CC BY
29
IÖMA HOMFFÄ
ность клинического мышления при сборе анамнеза заболевания и эпидемиологического анамнеза, оценке данных физикального и параклинического обследования, при выделении ведущего патологического синдрома.
2. В очагах КГЛ при выявлении укушенных клешами пациентов и динамическом наблюдении за ними в течение 14 дней важно максимально регистрировать неспецифические симптомы (сильная головная боль, боли в суставах, мышцах, в том числе икроножных, разбитость, быстрая утомляемость, головокружение, сухость, жажда, катаральные явления в верхних дыхательных путях, потеря сознания), которые встречаются и при других заболеваниях, с целью своевременного выявления и направления пациентов в стационар.
3. Аля практических целей обеспечить при подозрении на КГЛ определение комплекса наиболее информативных показателей, характеризующих состояние свертывания крови, позволяющих выявить АВС и установить его фазы.
4. Эффективность терапии, корригирующей нарушения гемостаза, больше выражена на ранних стадиях синдрома ABC, а ее отсутствие характеризует прогрессирование каскадных реакций и всего инфекционного процесса в целом.
5. Степень нарушения гемостаза, выраженность признаков внутрисосудистого свертывания крови определяют тяжесть течения КГЛ и степень нарушений функций печени, почек, легких.
Литература
1. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. -М.:Медицина, 1988. - 480 с.
2. Брумштейн М.С., Лещинская F.B. Клиника и патоморфоло-гия геморрагической лихорадки в Астраханской области. Матер. научно-практ. конф. - Астрахань, 1969. - С. 21 -26.
3. Малеев B.B. Новые и возвращающиеся инфекции. - Терапевт. архив. - 2000. - <11, С. 5 - 9.
4. Малеев B.B. Проблемы и перспективы патогенетической терапии инфекционных болезней.//Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2000. - <3. -С.4 - 8.
Иммуномодулируюшие
свойства ивермектина:
влияние на купферовские клетки (макрофаги печени)
A.B. Викторов, В.А. Юркив
ГУ Центральный НИИ эпилемиологии Минзлрава России, Москва
Макроииклический лактон ивермектин (22,23-лигилро-авермектин В1) широко используется как активный ингрелиент в ветеринарных антипаразитарных препаратах широкого спектра лействия. Ивермектин облалает мошной антигельминтной, инсектииилной и ака-рииилной активностью. За рубежом ивермектин применяется и в мелииине: против эктопаразитов, многие из которых являются переносчиками опасных инфекционных заболеваний, а также лля лечения онхоиеркоза [3]. Кроме того, ивермектин может попадать в организм человека в виле остаточных количеств, солержашихся в животных и растительных пролуктах. Несмотря на ллительный периол изучения, прямое возлействие ивермектина на иммунокомпетентные клетки остается мало известным: например, нет ни олной публикации, посвяшенной его влиянию на макрофаги печени (купферовские клетки).
Введение
Биологическая активность ивермектина связана с его взаимодействием с различными хлорными каналами: глутамат [9], ГАМК [1] и глицинактивируемыми каналами/рецепторами [7]. Глицинзависимые каналы представляют особый интерес, поскольку они обнаружены во многих иммунных клетках, в частности в резидентных макрофагах печени - купферовских клетках [2]. Недавно было показано, что диетный глицин оказывает существенное противовоспалительное действие, блокируя активацию купферовских клеток,
альвеолярных макрофагов, лимфоцитов и нейтрофи-лов, вызванную липополисахаридом (ЛПС) - фрагментом наружной стенки грамотрицательных бактерий [12]. Купферовские клетки образуют в организме млекопитающих самый крупный пул фиксированных макрофагов, которые представляют собой первую линию обороны организма, удаляя из кровотока бактерии и разнообразные чужеродные вещества посредством фагоцитоза и пиноцитоза. В ответ на стимуляцию ЛПС купферовские клетки генерируют целый спектр физиологически активных веществ - медиато-
IFMA HOMFPA
ров воспалительного процесса [B], которые не только влияют на функционирование всего ансамбля клеток печени, но и могут привести к повреждению других тканей и органов. К подобным медиаторам относятся фактор некроза опухолей (TNFa), окись азота NO и эйкозаноиды (прежде всего простагландин Е2).
Методика исследования
Очишенный препарат липополисахаридного токсина (дикий тип) Salmonella typhimurium (ЛПО был поставлен фирмой Sigma (CI1IA), а ивермектин -фирмой Merck (CHA). Флуоресцентный кальциевый индикатор fura-2AM был закуплен у фирмы Molecular Probes (CHA). Cреды для культуры клеток были получены от фирмы Gibco (CHA). Наборы (киты) для определения простагландина Е2 методом радиоиммунного анализа (PИA) были приобретены у фирмы Amersham (Aнглия). Киты для определения TNFa им-муносорбентным методом (ELISA) были закуплены у фирмы Genzyme (Кембридж, CHA).
