CC BY
4
УДК 614.777-078 + 576.851.49.078.13
ИНДИКАЦИЯ ДИЗЕНТЕРИЙНЫХ И ДРУГИХ ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ В ВОДЕ МЕТОДОМ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ
А. В. Титова, И К. Лайкунас, Г. Н. Недошопа
Днепропетровский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены им. Н. Ф. Гамалеи, лаборатория Госводинспекции н/Днепра
Методы индикации патогенных микробов кишечной группы во внешней среде в достаточной степени не разработаны. В последнее время в лабораторной практике широко применяется метод флуоресцирующих антител как в прямой, так и в непрямой модификации. Ввиду особой чувствительности непрямого метода наряду с общепринятыми бактериологическими методами он был использован для выявления патогенных микробов кишечной группы в хозяйственно-фекальных сточных водах городских стоков канализации и больниц.
Для получения специфической сыворотки применена комбинированная схема иммунизации барана нормальной сывороткой кролика, в результате чего была получена преципитирующая сыворотка с высоким содержанием антител (1:40 000). Связывание иммунного у-гл°булина с тиоизоционатом флуоресцеина осуществлялось по методике Кунса. Освобождение меченой иммунной сыворотки от непрореагировавшегося иоизоцианата проводилось только одним диализом без дополнительной обработки ее ацетоном. Специфичность полученной меченой сыворотки к гомологичным антигенам была проверена на 82 штаммах патогенных микробов кишечной группы (культуры паратифа В и дизентерии Флекснера, Мечниковский вибрион, серотипы кишечной палочки 026, Olli 055). Из диагностических сывороток применялись кроличьи адсорбированные в разведениях 1 : 10, а для контроля — гетерологиче-ские.
Микробные антигены, обработанные гомологической и меченой сывороткой, имели морфологические структурные особенности: светились в виде крупных микробных тел яйцевидной формы с выделением периферической части. В контрольных препаратах специфическое свечение отсутствовало. Меченая антикроличья сыворотка была апробирована на кафедре микробиологии Военно-медицинской ордена Ленина академии им. С. М. Кирова.
Исследованию подвергались различные хозяйственно-фекальные сточные воды больниц, общие стоки канализации города, а также вода р. Самары в местах выпуска бытовых сточных вод канализации жилого поселка и пищевых предприятий. Всего исследовано 168 проб воды. Бактериологические исследования включали определение общего количества сапрофитных бактерий и коли-индекса. Патогенные бактерии выявлялись общепринятым бактериологическим методом и непрямым методом флуоресцирующих антител. Для выделения чистых культур, подтверждающих чувствительность непрямого метода (специфическое свечение), мы в своих исследованиях несколько расширили бактериологический посев, применив 20% желчный бульон в качестве среды обогащения и отпечатки фильтров.
Методика исследования сводилась к следующему. Сточную воду в объеме 400 мл дробно по 100 мл фильтровали через мембранный фильтр № 3. После фильтрации воды на чашки со средой Эндо и Пло-скирева делали отпечатки фильтров (на каждой чашке по 4). Затем осадок с фильтра смывали физиологическим раствором (1 мл), засевали на чашки с указанными средами. Одновременно из осадка готовили
мазки-препараты, которые окрашивали непрямым методом флуоресцирующих антител и просматривали в люминесцентном микроскопе. После этого фильтр погружали в отдельные пробирки с 20% желчным бульоном. Все посевы выдерживали 24 часа в термостате при 37°.
На следующие сутки подозрительные колонии, выросшие на отпечатках фильтров, изучали по общепринятой методике (снималось до 20 колоний). Из каждой пробирки с 20% желчным бульоном с фильтром петлей производили посев на чашки с указанными средами для получения изолированных колоний и их дальнейшего изучения. Таким образом, для обработки 1 пробы сточной воды засевали 12 чашек, 4 пробирки с 20% желчным бульоном и снимали для изучения до 50— 60 колоний. Применив указанную методику бактериологических посевов, мы смогли параллельно с непрямым методом выделить и чистые культуры. Нельзя не отметить, что патогенные бактерии в основном выделялись из 20% желчного бульона.
За 1962—1963 гг. было исследовано 68 проб воды р. Самары. Речная вода в местах выпуска сточных вод характеризовалась большой микробной обсемененностью, коли-индекс колебался от 23•IО6 до 23- 107 микробных тел.
В пробах воды, отобранных летом 1963 г., в 12 случаях в мазках-препаратах было выявлено специфическое свечение, которое в 7 случаях подтвердилось выделением чистых культур. Среди них были 2 культуры дизентерии Зонне, 3 культуры паратифа А и 2 культуры паратифа В.
Помимо этих исследований, было обработано 100 проб сточной воды городских канализаций и лечебных учреждений (больницы). Сточные воды больниц, несмотря на их очистку и обеззараживание, характеризовались значительным содержанием кишечной палочки; индекс кишечной палочки достигал 2,3 • 108. При исследовании сточных вод соматических больниц в 10 случаях выявлено специфическое свечение, однако только в 5 случаях оно подтвердилось выделением чистых культур, причем 3 из них были отнесены к дизентерии Флекснера и 2 — к паратифу В.
Все выделенные бактерии были неподвижными, не разлагали лактозу, не образовывали индола и сероводорода. С глюкозой, маннитом и мальтозой они давали кислоту, агглютинировались на стекле с соответствующими сыворотками, хорошо лизировались поливалентным дизентерийным бактериофагом. В пробирочной агглютинации бактерии давали положительные результаты в разведениях 1 :800 при титре сыворотки 1 : 12 800.
Одиннадцать штаммов по культуральным, морфологическим серологическим свойствам были отнесены к паратифозным А и В бактериям, не разлагали лактозу и сахарозу, расщепляли с образованием кислоты и газа углеводы пестрого ряда. Постановка реакции агглютинации с О- и Н-сыворотками позволила отнести выделенные культуры в группу салмонелл паратифа В, имеющих антигены 0—IV и Н-в.
Из 100 обработанных сточных вод в 50 случаях в мазках-препаратах наблюдалось специфическое свечение различных серотипов кишечной палочки, при этом в 25 случаях были выделены чистые культуры, относящиеся к серотипам 026 и 055.
Таким образом, для индикации патогенных бактерий кишечной группы в воде открытых водоемов, а также в хозяйственно-фекальной непрямой люминесцентный метод, по нашим наблюдениям, оказался малочувствительным; в 50% случаев регистрировались ложные неспецифические результаты.
Поступила 24/ХП 1964 г.
