CC BY
21
Рис. 2. а — положительное окрашивание опухолевых клеток молочной железы МКАТ ИКО-25 (мазок с операционного материала).
Продукт реакции в виде гомогенного окрашивания и темных гранул в цитоплазме клеток. Х400; б — контрольный препарат.
мыши и РАР-комплекса (РАР-метод) — продолжались по 1 ч каждый; за инкубацией следовала промывка. Все реагенты наносились на очерченные на стекле участки по 20—40 мкл.
Пероксидазу проявляли по модифицированному способу [5] (2,5 мл ФСБ, 1,5 мг 3,3-диамино-бензидина (ДАБ), 10 мкл 33% перекиси водорода). Мы применяли ДАБ фирмы «Sigma», США.
Через 15—20 мин препараты отмывали под струей холодной водопроводной воды и докрашивали ядра клеток гематоксилином Караци 7 мин или азуром-П (1 г сухой краски на 1 л дистиллированной воды, pH 6,7—7,2) 3 мин. Такая кратковременная окраска не влияет на выраженность и цветовые вариации пероксидазной реакции.
Преимуществами предлагаемой модификации иммуноцитохимической методики являются: 1) хорошая сохраннрсть морфологии клеток; 2) четкое проявление пероксидазной реакции и возможность оценки ее интенсивности; 3) уменьшение неспе-. цифического связывания.
Следует отметить, что непрямая иммуноперокси-дазная техника и РАР-метод дали сходные результаты во всех случаях. По предварительным данным, МКАТ ИКО-25 и ИКО-84 давали положительную реакцию почти во всех цитологических препаратах. Темно- или светло-коричневый продукт реакции локализовался в виде гранул на клеточной мембране и в цитоплазме или ободка вокруг отдельных эпителиальных клеток или их групп (рис. 1,2). Подобная картина наблюдалась в мазках-отпечатках с операционного материала при проверке МКАТ РМЖ-1 (при работе с пунк-ционными мазками это антитело не применялось). Положительные реакции с остальными МКАТ очень сильно варьировали.
Таким образом, применение описанцой модифицированной методики и МКАТ указанной специфичности действительно может служить способом определения муциноподобных антигенов в цитологических препаратах опухолей и предопухолевых состояний молочной железы. Для окончательного заключения о выявлении панелью испытываемых антител этих антигенов в клетках
опухолей молочной железы и других органов с учетом их гистологического типа, доброкачественности или злокачественности, а также для решения вопроса о диагностической ценности выявления муциноподобных антигенов в пунктатах необходимы дальнейшие исследования.
ЛИТЕРАТУРА
1. Иммуноцитохимия и моноклональные антитела в онкогематологии / Под ред. В. Г. Пинчука, Д. Ф. Глузмана.— Киев, 1990.
2. Кулевич Е. Е., Пискунова Т. В., Иванов П. К., Ананьев В. С. // Арх. пат.— 1989.—№ 7.— С. 20—25.
3. Полак Дж., Ван Нордан С. // Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы.— М., 1987.
4.' Dearnaley D. Р., То А. С. W., Husan О. А. N. et al. // Lancet.— 1984.— Vol. 7, N 1.— P. 39.
5. Graham R. C., Karnovsky M. J. // J. Histochem. Cytochem.— 1966,—Vol. 13,—P. 150—152.
6. Johuston W. W. U Acta Cyt.— 1987,—Vol. 31, N S.-Р. 537—556.
Поступила 28.03.91
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1991 УДК 618.19-006.6-097-053.84
Н. С. Чобанян, В. П. Летягин, Е. В. Савельева, Т. Н. Заботина, А. Ю. Барышников, 3. Г. Кадагидзе
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ФЕНОТИП ЛИМФОЦИТОВ У ЛИЦ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА, БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
НИИ клинической онкологии
В последнее время широкое распространение получило определение иммунологического статуса с помощью моноклональных антител (МКА), которые упростили и унифицировали иммунологические исследования. В лаборатории клинической радиоиммунологии создан набор МКА, позволяющих оценивать иммунологический статус организма в норме и при различной патологии [1—3].
Иммунофенотипический анализ позволяет выявить роль различных популяций иммунокомпе-тентных клеток в развитии противоопухолевого иммунитета у больных раком, в том числе и раком молочной железы — РМЖ [10, 11].