Купферовские клетки были выделены из самцов крыс породы Sprague-Dawley весом 250 - 300 г согласно методу, подробно описанному ранее [10, 11]. Чистота купферовских клеток была не менее 90% (окрашивание пероксидазой, морфология и захват латексных частиц); при этом более 95% выделенных клеток не прокрашивалось трипановым синим, то есть были жизнеспособны. Клетки культивировали в 24-луночных культуральных пластиковых плашках с плотностью 5x105 клеток/лунку в среде RPMI 1640 с добавлением 10%-ной телячьей сыворотки в инкубаторе (370C, 5% CO2) в течение 4B часов до начала экспериментов. Раствор ЛПC (в присутствии 5%-ной сыворотки крысы) добавляли в культуральную среду в конечной концентрации 1 мкг/мл. Использовали стоковый раствор ивермектина в этаноле (1 мг/мл или 1,15 мM). В опытах по удалению ионов хлора из культуральной среды хлорид был заменен на глюко-нат за 2 мин до добавления ивермектина. Фагоцитоз определяли по захвату культурой клеток латексных частиц [5]. В лунку добавляли 0,5 мл 0,05%-ной суспензии частиц (диаметр 1 мкм). Незахваченные частицы отмывали через 1 час. C помошью фазово-кон-трастного микроскопа (х400) подсчитывали число латексных частиц в цитоплазме клетки для 30 клеток в каждой лунке для 3-х лунок каждого эксперимента. Концентрацию свободных внутриклеточных ионов кальция [Ca2+]i определяли с помошью флуоресцентного зонда fura-2 [10] после того, как прикрепившиеся клетки были переведены в суспензию. Концентрация TNFa в культуральной среде была определена иммуносорбентным методом (ELISA) с помошью китов фирмы Genzyme (CHA) [6]. Cекрецию окиси азота NO определяли по накоплению нитрата в культуральной среде, концентрацию которого измеряли колориметрическим методом с помошью реакции Грис-са [4]. Концентрации секретированных культурой клеток простагландинов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в сочетании с PИA [11].
Результаты исследования
Ивермектин в концентрации 1 мкМ лишь незначительно влияет на фагоцитоз первичной культуры купферовских клеток, измеренный по захвату латексных частиц. Добавление ЛПС стимулирует фагоцитоз, в то время как предынкубация клеток с ивер-мектином снижает этот эффект. В отсутствие ионов хлора ингибируюшее действие ивермектина не проявляется.
Необходимым условием активации многих процессов в купферовских клетках является повышение концентрации внутриклеточных ионов кальция [Са2+] [8]. Сам по себе ивермектин не изменяет уровень [Са2+]1, однако способен сушественно блокировать увеличение внутриклеточной концентрации кальция, вызываемое последуюшим добавлением ЛПС; причем эффект наблюдается только в присутствии ионов хлора в наружной среде. Базируясь на этих данных, логично предположить, что ивермектин способен зашишать купферовские клетки и от стимуляции другими агонистами, вызываюшими мобилизацию внутриклеточного кальция.
Контрольные купферовские клетки секретируют лишь незначительное количество простагландина Е2, которое не изменяется при добавлении ивермектина (1 мкМ). Активация купферовских клеток ЛПС, напротив, приводит к многократному увеличению концентрации простагландина Е2, которая достигает максимума к 24 часам, что близко к литературным данным [8, 11]. Совершенно иная картина наблюдается при воздействии ЛПС, если клетки предварительно инкубировались с ивермектином: секреция простагландина Е2 значительно подавлена. Замена в наружной клеточной среде хлорида на глюконат полностью устраняет вышеописанный эффект ивермектина.
Фактор некроза опухолей ТЫРа является одним из наиболее известных пептидных медиаторов - ци-токином, секретируемым купферовскими клетками при воспалительном процессе [8]. В ответ на действие ЛПС концентрация ТЫРа в культуральной среде возрастает к 4-му часу стимуляции в 25 - 30 раз, а затем уменьшается (не показано). Предынкубация с ивермектином приводит к значительному уменьшению секреции ТЫРа, вызванной последуюшим добавлением ЛПС, в то время как удаление из культуральной среды ионов хлора перед введением ивермектина полностью снимает ингибируюшее действие ивер-мектина.
Накопление в культуральной среде окиси азота N0, одного из важнейших химически реактивных промежуточных соединений азота, регистрируемых при активации купферовских клеток ЛПС, показано также на рисунке 1. Концентрация N0 увеличивается в 6 - 8 раз и достигает пикового значения приблизительно через 48 ч после начала стимуляции эндотоксином. Ивермектин способен сушественно понизить индуцируемое ЛПС образование N0, однако только при наличии ионов хлора во внешней среде.
