CC BY
20
УДК 619:616.995.42:615.1:636.92
Куцан О.Т., д.вет.н., професор, член-кореспондент HAAH Украши noHOMapeHKO О.В., к.вет.н. © ННЦ «1нcmumym екcперuменmaльнoï i клiнiчнoï веmерuнaрнoïмедuцuнu»,
м. Xapюв
ВПЛИВ ЗАСОБУ «НУР1ЦИД» НА ОРГАН1ЗМ КРОЛ1В ТА УМОВНО-ПАТОГЕННУ М1КРОФЛОРУ ПРИ АКАРОЗАХ ТВАРИН
введет резyльmamu дocлiджень вплuвy 3aco6y «Hyp^ud» m ктшчнт cmaн i гемamoлoгiчнi пoкaзнuкu кpoлiв 3a yмoвu amrna^ï üoгo нa штру mвapuн ma вuзнaчення üoгo бaкmеpuцuднoï diï. Bcmaнoвленo, щo 3aci6 «Hyp^ud» не вuклuкae змш гемamoлoгiчнuх пoкaзнuкiв i не вuявляe moкcuчнoï diï нa opгaнiзм кpoлiв ma мoже 6ymu зacmocoвaнuü для лiкyвaння dpi6mx œm^mx mвapuн npu aкapoзax, ycклaдненux yмoвнo-пamoгеннoю мiкpoфлopoю.
Ключовi слова: aкapoзu, 3aci6, кpoлi, кpoв, еpumpoцumu, леüкoцumu, гемoглoбiн, неümpoфiлu, еoзuнoфiлu, мoнoцumu, лiмфoцumu, гpaмпoзumuвнa ma гpaмнегamuвнa мiкpoфлopa.
Вступ. ^зважаючи на значну кшькють piзнoмaнiтних зaсoбiв боротьби з акарозами, aктyaльним залишаеться питання розробки нових препараив для л^вання хворих на акарози тварин [1,2,3]. В тепершнш час перевага надаеться комплексним препаратам на oснoвi синтетичних шретровдв [2,3].
Вщомо, що переб^ aкapoзiв часто yсклaднюеться yмoвнo-пaтoгеннoю мжрофлорою. Тому необхщно викopистoвyвaти препарати, яю мають кoмплекснy дiю як на збудниюв aкapoзiв, так i на yмoвнo-пaтoгеннy мiкpoфлopy. Hеoбхiднiсть розробок препараив комплексно1' ди для лiкyвaння тварин, хворих на акарози, пiдтвеpджyеться pезyльтaтaми дoслiджень ряду нayкoвцiв [2,3].
№ми був розроблений i запатентований зааб для лiкyвaння сapкoптoïдoзiв i демoдекoзiв дpiбних свiйських тварин «^р^ид». В лабораторних умовах були пpoведенi комплексш дoслiдження препарату.
Meтa дослiджeнь - вивчити вплив засобу «Шурщид» на клшчний стан i гемaтoлoгiчнi показники кpoлiв за умови aплiкaцiï його на шюру тварин та визначити його бактерицидну дiю.
Maтepiaли i мeтоди дослiджeнь. Для вивчення впливу на opгaнiзм тварин нових препараив, що застосовуються мiсцевo, неoбхiднo проводити дослщження щодо ïx тoксичнoстi та нешкщливост для тварин шляхом встановлення динaмiки змiн гемaтoлoгiчниx та бioxiмiчниx пoкaзникiв кpoвi пiсля aплiкaцiï препараив на шкipy тварин.
Вивчення впливу л^вального засобу «^р^ид» на оргашзм кpoлiв за умови aплiкaцiï його на шюру тварин здiйснювaли за методичними рекомендащями [4].
