ИНДУЦИРОВАННАЯ АНТИГЕНАМИ (H37Rv И ESAT-6) ПРОДУКЦИЯ ИНТЕРФЕРОНА ГАММА В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

А Б В

Рис. 2. Результаты исследования бактериальной транслокации из ущемленного отдела тонкой кишки при странгуляци-онной непроходимости кишечника методом динамической и статической сцинтиграфии. А - Динамическая сцинтигра-фия. Суммационная сцинтиграмма за 4 часа исследования: регистрируется экстраинтестинальное распространение меченых бактерий. Б - Динамическая сцинтиграфия. Суммационная сцинтиграмма за 4 часа исследования с обозначенными зонами интереса: 1 - кишечник (место введения БРП); 2

- печень; 3 - мягкие ткани; 4 - почки; 5 - мочевой пузырь. В

- Статическая сцинтиграфия после экстирпации кишечника: 1 - париетальная брюшина (место прилегания ущемленного сегмента тонкой кишки с введённым БРП; 2 - печень; 3 -мягкие ткани; 4 - почки; 5 - мочевой пузырь.

Рис. 3. Результаты исследования бактериальной транслокации из приводящего отдела тонкой кишки при странгуляци-онной непроходимости кишечника методом динамической и статической сцинтиграфии. А - Динамическая сцинтигра-фия. Суммационная сцинтиграмма за 4 часа исследования: регистрируется экстраинтестинальное распространение меченых бактерий. Б - Динамическая сцинтиграфия. Суммаци-онная сцинтиграмма за 4 часа исследования с обозначенными зонами интереса: 1 - кишечник (место введения БРП); 2 - печень; 3 - мягкие ткани; 4 - почки. В - Статическая сцинтиграфия после экстирпации кишечника: : 1 -печень; 2 -мягкие ткани; 3 - почки; 4 - мочевой пузырь.

Заключение. Сцинтиграфия с меченными 99mTc бактериями E. coli позволяет визуализировать процесс бактериальной транслокации и исследовать закономерности течения бактериемии при острой хирургической патологии живота. В ходе проведенного исследования установлено:

- в норме БТ из полости тонкой кишки не происходит;

- при СНК вследствие БТ условно патогенной микрофлоры из просвета тонкой кишки развивается системная бактериемия;

- приоритетным источником развития системной бактериемии при СНК является микрофлора ущемленного отдела тонкой кишки.

O.V.Salato, Yu.M.Galeev, M.V.Popov, KAAparcin, E.V.Koval, S.A.Lepekhova

SCINTIGRAPHY WITH TECHNETIUM 99m LABELLED E. COLI IN EXPERIMENTAL RESEARCH OF BACTERIEMIA AT INTESTINAL OBSTRUCTION AND ISCHEMIA

Scientific Center of Reconstructive and Restorative Surgery Irkutsk, Russia

This article described new information technology in medicine - scintigraphy assessment of bacteriemia at intestinal obstruction and ischemia in experiment. Laws of current bacteriemia are investigated at intestinal obstruction and ischemia. Key words: bacterial radiopreparation, scintigraphy, bacteriemia, intestinal obstruction and ischemia.

© Т.Ю.Салина, М.А.Владимирский, Т.И.Морозова, 2006.

Т.Ю.Салина, М.А.Владимирский, *Т.И. Морозова

ИНДУЦИРОВАННАЯ АНТИГЕНАМИ (H37Rv И ESAT-6) ПРОДУКЦИЯ ИНТЕРФЕРОНА ГАММА В ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

Саратовский государственный медицинский университет, НИИфтизиопульмонологииММА им. И.М.Сеченова* Саратов, Россия

Аннотация

Изучалась спонтанная и индуцированная антигенами (H37Rv и ESAT-6) продукция ИФН-у в супернатан-тах 48 часовых культур цельной периферической крови больных туберкулезом (n=36). Установлено значительное снижение индуцированной продукции ИФН-у у больных с тяжелым прогрессирующим течением туберкулезного процесса (группа 2) в ответ на H37Rv 10,9±3,8 пг/мл и ESAT-6 24,8±9,3 пг/мл по сравнению с пациентами с благоприятным течением туберкулезного процесса (группа 1) 225,4±102 пг/мл и 65,0±15,2 пг/мл соответственно, р<0,05. Предложенный метод может быть полезным для оценки тяжести течения туберкулеза.

