как нативной, так и активированной. При этом квантовый выход активированной хемилюминесценции, на несколько порядков выше, чем в случае не активированной.
Литература:
1. Владимиров Ю.А., Демин Е.М., Проскурнина Е.В., Осипов А.Н. Биологические Мембраны. — 2009. — Т. 26. — № 6. — C. 493-504.
2. Владимиров Ю.А., Проскурнина Е.В., Измайлов Д.Ю., Новиков А.А., Брусничкин А.В., Осипов А.Н., Каган В.Е. Биохимия. — 2006. — Т. 71. — № 9. — C. 1225-1233
3. Belikova N.A., Vladimirov Y.A., Osipov A.N., Kapralov A.A., Tyurin V.A., Potapovich M.V., Basova L.V., Peterson J., Kurnikov I.V., Kagan V.E. Biochemistry. — 2006. — V. 45. — № 15. — P. 4998-5009.
4. Kagan V.E., Tyurin V.A., Jiang J. et al. Nature chemical Biology. — 2005. — V.1. — № 1 — P. 223-232.
ВЛИЯНИЕ АЛЛОГЕННОГО БИОМАТЕРИАЛА
НА КРИОГЕННЫЙ РУБЕЦ МИОКАРДА
А.И. Лебедева1, С.А. Афанасьев2, Е.М. Гареев1,
Д.С. Кондратьева2, С.А. Муслимов1, С.В. Попов2
1 ФГБОУ ВО Башкирский государственный медицинский университет МЗ РФ, Уфа, Россия
2 НИИ кардиологии, Томский НИМЦ РАН, Томск, Россия
e-mail: e-mail: Jeol02@mail.ru
Ключевые слова: аллогенный биоматериал, криоповрежде-
ние, миокард, кардиосклероз, макрофаги, регенерация.
Проблема регенерации поврежденного миокарда является одной из важнейших задач тканевой восстановительной терапии сердца. Наиболее перспективным подходом является использование производных децел-люляризированного внеклеточного матрикса — аллоген-ного биоматериала (АБ) Целью исследования явилось оценка морфофункциональных свойств сердца в условиях применения АБ.
Хронический инфаркт миокарда моделировали на 80 крысах—самцах с использованием метода криоде-струкции. Через 45 суток после воздействия жидким азотом при повторной торакотомии в основной группе в область криогенного некроза миокарда вводили суспензию АБ (3 мг, 60 мкл физ. раствора). В контрольной группе вводили физиологический раствор в аналогичном объеме. После 45 суток после введения АБ животных оценивали на толерантность к физической нагрузке и выводили из эксперимента. Проводили гистологические, иммуногистохимические исследования. Определяли толщину мышечной части стенки поврежденого желудочка сердца, рубца и диаметр реактивной зоны. В результате исследования, толщина мышечной части стенки левого желудочка, в осночной группе увеличивалась на 3 порядка (p<0,008), что повышало толерантность к физической нагрузке крыс в 2 раза (р=0,03). Изменения параметров толщины рубца и диаметр поврежденной зоны были статистически не значимы. Аллогенный биоматериал подвергался постепенной резорбции макрофагами и замещался волокнисто-соединительнот-канно-мышечным регенератом, представленным васку-ляризированной рыхлой волокнистой соединительной тканью. Меченые сердечным тропонин I+ клетки проникали в межволоконные пространства, подвергались гипертрофии. Кардиомиоциты группировались в зоне имплантации АБ как в виде отдельных кластеров, так
и функционального синцития. Масса сердца при этом не менялась в обеих экспериментальных группах.
Так, применение АБ в зоне сформированного криогенного рубца миокарда способствовало трансформации плотной в рыхлую волокнистую соединительную ткань и замещению сердечной мышечной тканью.
