CC BY
25
- 'Рис.З , Рис.4
Рис. 3. Сравнительный характер модуляции антигена, определяемого МкАТ ИКО-80.
Здесь н на рис. 4: I — РИФ; с интактными клетками, И — РИФ. с МкАТ ИКО-80 после 6 ч преинкубации клеток с МкАТ; антигенположительные клет-КИ (в %).
4 —МкАТ ИКО-80, б — МкАТ А-50, s— МкАТ ИКО-33, г — МкАТ ВСА-16, д —МкАТ,ЛТ!,:е —МкАТ ИКО!87. '
Рис. 4. Сравнительный характер модуляции антигена, определяемого МкАТ ИКО-87.
а'—МкАТ ИКО-87, б— МкАТ 1—210, в — МкАТ ЛТ7, у — МкАТ ИКО-80. .
выявляют тот же самый или близкорасположенный эпитоп антигена' СД5, который определяют МкАТ ЛТ1, ВСА-16 и А-50, а МкАТ ИКО-87 определяют тот же .самый или близкорасположенный эпитоп антигена СД7. Таким, образом, МкАТ ИКО-87, распознавая антиген СД7, который является наилучшим маркером для иммунодиагностики Т-клсточного острого лимф,областного лейкоза,, и учитывая, что .он сильно экс- ’ прессирован на всех клетках больных Т-клеточными острыми Лимфобластными лейкозами и на клетках большинства больных Т-клеточной лимфо-саркомой и Т-кЛеточным хроническим' лимфобластным лейкозом, могут быть широко исполь-; зованы в диагностике лейкозов [6, 8] .
МкАТ ИКО-33, ИКО-§0 могут быть использованы как ранний .индикатор наличия' реакции трансплантат против хозяина при трансплантациях костного мозга [5], ~а также для определения иммунологического фенотипа лейкозных • клеток [2].- МкАТ ИКО-33, 'ИКО-80 вместе с МкАТ ИКО-87 могут применяться и как компонент иммуноконъюгатов для санации костного мозга, при аутотрансилантациях у больных Т-клеточными лейкозами и для удаления Т-клеток .из - аллогенных трансплантатов костного мозга.
ЛИТЕРАТУРА . '
\. Бем Э. Н. // Иммунологические методы.— М'., 1979.— с. 31. 1
2. Булычева Т. Н., Новикова H, Н.; Митерев Г. Ю. и др. // Гематол. и трансфузиол.—. 19,88,— № 12..— С. 45—47:
3. Филатов А. В., Бачурин П. С., Маркова Н. А. и др. // Экспер. онкол — 1989.— № 2.— С. 28—32г
4. Bernard. A., Boumsetl L. // Immunologe.— 1984.—
Vol. П.— P. 195—212.
5. Bierer В. E., Burakoff S. J., Smith B. /?.•■// Blood.—
• 1989.—Vol. 73,— P. 1359—1366. ;
6. Borowitz M. Dowell B. L., Boyett J. М., Falletta J. M. et al. Ц Ibid.— Л'985.— Vol. 65.— P. 785—788. ;
7. Hervé P., Flesch M.; Cahn J. Y. et al. .// Transplanta-' tion.— 1985.— Vol. 39,— P, 138—143.
8. Roper М., Crist W. М., Metzgar R. et al. // Blood.—
1983,— Vol. 61.— P. 830—834. ' , .
9. Vallera D. A., Youle R. J., Neville D. M. et- al. // J. Exp. Med.— 1982,— Vol. 155,— P. 949—95.4. •,
■ 4
Поступила 8.06.90
MONOCLONAL ANTIBOpiBS AGAINST COMMON T-CELL HUMAN ANTIGENS
I. A. Karpov, A. Yu, Baryshnikov, K. L. Chtmishkyan, Z. G. Kadagidze „
Monoctonal antibodies 1C0^80, ICO-33 and ICO-87 were' screened by flow cytometry, indirect immunofluorescence and competitive binding studies to determine their affinity for khpwn antigens on human blood cells. Antibody-antigen binding also was assayed by the “comoduTation” method: binding of test antibodies was determined after incubation of target cells with well-characterized. antibodies for specific antigens. It was’found that the ICQ-80 and ICO-33 antibodies bind to antigen CD5 and the ICO-87. antibody to antigen CD7, . These .3 monoclonal antibodies may be used to determine the fmmunological status of human subjects and for studying their immune response. -
© КОЛЛЕКТИВ ABTOROB, 1991
УДК 612.112.94.017.1.014.467 .
