CC BY
25
© О. М. Пронша, С. М. Совгиря, А. В. Пирог-Заказшкова, О. Ю. Половик, Н. I. Винник УДК [611. 21+611. 018]:616-053. 9
О. М. Прон1на, С. М. Совгиря, А. В. Пирог-Заказнкова, О. Ю. Половик, Н. I. Винник 1МУНОГ1СТОХ1М1ЧНЕ ДОСЛ1ДЖЕННЯ МАКРОФАГАЛЬНОТЛАНКИ М1СЦЕВОГО ЗАХИСТУ СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ КЛИНОПОД1БНО1ПАЗУХИ У ЛЮДЕЙ ЗР1ЛОГО В1КУ ЗА ДОПОМОГОЮ МАРКЕРА 00-68
Вищий державний навчальний заклад Укра'Гни «УкраГнська медична стоматолопчна академт» (м. Полтава)
Дана робота е фрагментом науково! теми «Мор-фолопя судинно-нервових взаемовщношень ор-гаыв голови та ши! людини в норм1 та пщ д1ею зо-вышых чинникiв у вковому аспектi. Створення та модифiкацiя юнуючих хiрургiчних шовних матерiалiв i експериментально-морфолопчне обфунтуван-ня !х використання в кпшМ», № держ. реестрацп 0107U001657.
Вступ. Одними з основних клггин iмунноI систе-ми е мононуклеарнi фагоцити, якi представленi моноцитами периферично! кровi i тканинними макрофагами (макрофаги сполучно! тканини, макрофаги печЫки, альвеолярнi макрофаги легень, макрофаги селезшки i лiмфатичних вузлiв, макрофаги сероз-них i слизових оболонок, кгмтини мiкроглi! ЦНС, ос-теобласти) [1,3,5]. Данi клiтини мають високу фа-гоцитарну здатнiсть i бактерициднють, приймають участь в Ыдукцп гуморального та клiтинного iмунiте-ту, мають вплив на розвиток iмунних реакцм, а також являються ефекторами цих реакцiй (вони здатнi знищувати чужорiднi, злоякiснi i апоптознi клггини) [2,4,6]. Тому сучасна iмунологiя, завдяки новим iму-ногiстохiмiчним методам, мае можливють постiйно поновлювати знання вщносно макрофагальних ме-ханiзмiв iмунного статусу окремих оргаыв i тканин [7]. В лггератури досить мало уваги придтяеться дослiдженню внутришньоепiтелiальних макрофагiв слизових оболонок верхых дихальних шляхiв.
Мета роботи - дослiдити особливостi розташу-вання внутрiшньоепiтелiальних макрофагiв в рiзних дiлянках слизово! оболонки клиноподiбно! пазухи людини.
Об'ект i методи досл1дження. Объектом до-слiдження дано! роботи була слизова оболонка клиноподiбно! пазухи 30 людей, померлих вщ причин не пов^язаних з ЛОP-патологieю. Забiр слизово! оболонки клиноподiбно! пазухи вщбувався в умовах примiщення судово-медичного моргу Бюро судово-медично! експертизи Управлшня Охорони Здоров'я Полтавсько! обласно! державно! адмшютраци. До-слiдження проведено з дотриманням основних бю-етичних положень Конвенцп Ради бвропи про права людини та бюмедицину (вiд 04. 04. 1997 р.), ГельсЫ-сько! декларац^ Всесвiтньо! медично! асоцiацi! про етичы принципи проведення наукових медичних
дослщжень за участю людини (1964-2008 рр.), а також наказу МОЗ Укра!ни № 690 вiд 23. 09. 2009 р.
Для отримання слизово! оболонки ми викорис-товували доступ до клиноподiбно! пазухи, запро-понований Абрикосовим А. И. (1948). Пюля цього за допомогою шприца на 1-2 хв. вводили у пазуху 2мл 10 % розчин формалЫу для фксаци слизово! оболонки i виконували забiр тканини з передньо!, задньо!, медiально!, латерально! i нижньо! стiнок клиноподiбно! пазухи. В подальшому тканини заключали в парафш за загальновiдомою схемою.