IFMA HOMFFA
Выводы
1. Абсолютная зависимость инактивируюшего действия ивермектина от присутствия во внешней среде ионов хлора согласуется с литературными данными в том, что ивермектин является агонистом гли-цинзависимых хлорных каналов, которыми обладают макрофаги печени [3, 7].
2. Способность ивермектина, с одной стороны, сушественно блокировать индуцируемую ЛПС секрецию медиаторов воспалительной реакции макрофагов, а с другой - практически не влиять на фагоцитоз может иметь благоприятные физиологические последствия на уровне всего организма в виде снижения эндотоксемических проявлений.
Литература
1. Dawson G.R., Wafford K.A., Smith A., et al.//J. Pharmacol. exp.
therapeut. - 2000. - Vol. 295, N 3. - P. 1051 - 1060.
2. Froh M., Thurman R.G., Wheeler M.D. //Physiol. gastrointest.
liver physiol. - 2002. - Vol. 283, N 4. - P. G 856 - 863.
3. Goa K.L., Mctavish D., Clissold S.P.//Drugs. - 1991. - Vol. 42.
- P. 640 - 658.
4. Green L.C., Wagner D.A., Glogowsky J. et al.//Anal. biochem.
- 1982. - Vol. 126. - P. 131 - 138.
5. Hirose M., Tomono M., Takeuchi M. et al.//Acta hepatol. Jap.
- 1987. - Vol. 28. - P. 1327 - 1330.
6. Schemmer P., Enomoto N., Bradford B.U. et al.//Physiol. gastrointest. Liver physiol. - 2001. - Vol. 280. - P. G1076-G1082.
7. Shang Q., Haddrill J.L., Lynch J.W. //Biol. chem. - 2001. - Vol. 276, N 16. - P. 12556 - 12564.
8. Su G.L. //Physiol. gastrointest. Liver physiol. - 2002. - Vol. 283, N 2. - P. G256 - 265.
9. Vassilatis D.K., Arena J.P., Plasterk R.H., et al. //Biol. chem. -1997. - Vol. 272, N 52. - P. 33167 - 33174.
10. Victorov A.V., Abril E.R., Hamlin C.E. et al.//Cells of the hepatic sinusoid, kupffer cell foundation, E.Wisse, D.L.Knook, R.S.Mccuskey eds. - 1991. - Vol. 3. - P. 449 - 452.
11. Victorov A.V., Hoek J.B //Biochim. biophys. res. commun. -1995. Vol. 215, N 2. - P. 691 - 697.
12. Wheeler M.D., Ikejima K., Enomoto N, et al.//Cell mol. life sci.
- 1999. - VOL. 56, N 9-10. - P. 843 - 856.
Особенности патогенеза эндогенных увеитов у детей с хронической герпес-вирусной инфекцией
Т.В. Сидорова, В.В. Лебедев, Г.И. Кричевская, Л.А. Катаргина, Г.Н. Быковская
ГУ Центральный НИИ эпилемиологии Минзлрава России, Москва
Московский НИИ глазных болезней им. Гельмгольца
Энлогенные увеиты - полиэтиологические воспалительные заболевания сосулистой оболочки глаза - характеризуются различными вариантами клинического течения. Наиболее важной особенностью их развития в летском возрасте являются большая частота инфекционных форм увеитов и реииливируюший характер увеального воспалительного процесса.
Р
I азвитию рецидива увеального воспалительного процесса обычно способствуют различные иммунные нарушения. К числу таковых относят нарастание явлений аутоиммунной агрессии, расстройства клеточного иммунитета, развитие локальной недостаточности 1§А, нарушение баланса цитокинов в сторону преобладания провоспалительных медиаторов [3].
Указанные иммунные расстройства сопутствуют усилению реакции воспаления и персистенции герпес-вирусной инфекции [7]. При этом инфекционный агент может не только быть причиной заболевания, но и выступать одним из патогенетических факторов обострения увеита другой этиологии: фокальных, инфек-
ционно-аллергических, аутоиммунных [1, 5, 6]. В то же время обострение эндогенного увеита (ЭУ) может наблюдаться и в отсутствие инфекционного агента. Существование инфекционного и неинфекционного путей развития ЭУ предполагает наличие разных патогенетических механизмов развития воспаления в сосудистой оболочке и соответственно - различных вариантов клинического течения данного заболевания.
В этой связи мы проанализировали варианты клинического течения эндогенных увеитов в зависимости от активности герпес-вирусных инфекций и состояния иммунной реактивности детского организма.
Цель работы: выявить особенности клинического
