CC BY
75
УДК 618.19-006.6-053;612.621.31
Н.С. Чабан ян, В. Д. Ермилова, Е.В. Савельева, А.Ю. Барышников, З.Г. Кадагидзе
ЛИМФОИДНАЯ ИНФИЛЬТРАЦИЯ ОПУХОЛИ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ФЕНОТИП ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА
НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, НИИ клинической онкологии
В последние годы большой интерес проявляют к оценке морфологических изменений в опухоли, опосредованно характеризующих систему местного клеточного иммунитета, одним из критериев которого является степень выраженности лимфоидной инфильтрации опухоли [3, 5, 8 ]. Лимфоидная инфильтрация опухоли — отражение местной защитной реакции организма на рост и развитие опухоли, которую большинство авторов рассматривают как благоприятный прогностический фактор, обладающий большей информативностью, чем размер опухоли [4, 7 ]. При этом некоторые авторы считают, что дополнительная оценка морфологических критериев иммунитета позволяет получить более полное представление о защитных противоопухолевых механизмах [6, 7, 10]. Несмотря на большое количество публикаций, посвященных изучению иммуноморфологических изменений у больных раком молочной железы, при анализе литературы мы не встретили работ по сравнительному изучению степени выраженности лимфоидной инфильтрации опухоли с иммунологическим фенотипом лимфоцитов периферической крови у больных раком молочной железы молодого и среднего возраста.
Цель настоящего исследования — сравнительное изучение иммунологического фенотипа моно-нуклеарных клеток периферической крови в зависимости от степени выраженности лимфоидной инфильтрации опухоли у больных раком молочной железы молодого и среднего возраста.
Материалы и методы. Обследовано 60 больных раком молочной железы I—III стадий (30 больных молодого возраста — от 23 до 35 лет, 30 больных среднего возраста — от 36 до 45 лет). Иммунологический фенотип лимфоцитов определяли в непрямой реакции поверхностной иммунофлюоресценции на проточном цитофлюориметре ’ТЛСЭсап" с помощью моноклональных антител серии ИКО [1], созданных в лаборатории клинической радиоиммунологии ОНЦ РАМН (табл. 1). Наряду с относительным содержанием клеток определяли их абсолютное количество. Забор крови у всех больных проводили до начала лечения. Лимфоплазмоцитарную инфильтрацию опухоли изучали на препаратах, удаленных во время радикальной маст-
эктомии или трепанобиопсии, до начала лечения. Степень выраженности лимфоидной инфильтрации оценивали с помощью ранее описанного метода и характеризовали ее как выраженную, умеренную, незначительную и ее отсутствие [31. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью математических методов оценки результатов медицинских исследований.
Результаты и обсуждение. Экспрессию маркеров, характеризующих определенную популяцию клеток, изучали в зависимости от степени выраженности лимфоидной инфильтрации как внутри каждой возрастной группы больных, так и в сравнении этих показателей у пациентов молодого и среднего возраста (табл. 2).
При анализе относительного количества моно-нуклеарных клеток периферической крови в зависимости от степени выраженности лимфоидной инфильтрации опухоли не обнаружено их достоверных различий у больных раком молочной железы молодого и среднего возраста, поэтому в табл. 2 представлено абсолютное количество экспрессируемых маркеров иммунокомпетентных клеток.
