. Sep.

3. doi: 10.1002/cytob.21123.

18. Roussel M., Benard C., Ly-Sunnaram B., Fest T. Refining the white blood cell differential: the first flow cytometry routine application. Cytometry PA. 2010; 77A: 552—63.

19. Roussel M., Gros A., Gacouin A., Le Meur N/, Le Tulzo Y., Fest T. Toward new insights on the white blood cell differential by flow cytometry: a proof of concept study on the sepsis model. Cytometry B. Clin. Cytom. 2012; 82(6): 345—52.

20. Uy J., Armon C., Buchacz K., Wood K., Brooks J.T. Initiation of HAART at higher CD4 cell counts is associated with a lower frequency of antiretroviral drug resistance mutations at virologic failure. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2009; 51: 450—3.

REFERENCES

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1. Barlett J., Gallant J. Clinical aspects of HIV. Moscow: GEOTAR-Media; 2007. (in Russian)

2. Govorun V. HIV. Voscow: GEOTAR-Media; 2009. (in Russian)

3. Pokrovsky V.V., Ermak V.V., Belyaeva V.V., Jurin O.G. HIV infection: clinical features, diagnosis and treatment. Moscow: Meditsina; 2000. (in Russian)