Ключевые слова: туберкулез, гамма интерферон, спонтанная и индуцированная продукция, цельная периферическая кровь .

E-mail: SalinaTU@rambler.ru

Интерферон гамма (ИФН-у) продукт активированных врожденного и приобретенного иммунного ответа (Strieter

Т-лимфоцитов (Th1) и натуральных киллерных клеток R.M. et al., 2002). Многочисленными экспериментальными

(NK), ему принадлежит критическая роль в реализации исследованиями (Flynn J.L. et al.,1993; Cooper A.M. et al.,

The Third International Scientific Teleconference: New Technology in Medicine - 2006

- 56 -

1997) было показано, что недостаточная продукция ИФН-у ведет к неспособности организма ограничить рост и размножение внутриклеточных микобактерий и ассоциируется с выраженным тканевым некрозом и фатальным течением туберкулеза. Важная роль ИФН-у и ИЛ-12 в течении мико-бактериальной инфекции была установлена и у генетически дефектных детей (Rook G.A.W. et al.,2001). Традиционно проводятся исследования спонтанной и индуцированной продукции цитокинов мононуклеарными клетками крови. Однако эти исследования являются достаточно трудоемкими, требующими предварительного выделения иммунокомпе-тентных клеток на градиенте плотности фиколл-урографин. Кроме того, имеются литературные данные (Швыдченко И.Н. и др., 2005), указывающие на возможность дополнительной активации иммунокомпетентных клеток в процессе их выделения. В связи с этим наши исследования были направлены на изучение диагностической информативности определения спонтанной и индуцирован-ной антигенами (H37Rv и ESAT-6) продукции ИФН-у в супернатантах 48 часовых культур, где вместо периферических мононуклеар-ных клеток использовалась неразделенная гепаринизирован-ная кровь.

Материалы и методы. Исследования проводились у 36 женщин с впервые выявленным, преимущественно инфильт-ративным туберкулезом легких, в возрасте от 19 до 65 лет. Пациенты были распределены на 2 группы в зависимости от тяжести течения туберкулезного процесса. Группу 1 составили 14 пациенток с ограниченным по протяженности (1-2 сегмента) туберкулезом легких и без симптомов интоксикации. Деструктивные изменения в легочной ткани, преимущественно в виде мелких полостей распада выявлялись только у 5 (35,7%) человек. Бактериовыделение - у 2-х (14,3%) пациенток. В группу 2 были включены 22 женщины с тяжелым, прогрессирующим и осложненным течением туберкулезного процесса. Выраженный интоксикационный синдром выявлен у 20 (90,9%), бронхолегочный синдром - у 22 (100%)человек. Распространенные и деструктивные процессы в легочной ткани с бактериовыделением наблюдались у всех 22(100%) пациенток этой группы. У 8(36,4%) человек отмечалось осложненное течение туберкулезного процесса в виде экссуда-тивного плеврита, туберкулеза гортани, бронхов, кишечника, формирования трахеобронхиального свища, легочно-сердечной и дыхательной недостаточности. У 5(22,7%) пациенток наступил летальный исход, обусловленный непрекращающимся прогрессированием туберкулезного процесса, несмотря на проведение комплексной этиопатогенетической терапии. В контрольную (3-ю) группу были включены 15 здоровых доноров. Определение содержания ИФН-у проводилось в супернатантах 48-часовых культур разведенной в 10 раз гепаринизированной крови. Культивирование осуществлялось в 96 луночных культуральных планшетах в среде RPMI, содержащей 5% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМоль L-глютамина и по 100 мкг/мл пенициллина и стрептомицина при t=37C в атмосфере повышенной влажности и СО2. Изучалась спонтанная и индуцированная продукция ИФН-у. В качестве специфического стимулятора использовались два антигена: H37Rv в рабочей концентрации 10 мкг/мл и ESAT-6 - 15 мкг/мл. Технология получения антигена H37Rv разработана сотрудниками Российского НИИ фтизиопульмонологии. Антиген представляет собой суспензию гамма-облученной (2,5 мегарад) биомассы вирулентного штамма микобактерий туберкулеза H37Rv, обработанную с помощью ультразвукового диспергатора