Для проведення iмуногiстохiмiчного дослiджен-ня використовували парафiновi блоки слизово! оболонки клиноподiбно! пазухи людини. Отримували зрiзи за допомогою мiкротому зi станцieю прийому зрiзiв (Microm HM-340), що дозволило готувати се-рiйнi зрiзи. В нашому дослiдженi зрiзи товщиною 4-6 мкм наносили на спе^альы адгезивы предмет-нi стекла SuperFrost Plus, по™ депарафiнiзовува-ли вiдповiдно до прийнятих стандар^в. В роботi в якос^ первинних використовувалися моноклональнi антитта до CD-68 - маркер макрофапв, гiстiоцитiв (клон КР1, Dako) [8,9,10,11]. 1дентифкащя реакцi! проводилась завдяки нанесенню хромогену (DAB (Lab Vision)) пщ контролем мiкроскопа протягом вiд 20 секунд до 3 хвилин, з проявом у виглядi темно-коричневого забарвлення ядер специфiчних структур [2,4,5].
Для диференцтвання структур тканин зрiзи до-датково забарвлювали гематоксилiном Маера протягом 1-3 хвилин. Наступна дегщратащя i включення у бальзам здмснювалися згщно розповсюдженим методикам.
Мiкроскопiю проводили за допомогою свгглового мiкроскопа Leica DMLS з використанням об'eктивiв 410, 420, 440, 4100.
Результати дослщжень та Тх обговорення. Як
було вщомо, iмунологiчний статус в епiтелiальному шарi псевдобагатошарового вiйчастого цилiндрич-ного епггелю забезпечуеться клiтинами-репрезен-тантами iмунологiчного нагляду, так званими внут-ришньоепiтелiальними макрофагами. Виходячи з даного теоретичного положення, нами вивчена, завдяки iмуногiстохiмiчному маркеру СД-68, лока-лiзацiя даних клггин в дтянках слизово! оболонки клиноподiбно! пазухи представлених переважно
Рис. 1. Псевдобагатошаровий вшчастий цилшдричний ештелш з перевагою вшчастих кл1тин. Макрофаги. Забарвлення СД-68. Збшьшення 100410.
Рис. 2. Псевдобагатошаровий вшчастий цилшдрич-ний ештелш з переважним розташуванням келихо-под1бних кл1тин. Макрофаги. Забарвлення СД-68. Збшьшення 100410.
Рис. 3. Будова слизовоГ оболонки клинопод1бноГ пазухи в зон росту ештел1ю. Макрофаги. Забарвлення СД-68. Збшьшення 100410.
в\йчастими або келихопод\бними кл\тинами та в зонах росту. Встановлено, що в слизов\й оболонц\ з переважним розташуванням в\йчастих клггин зна-чна юльюсть внутришньоеп\тел\альних макрофаг\в, що мають ¡нтенсивне темно-коричневе забарвлення цитоплазми. Дан\ кл\тини локал\зуються як поблизу базально! мембрани, так \ в середн\х, та поверхне-вих шарах, розташовуючись м\ж в\йчастими кл\тина-ми (рис. 1).
Под\бна законом\рн\сть локал\заци макрофаг\в спостер\гаеться \ в зонах псевдобагатошарового в\йчастого цил\ндричного еп\тел\ю, представленого
келихопод\бними кл\тинами, але юльюсть !х менша. Так на рис. 2 представлен! внутр\шньоепггел\альн\ макрофаги забарвлен\ темно-коричневим кольо-ром, як\ локал\зуються як м\ж келихопод\бними кл\-тинами, так \ в п\длегл\й до еп\тел\ю власн\й пластин-ц\ слизово! оболонки.