' 1 ' '’.Г'.. , ■ -
А. Ю. Барышников, 3. Г. . Кадагидзе, О. В. Короткова, Т. Н. Заботила, И. Г. Штефанчук, Е. Достот, М. Шмидт, С. Гутефангес, Л. Боумселл
МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ИКО-53 ПРОТИВ МОНОМОРФНЫХ HLA-АНТИГЕНОВ I КЛАССА
кН И И клинической онкологии, госпиталь Сан-Луи, Париж
Моноклональнь1е антитела (МКА) к моно-морфным детерминантам антигенов гистосовме-' стимости I класса (HLA-I) шйроко применяются при йммунофенртипировании опухолевых клеток у .больных лимфопролиферативными заболеваниями [1]. Цель настоящее работы — получение и характеристика МКА против мономорфных HJLA-антигенов I класса.
Материалы и iyt е т о ды. Экспрессию антигенов определяли, в непрямой реакции .иммунофлюоресценции (РИФ) на живых клетках, которую учитывали или на люминесцентном микроскопе «Leitz», или методом проточной цитофйю-орометрии на аппаратах FACStar или FACScarj^ Метод выполнения РИФ описан нами ранее [2]. При характеристике МКА методом конкурентной ингибиции 5-106 лимфоцитов периферической крови здоровых доноров инкубировал и с 300 мкл немеченых МКА ИКО-53 или МКА W6.32 против мономорф-ной детерминанты HLA-I в течение 30 мин при комнатной температуре. Клетки отмывали в PBS и инкубировали с 50 мкл МКА W6.32, меченных FITC, в течение 30 мин при комнатной температуре. После двухкратного' отмывания b . PBS учитывали .свечение на проточном цитофлюорометре.. Характеристику МКА методом двойной .метки проводили следующим-- образом. 5ХЮ6 лимфоцитов периферической крови здоровых доноров инкубировали, в течение 30 мин'при комнатной температуре с 50 мкл МКА ИКО-53. После отмывки клетки инкубировали в течение 30 мин при 4-°С с 50 мкл кроличьей антисыворотки против IgG мыши,
■ меченными FITC. После отмывки в PBS клетки инкубиро-
в.али в течение 30 мин при комнатной температуре с 50 мкл МКА W6.32, конъюгированными с биотином. Клетки отмывали и инкубировали в, течение 30 мин при; 4 °С с комплексом авидин—фикоэритрин. После двукратной отмывки в PBS определяли, методом проточной цитофлюорометрии гистограмму распределения окрашенных клеток. По оси абсцисс располагали клетки, окрашенные FITC, а по оси ординатч*- клетки, окрашенные фикоэритрином. Молекулярную массу антигена, распознаваемого МКА ИКО-53, определяли' радиойммуно-преципитацией из лизатов меченных I лимфоцитов периферической крови и клеток'Т-клёточной линии В13Ь. В качестве МКА ИКО-53 использовали асцитическую жидкость в раз-
2 Вестник ВОНЦ № 1
9
к?‘ /о' . /о* ю3 ю4 io° /о' /о2 ю3 ' ю4 . ю° ю' ■<? ю3 ю*
Рис: 1. Ингибация связывания МКА Ш6.32 МКА ИКО-53.
* . . .
По оси ординат — количество клеток; по оси асбцисс — интенсивность флюоресценции. Гистограммы распределения лимфоцитов: а окрашенных МКА \V6.32, б — преинкубированных с МКА \У6.32 и окрашенных МКА Ш6.32, в — преинкубированных с МКА ИКО«53 М окрашенных МКА Ш6.32.
ведении 1:100. В-работе использованы МКА W6.32’против мономорфных HLA-антигенов I класса [2].
Резул ьтатьг и обсуждение, Гибридому ИКО-53 получили при иммунизации мыши BALB/c с Т-лимфоцитами крови здоровых доноров. Гибридома стабильно продуцировала МКА IgG2a-H30THna. . ,
МКА ИКО-53 реагировали в РИФ, оцененной на люминесцентном микроскопе «Leitz», с 72,3±5,7 % мононуклеаров крови здоровых доноров, с 81,3±6,8 % гранулоцитов, 96,1± ±2,4 % Т-лимфоцитов, 87,9± 12,1 % не-Т-клеток, 63,9±14,2 % клеток костного мозга, 2б,6±6,9 % тимоцитов, с 80 % тромбоцитов, 100 % лимфоцитов больных хроническим лимфолейкозом. МКА ИКО-53 не взаимодействов'али с эритроцитами, реагировали с- Т-клеточной линией Jurkat, пре-В-клеточной линией Reh, миеломоноцитарными линиями ML-1 и HL-1.