Набор МКА серии ИКО для определения иммунологического
статуса
Название МКА серии ИКО Антиген Специфичность, клеточное распределение
ИКО-90 соз Зрелые Т-клетки
ИКО-80 С 05 Все Т-клетки
'ИКО-87 С 07 То же
ИКО-86 С 04 Т-хелперы (индукторы)
ИКО-31 С 08 Т-супрессоры (киллеры)
ИКО-12 С 022 В-клетки
ИКО-1 НЬА-Ог Активированные Т-, В-клетки,
моноциты
ИКО-20 С 038 1ЧК-клетки, цитотоксические
Т-клетки
ИКО-88 СОЗО Активированные Т-, В-клетки
ГМ-1 СОНЬ СИЗ-рецептор для СЗЫ-комп-
лемента
ИКО-60 С018 Цепь молекул СИЗ, СИ, ЬРА1
ИКО-66 С 037 В-клетки (Т-клетки, моноциты)
ИКО-40 ИРВ-1 Субпопуляции Т-клеток
ИКО-44 1С Кортикальные тимоциты
ИКО-ЗО ц-цепь 1дМ В-лимфоциты
Противоречивые данные относительно худшего прогноза жизни и эффективности лечения у лиц молодого возраста, больных РМЖ, по сравнению с больными старших возрастных групп обусловливают необходимость в тщательном изучении иммунного статуса молодых больных со сравни-
тельной оценкой показателей иммунитета с больными более старшей возрастной группы, но с учетом относительной идентичности гормонального фона.
Несмотря на все увеличивающееся число исследований, посвященных вопросам противоопухолевого иммунитета у больных РМЖ [4—9], мы не обнаружили работ, в которых проводился анализ иммунного статуса больных РМЖ молодого возраста с применением МКА.
Целью настоящей работы было определение иммунологического статуса у больных РМЖ молодого возраста с помощью МКА серии ИКО и сравнительный анализ иммунологического фенотипа лимфоцитов этих больных с аналогичными показателями у здоровых доноров и больных РМЖ среднего возраста.
Материал и методы. Экспрессию дифференци-ровочных антигенов лимфоцитов определяли в непрямой реакции поверхностной иммунофлюоресценции с помощью МКА серии ИКО (см. таблицу). Реакцию учитывали на проточном цито-флюорометре ЕАСБсап. Помимо относительного уровня лимфоцитов, анализировали и абсолютное число клеток.
Использовали образцы периферической крови 16 больных РМЖ (I—III стадий) в возрасте от 28 до 35 лет и 18 больных в возрасте от
СО8(ИН0-31)
ам(ино-8б)
СО7(ИН0-87)
О 200 400 600 800 1000 1200 1400
Абсолютное значение
сою(т-44)
ах(ино-ао)
СОЗ(ИН0-90)
200
600 800 1000 1200 1400
Абсолютное значение
СЛ8(ИИ0-31)
Рй4(ИИ0-86)
СО7(ИИ0-87)
' О
тс(ико-44)
I СВ5(ИН0-80)
I
СОЗ(ИК0-90)
20 30 40 50
Процент
V В—аг ШШЩз шши
•Д<35лет РМШ<35шп РММ>35лвт
Рис. 1. Экспрессия Т-клеточных маркеров.
Здесь и на рис. 2—4: У — доноры моложе 35 лет; 2 — больные РМЖ моложе 35 лет; 3— больные РМЖ старше 35 лет; 4 — доноры старше 35 лет. По вертикали — название маркеров; по горизонтали: а — абсолютное значение, б — содержание клеток (в %).
3 В-к ВОНЦ Яо 4
17
36 До 45 лет. В качестве контроля использовали 2 группы доноров соответствующих больным возрастов (по 16 человек в каждой).
Статистическая обработка материала проводилась по методу Стьюдента. Различия расценива-’ лись как достоверные при р<0,05.
Результаты и обсуждение. В работе использовались 6 Т-клеточных маркеров: CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD1C. Уровни Т-клеток, содержащих антигены CD3, CD5, у больных РМЖ молодого возраста были снижены по сравнению с больными среднего возраста (ptic. 1). Однако различия эти не имели статистически достоверного значения.
