ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ Текст научной статьи по специальности «Математика»

УДК 613.31:579.68:579.842.141-078

Н. В. Чугунихина

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ ИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

НИИ общей и коммунальной гигиеиы им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва

В питьевой воде возбудители инфекционных заболеваний, в том числе и сальмонеллы, могут находиться в незначительном количестве, что обуславливает необходимость исследования больших объемов воды — 2—3 л. В московской городской санэпидстанции для определения содержания сальмонелл в воде использовался метод мембранных фильтров: по окончании фильтрации мембранный фильтр помещается в среду накопления и после инкубации производится высев на плотные питательные среды. Однако чувствительность данного метода и возможность его использования для выделения S. typhi до настоящего времени не изучались. Решение этих вопросов и явилось целью настоящей работы.

Исследования проводили с двумя штаммами сальмонелл — S. typhi 520 и S. typhimurium 10, полученными из ЦНИИ эпидемиологии Минздрава СССР. Заражение дехлорированной водопроводной воды осуществлялось суспензией бактериальных культур, приготовленной по оптическому стандарту мутности. Контроль заражения производился путем подсчета колоний, выросших на висмутсульфитном агаре при посеве зараженной воды или десятичных разведений суспензии культур (в зависимости от дозы заражения). Коли-индекс водопроводной воды во всех экспериментах был менее 500. Пробы зараженной воды фильтровались через мембранные фильтры № 3 со средним диаметром пор 0,5 мкм. Подготовку мембранных фильтров осуществляли в соответствии с ГОСТом 18963—73 «Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа». Число проб воды с одинаковой концентрацией бактерий составляло 6—15. Мембранные фильтры после фильтрации 3 проб помещались в колбочки с 20—50 мл селенитового бульона, которые инкубировались 24 ч при 37 °С, после чего производился высев на чашки с висмутсуль-фитным агаром (1-й вариант метода). Мембранные фильтры после фильтрации остальных проб воды помещались непосредственно на поверхность висмутсульфитного агара и после инкубации в течение 24 ч при 37 °С подсчитывалось количество выросших колоний (2-й вариант метода). Следует отметить, что фильтрация больших объемов (500 мл и выше) водопроводной воды затруднительна, поэтому целесообразно проводить дробную фильтрацию, что значитель-

но ускоряет проведение анализа. Например, объем 500 мл делится на 5 проб по 100 мл или на 2 по 250 мл.

Полученные результаты показали, что оба варианта метода мембранных фильтров могут быть использованы для индикации сальмонелл, в том числе и S. typhi, в питьевой воде (см. таблицу). Чувствительность обоих вариантов метода приблизительно одинакова и позволяет определять единичные клетки сальмонелл в пробе воды.

1-й вариант метода мембранных фильтров, использованный для индикации сальмонелл в питьевой воде, имеет ряд существенных преимуществ перед общепринятым методом значительная экономия сред накопления, плотных питательных сред, лабораторной посуды, сокращав1 ется трудоемкость анализа (см. схему). 2-й вариант метода (непосредственное помещение мембранных фильтров на плотную питательную среду) имеет следующие преимущества: сокращает время анализа и количество используемой лабораторной посуды, не требует сред накопления, существенно уменьшает объем исследований каждой пробы воды. Кроме того, метод мембранных фильтров позволяет определять индекс сальмонелл в воде, т. е. является количественным.

В настоящее время метод мембранных фильтров рекомендован для определения многих сани-тарно-показательных, потенциально патогенных и патогенных микроорганизмов. Он обладает такими достоинствами, как высокая чувствительность, экономичность, эффективность при иссл^Щ довании морской и химически загрязненной вот ды и др. В связи с этим необходимо как можно быстрее внедрить метод мембранных фильтров в практику бактериологических лабораторий санэпидстанций, что позволит существенно повысить качество санитарно-бактериологических исследований.