IN VITRO МОДЕЛИРОВАНИЕ МЕХАНИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ МОЗГА НА ПЕРВИЧНЫХ НЕЙРО-ГЛИАЛЬНЫХ И АСТРОЦИТАРНЫХ КУЛЬТУРАХ ИЗ МОЗГА КРЫСЫ
О.Ю. Лисина1, И.А. Красильникова2,
Р.Р. Шарипов1, М.В. Балясин3, В.Г. Пинелис2,
З.В. Бакаева2, А.М. Сурин1, 2
1 ФГБНУНИИ общей патологии и патофизиологии, Москва, Россия
2 ФГАУ НМИЦ здоровья детей Минздрава России, Москва, Россия
3 ФГАОУ ВО Российский университет дружбы народов (РУДН), Москва, Россия
e-mail: anezi@yandex.ru
Ключевые слова: нейрональная сеть, ионный гомеостаз, митохондриальный потенциал, кальций, нейроглиальная культура, астроцит, кортекс, нейрит.
Моделирование in vitro повреждения мозга (царапина) применяется для выяснения молекулярно-клеточных механизмов, происходящих в мозге в ответ на травму. В настоящей работе исследованы: (1) регенерация ней-рональной сети в зоне царапины; (2) изменения ионного гомеостаза и функций митохондрий в ответ на царапину монослоев первичных нейроглиальных культур и культур астроцитов из коры головного мозга крысы. Изменения указанных параметров определяли методом флуоресцентной микроскопии, используя специфичные зонды и микроманипулятор для нанесения царапины. В нейроглиаль-ных культурах царапины шириной « 0,1 и 1 мм наносили спустя 3 и 18 дней после посадки культуры (3 и 18 ДВК). Для количественной оценки регенерации культур подсчитывали среднюю длину нейритов, количество ветвлений и окончаний нейритов на единицу поверхности в зоне повреждения. При травмировании «молодой» культуры (3 ДВК) формирование нейрональной сети начиналось через сутки, достигая наибольшей скорости на 2-3 день после нанесения царапины. Затем развитие нейрональ-ной сети в зоне повреждения замедлялось. Помимо роста нейритов, наблюдалась диффузия в повреждённую зону клеток из неповрежденной части культуры. В «зрелых» культурах (травма на 18 ДВК) нейритов, прорастающих в царапину из неповрежденной зоны, было на ~40% меньше и они имели в 2-3 раза меньший диаметр.
В нейро-глиальной культуре в первые минуты после нанесения царапины происходит скачкообразный рост внутриклеточной концентрации Са2+ ([Ca2+]i) и митохон-дриального потенциала (ATm) в нейронах. В 22,3 ± 5,1% нейронов (n=264) развивался вторичный подъем [Ca2+] i (отсроченная кальциевая дизрегуляция, ОКД) и синхронное падение ATm. Около 85% таких нейронов находилось на расстоянии <100 мкм от границы повреждения. Доля нейронов, развивших ОКД, увеличивалась с увеличением возраста культуры. Удаление Са2+ из буферного раствора подавляло посттравматическое увеличение [Ca2+] i и падение ATm, указывая на вход Ca2+ из буфера, как на причину роста [Ca2+]i.
В культуре астроцитов механическое повреждение вызывало лишь транзиторное повышение [Са2+]1 без развития ОКД и изменения АТт. Увеличение [Са2+]1, вызванное травмой культуры астроцитов, распространялось от границы повреждения на расстояние примерно вдвое меньшее, чем в нейро-глиальной культуре. В астро-цитах удаление Са2+ из буферного раствора не подавляло посттравматическое увеличение [Са2+]1, свидетельствуя о мобилизации Са2+ из внутриклеточных депо, как о причине роста [Са2+]1.
Таким образом, исследования на астроцитарных и ней-ро-глиальных культурах позволяют дифференцировать вклад нейронов и астроцитов в изменения [Са2+]|, вызванные механической травмой. Уход за животными и экспериментальные процедуры проводились в соответствии с требованиями Этического комитета ФГБНУ НИИОПП. Выполнено по Гос. заданию П6П_1-2022-0012 и Гранту Минобрнауки РФ 08-07-86/2021/82930.
ПОЛУЧЕНИЕ БИОСОВМЕСТИМЫХ ИМПЛАНТАЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ С АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
Ю.Ю. Литвинов, В.П. Панин, В.В. Краснов
ФГБНУ Всероссийский НИИ лекарственных и ароматических растений, Москва, Россия
e-mail: zip1@list.ru
Ключевые слова: костные имплантаты, сангвиритрин, стерилизация, озоно-кислородная смесь.