Сравнение экспрессии других Т-кл^точных маркеров также не выявило статистически достоверных различий в их уровнях у больных молодого и среднего возраста.
Интерес представляет сравнение уровней экспрессии Т-клеточных маркеров больных РМЖ с донорами соответствующих возрастных групп. Обнаружено статистически значимое снижение уровня CDlC-положительных клеток у больных молодого возраста по сравнению с донорами, тогда как -у больных среднего возраста различий с донорской группой не получено.
Уровень Т-хелперных (индукторных) клеток, экспрессирующих антиген CD4, не отличался у молодых доноров и больных РМЖ, тогда как у больных среднего возраста имелось статистически значимое снижение по сравнению со своей контрольной группой.
Снижение уровня Т-супрессорных (цитотоксиче-ских) лимфоцитов, содержащих антиген CD8, у больных молодого возраста по сравнению с донорами статистически незначимо, а у больных среднего возраста находится примерно на одинаковом уровне с донорами. Снижение иммуноре-
гуляторного соотношения было более выражено у лиц среднего возраста по сравнению с донорами (1,56 против 2,06), Чем у больных молодого возраста по .сравнению с контрольной группой (1,28 и 1,42 Соответственно)'. ' . '
Уровень В-лимфоцитов определяли 4 маркерами: С022, С037, НЬА-Ог, ^-цепь иммуноглобу-1 линов класса М. Экспрессия антигенов С&22 и ^-цепь 1дМ у больных молодого возраста была несколько повышена по сравнению с группой доноров и больных среднего возраста. Различия эти статистически незначимы.
У больных- молодого возраста отмечалось статистически достоверное снижение уровня экспрессии антигена СБ37 по сравнению с донорами. У лиц среднего возраста уровень С037-по-ложительных клеток был выше, чем у молодых, но ниже, чем у соответствующей донорской группы (различия статистически, незначимы).
Экспрессия НЬА-Эг-антигенов у больных молодого возраста была достоверно снижена по сравнению с донорами. У лиц же среднего возраста отмечалось 4-кратное увеличение уровня клеток, экспрессирующих НЬА-Ог-антиген по сравнению с донорами (^<0,05). Наблюдалась тенденция к повышению уровня этих клеток у больных среднего возраста по сравнению с молодыми (рис. 2).
Большой процент С037-положительных клеток в сравниваемых группах связан с экспрессией этого антигена, кроме В-клеток, также на- суб: популяциях Т-лимфоцитов и моноцитов [8] .
Дополнительную информацию о состоянии иммунной системы можно получить, используя МКА против антигенов активации, ЫК-клеток и семейства молекул адгезии. Уровень СОЭ8-и СОЗО-положительных клеток, определяющих Т-, В-клетки и естественные киллеры, был несколько повышен у больных молодого возраста по
HLA-Dr(mo-I)
С037(ии0—66)
HLA-Dr(mO-t)
С037(ин0-В6)
ЯFBHm0-40)
созв(ино-го)
0 100 гоо 300 400 SOO в00 700
Абсолютное значение
RFB1(m-40)
CD38(HH0-20)
Д<35лет
РМЖ<35лет РМШ>35лет
Д>35пет
Д<35лет
РМЖ*35лет
РМЖ>35тп
'Д>$5п$т
Рис. 2. Экспрессия В-клеточных маркеров. 18
Рис. 3. Экспрессия активационных маркеров.
СР18(ИИО-вО)
сот(гм-!)
1475
11514.4 .
О 200 400 В00 800 1000 1200 1400 1600
Абсолютное значение 6
$915
CD18(HH0-6O)
CD1tb(rU-1l
Д*35лет
з
РМЖ^35лет РМШ*35пет М>35лвт
Рис. 4. Экспрессия миеломоноцитарных маркеров и линий неограниченных антигенов.
сравнению с больными среднего возраста, но снижен относительно уровня молодых здоровых женщин. Эти различия статистически незначимы (рис. 3) .
Содержание клеток, экспрессирующих RFB-1-антиген, было достоверно выше у больных РМЖ молодого возраста по сравнению с донорами (р<0,05). У больных среднего возраста наблюдалась обратная тенденция. Уровень RFB-1-анти-генсодержащих клеток у больных среднего возраста был снижен как относительно молодых больных,'так и доноров среднего возраста.
