Индукция провоспалительных цитокинов in vitro иммунными комплексами, выделенными из плазмы больных ревматоидным артритом Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

1999, Т. 1, № 3-4

Иммунорегуляция

использование этой процедуры на 2 сутки также достоверно уменьшало количество плазматических клеток. Контакт крови с агарозой 4Б на 3 и 4 сутки существенно повышал антителопродукцию и по сравнению с “холостой” гемоперфузией в те же сроки.

Таким образом, перфузия крови через гемоконтакт-ные препараты существенно влияет на процесс специфической антителопродукции в организме иммунизированных животных.

Индукция провоспалительных цитокинов in vitro иммунными комплексами, выделенными из плазмы больных ревматоидным артритом

Кузнецова С.А., Косицкая Л.С., Колосков А.В., Дорофейков В. В., Фрсйдлин И.С.

НИИ экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург

Патогенетическая роль иммунных комплексов (ИК) в патогенезе ревматоидного артрита (РА) не вызывает сомнений. Исследованиями последних лет убедительно показана важная роль цитокинов, которые продуцируются активированными клетками и участвуют в процессах воспаления и деструкции тканей. Однако взаимосвязь продукции цитокинов с циркулирующими ИК до сих пор недостаточно изучена. Ранее нами было показано, что агрегированный человеческий сывороточный иммуноглобулин М, использованный в качестве модели ИК, значительно увеличивает продукцию ТНФ-а, ИЛ-1 (3, ИЛ-6, ИЛ-8 клетками периферической крови здоровых доноров. Целью настоящей работы было выделить и охарактеризовать ИК из плазмы больных РА и изучить их влияние на клетки крови здоровых доноров. ИК выделяли из плазмы больных РА (п=4), полученной путем плазмофереза (любезно предоставленной нам в ревматологическом центре Городской больницы № 25), с помощью водно-кислотного метода и растворяли в культуральной среде таким образом, чтобы концентрация ИК соответствовала исходной в плазме больного. Для характеристики полученных препаратов ИК использовали методы: осаждения полиэтиленпликолем, сорбции ге-терологичного комплемента, определения концентрации белка и концентрации иммуноглобулинов разных классов в составе ИК. Гепаринизированную цельную кровь (п=8) от здоровых доноров (любезно предоставленную нам в ге-матрансфузионном центре городской больницы № 26) разводили в 10 раз культуральной средой и инкубировали в течение 24 часов в присутствии ИК. Количество ТНФ-а и ИЛ-1 р в надосадочной жидкости определяли методом им-муноферментного анализа. После инкубации с препаратами ИК от разных больных продукция ТНФ-а и ИЛ-1 (3 дозозависимо возрастала. В случае инкубации с препаратами ИК в присутствии нейтрализующей антисыворотки к человеческому ИЛ-10 наблюдали дозозависимое увеличение уровней продукции ТНФ-а и ИЛ-1 р. Таким образом,

мы показали, что ИК, циркулирующие в кровяном русле больных РА, индуцируют продукцию провоспалительных цитокинов, которая может быть ограничена эндогенным ИЛ-10, индуцированным теми же ИК. Эти результаты говорят о том, что ИК индуцируют секрецию клетками крови провоспалительных и противовоспалительных шггоки-нов, которые могут участвовать в патогенезе иммуноком-плексных заболеваний.

Работа поддержана фантом РФФИ № 97-04-48889.

Особенности Са2+-зависимой внутриклеточной сигнализации в Т-лимфоцитах памяти

Лнгвмнов И.С.1, Дедкова Е.Н.\ Хайдуков С.В.', Агафонова С.А.1,Зинченко В.П.2

'Институт биоорганическойХимии

им. М. М.Шемякина иЮ.А. Овчинникова РАН,

лаборатория иммунохимии,

'Институт биофизики клетка РАН

В процессе иммунного ответа в организме формируется пул клеток памяти, обеспечивающий ускоренный и больший по амплитуде ответ при повторном попадании того же самого антигена. Несмотря на значительное количество исследований, сведения о механизмах формирования и поддержания иммунологической памяти, а также свойствах клеток памяти весьма фрагментарны. Известной особенностью Т-клеток памяти является их резистентность к Са2*-ионофорам, что послужило основой для разработки метода их выделения. В данной работе был проведен сравнительный анализ Са2‘ -отпетов Т-клеток памяти и наивных Т-клеток мышей на Са2~-мобилизукнцие агенты: СопА, тапсигаргин и иономицин. Эти агенты не повышали [Са2*]( в изолированных Т-клетках памяти при концентрациях, действующих на наивные Т-клетки. Таким образом, вход Са2* в Т-клетки памяти не активируется истощением его внутриклеточных запасов. Определение размеров внутриклеточных запасов Са2\ мобилизуемых ионо-мицином и тапсигаргином в бескальциевой среде, выявило отсутствие в Т-клетках памяти пулов внутриклеточного Са2". С использованием БН-реагента — тимеросала показано значительное уменьшение системы входа Са2' через плазматическую мембрану в Т-клетки памяти. Обнаружена резистентность Т-клеток памяти к “Са2"-парадоксу”, т.е. отсутствие аномально большого входа Са2‘ в ответ на его добавление (2 мМ) после инкубации клеток в бескальциевой среде с 0.5 мМ ЕОТА. Это свойство Т-клеток памяти было использовано для разработки нового метода выделения Т-клеток памяти без использования ионофоров. Са2'-парадокс-резистентные Т-клетки нечувствительны к Са2'-ионофорам, СопА, тапсигаргину и тимеросалу. В использованных тестах нам не удалось обнаружит!, существенных различий между Са2т-парадокс-резистентнымиТ-клет-ками и иономицин-резистентными Т-клетками. Методом проточной цитометрии показано, что на поверхности Са2'-парадокс-резистентных Т-клеток и иономицин-резистент-