Нарешт\ в зонах росту псевдобагатошарового в\йчастого цилшдричного еп\тел\ю, на вщмшу в\д по-передн\х д\лянок, макрофаги у вигляд\ темно-корич-невих експресуючих СД-68 структур локал\зуються як серед вставних кл\тин, так \ серед м\кроворсинча-тих клггин. Перш\ з них мають округле ядро, останн\ витягнуте або овальне ядро (рис. 3). Визначено, що дан\ кл\тини мають моноцитарне походження вна-сл\док виходу з просвггу судин м\кроциркуляторного русла.
Висновки. Проведен! ¡мунопстох\м\чн\ досл\-дження виявили розташування внутришньоеп\тел\-альних макрофаг\в в р\зних д\лянках еп\тел\ально-го шару слизово! оболонки клинопод1бно! пазухи. В д\лянках з переважним вм\стом в\йчастих кл\тин юльюсть макрофаг\в бтьша н\ж в м\сцях здебтьше представлених келихопод\бними кл\тинами та зонах росту еп\тел\ю. На нашу думку, в цих м\сцях ¡мун-ний контроль зд\йснюеться за рахунок ¡нтеграци Т- \ В-л\мфоцит\в.
Перспективи подальших дослщжень. Провести юльюсну оц\нку тканинних макрофаг\в слизово! оболонки р\зних ст\нок клинопод\бно! пазухи людини та досл\дити особливост\ вс\х ланок ¡мунно-го нагляду в псевдобагатошаровому в\йчастому ци-л\ндричному еп\тел\! клинопод\бно! пазухи людини.
Л1тература
1. Изучение состояния макрофагального звена местного иммунитета у часто болеющих детей с патологией ЛОР-органов / М. 3. Саидов, Ю. А. Джамалутдинов, X. Ш. Даудов [и др.] // Иммунология. - 2007. - Т. 28, № 5. - С. 303-307.
2. Иммуногистохимические показатели местного иммунитета у часто болеющих детей / М. 3. Саидов, П. Ю. Амирова, Г. Б. Элькун [и др.] // Иммунология. - 2006. - Т. 27, № 2. - С. 108-112.
3. Иммунная система слизистой оболочки и ассоциированная лимфоидная ткань: механизмы взаимодействия в норме и
при патологии, пути коррекции / Л. С. Овчаренко, А. А. Вертегел, Т. Г. Андриенко [и др.] // Клш. ¡мунолопя. Алерголопя.
1нфектолопя. - 2008. - № 4(15). - С. 25-30.
4. Иммунология ( в 3-х т.) / Под ред. У. Пола. - М. : Мир, 1988. - Т. 1. - 473 с.
5. Holness C. L. Macrosialin, a mouse macrophage-restricted glycoprotein, is a member of the lamp / Igp family / C. L. Holness,
R. P. da Silva, J. Faweett, S. Gordon, D. L. Simmons // J. Biol. Chem. - 1993. - Vol. 268. - P. 9661-9699.
6. Page R. C. The macrophage as a secretory cell / R. C. Page // Int. Rev. Cytol. - 1978. - Vol. 52. - P. 119.
7. Saito N. Ultrastructural localization of the CD-68 macrophage-associated antigen in human blood neutrophils and monocytes / N. Saito, K. A. Pulford, J. Breton-Gorius [et al.] // Am. J. Pathol. - 1991. - Vol. 139. - P. 1053-1059.
УДК [611. 21+611. 018]:616-053. 9
1МУНОГ1СТОХ1М1ЧНЕ ДОСЛ1ДЖЕННЯ МАКРОФАГАЛЬНОТ ЛАНКИ М1СЦЕВОГО ЗАХИСТУ СЛИ-ЗОВОТ ОБОЛОНКИ КЛИНОПОД1БНО1 ПАЗУХИ У ЛЮДЕЙ ЗР1ЛОГО В1КУ ЗА ДОПОМОГОЮ МАРКЕРА CD-68
Пронша О. М., Совгиря С. М., Пирог-Заказшкова А. В., Половик О. Ю., Винник Н. I.