Процент клеток, содержащих молекулы адгезии, у больных молодого возраста достоверно выше, чем у доноров, тогда как у лиц среднего возраста различия с донорами статистически незначимы (рис. 4).
Экспрессия клеток, содержащих антиген CD18, у больных обеих возрастных групп находилась примерно на одинаковом уровне, однако достоверно снижена относительно уровня здоровых женщин соответствующих возрастов.
Таким образом, проведенное исследование позволило оценить иммунный статус у больных РМЖ молодого возраста на основе иммунологического фенотипа мононуклеарных клеток с применением МКА.
Выводы. 1. У больных РМЖ обеих возраст -ных'групп отмечается снижение Т-клеточной популяции по сравнению с донорами. Нет достоверных различий в показателях Т-клеточного иммунитета у больных молодого и среднего возраста, хотя наблюдалась тенденция к снижению уровня зрелых Т-лимфоцитов у молодых больных.
2. Показатели В-клеточного иммунитета у больных молодого возраста по сравнению с донорами снижены, тогда как у больных средне-
го возраста наблюдалось 4-кратное увеличение уровня В-лимфоцитов и моноцитов по сравнению с донорами (HLA-Dr-антигенсодержащие клетки). Также отмечена тенденция к снижению В-кле-точной популяции у молодых больных по срав-. нению с больными среднего возраста.
3. Экспрессия активационных маркеров- и линий неограниченных антигенов у молодых больных достоверно выше, чем у доноров. Отмечается также тенденция к повышению уровня активационных и линий неограниченных маркеров у больных молодого возраста по сравнению с больными средней возрастной группы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барышников А. Ю. // Гематол. и трансфузиол.— 1990.— № 8.— С. 4—7.
2. Барышников А. Ю., Кадагидзе 3. Г. // Современные направления создания медицинских диагностикумов.— М., 1988,— С. 23.
3. Барышников А. Ю. // Диагностика злокачественных новообразований.— М., 1988.— С. 68—70.
4. Кампова-Полевая Е. Б. Современные свозможности иммуномониторинга и иммунокоррекции в процессе лечения рака молочной железы: Дне. ... д-ра мед. наук.— М., 1989.
5. Рьжакова М. М. Разработка метода получения цито-токсических лимфоцитов и оценка его эффективности в изучение иммунного ответа при адоптивной иммунотерапии больных раком молочной железы: Дис. ... канд. мед. наук,—М., 1989.
6. Табагари Д. 3., Харкевич Д. Д., Савинова А. Ю. // Материалы совещания «Новые подходы к вопросам иммунологии рака».— Кемерово, 1986.— С. 19—20.
7. Трапезников Н. Н., Кадагидзе 3. Г., Полевая Е. Б. и др. // Иммунология опухолей.— Рига, 1982.— С. 70—77.
8. Федин Ю. В. Клинико-иммунологические аспекты рака молочной железы: Автореф. дис. ... канд. мед. наук.— М., 1983.
9. Филатов А. В., Бачурин П. Ф., Маркова Н. А. и др. // Экспер. онкол.— 1989.— № 2.— С. 28—32.
10. Vose В. М., White W. // Cancer Immunol. Immunother.— 1983,—Vol. 15.—P. 227—236.
11. Wagner H., Harradt C„ Rollinshoff U. et al. // Immunobiology.—1981.—Vol. 159,—P. 183—186.
Поступила 30.05.91
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1991 УДК 616.313-006
Е. Г. Матякин, А. А. Уваров, Е. И. Ажигалиев ОПУХОЛИ КОРНЯ ЯЗЫКА
НИИ клинической онкологии
Опухоли корня языка встречаются нечасто и относятся к новообразованиям языка и ротоглотки. Как в отечественной, так и в зарубежной литературе обычно приводится небольшое количество случаев (от 15 до 115). Рак корня языка обладает выраженным злокачественным течением и имеет крайне неблагоприятный прогноз с высокой вероятностью регионарного метастазирования (72%). По данным литературы, 5-летняя выживаемость составляет от 9 до 34 % [1 —12].
Редкость указанной патологии, трудности диагностики, неудовлетворительные отдаленные результаты лечения побудили нас обобщить и проанализировать клинический материал ВОНЦ АМН СССР. За период с 1970 по 1990 г. проходили лечение 77 больных с опухолями корня языка.