В настоящее время, в связи с увеличением количества больных с остеомиелитом и возрастающей резистентностью микроорганизмов к антибиотикам, продолжает оставаться актуальной проблема поиска новых препаратов с антимикробными свойствами и создания на их основе биосовместимых имплантационных материалов для реконструкции дефектов костной ткани. В связи с этим, нами разработаны способы получения новых биосовместимых имплантационных материалов, на основе костного матрикса, импрегнированных раствором сангвиритрина — лекарственного средства растительного происхождения с выраженными антибактериальными и антимикотическими свойствами. Проведены исследования, направленные на адаптацию метода стерилизации озоно-кислородной смесью для получения биоим-плантатов с сохранением антибактериальных свойств действующих веществ растительного происхождения.
Установлено отсутствие существенного влияния озоно-кислородной стерилизации с концентрацией озона 8 мг/л и продолжительностью 15 мин в проточном режиме на антибактериальные и антимикотические свойства исследуемых костных образцов, импрегниро-ванных раствором сангвиритрина. Высвобождаемые после озоно-кислородной стерилизации из деминерализованного и деорганифицированного костного матрикса алкалоиды сангвиритрина не утрачивают своих антимикробных свойств в отношении грамположительных [Staphylococcus aureus) и грамотрицательных бактерий [Escher^hia coli), а также микромицетов [Aspergillus niger, Cladosporium herbarum).
Предложенный подход к получению и стерилизации биосовместимых имплантационных материалов с антимикробными свойствами может быть использован в дальнейших исследованиях с целью разработки
и совершенствования способов получения новых имплантационных препаратов для репарации минерализованной соединительной ткани в инфицированных ранах.
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ОСТЕОГЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНЫХ КЛЕТОК АОРТАЛЬНОГО КЛАПАНА
А.А. Лобов1, 2, Д.С. Семенова1, И.А. Тараскин3, Д.А. Костина1, А.А. Ивашкин3, И.А. Хворова1, К.В. Данько4, Б.Р. Зайнуллина4, В.В. Карелкин5, Л.Г. Данилов4, В.Е. Успенский2, А.Б. Малашичева1
1 Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБУ НМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
3 Московский физико-технический институт, Москва, Россия
4 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
5 РНИИТО им. Вредена, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: lobov@incras.ru
Ключевые слова: кальцинирующий аортальный стеноз, интерстициальные клетки аортального клапана, остеобласты, остеогенная дифференцировка, протеомика, биоинформатика.
Кальцинирующий аортальный стеноз (КАС) — это наиболее распространенный приобретенный порог сердца. На поздних стадиях КАС наблюдается обширная кальцификация клапана, приводящая к потенциально летальным нарушениям кровотока. Не существует подходов для терапии КАС и замена поврежденного клапана — единственный метод, доступный для лечения пациентов с этим заболеванием. Основной вклад в развитие КАС вносит остеогенная дифференцировка интерстици-альных клеток аортального клапана (ИКК). Подавление кальцификации ИКК — это перспективная, но все еще недостаточно изученная терапевтическая мишень.
Мы провели серию исследований по изучению молекулярных механизмов остеогенной дифференцировки ИКК. На первом этапе мы сравнили протеомные и транс-криптомные профили ИКК в ходе остеогенной диффе-ренцировки. В работе использовали первичные культуры клеток из клапанов здоровых доноров и пациентов с КАС. Протеомный анализ проводили с двумя группами образцов и, для поиска оптимального метода статистического анализа, мы также провели сравнение различных методов для удаления группового эффекта.
Сравнение ИКК от больных и здоровых доноров не позволило выявить достоверных различий — ИКК в здоровом и кальцинированном клапане принципиально схожи. Это подтверждает, что в развитии КАС принимают участие преимущественно резидентные ИКК. Единственным обнаруженным белком, различающимся между больными и здоровыми клетками, был PRMT5. Этот белок связан с эпигенетической регуляцией и, возможно, развитие КАС ассоциировано с эпигенетическими изменениями ИКК.
Мы подробно описали молекулярные механизмы остеогенной дифференцировки иКк in vitro и нашли несколько перспективных мишеней. Примечательно, что механизмы дифференцировки ИКК значительно отличались от описанных ранее для мезенхимных стволовых клеток. Чтобы подтвердить это, мы провели про-теотранскриптомный анализ ИКК и первичных культур