' При исследовании экспрессии антигена методом проточной цитофлюорометрии обнаружили, что МКА ИКО-53 реагировали с 100 % лимфоцитов периферической крови здоровых доноров, 95 % гранулоцитов, 90 % тромбоцитов, а также с клетками Т-клеточной линии В12Ь, В-клеточной линии JY,- монобластоидной линией U932 и не реаги-
ю‘
103
10*
Ш
/0-
» tu Hl-' » i im
ul----- I I I Mllll I I I I 11,1
10°
10'
10*
103
IO4
■ V:- -- . . ' ■
Рио. 2. Гистограмма распределения лимфоцитов, окрашенных МКА ИКО-53, меченными ИГТС, и ^6.32, меченными фико-'эритрином.- : /
По оси ординатинтенсивность флюоресценции клеток,., окрашенных МКА ИКО*53, меченными Р1ТС; па оси абсцисс —интенсивность флюоресценции клеток, окрашенных МКА. \V6.32, меченными фикоэритрином/
ровали с В-клеточной линией БаисИ, не экспрессирующей. НЬА-антигены I класса.. Большой процент а'нтигенположительных клеток, выявленных проточной цитофлюорометрией по сравнению с . микроскопией, связан с большей чувствительностью метода.
Гистограммы распределения окрашенных МКА ИКО-53 клеток были похожи на гистограммы распределения клеток, связанных с МКА А^6.32 против НЬА-антигенов I класса. Предположили, что МКА ИКО-53 направлены против НЬА-анти-. генов I класса. Для доказательства этого были использованы методы конкурентной ингибиции, двойной метки и радиоиммунопреципитации.
Исследование МКА ИКО-53 методом конкурентной ингибиции показало, что преинкубация лимфоцитов периферической крови с МКА ИКО-53, так же' как и с МКА \V6.32, полностью блокирует связывание биотинилированных МКА
„в!* 1Я
Швт-Ш
’. ■ВВшНр
ШШШт
Шжтт
Рлс. 3. Радиоиммунопреципитация йз лизата клеток В12Ь, меченных 125Г. .
/ — ysi, 5 — МКА ИКО-53.
W6-.32 (рис. 1). Это свидетельствует о том, что MKÂ ИКО-53 распознают тот же самый или близкорасположенный эпитоп.
В опытах с двойной меткой лимфоциты периферической крови инкубировали "с МКА ИКО-53 и кроличьей антисывороткой против мышиных ' IgG, меченной FITC.. Затем клетки инкубировали . с биотинилированными МКА W6.32 и фико-эритрином. Все клетки расположились по оси ординат, так как связавшиеся с клетками. МКА ИКО-53 блокировали присоединение МКА W6.32 ' (рис. 2) . '. .
МКА ИКО-53, так, же как и МКА W6.32, иммунопреципитируют антиген с молекулярной массой 45 килодальтон (рис. 3). . /
; Таким, образом, сравнение МКА ИКО-53 и W6:32 показало, чтб они определяют одинаковый процент клеток на HLA-I-положительных клетках, дают одинаковые- гистограммы распределения окрашенных клеток, блокируют друг друга, иммунопреципитируют антиген с той же самой молекулярной массой. На'основании этого можно сделать вывод, что МКА ИКО-53 распознают тот же самый или близкорасположенный эпитоп мономорфных HLA-айти генов I класса.
ЛИТЕРАТУРА.
1. Барышников А. Ю., Кадагидзе 3. Г., МахоноваЛ. А.,
Тупицын H. Н. Иммунологический фенотип лейкозной
клетки.— М., .1989." " . -
2. Barnstable С. J.i 'Bodmer W. F., Brown G. et al. //
Cell.— 1978.- Vol. 14.— P. 9.
ICQ-53 MONOCLONAL ANTIBODIES TO . CLASS 1 :
