CC BY
7
к ВОПРОСУ О БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВАХ РАС КИШЕЧНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ
Кандидат медицинских наук И. И. Гориенко, научный сотрудник К. Ф. Гончарова
Из Ростовского-на-Дону института эпидемиологии, микробиологии и гигиены
Задачей настоящей работы являлось выделение из водных источников бактерио фагов кишечной группы, которые иногда рассматриваются как показатели их санитарного состояния.
Содержание бактериофагов исследовали в воде Дона, в некоторых колодцах на окраине города и в различных пунктах сети городского водопровода. Выемку проб производили батометром на глубине 1 м от зеркала реки в течение всех сезонов года Под наблюдение был взят верхний и нижний отрезок реки. На изучаемом участке было установлено 4 пункта наблюдения.
Пункт № I. Выше Ростова и Аксая, на 1,5 км выше забора воды Новочеркае ским /водопроводом.
Пункт № 2. Выше Ростова, в начале станции Александровской, в 500 м от устья проточной балки Кизетеринкн, у водозабора Ростовского водопровода.
Пункт № 3. В черте города, в 200 м ниже выхода городского канализацион ного коллектора, вниз по течению от коллектора.
П у н к т № 4. На 250 м ниже места артели «Мойка тряпья».
В каждой пробе воды производились поиски бактериофагов, определялись коли :итр и общая обсемененность, проводился краткий санитарно-химический анализ.
Изучению было подвергнуто 165 проб донской и колодезной воды. Выделение бактериофагов из различных водных источников проводилось в динамике методом обогащения, параллельно ставились контрольные опыты без подсева культур. Для обнаружения бактериофагов в воде мы пользовались следующей методикой.
К 30 мл фагового бульона (рН 7,4—7,6) добавляли 100 мл испытуемой воды и 1,5 мл 16—22-часовой бульонной культуры. Посевы помещали в термостате при 37°. Через 16—18 часов посевы фильтровали через фильтр Зейтца и испытывали на плотной среде. Для подкорма употребляли тифозные, паратифозные А и В, Бреслау, дизентерийные Флекснера, Зонне и кишечные бактерии. Подкорм указанными бакте риями производили для каждой культуры отдельно.
Каждую выделенную расу фага изучали по 6 показателям: определяли ее лити-ческую активность, диапазон валентности, специфичность, морфологию стерильных пятен, предельную литическую активность и появление вторичных волн роста.
Ни в одной из 165 проб воды, взятых из различных источников, бактериофаг без подсева бактерий кишечной группы не обнаружен. Методом обогащения нам удалось выделить из донской воды 190 рас бактериофагов, из колодезной воды — одн> расу фага. Из верхнего участка реки (пункты № 1 и 2) выделена 21 раса фага, из нижнего—169. В нижнем участке реки выделяются чаще всего дизентерийные фаги, лизнрующие бактерии Флекснера, Зонне, кишечные и брюшнотифозные. Находки фа гов, лизирующих бактерий паратифа А, В (Шотмюллера) и Бреслау, были единичными (от 1 до 5 рас). Из воды верхних пунктов реки выделены бактериофаги, растворяющие палочки дизентерии Зонне (12 находок), Флекснера (8 находок) и тифа (1 находка). причем в районе забора воды Новочеркасским водопроводом обнаруженс 7 рас бактериофагов (Зонне и Флекснера), в районе забора воды Ростовским водо проводом—14 (лизирующне бактерии. Флекснера, Зонне и тифа). Бактериофаги паро тифозные А и В, Бреслау и кишечные не найдены.
При исследовании воды различных колодцев на окраинах города в одном случае из колодца общественного пользования был выделен бактериофаг Флекснера слабой литической активности (Ю-3).
В водопроводной воде разных пунктов городской сети бактериофаг не обнару жен. Следует отметить, что в верхнем участке реки, особенно в районе забора воды Ростовским городским водопроводом, качество донской воды значительно снижалось после обильных осадков и при нагонных штормовых ветрах («низовках)». Увеличи валась концентрация бактериофагов, снижался колн-титр (отмечались находки ки щечных палочек в 0.01 мл в районе пункта № 2), повышалась микробная обсеменен ность (от 700 до 1000—2000 микробов в 1 мл).
В речной воде, загрязненной хозяйственно-фекальными и промышленными вода ми, бактериофаги кишечной группы обнаруживали систематически в различные сезо ны года независимо от атмосферных осадков, направления и силы ветра. В воде Дона ниже сброса городских нечистот кишечная палочка встречалась в 0.01—0,00001 мл Среднее количество бактерий в 1 мл — 4015. В отдельных исследованиях микробное число доходило до 7000—10 000 в 1 мл. В ряде случаев микробное число не поддавалось учету ввиду сплошного роста.