© Куцан О.Т., Пономаренко О.В., 2011
При проведенш дослщжень використовували 15 кролiв масою 2-3 кг. ycix тварин розподiлили на три групи по 5 у кожнш. Препарат наносили на шюру пiд прямокутне лекало площею 4^6 см за допомогою шприца, поступово, даючи змогу всмоктуватись, i рiвномiрно розподiляли його по всiй поверхш тонким шаром. Кролям першо! дослщно! групи на шкiру наносили препарат «Нурщид» i3 розрахунку 10 мг/кг маси тша тварин, кролям друго! дослщно! групи наносили препарат i3 розрахунку 50 мг/кг маси тша тварин. Тварини третьо! групи були контрольними - на шюру наносили соняшникову олiю. Спостереження за дослщними тваринами проводили впродовж 21 доби.
Для гематолопчних дослiджень вiдбирали кров iз вушно! вени до апшкацп препарату, через 8 годин та 1, 3, 7 i 14 дiб пiсля апшкацл. Вплив дослщжуваного препарату на органiзм кролiв визначали за кiлькiстю еритроцитiв на КФК-2 за допомогою калiбрувальних графiкiв [5,6]; кшьюстю лейкоцитiв у камерi Горяева [7]; рiвнем гемоглобiну гемоглобiнцiанiдним методом [7] та показниками лейкоформули у мазках кровi [7].
У плазмi кровi дослiдних тварин визначали актившсть лужно! фосфатази (К.Ф. 3.1.3.1.) та загально! лактатдегiдрогенази (К.Ф. 1.1.1.27.) з використанням наборiв науково-виробничого пiдприемства «Фшют Дiагностика» (Укра!на).
Визначення бактерицидно! ди препарату «Нурiцид» щодо еталонних музейних штамiв Staphylococcus aureus-209 i Salmonella enteritidis-8M здiйснювали за наступною схемою.
Стерильш диски з фiльтрувального паперу просочували робочими розчинами дослiдних зразюв препарату «Нурiцид» у рiзних розведеннях, як мали рiзнi строки збер^ання: одна доба (свiжовиготовлений), 2 мшящ та 2 роки (максимальний строк збереження). Диски помiщали на поверхню м'ясопептонного агару, який попередньо було зааяно тест-культурами бактерiй у концентращях 5 х 105 та 5 х 106 м.т./см3. Як контроль використовували стандартнi диски з левомiцетином. Вибiр контролю було обумовлено тим, що до складу препарату як бактерицидний засiб входить левомiцетин. Чашки Петрi з висiвами iнкубували 24 години при температурi 37°С. Результати дослщжень ощнювали шляхом вiзуального огляду посiвiв i вимiрювання дiаметрiв зон затримання росту тест-культур.
Результати дослiджень. Кшшчш спостереження за тваринами показали, що загальний стан органiзму тварин як контрольно!, так i дослiдних груп був задовiльний, тобто кролi мали блискучий волосяний покрив, еластичну шюру, помiрно вологi слизовi оболонки, лiмфатичнi вузли не збiльшенi, гладенькi, рухом^ не болючi, добре вiдмежованi вщ навколишнiх тканин. Кiлькiсть споживання корму та води протягом до^ду в уах групах не змiнювалось. Почервоншня шкiри на дiлянках з нанесеним препаратом не спостер^алось. Не було i загибелi тварин.
Отриманi даш гематологiчних дослiджень до аплiкацi! препарату, через 8 годин та 1, 3, 7 i 14 дiб тсля аплiкацi! наведенi у таблищ 1.
Таблиця 1
Динамнса г ем ато ло пчшк показ шпл в та лейкоцнтарно! формулы у крсшв теля агапкаци препарату «Нурщид» на шюру
тварин (М±111, п=5)
Час теля апшкжц! препарату «Нурщид:»
Показники До доби До доби До доби
аши- 8 год 1 3 7 14 апга- 8 1 3 7 14 апга- 8 1 3 7 14
каци каци год. каци год.