Экспрессия Т-клеточных маркеров у больных молодого возраста была выше в тех случаях, когда лимфоидная инфильтрация опухоли отсутствовала (антигены CD3, CD4, CD8, CD5, CD7), однако
Таблица 1. Набор моноклональных антител серии ИКО для определения показателей клеточного иммунитета
Антигены Моноклональные антитела Специфичность
CD3 ИКО-90 Зрелые Т-клетки
CD4 ИКО-86 Т-хелперы/индукторы
CD5 ИКО-80 Все Т-клетки
CD7 ИКО-87 Все Т-клетки
CD8 ИКО-31 Т-супрессоры/киллеры
CD 11b ИКО-ГМ1 СЯЗ-рецептор для СЗЫ-
комплемента
CD18 ИКО-60 /¡-цепь молекул СИЗ,
СИ4, 1_РА1
CD22 ИКО-91 В-клетки
HLA-Dr ИКО-1 Активированные Т- и В-
клетки, моноциты
RFB1 ИК040 Субпопуляции Т-клеток
1с ИКО-44 Кортикальные тимоциты
CD30 ИКО-88 Активированные Т- и В-
клетки
CD37 ИКО-66 В-клетки (Т-клетки, моно-
'циты)
CD38 ИКО-20 ЫК-клетки и цитотоксиче-
ские Т-лимфоциты
/«-цепь IgM ИКО-ЗО В-клетки
Иммунологиче- Степень выраженности лимфоидной инфильтрации
ские маркеры больные молодого возраста больные среднего возраста
слабая инфильтрация выраженная и умеренная инфильтрация инфильтрация отсутствует слабая инфильтрация выраженная и умеренная инфильтрация инфильтрация отсутствует
Т-Клеточные: CD3 CD4 CD8 CD1c CD5 CD7 874+95 413+68 413+75 270+170 868+124 994±148 781+111 290+95 204±55 624+152 885±115 968+223 509+146 430+133 71+24 1007+292 1311+314 687+109 452+75 246+45 65+14 658+107 801±135 943+279 654+167 527+224 183+146 996+304 1119±388 997+122 697+73 458+79 81+14 1046+106 1144+168
В-клеточные: CD22 HLA /<-цепь IgM CD37 136+32 255+68 150+37 1503+312 125+17 361+49 190+42 562+127 71+14 379+62 108+40 1031+215 84+28 294+36 67+12 551+66 258+123 454+169 53+18 832±248 150+37 486+93 141+37 885+115
Активационные: CD38 RFB CD30 629+130 579+141 94±25 497+110 533+166 65+5 647+113 889+236 89+30 412+90 446+99 60+7 578+309 692+301 139±116 604+88 620+128 93±22
Линией неограниченные: 11Ь CD18 322+73 939+174 509+220 900+223 316+69 1443+288 218+55 897+176 181+71 1314+168 451+129 1551+187
Примечание: в таблице представлены абсолютные величины исследуемых маркеров.
различия эти не были статистически достоверны. При выраженной и умеренной лимфоидной инфильтрации экспрессия Т-клеточных маркеров была наименьшей, особенно значительно снижен уровень Т-супрессоров/киллеров (антиген CD8, р < 0,05). У больных среднего возраста в отсутствие лимфоидной инфильтрации опухоли отмечалось статистически достоверное повышение уровня клеток, содержащих антиген CD3 (зрелые Т-лим-фоциты), CD4 (Т-хелперы/индукторы) и CD5, по сравнению с таковыми показателями при слабой лимфоидной инфильтрации. При сравнении двух возрастных групп установлено, что у больных молодого возраста при наличии выраженной лимфоидной инфильтрации отмечалось статистически достоверное снижение (более чем в 2 раза) уровня Т-хелперных/индукторных клеток (антиген CD4). Вместе с тем экспрессия С08-положительных клеток (Т-супрессоры/киллеры) у больных молодого возраста при незначительной лимфоидной инфильтрации опухоли, наоборот, была в 2 раза повышена (р < 0,05).