Бактериофаги, выделенные из речной воды, имели титр по Аппельману в пределах от 10-' до Ю-10. Чаще выделяли фаги средней и высокой литической актив ности. Большинство выделенных фагов обладало строгой видовой специфичностью
широким спектром действия в пределах вида и способностью лизиса микробной взвеси большой концентрации (500 млн. — 1 млрд. микробных тел).
Каждую расу фага изучали на 100—150 культурах тифозно-паратифозной и дизентерийной группы. Для изучения употребляли эталонные и местные культуры, свеже-выделенные от больных носителей и из внешней среды.
При наличин большой коллекции кишечных палочек (свыше 200 штаммов) проведено испытание выделенных бактериофагов к указанным культурам.
Установлено, что тифозные, паратифозные и дизентерийные бактериофаги не растворяли обычные и патогенные варианты кишечных палочек, выделенных от человека и животных при колибациллярных заболеваниях. Исключением было несколько рас дизентерийного фага Зонне, которые наряду с культурами Зонне растворяли некоторые штаммы кишечной палочки. Диапазон валентности кишечных фагов в пределах своего вида был достаточно высоким. Испытание спектра действия выделенных фагов показало, что бактериофаг дизентерийной группы, как правило, лизировал от 80 до 95% культур бактерий своего вида. Значительно меньшим спектром действия обладали тифозные и паратифозные фаги.
Большая часть выделенных фагов обладала строгой видовой специфичностью Так, бактериофаг Флекснера лизировал бактерии Флекснера и не растворял бакте рии Зонне. Для испытания брюшнотифозного фага употребляли культуры брюшного тифа, содержащие Vi-антиген, выделенные от больных в период вспышки брюшного тифа. Тифозный фаг лизировал указанные брюшнотифозные бактерии и не растворял палочек паратифа А и В.
Некоторые фаги не были строго специфичными, обладали поливалентными свой ствами и растворяли несколько видов патогенных бактерий. Например, фаги Флекснера наряду с бактериями Флекснера лизировали бактерии Зонне, Григорьева-Шига и Штуцер-Шмитца.
Как известно, выделение патогенных бактерий из водоемов представляет определенную трудность. Учитывая это, мы предложили несколько измененную методику длч обнаружения фагов.
Для исследования испытуемую воду брали в двойном объеме (1 л) и пропуска ли через мембранные фильтры № 2 и 3. Мутную воду пропускали через предварительные фильтры. После фильтрации соскобы с фильтром засевали на плотные элективньк среды (бакто-агар «Ж», висмутсульфитный и холевоцитратный агар). Мембранные фильтры после посевов на твердые среды опускали в среды накопления (желчный бульон и среду Киллиана с бриллиантовой зеленью в концентрации 1 : 100 000). Посе вы выращивали одновременно при комнатной температуре и в условиях термостата при 37°. В дальнейшем подозрительные культуры выделяли по обычной методике.
Основная масса фагов имела колонии круглой формы. В нижнем отрезке реки встречались бактериофаги с резко измененной морфологией колоний звездчатой формы, так называемые лучистые бактериофаги, стойко передающие свои свойства по наследству. •
Размер стерильных пятен бактериофага на чашках с двухслойным агаром варьи ровал от крупных (7X7 мм) до средних (3X3, 2X2 мм) и мелких (1X1, 0,5X0,5. 0,1X0,1 мм). Часть фагов имела одновременно стерильные пятна разных размеров Количество корпускул фагов колебалось от десятков до сотен, тысяч и миллионов в 1 мл.
Следует отметить, что большая часть фагов, выделенных из внешней среды, обладала способностью давать вторичную волну роста через 4—6—10—20 и более часов
В результате бактериологических исследований установлен определенный па раллелизм между частотой находок бактериофага в воде, коли-титром и общей обсе-мененностью !.
ЛИТЕРАТУРА
11 з возчиков а В. А. Гиг. и сан., 1952, № 2, стр. 7. — Никольская А. А Журн. мнкробиол., эпидемиол. и иммунобиол., 1941, № 5—6, стр. 156. — Слав-н и н Н. П. Там же, 1933, № 3—4, стр. 25.
Поступила 6/Ш I960 г.
1 Желательно на страницах журнала обсудить, в какой мере существенно сани-гарно-показательное значение бактериофагов, и обогащают ли исследования на ки шечные бактериофаги санитарную и эпидемиологическую практику, располагающую современными приемами санитарно-бактериологических и санитарно-химических иссле ваний. — Ред.