I група (1%) П (5%) контроль
К1льюстъ еритроципв, 6,7 6,0 5,2 5,2 7,8 7,5 6,7 5,5 5,4 5,1 8,2 7,4 7,0 5,9 6,2 6,2 8,6 7,6
Т/л ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,5 0,3 0,3 0,4 0,2 0,2 0,5 0,3 0,6 0,7 0,6 0,2 0,4 0,2 0,4 0,5 0,6 0,1
Кшьюстъ лейкоцит1Б, 4,6 8,2 5,5 7,8 5,4 5,2 5,3 8,9 5,4 6,9 6,6 5,8 4,9 8,6 5,6 5,2 4,7 4,8
Г/л ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,4 0,4 0,5 1,1 0,5 0,5 0,2 0,2 0,6 1,1 0,5 0,5 0,2 2,8 0,4 0,5 0,3 0,5
Р1вень 112,2 111,5 110,9 110,1 110,6 113,7 111,8 107,6 106,3 104,3 108,5 112,5 111,3 110,2 109,5 109,5 110,3 113,6
гемоглоб1ну, г/л ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
10,6 9,6 1,7 7,0 6,8 3,9 1,9 10,0 12,7 7,2 7,3 2,9 2,4 8,7 3,7 10,8 4,9 1,9
Нейтрофши, %: 1,8 2,5 1,3 2,0 1,6 1,3 2,0 3,0 2,4 1,8 1,6 1,6 1,7 1,8 2,0 1,5 1,5 1,25
Пало чкояд ерш,% ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,37 0,4 0,37 0,32 0,49 0,4 0,32 0,58 0,29 0,2 0,24 0,37 0,37 0,37 0,32 0.29 0.29 0,25
С е гментоядерш,% 13,8 22,5 21,0 15,6 13,1 15,0 16,5 21,7 21,55 16,4 15,2 16,4 14,5 20,2 18,0 20,5 18,75 19
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
1,39 2,25 1,14 2,18 2,15 1,76 0,81 2,02 2,87 2,13 1,88 0,51* 1,78 3,97 2,17 4,55 1,55 0,71
Еозиноф1ли,% 2,6 1,3 2,8 2,4 2,0 2,3 1,7 1,3 1,55 2,0 1,0 2,6 2,3 1,8 2,4 2,0 1,75 2,75
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,24 0,33 0,37 0,75 0,77 0,24 0,48 0,33 0,75 0,77 0+ 0,48 0,4 0,49 0,4 0,41 0,25 0,75
Моноцити,% 2,4 2,6 2,8 3,0 2,0 2,2 2,3 2,0 2,5 4,0 1,2 1,4 2,4 3,2 2,4 2,75 2,0 2,25
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
0,24 0,86 0,58 0,32 0,41 0,25 0,6 0,58 0,41 0,77 0,2 0,4 0,29 0,73 0,4 1,03 0,58 0,48
Лшфоцити,% 79,4 71,1 71,6 77,0 81,3 79,2 77,5 72,0 72,0 75,8 81,0 78,0 79,1 73,0 75,2 73,2 76,0 74,7
± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±
1,2 1,85 0,98 2,21 2,11 1,78 0,81 3,46 3,39 2,39 2,24 1,41 2,58 4,37 2,48 5,10 1,08 0,48
а;
1 Ой
¡е К'
0 а: ¡г РЧ
1
(й о
(оэ
51
-К
о*
РЧ
о о
Р3
Од
£
(о
.оо
о 2 с а: о
Прпмгтка * - Р<0,01 (вщносно контролю)
(о С5
Проведет дослщження та ан^з гематолопчних показниюв кролiв свщчать про те, що змiни, яю спостерiгали протягом двох тижнiв дослщжень у дослiдних групах пiсля апшкаци препарату «Нурщид», вiрогiдно не вiдрiзнялись вiд контролю, а вiрогiдне зниження кiлькостi еозинофiлiв до 1,0±0 через 7 дiб i пiдвищення кшькосп сегментоядерних нейтрофiлiв до 16,4±0,51 через 14 дiб у тварин друго! дослщно! групи суттево не впливали на загальну структуру лейкограми.
В результат проведених бiохiмiчних дослiджень та статистично! обробки отриманих даних встановлено, що змши активностi лужно! фосфатази та лактатдегщрогенази в плазмi кровi кролiв дослiдних груп не були вiрогiдними порiвняно з показниками у кролiв контрольно! групи (таблиця 2).