У молодых больных из В-клеточных маркеров экспрессия антигенов //-цепи IgM и CD22 была понижена в отсутствие лимфоидной инфильтрации и повышена при ее значительной выраженности. В то же время уровень С037-положительных клеток
при резко выраженной лимфоидной инфильтрации был достоверно ниже, чем при незначительной лимфоидной реакции и ее отсутствии. Экспрессия антигена НЬА-Ог имела тенденцию к повышению у тех больных, у которых отсутствовала лимфо-плазмацитарная инфильтрация опухоли. У больных среднего возраста в отсутствие лимфоидной инфильтрации наблюдалось статистически достоверное повышение экспрессии всех В-клеточных маркеров, за исключением СЮ22-положительных клеток, по сравнению со слабо выраженной лимфоидной инфильтрацией опухоли, при которой отмечался наиболее низкий уровень клеток, характеризующих В-клеточный иммунитет. Сравнение экспрессии В-клеточных маркеров в обеих возрастных группах показало двукратное уменьшение С022-положительных клеток у молодых больных в отсутствие лимфоидной инфильтрации (р < 0,05). Вместе с тем у больных среднего возраста отмечено статистически достоверное снижение экспрессии СЭ37- и /¿-цепи ^М-положительных клеток при незначительно выраженной лимфоидной инфильтрации по сравнению с молодыми больными.
У больных молодого возраста экспрессия активационных маркеров имела тенденцию к повышению в отсутствие лимфоидной инфильтрации, тог-
Маркеры Слабая инфильтрация Выраженная и умеренная инфильтрация Инфильтрация отсутствует
Направление изменений уровня маркеров
повышен понижен повышен понижен повышен понижен
Т-клеточные:
CD3 + +
CD4 + +
CD8 + -f
GD1c
CD5 + +
CD7 + +
В-клеточные:
CD22 + +
HLA + +
/i-цепь IgM + +
CD37 + +
Активационные:
CD38
RFB
CD30 +
Линией неограниченные:
11Ь + +
CD18 + +
да как у больных среднего возраста выраженная лимфоидная инфильтрация опухоли сочеталась с повышением уровня активационных маркеров (антигены СЮ38, СБЗО и ЯРВ).
Экспрессия миеломоноцитарных маркеров и линией не ограниченных антигенов (СО 18 и СОПЬ) у больных молодого возраста повышалась в отсутствие лимфоидной инфильтрации опухоли. У больных среднего возраста наблюдалось статистически достоверное повышение уровня СО 18-положительных клеток по сравнению со слабо выраженной лимфоидной инфильтрацией. При сравнении изученных показателей в обеих возрастных группах не выявлено достоверных различий между ними, хотя у больных среднего возраста в отличие от молодых экспрессия С018-положительных клеток была повышена как при выраженной лимфоидной инфильтрации, так и в ее отсутствие (см. табл. 2).
Из анализа полученных данных (табл. 3, 4) видно, что у молодых больных в отличие от больных среднего возраста наиболее низкие уровни экспрессии показателей клеточного иммунитета наблюдаются при выраженной инфильтрации.
Таким образом, проведенное исследование позволило выявить различия в уровнях экспрессии показателей, характеризующих иммунологический фенотип мононуклеарных клеток периферической крови, у больных раком молочной железы в зависимости от возраста и степени выраженности лимфоидной инфильтрации опухоли. Известно,
что при злокачественных новообразованиях, в том числе раке молочной железы, происходит снижение показателей клеточного иммунитета, которое усиливается при прогрессировании опухолевого процесса [2 ]. Эти изменения наиболее выражены в группе пациентов, находящихся в пременопау-зальном и позднем постменопаузальном периодах, что, вероятно, связано с особенностями влияний нейроэндокринной регуляции на иммунологическую реактивность организма этих больных [4].