Поступила 10.11.87

Результаты посева проб питьевой воды, зараженных тест-культурами

1 «Инструктивно-методические указания по обнаружению возбудителей кишечных инфекций бактериальной и вирусной природы в воде» (1974 г.).

Культура бактерий 1-й вариант метода 2-й вариант метода

число проб % положительных проб число проб % положительных проб

М±т доверительный интервал М±т доверительный интервал

S. typhi S. typhimurium 82 29 76±5 69±9 65—85 49—85 82 79 70±5 56±6 58—79 44—67

Общепринятый метод

Схема выделения S. typhi из питьевой воды

Метод мембранных фильтров

1-й вариант

2-й вариант

Проба воды, 1 л

*

Посев в 1 л селенитового бульона двойной концентрации, распределение на 4 объема по 0,5 л

Проба воды, 1 л

Проба воды, 1 л

Фильтрация через мембранный фильтр № 3

Фильтрация через мембранный фильтр № 3

Посев в 20—50 мл селенитового бульона обычной концентрации

Инкубация в течение 24 ч при 37°С Инкубация в течение 24 ч при 37°С

Посев с каждого объема на 3 чашки с висмутсульфитным агаром

Посев на 3 чашки с висмутсульфитным агаром

Инкубация 1—2 чашек висмутсулъфит-ного агара с мембранными фильтрами в течение 24 ч при 37 °С

¡■^Инкубация в течение 24 ч при 37 °С Инкубация в течение 24 ч при 37 °С

УДК 613.32: [579.842.11:578.81 )-078

|£. Л. Ловцевич\, Р. А. Дмитриева, А. Е. Недачин, Л. А. Мышляева, Т. В. Доскина, Н. Г. Нечипоренко, Н. М. Корнилова

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИФАГОВ В ПИТЬЕВОЙ ВОДЕ

НИИ общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва

В соответствии с принятыми в СССР документами санитарного законодательства оценка эпидемической безопасности водных объектов в отношении возбудителей кишечных инфекций проводится по косвенным бактериальным показателям. Однако если бактерии группы кишечных ^алочек являются надежным косвенным показателем эпидемической безопасности питьевой воды в отношении патогенных энтеробактерий, то в отношении энтеровирусов они не всегда адекватны. В последние годы для рекреационных вод и для воды источников централизованного водоснабжения в качестве индикаторов вирусного загрязнения используются бактериофаги кишечной палочки — колифаги [1, 2]. При са-нитарно-микробиологическом анализе этих вод проводится прямое выделение колифагов из 10 мл воды, так как их уровень в них составляет десятки, сотни и более бляшкообразуюших единиц в 1 л (БОЕ/л).

Что касается питьевой воды, то в связи с отсутствием методов обнаружения единичных колифагов в 1 л до настоящего времени не представлялось реальным изучить возможность использования колифагов в качестве индикаторов энтеровирусов при санитарно-микробиологиче-ском исследовании этого водного объекта.

В связи с изложенным выше целью настоящих исследований являлась разработка метода определения минимального количества колифагов (единичные вирионы в 1 л) в питьевой воде.

В основу разработанного метода определения колифагов в питьевой воде был положен метод обогащения (подращивания), традиционно применяемый в бактериологических исследованиях слабозагрязненных водных объектов.

Экспериментальные исследования проводили на модели ДНК-содержащего колифага Ть Последний был выбран в качестве модели в связи с тем, что ДНК-содержащие бактериофаги наиболее распространены в природных водах, при этом, по данным ряда авторов, частота их выделения колеблется от 80 до 100 % в зависимости от степени загрязнения исследуемого объекта сточными водами. Рабочие концентрации фага в эксперименте составляли от 0,5—1 до 5-104 БОЕ/ /л.

В качестве бактерии-детектора был использован штамм Е. coli В АТСС 11 303, полученный из Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов. Образцы воды для экспериментальных исследований отбирали из водопроводной сети города и подвергали стерилизации путем автокла-вирования. В качестве обогатительной среды ис-