Таблиця 2
Вплив препарату «Нурщид» на актившсть деяких фермент1в кров1 крол1в
Час тсля аплшаци препарату «Нурщид»
8 год. доби
1 3 7 14
Групи тварин
До апл1кацп
Лужна фосфатаза, нмоль/с х л
Iгрупа (1,0 %) 3466 ± 373,72 2912 ± 128,00 3164 ± 198,31 3634 ± 156,77 2906 ± 86,00 3804 ± 356,21
II група (5,0 %) 3124 ± 230,36 2830 ± 850,00 3040 ± 194,47 3846 ± 182,28 3208 ± 420,37 3336 ± 219,42
контроль 3148 ± 220,58 3126 ± 173,45 3040 ± 230,69 4625 ± 135,55 4100 ± 210,00 4047 ± 53,00
Лактатдепдрогеназа, мкмоль/год х мл
Iгрупа (1,0 %) 1,05 ± 0,11 0,83 ± 0,09 0,94 ± 0,11 0,79 ± 0,13 0,88 ± 0,09 1,11 ± 0,22
II група (5,0 %) 0,8 ± 0,13 0,625 ± 0,13 0,93 ± 0,15 0,76 ± 0,11 0,93 ± 0,13 0,92 ± 0,09
контроль 0,77 ± 0,12 0,65 ± 0,07 0,73 ± 0,10 0,64 ± 0,09 1,03 ± 0,15 0,83 ± 0,14
Слiд вiдмiтити про тенденци до зниження активност лужно! с осфатази
на 3-14 добу в обох дослщних групах проти контролю, та, навпаки, тенденци до зростання активност лактатдегiдрогенази в обох дослiдних групах на 1-3 добу проти контролю.
Отже, проведет дослщження свщчать про те, що препарат «Нурщид» при нанесенш на шюру кролiв не викликае змш гематологiчних показникiв та активност деяких ферментiв кровi (лужна фосфатаза та загальна лактатдегiдрогеназа) i не впливае токсично на оргашзм тварин.
Нами було проведено визначення бактерицидно! ди препарату «Нурщид» на грамнегативну та грампозитивну мжрофлору, а також стутнь !! активност залежно вiд строкiв збереження препарату. Результати дослвдв наведенi в таблиц 3.
Таблиця 3
Показники бактерицидно*! активност дослщних зразкчв препарату
«Нурщид» з рйннмн строками зберигання
№ п/п Препарат, строки збертання Staphylococcus aureus | Salmonella enteritidis
Концентращя тест-культур, м.т./смЗ
5 х 105 5 х 106 5 х 105 5 х 106
Дiаметри зон затримання росту тест-культур, мм
1 «Нурщид» одна доба 25 24 27 26
2 «Нурщид» 2 м1сящ 25 24 27 26
3 «Нурщид» два роки 24 23 26 24
4 Контроль 25 24 27 26
За результатами наших дослiджень було встановлено, що препарат «Нурщид» мае високий стутнь бактерицидно! активност щодо грамнегативно! та грампозитивно! мiкрофлори. При визначенш бактерицидно! активностi свiжовиготовленого препарату «Нурщид» (строк збереження одна доба) встановлено, що вш забезпечуе зону затримання росту культури Staphylococcus aureus 209 в концентраци 5х105 м.т./смЗ з дiаметром 25 мм, а в концентраци 5х106 м.т./смЗ - 24 мм. Ц показники вiдповiдають контрольним аналогам (стандартш диски з левомщетином фабричного виробництва). Зони затримання росту культури Salmonella enteritidis 8 M дорiвнюються 27 та 26 мм, що також вщповщае контрольним аналогам.