MONOMORPHIC HLA ANTIGENS
A. Yu. Baryshnikov, . Z. G. Kadagidze, О. V. Korotkova,
T. N. Zabotina, I. ’ G. Shtefanchuk, H. Dastot, M. Shmidt, . .
' C. Gouttefangeas; L. Boumsell
ICO-53 monoclonal, antibodies (Mabs) to class I monomor-phic HLA antigens have been produced. Mabs were characterized in the tests of indirect immunofluorescence, competitive inhibition, double staining; the molecular mass of the antigen was determined’by radioimnfunoprecipitation. ICO-53 -Mahs: were compared with W6.32 Mabs to class I monomorphic HLA antigens. Histograms depicting the distribution of ICO-53 and W6.32 Mab-stained cells proved similar. ICO-53 Mab . binding with cells blocked the linking with W6.32 Mab. The mol. .mass of antigen is 45 kilodalton. ■ ICO-53 Mabs were concluded to recbgnize the same or closely located .epitop as W6.32 Mabs do. , T , -
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ УДК 616.006-04:616.988
Г. А. Фирсова, М. К. Мамедов, Е. М. Трещалина, С. В. Оже-релков, В. В. Хозинский, Л. А. Седакова, Б. Ф. Семене
СТИМУЛЯЦИЯ ОПУХОЛЕВОГО ПРОЦЕССА ПОД ВЛИЯНИЕМ ПЕРСИСТЕНТНОЙ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, Республиканский онкологический научный центр Минздрава Азербайджанской ССР, Баку, Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР, Москва
Степень прогрессии, и метастазирования зло-, качественных опухолей, характер клинического течения и прогноз онкологического заболевания во многом зависят от состояния иммунологи-
ческой реактивности организма [2, 7]. Учитывая способность других длительно протекающих соматических и инфекционных заболеваний оказывать отрицательное влияние .на иммунный статус [8], логично поставить вопрос о воздействии таких заболеваний на течение и прогноз опухйлевой болезни.
Большое значение в клинической онкологии ■ имеют интеркуррентные инфекции. Они являются распространенными осложнениями онкологических заболеваний и до сих пор являются причиной смерти этой категории больных [6]. При этом, несмотря на преобладающую роль бактериальных инфекций среди инфекционных осложнений [4, 9]-, вполне оправдан интерес онкологов к вирусным инфекциям (ВИ), составляющим более 90 % всей инфекционной патологии человека. Известно, что многие из ВИ у людей с нормальным иммунитетом зачастую протекают в суб-'клиническбй персистентной форме и остаются клинически нераспознанными. У онкологических больных отмечается более частая реактивация' и клиническая, манифестация таких ВИ. Это является следствием угнетения иммунитета, обусловленного как самой опухолью, та“к и специфическим противоопухолевым лечением [4, 6].
С другой стороны, длительное пребывание вируса в' организме закономерно приводит к развитию регуляторных и метаболических сдвигов, которые способны усугублять нарушения в системах, обеспечивающих гомеостаз. Помимо этого, многие вирусы оказывают прямое иммуноеу-прессивное воздействие на организм больного, что может стимулировать прогрессию опухоли по типу иммунного усиления [1]. ч
Цель данной работы — проверка этого предположения и определение характера влияния пер-. систентной ВИ в сравнении с иммунодепрес-'сивным воздействием на развитие злокачественной опухоли в. эксперименте.
Материал и методы. В работе использована вирусная инфекция, вызванная вирусом Тахиня (ВТ), относящимся к буньявирусам и обладающим выраженными имт: мунодепрессивными свойствами [10]. Вирус получали из мозга новорожденных мышей и готовили суспензию, содержащую 3-104 ЛДяо вируса для новорожденных мышей в 1 мл. Суспензию в объеме 0,3 мл вводили в хвостовую вену половозрелым мышам-гибридам ВОРГ. Как показано ранее [10], введение такого количества ВТ не вызывает гибели половозрелых мышей. Для контроля использовали ВТ, инактивированный нагреванием в течение 2 ч при 56 °С. В качестве иммунодепрессивного агента использован цикло-фосфан, введенный внутрибрюшинно, начиная с 4-х суток до прививки опухоли, в суммарной дозе 200 мг/кг (разовая доза 50 мг/кг ежедневно в течение 4 дней). Всем мышам _прививали лимфолейкоз L-1210 внутрибрюшинно по 10 000 . клеток в 0,2 мл среды 199 на мышь. Шдопытных мышей разделили на 6 групп (в каждой группе по 10 мышей): 1, 2 и 3-я группы получали ВТ соответственно за
3, 7 и 14 дней до прививки опухоли; 4-я группа — инактивированный ВТ за 7 дней до прививки опухоли; 5-я груп-ра — курс циклофосфана; 6-я группа — мыши с лейкозом, не получавшие никакого воздействия (контроль)'. Эффект определяли по средней продолжительности жизни мышей (СПЖ). Данные обрабатывали статистически методом, вариационной статистики [9].
"Результаты и обе уж д е н и е. Установлено (см.• таблицу), что при прививке лейкоза мышам, получившим ВТ (1— 3-я группа), наблюдалось достоверное уменьшение СПЖ (р<0,0&)
. в сравнении с контрольными мышами. Разница
Поступила 23.05.90
2
и