В литературе отсутствуют сравнительные данные о состоянии клеточного иммунитета крови в зависимости от степени выраженности лимфоидной инфильтрации у больных раком молочной железы молодого и среднего возраста. В связи с особенностями нейроэндокринной регуляции иммунной системы в разные возрастные периоды женщин пременопаузального возраста возможны различия в показателях иммунной и эндокринной систем организма, а следовательно, и в особенностях лимфоплазмоцитарной инфильтрации первичной опухоли. Последнее обстоятельство и обусловило проведение нами настоящего исследования. При этом данные некоторых авторов относительно связи выраженности лимфоидной инфильтрации опухоли с течением заболевания и прогнозом жизни у больных раком молочной железы крайне противоречивы |2 ]. Результаты настоящего исследования свидетельствуют о том, что у молодых больных в отличие от больных среднего возраста обнаружены
Маркеры Слабая инфильтрация Выраженная и умеренная инфильтрация Инфильтрация отсутствует
Направление изменений уровня маркеров
повышен понижен повышен понижен повышен понижен
Т-клеточные:
CD3 + +
CD4 + +
CD8 + +
CD1c + +
CD5 + +
CD7 + +
В-клеточные:
CD22 + +
HLA + +
/<-цепь IgM + +
CD37 + +
Активационные:
CD38 + +
RFB + +
CD30 + +
Линией не ограниченные:
11b + +
CD18 + +
максимальные уровни всех изученных нами иммунологических маркеров в отсутствие лимфоидной инфильтрации опухоли и минимальные их значения при ее значительной выраженности. Охарактеризовать этот факт с позиции влияния на прогноз заболевания у молодых больных раком молочной железы по сравнению с больными среднего возраста в настоящее время не представляется возможным. Полученные нами предварительные данные необходимо проанализировать ретроспективно относительно значения лимфоидно-клеточной инфильтрации в прогнозе заболевания, так как представленные в литературе данные противоречивы и не проводился их анализ с учетом исследуемых иммунологических показателей.
Выводы. 1. В отсутствие лимфоидной инфильтрации опухоли экспрессия Т-клеточных маркеров выше у больных молодого возраста.
2. При наличии выраженной лимфоидной инфильтрации у молодых больных отмечается статистически достоверное снижение уровня Т-хелпер-ных/индукторных клеток.
3. У молодых больных в отличие от больного среднего возраста наиболее низкие уровни экспрессии показателей клеточного иммунитета отмечаются при выраженной лимфоидной инфильтрации.
Л ИГЕРЛТУРЛ
1. Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к диффереицировочным антигенам лимфоцитов человека // Гематол. и трапсфузиол. — 1990.— № 8. — С. 4—7.
2. Добрынин П.А., Петров С.Л. Лимфоидно-клеточная инфильтрация злокачественных эпителиальных опухолей человека // Вопр. онкол. — 1988, № 5. — С. 534—538.
3. Полевая Е.Б., Ермилова В.Д., Кучин В.И. Морфологические и иммунологические изменения при внутриопухоле-вом введении л-интерферола у больных раком молочной железы // Вопр. онкол. — 1986. — № 12. — С. 19—22.
4. Шпарик Я.В., Билынский Б.Т. Влияние кортикостероидов и эстрогенов на функциональное состояние естественных киллеров // Пробл. эндокрипол. — 1990. — Т. 36, № 6. — С. 84—89.
5. David Page /., Simpson F. Pathology of preinvasive and excellent prognosis breast cancer // Curr. Op. Oncol. — 1990, № 2. — P. 1031 — 1037.
6. Hart veil Tangen М., Hulvorsen I. As the growth of breast carcinoma regulated by the axillary nodes? 11 Oncology. — 1983. — Vol. 9, № 3. — P. 239—244.
7. Hurlimann Saga P. Mononuclear cells infiltrating human
mammary carcinomas: immunohistochemical analysis with
monoclonal antibodies // Int. J. Cancer. — 1985. — Vol. 35, № 6. — P. 753—762.
8. Miescher S., Whiteside 'Г., Carrel S. et al. Functional properties of tumor infiltrating and blood lymphocytes in patients with solid tumor // J. Immunol. — 1986. — Vol. 136, № 5. — P. 1899—1907.
9. Vose B., Moore M. Supressor cell activity of lymphocytes infiltrating human lung and breast tumors // Int. J. Cancer. — 1979. — Vol. 24, № 5. — P. 579—585.
10. Wernicke М., Podesta A. Host defense factors, tumor aggresiveness and prognosis, associated with carcinomas of the breast // Hum. Pathol. — 1984. — Vol. 15, № 5. — P.423— 429.
Поступила 28.01.92.