мощностью 100 Вт при 22 кгц в течение 40 циклов по 1 минуте. Использовался супернатант этой биомассы после центрифугирования (18 тыс. об/мин). ЕБАТ-б - секретируемый пептид, с молекулярной массой б кДа, продуцент метаболической активности микобактерий, получен из института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.Н. Овчинникова. Оценка содержания ИФН-у в супернатантах культур проводилась методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием 2-х моноклональных антител в авидин-биотиновой системе (тест-система «гамма-Интерферон-ИФА-Бест», Новосибирск). Количественный учет результатов реакции оценивался на многоканальном иммуноферментном анализаторе марки «Линкей», при длине волны 450 нм. Концентрация ИФН-у определялась путем построения калибровочной кривой по результатам титрования рекомбинантного ИФН-у в качестве стандарта и выражалась в пг/мл. Рассчитывалась разность между величиной оптической плотности образца в ответ на стимулятор и уровнем спонтанной продукции (Д И37Яу и Д ЕБАТ-б).

Получены статистически значимые различия по уровню спонтанной и индуцированной продукции ИФН-у в зависимости от тяжести течения туберкулезного процесса. Нести-мулированная продукция ИФН-у в группе 1 составила 52,7±7,5 пг/мл против 93,2±15,1 пг/мл в группе 2, р<0,05, и в группе 2 она была достоверно выше, чем у здоровых 43,1±9,8 пг/мл, р1_2<0,05. Установлено значительное угнетение индуцированной продукции ИФН-у в ответ на стимуляцию антигенами у тяжелых больных. Среднее значение Д И37Яу в группе 2 составило 10,9±3,8 пг/мл против 225,4±102,0 пг/мл в группе 1, р<0,05. У 13 из 22(59,1%) пациенток группы 2 ответ иммунокомпетентных клеток на антиген И37Яу отсутствовал, в то время как в группе 1 таких пациентов было только 2(14,3%) человека. Аналогичные изменения в сторону угнетения индуцированной продукции ИФН-у получены и при стимуляции антигеном ЕБАТ-6, среднее значение Д ЕБАТ-б составило 24,8±9,3 пг/мл в группе 2 против 65,0±15,2 пг/мл в группе 1, р<0,05. Нулевые значения прироста индуцированной продукции относительно спонтанной в группе 2 установлены у 12 (54,5%) человек и только в 3-х (21,4%) случаях у пациентов 1-й группы. У здоровых туберкулинпо-ложительных лиц колебания индуцированной продукции ИФН-у в ответ на оба антигена наблюдались в диапазоне от 0 до 60 пг/мл. Среднее значение Д И37Яу у здоровых составило 15,0±5,8 пг/мл, Д ЕБАТ-б 15,0±5,3 пг/мл.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что у больных тяжелым, осложненным и неблагоприятно протекающим туберкулезом наблюдается повышение спонтанной и угнетение индуцированной специфическими антигенами продукции ИФН-у в цельной гепарини-зированной крови. Повышение спонтанной продукции ИФН-у у больных туберкулезом, вероятно, является следствием «преактивации» иммунокомпетентных клеток в живом организме и определяет в большей степени интерфероногенную активность самого возбудителя. В то время, как угнетение индуцированной продукции ИФН-у у тяжелых больных, возможно, связано с повреждением иммунокомпетентных клеток или их функциональным истощением, и может быть является одной из причин тяжелого течения туберкулеза. Метод определения индуцированной специфическими антигенами продукции ИФН-у в цельной гепаринизированной крови может оказаться полезным для оценки функциональной способности иммунокомпетентных клеток у больных туберкулезом.

T.Yu.Salina, M.A.Vladimirsky, * T.I.Morozova INDUCED WITH ANTIGENS H37RV AND ESAT-6 PRODUCTION INTERFERON-r WHOLE BLOOD OF THE

PATIENTS PULMONARY TUBERCULOSIS

Medical university, Saratov, Research institute of Phthisiopulmonology, Sechenows Moscow Medical Academy

Russia

We studied the spontaneous and induced H37Rv and ESAT-6 production IFN-y in supernatants 48 hours cultures whole blood of the patients with active pulmonary tuberculosis (n=36). It was found decreasing induced production IFN-y of the patients with high-gravity progressing flow of tuberculosis (group 2) in response to H37Rv 10,9±3,8 pg/ml and ESAT-6 24,8±9,3 pg/ml against 225,4±102,0 pg/ml and 65,0±15,0 pg/ml accordingly (p<0,05) for the patients (group 1) with favourable flow of tuberculosis process. Thus, offer method can be useful for appraisement gravity course tuberculosis.

The Third International Scientific Teleconference: New Technology in Medicine - 2006