CC BY
13
IFMA HOMFFA
3. В случае развития активной герпетической инфекции увеит приобретает тяжелый рецидивирующий характер с развитием резистентности к проводимой терапии и прогрессированием осложнений.
4. Высокий уровень антител к ранним вирусным белкам на фоне сниженной специфической сенсибилизации лимфоцитов отражает несостоятельность системы противовирусной зашиты и является патогенетической основой для развития хронического воспалительного процесса в сосудистой оболочке глаза.
5. Для достижения клинической ремиссии в этом случае необходимо снижение активности герпетической инфекции до латентной фазы и усиление клеточной противовирусной зашиты с помощью противовирусных и иммунотропных препаратов.
Литература
1. Денисова Е.В., Катаргина Л.А., Кричевская Г.И. и др. Роль персистентных офтальмотропных инфекций в патогенезе осложнений энтеровирусного увеита //Актуал. вопросы воспал. Заболев. глаз. - М., 2001. - С. 165 - 168.
2. Зайцева Н.С., Слепова О.С., Теплинская Л.Е. и др. Нарушение иммунитета и лечение увеитов. // Метод. рекоменд. -М., 1991. - 30 с.
3. Катаргина Л.А., Хватова А.В./Эндогенные увеиты у детей и подростков. - М: Медицина, 2000. - С. 176 - 190.
4. Кличко В.И., Звонарев А.Ю., Шаталин К.Ю. и др.// Молекул. генет. - 1994. - <3 - С. 720 - 722.
5. Кричевская Г.И., Анжелов В.О., Катаргина Л.А. и др. Уито-мегаловирусная инфекция у детей с эндогенными увеита-ми//Вестн. офтальмол. - 1999. - <5 - с.23 - 25.
6. Кричевская Г.И., Анжелов В.О., Катаргина Л.А. и др. Распространенность и клиническое значение активной цито-мегаловирусной инфекции у больных с офтальмопатологи-ей воспалительного характера//Вестн. офтальмол. - 2000. -< 5. - С. 51 - 53.
7. Кусельман А.И., Черданцев А.П., Соловьева И.Л. и др. Состояние иммунной и эндокринной систем у детей, инфицированных вирусами семейства герпес // Педиатрия. - 1996. - <5. - С. 28 - 31.
8. Слепова О.С. Реакции бласттрансформации лимфоцитов и торможения миграции лейкоцитов в патогенезе и дифференциальной диагностике офтальмогерпеса//Дис. к.б.н. -М., 1980. - С. 49 - 51.
ИММУНОРЕГУЛЯТОРНАЯ ОЦЕНКА ЕСТЕСТВЕННЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В СИСТЕМЕ ПРАЙМИНГА ЛЕЙКОЦИТОВ
A.B. Тутельян
ГУ Центральный НИИ эпилемиологии Минзлрава России, Москва
Хорошо известно, что возникновение и развитие инфекционной патологии сопровожлается лейкоцитозом и увеличением функциональной активности лейкоцитов, в том числе фагоцитов. Фагоцитирующие лейкоциты (полиморфно-ялерные лейкоциты (ПМЛ) и мононуклеарные клетки (МНК) принимают участие в развитии специфического иммунитета [3], улалении ленатурированных белков, остатков умерших клеток, тканей и различных пролуктов из очага воспаления или инфицирования [7, 11 ]. Кроме того, МНК, равно как и ПМЛ, в процессе активации пролуцируют значительное количество биологически активных соелинений, оказывающих существенное влияние на условия жизнелеятельности организма [4 - 6, 10].
Д
я фагоцитирующих клеток характерны два хорошо различаемых состояния: исходное - с низким уровнем протекания метаболических процессов и активированное, переход в которое обусловлен взаимодействием клеток с различными стимуляторами. Активация фагоцитов сопровождается существенными морфологическими, биохимическими и биофизическими перестройками клеток [7, 8].
Известно, что фагоцитирующие клетки, находящиеся вне контакта с антигеном, малоактивны. Однако если ПМЛ предынкубировать с каким-либо стимулятором,
взятым в концентрации, недостаточной для активации гранулоцитов, а затем воздействовать на них тем же стимулятором или каким-либо другим в стимулирующей концентрации, то наблюдается увеличение эффектор-ных ответов фагоцитов по сравнению с контролем. Повышение функционального потенциала фагоцитов в процессе предварительного стимулирования получило название «прайминг» (priming) [McPhail, 1984]. Прай-минг фагоцитов выражается в увеличении ответа ПМЛ на последующую стимуляцию, определяемом в виде индекса прайминга (ИП); в сокращении лаг-периода разви-
1ЕМА НОМЕРА
тия ответа клеток на стимуляцию и в повышении скорости развития ответа [8, 9]. После прайминга при последующей стимуляции отмечаются повышение продукции активных форм кислорода (АФК), цитокинов, эйкозано-идов и обусловленный этим рост цитотоксичности и ба-ктерицидности фагоцитов.