Резюме. Результати iмуногiстохiмiчних дослiджень рiзних дiлянок слизово! оболонки клиноподiбноI пазухи людини з використанням маркера CD-68 дозволили встановити закономмрносп розташування внут-ришньоепiтелiальних макрофагiв в псевдобогатошаровому вiйчастому цилшдричному епiтелiI: бiльшiсть макрофагiв розташовуеться в дтянках, представлених вiйчастими клiтинами. Дтянки, представленi кели-хоподiбними клiтинами та в зонах росту, мають меншу ктькють макрофагальних клiтин, що, на нашу думку, пояснюеться iмунологiчним наглядом завдяки ¡нтеграци рiзних видiв лiмфоцитiв.
Ключов1 слова: макрофаг, псевдобагатошаровий вмчастий цилiндричний епiтелiй, CD-68.
УДК [611. 21+611. 018]:616-053. 9
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДАВАНИЕ МАКРОФАГАЛЬНОГО ЗВЕНА МЕСТНОЙ ЗАЩИТЫ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КЛИНОВИДНОЙ ПАЗУХИ У ЛЮДЕЙ ЗРЕЛОГО ВОЗРАСТА С ПОМОЩЬЮ МАРКЕРА CD-68
Пронина Е. Н., Совгиря С. Н., Пирог-Заказникова А. В., Половик А. Ю., Винник Н. И.
Резюме. Результаты иммуногистохимических исследований разных участков слизистой оболочки клиновидной пазухи человека с использованием маркера CD - 68 позволили установить закономерности расположения внутриэпителиальных макрофагов в псевдомногослойном реснитчатом цилиндрическом эпителии: большинство макрофагов располагаются в участках, представленных реснитчатыми клетками. Участки, представленные бокаловидными клетками и зоны роста, имеют меньшее количество макрофагальных клеток, что, по нашему мнению, объясняется иммунологическим надзором благодаря интеграции разных видов лимфоцитов.
Ключевые слова: макрофаг, псевдомногослойный реснитчатый цилиндрический эпителий, маркер CD-68.
UDC [611. 21+611. 018]:616-053. 9
Immunohistochemical Study of Macrophage Link of Local Protection of Sphenoidal Sinus Mucosa in Elderly People using Cd-68 Marker
Pronina O. M., S. N. Sovhyrya, Pyrog-Zakaznikova A. V., Polovik A. Yu., Vinnik N. I .
Abstract. The purpose of the research was to study the features of localization of infraepithelial macrophages in various areas of human sphenoidal sinus mucosa.
The object and methods of research. The object of research was the sphenoidal sinus mucosa of people, died of circumstances, not connected with ENT-pathology. Homogeneous antibodies have been used as primary ones to the CD-68 markers of macrophages, histiocytes (KP1-clone, Dako).
As was known, immunological status in the epithelial layer of pseudostratified ciliated cylindrical epithelium is provided by the cells, representatives of immunological monitoring, called infraepithelial macrophages. Judging by the theoretical statement, localization of these cells, mostly ciliated and goblet ones, in the areas of sphenoidal sinus mucosa and growth zones has been studied due to CD-68 immunohistochemical marker.
Results of the research and their discussions. The results of immunohistochemical studies of various areas of human sphenoidal sinus mucosa, using the CD-68 marker, founded the mechanism of localization of infraepithelial macrophages in the pseudostratified ciliated cylindrical epithelium: most of the macrophages are located in the areas, covered by the ciliated cells. Areas, covered by the goblet cells and in the growth zones, have less macrophage cells that, in our opinion, is explained by the immunological monitoring due to integration of various types of lymphocytes.
Conclusions. It is planning to conduct quantitative evaluation of tissue macrophages of mucosa of various walls of human sphenoidal sinus and study the features of all chains of immunological monitoring in the pseudostratified ciliated cylindrical epithelium of human sphenoidal sinus.
Key words: macrophage, pseudostratified ciliated cylindrical epithelium, CD - 68 marker.
Рецензент - проф. Старченко 1.1.
Стаття надшшла 21. 01. 2014 р.