Крiм того встановлено, що бактерицидш властивостi препарату стабiльнi i не змшюються протягом зберiгання. Так, препарати з короткочасними та тривалими строками збертання (2 мiсяцi та 2 роки вщповщно) забезпечували дiаметри зон затримання росту тест-культур, яю вщповщали аналогiчним у свiжовиготовленому препаратi. Препарат «Нурщид» проявляе яскраво виражену акарицидну дiю щодо акариформних клiщiв. Результати наших дослщжень пiдтверджують високий рiвень бактерицидно! дi! препарату щодо грампозитивно! та грамнегативно! мшрофлори.
Отже, «Нурщид» е комплексним препаратом полiфакторно! ди, який може бути застосований для л^вання дрiбних свiйських тварин при акарозах, що ускладнюються умовно-патогенно! мжрофлорою.
Висновки. 1. Лiкувальний засiб «Нурщид», за умови його апшкаци на шюру кролiв, не викликае подразнення у мющ нанесення i не впливае на загальний клiнiчний статус оргашзму.
2. Аплiкацiя «Нурiциду» на шюру кролiв у дозах 10 мг/кг i 50 мг/кг не впливае на гематолопчш показники (кшьюсть еритроцитiв, лейкоцитiв, рiвень гемоглобiну та лейкоцитарну формулу).
3. За результатами дослщжень встановлено, що препарат «Нурщид» мае високий стутнь бактерицидно! активност щодо грамнегативно! та грампозитивно! мжрофлори.
Лiтература
1. Криворучко Е.Б. Демодекоз собак (распространение, симптоматика, патогенез и лечение) [Текст] / Е.Б. Криворучко : автореф. дис. ... канд. вет. наук. - Минск, 2004. - 21 с.
2. Рогозина И.Е. Саркоптоз и отодектоз у собак в городах Санкт-Петербург и Иваново (эпизоотология, клиника и лечение) [Текст] / И.Е. Рогозина : автореф. ... канд. вет. наук: 03.00.19, 16.00.03 - Иваново, 2004. - 17 с.
3. Титаренко А.М. Демодекоз собак (ешзоотолопя, патогенез, симптоми, дiагностика, лжування) [Текст] / А.М. Титаренко : автореф. дис. ... канд. вет. наук. - К., 2005. - 19 с.
4. Токсиколопчний контроль нових засобiв захисту тварин : методичш рекомендаци [Текст] / М.В. Косенко [ш.]. - К., 1997. - 33 с.
5. Дервиз Г.В. Количественное определение гемоглобина крови посредством аппарата ФЭК-М [Текст] / Г.В. Дервиз, А.И. Воробьев // Лабораторное дело. - 1959. - № 3. - С. 3-8.
6. Заболоцкий В.Т. Методика подсчета эритроцитов на колориметре типа ФЭК-М [Текст] / В.Т. Заболоцкий, В.Ф. Поляков // Тр. ВИЭВ. - 1965. - Т. 31. - С. 281-286.
7. Кондрахин И.П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии [Текст] / И.П. Кондрахин, И.В. Курилов, А.Г. Малахов. - М.: Агропромиздат, 1985. - 286 с.
Summary
Kutsan О.Т., Doctor of Science (Vet. Med.), Professor, Corresponding Member of
NAAS of Ukraine, Ponomarenko O.V., Candidate of Science (Vet. Med) National Scientific Center «Institute of Experimental and Clinical Veterinary
Medicine», Kharkiv INFLUENCE OF THE PREPARATION "NURICIDE" ON THE RABBIT ORGANISM AND ON conditionally PATHOGENIC MICROFLORA AT
ANIMAL ACARIASISES
Results of investigations concerning the influence of the preparation "Nuricide" on the clinical state and hematological indices of rabbits under the condition of its application on animal skin o and determination of its bactericidal action are presented in the article. There have been determined that the preparation "Nuricide" does not cause changes of hematological indices and does not educe toxic action on the rabbit organism and it may be used for treatment of small domestic animals at acariasises complicated by the conditionally pathogenic microflora.
Key words: acariasises, preparation, rabbits, blood, erythrocytes, leukocytes, hemoglobin, neutrophils, eosinophils, monocytes, lymphocytes, gram-positive and gram-negative microflora.
Стаття надшшла до редакцИ 10.05.2011