В литературе накоплен большой экспериментальный материал, свидетельствующий о том, что прайминг фагоцитов может быть вызван действием широкого спектра эндогенных и экзогенных факторов (праймеров). Среди них - интерлейкины, липополисахариды, компоненты бактериальной стенки, эйкозаноиды, формильные пептиды и т.д.
Поскольку усиление протективных функций лимфо-идных клеток является одной из главных задач иммуно-тропной и патогенетической терапии, представляло интерес исследовать примирующее влияние различных им-мунорегуляторных соединений.
В настоящее время среди препаратов иммуномоду-лирующего типа действия наибольший интерес вызывают регуляторные пептиды, для которых характерен такой фармакологический эффект, как эффект малых доз. Он выражается в том, что регуляторные пептиды и их синтетические аналоги вызывают адекватное изменение функции клетки-мишени в очень низких концентрациях, около 10-8 - 10-10 М. Активация клетки низкими дозами регуляторных пептидов достигается за счет генерализации сигнала и образования в цитоплазме вторичных мессенжеров: цАМФ и ионов кальция, цГМФ, инозил-трифосфата, диацилглицерола с последующей генераци-?? ей сигнала на разнообразные индукторы. При этом ито-? говое усиление сигнала может составлять 1 06-1 07 раз, | что дает возможность пептидам, действующим в каскад-| ной системе, работать при низких концентрациях.
■©■ Наличие данного эффекта позволяет предположить
= участие регуляторных пептидов в кратковременном | прайминге. По времени инкубации, величине ИП и другим параметрам прайминг ПМЛ и макрофагов можно подразделить на два типа: кратковременный (время пре-| дынкубации - до 1 часа) и пролонгированный (5-40 часов). Первый тип характеризуется следующими особен-% носгями: эффект прайминга вызывается воздействием т низких концентраций примирующего агента в течение
нескольких минут; эффективность мала, величина ИП лежит в пределах 2 - 4. Из литературы известно, что кратковременный прайминг является первой стадией перехода фагоцитов из основного, исходного состояния в активированное, характерное для них при различных инфекционных и воспалительных заболеваниях.
В этой связи было проведено исследование действия различных синтетических регуляторных пептидов на кратковременный прайминг мононуклеарных клеток.
В качестве веществ с возможной примирующей активностью были взяты иммунорегуляторные пептиды: известные (имунофан) и новые (бурсин - синтетический гекса-пептид (лизил-гистидил-глицил-лизил-гистидил-глицин); циклобурсин - синтетический циклогексапептид (цикло-лизил-гистидил-глицил-лизил-гистидил-глицин); фрагмент гормона тимопоэтина II, включающий аминокислотные остатки в положениях 29 - 41. Также использовали атоми-
зированный экстракт элеутерококка, взятый в качестве соединения не пептидной природы и обладающий выраженным действием на клетки иммунной системы.
Для измерения примирующего влияния иммунорегу-ляторных соединений опыты проводили следующим образом. В суспензию ПМЛ с добавленным активатором свечения - люминолом вводили препараты в разной концентрации. Суспензию инкубировали 5 - 7 мин при температуре 370С и постоянном перемешивании и затем измеряли спонтанную, а после добавления стимулятора фагоцитов, опсонизированного зимозана - стимулированную люминолзависимую хемилюминесценцию (ЛХЛ). Амплитуду стимулированной ЛХЛ сравнивали с ЛХЛ суспензии ПМЛ без препаратов. Отношение максимальных интенсивносгей ЛХЛ использовали в качестве индекса прайминга в относительных единицах.
При анализе полученных результатов было обнаружено, что все исследуемые соединения в той или иной степени обладали примирующей активностью. Так, фрагмент тимопоэтина II (ФТП), элеутерококк и имунофан стимулировали фагоцитарную активность по показателю прайминга на 25 - 50%. Циклобурсин, в отличие от других исследованных соединений, увеличивал прайминг ПМЛ в 2,5 - 3 раза. Его линейный аналог, бурсин, в использованных концентрациях не влиял на прайминг лейкоцитов.
Таким образом, результаты проведенных экспериментов свидетельствуют: исследованные регуляторные соединения способны к модуляции функционального потенциала фагоцитов, что проявляется в формировании кратковременного прайминга клеток. При этом выраженность эффекта определялась структурой препарата и не зависела от его общей иммуномодулирующей активности.
Одно из следствий инициации кратковременного прайминга фагоцитов - повышение продукции АФК, что является основой увеличения кислородзависимой бактерицидности фагоцитов. Величина прироста продукции радикалов кислорода фагоцитами в результате кратковременного прайминга составляет для разных праймеров не более 4 раз. Вместе с тем, в процессе возникновения и развития ряда воспалительных заболеваний на фоне яркого гранулоцитоза возрастание удельной активности фагоцитов крови достигает 50 - 100 раз [1]. Такой большой прирост активности фагоцитов при различных воспалениях может быть обусловлен выбросом из депо костного мозга новой, очень активной популяции нейтрофилов, вызванным появлением в циркуляции цитокинового сигнала [2]. Следовательно, примиро-вание лейкоцитов может вызывать активацию синтетических процессов в клетках, приводящих к увеличению продукции ряда биологически важных субстанций: оксида азота, цитокинов и т.д.
Итак, исследованные регуляторные пептиды могут стимулировать кратковременный прайминг лимфоид-ных клеток, что увеличивает функциональный потенциал фагоцитов к бактериальному киллингу, тем самым создавая возможности для усиления элиминирования возбудителя и более эффективной терапии инфекционных заболеваний.
IFMA HQMFFA
Литература
1. Клебанов Г.И., Туркменова Э.М. и др.// Биологические мембраны. - 1987. - Т.4. - <10. - С. 1084 - 1092.
2. Крейнина М.В., Клебанов Г.И. и др. //Бюлл. эксп. биол. мед. -1989. - Т. 108. - <12. - С. 673 - 675.
3. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука, 1983.
4. Allison A./Adv. Inflam. Res. - 1984. - V. 7. - P. 201.
5. Bass D.A., Gerard C., Olbrautz P. et al. // J. Biol. Chem. - 1987. -V. 262. - < 24. - P. 2043.
6. Gannon D.E., Varani J., Phan S.H. et al. // Lab. Invest. - 1987. - V. 57. - < 1. - P. 37.
7. Leslie R.G. // Recent Develope of Clinical Immunology. N.Y.: Elsevier Sci. Publ. - 1984. - P. 77.
8. Morel F., Doussier J., Vignains P.V. // Europ. J. Biochem. - 1991. -V. 201. - < 3. - P. 523.
9. Pabst M.J., Johnston R.B. // J. Exptl. Med. - 1980. - V. 151. - < 1. -P. 101.
10. Palmblad Jan // Scand. J. Rheumatol. - 1984. - V. 13. - < 2. - P. 163.
11. Ward P.A., Warren J.S., Johnson K.J. // Free Rad. Biol. Med. - 1988. V. 5. - < 5. - P. 405.
ПЦР-ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Г.А. Шипулин
ГУ Центральный НИИ эпилемиологии Минзлрава России, Москва
Успешная борьба с инфекционными болезнями основывается на качественной и оперативной их лиагностике и четко организованной системе эпилемиологического налзора. В современных условиях наиболее чувствительной считается ЛНК/РНК-лиагностика метолом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
О
дним из приоритетных направлений научных исследований в Центральном НИИ эпидемиологии Минздрава России является разработка и производство ПЦР-тест-систем для диагностики инфекционных заболеваний человека. Интенсивно разрабатываются технологии молекулярно-генетического анализа: генотипирование, секвенирование, ПЦР в реальном времени и другие.
В настоящее время в Институте созданы и переданы в производство несколько десятков тест-систем, в их числе для диагностики: ВИЧ-инфекции;
заболеваний, ассоциированных с ВИЧ-инфекцией; вирусных гепатитов А, В, С, Э, С, ТТ; болезней, передающихся половым путем; заболеваний, вызываемых вирусами герпес-группы; острых кишечных инфекций бактериальной и вирусной этиологии;
папилломавирусной патологии; туберкулеза.
Следует отметить, что при ВИЧ-инфекции, гепатите С, герпетических инфекциях представляется возможным проводить не только качественные, но и количественные исследования. Так, длительное время при гепатите С диагностика основывалась только на определении антител. Однако антитела могут быть как результатом продолжающейся инфекции, так и следствием ранее перенесенного заболевания, закончившегося выздоровлением. Только с помощью ПЦР-диагностики удается подтвердить факт персистенции
возбудителя и продолжающегося инфекционного процесса. Метод количественного определения антигена позволяет оценить эффективность лечения.
Применение методов молекулярно-генетического анализа дает возможность осуществлять типирова-ние различных возбудителей, следить за циркуляцией эпидемических клонов.
Особое значение приобретает ПЦР-диагностика при так называемых возвращающихся инфекциях.
Именно при помощи ПЦР-диагностики удалось получить принципиально важные данные по эпидемиологии лихорадки Западного Нила, вызвавшей вспышки в Волгограде и других территориях Поволжья.
Разработанная в Институте тест-система позволила впервые в нашей стране выявить вспышки, вызванные калицивирусами.
В короткий срок была разработана ПЦР-тест-си-стема для диагностики тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС), или атипичной пневмонии, эпидемии которой потрясли мир.
Учитывая сложную эпидемиологическую обстановку в мире и России, ускорение темпов эволюции возбудителей инфекционных болезней, на базе Центрального НИИ эпидемиологии Минздрава России организован Центр молекулярной диагностики инфекционных болезней, призванный способствовать научно-исследовательской работе и практической деятельности, направленной на обеспечение эпидемиологического благополучия страны, укрепление ее национальной безопасности.
