CC BY
58
М. V. Mesentseva1, V. Е. Shcherbenko1, F. I. Ershov1, N. V. Kozachenko2,
V. B. Sirota2, S. S. Alzhanov3
IMMUNOLOGICAL EFFICIENCY OF ARGLABIN IN THERAPY OF BREAST CANCER
1 N. F. Gamalei RIEMRAMS, Moscow, Russia 2 Karaganda State Medical Academy MH RK, Kazakhstan 3 Institute of Phytochemistry MES RK, Karaganda, Kazakhstan
ABSTRACT
The data obtained in the course studies on interferon and cytokine system status in 18 patients with locally advanced breast cancer under clinical trials of Arglabin are indicative of high immune-corrective ability and clinical efficiency of the drug in question in the this group of patients.
Key words: breast cancer, immune-stimulators, Arglabin, interferons, cytokines.
М. В. Мезенцева1, В. Э. Щербенко1, Ф. И. Ершов1, Н. В. Козаченко2,
В. Б. Сирота2, С. С. Алъжанов3
ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ АРГЛАБИНА В ТЕРАПИИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
1 НИИЭМ им Н. Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва, Россия 2 Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан 3 Институт фитохимии МОН РК, г. Караганда, Казахстан
РЕЗЮМЕ
Данные, полученные в ходе исследования состояния системы интерферона и цитокинов у 18 больных с местнораспространенным раком молочной железы в рамках клинического испытания препарата арглабин, свидетельствуют о высокой иммунокорригирующей способности и клинической эффективности исследованного препарата у данной группы больных.
Ключевые слова: рак молочной железы, иммуномодуляторы, арглабин, интерфероны, цитокины.
ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время ярко выражена тенденция индивидуализации способов лечения рака молочной железы (РМЖ), основывающейся на учете биологических особенностей опухоли и гомеостатических механизмов организма. Не вызывает сомнения, что важное место принадлежит состоянию иммунной системы больных. Большое количество работ о РМЖ посвящены зависимости факторов состояния неспецифического клеточного и гуморального иммунитета от наличия злокачественного заболевания, его распространенности и возраста больных [2; 5].
По данным литературы, более высокая функциональная активность иммунной системы до и после лечения коррелирует с лучшим прогнозом при РМЖ и других опухолях [2; 3]. Развивающаяся опухоль молочной железы с применяемыми лечебными воздействиями (лучевая, химиотерапия, хирургическое вмешательство) усугубляют имеющиеся нарушения го-
меостаза [1; 2; 6]. Эти данные побуждают многих исследователей к дальнейшему изучению состояния иммунного статуса, разработке более эффективных схем лечения больных РМЖ с включением иммунотерапии, которая направлена на коррекцию показателей иммунной системы во время проведения специальной терапии и в отдаленные сроки после нее для уменьшения осложнений лечения и элиминации из организма оставшихся опухолевых клеток.
Повсеместное распространение получило применение иммуномодуляторов, которые могут оказывать избирательное действие на соответствующий компонент иммунной системы, но конечный эффект их влияния на иммунную систему всегда будет многогранным, что связано с главными регуляторами иммунитета — цитокинами [8]. Нет цитокинов со строго специфическим действием, следовательно, невозможно существование иммуномодулятора с абсолютно селективным конечным действием на иммунитет. При-
менение иммуномодуляторов в комплексном лечении онкологических больных является перспективным направлением клинической иммунологии и онкологии [7]. Широко используются иммуномодуляторы в сочетании с химиотерапией в лечении РМЖ и опухолей других локализаций [6].
Таким образом, можно считать, что в настоящее время наиболее перспективным является комбинированное применение иммунотерапии с хирургическим и химиолучевым лечением для профилактики развития супрессии, а также рецидивов и метастазов. Этим определяется актуальность поиска и применения эффективных иммуномодуляторов в лечении РМЖ, особенно отечественного производства.
Цель исследования — выявление влияния арглаби-на на показатели иммунной системы у больных РМЖ.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В исследование были включены 18 больных с впервые установленным диагнозом местнораспространенного рака молочной железы со стадиями заболевания ПА-В и ША-В, цитологически верифицированные. Средний возраст больных составил 61,1 год. По степени распространенности опухолевого процесса пациентки распределились следующим образом: стадия ПА (Т2ТМ0М0) — 6, стадия ПВ (ТгТ^Мо) и (Т3Т\[0М0)—4, стадия ША (Т^2М0) — 7, стадия ШВ (Т4К2М0)-1.
Проводился 1 курс неоадъювантной монохимиотерапии арглабином, через 10 дней — лучевая терапия, после которой — радикальная мастэктомия по Мад дену с последующей химиогормонотерапией.
Схема и режим введения арглабина: ежедневно в дозе 5 мг/кг массы тела внутривенно струйно, всего 15 введений. Арглабин вводился в виде 2%-ного раствора.
Положительный клинический ответ (полный ответ + частичный) после терапии арглабином получен у 4 пациентов, у 13 — стабилизация процесса и у 1 — прогрессирование.
Патоморфоз опухоли 3-й и 4-й степеней после лечения арглабином наблюдали у 6 больных, 1-й и 2-й степеней — у 6, опухоль без патоморфоза — у 3.
У этих больных РМЖ было проведено исследование состояния интерферонового (ИФН) статуса и ци-токинового профиля, играющих важную роль в оценке противоопухолевой защиты организма.
В исследованиях была использована стандартная методика определения ИФН-статуса биологическим методом, включающая определение способности к продукции ИФН-а и ИФН-у, уровня спонтанно продуцируемого и циркулирующего ИФН в плазме крови, а также чувствительности к иммуномодулирующим препаратам (ИФН, индукторам ИФН и препарату арглабин).
Исследование экспрессии генов ряда цитокинов (ИФН-а, ИФН-у, ИЛ-1р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-18 и ФНО-а) по активности их мРНЕС в мо-нонуклеарах периферической крови (МПК) проводили
с использованием методов обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР).
Количественное содержание цитокинов (ИФН-а, ИФН-у, ИЛ-1(3, ИЛ-2, ИЛ-4 и ФНО-а) в плазме/сыворотке и пробах цельной крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих тест-систем («Протеиновый контур», С.-Петербург, Россия).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Исследование ИФН статуса больных показало изначальное нарушение ряда показателей (табл. 1), в частности:
— снижение практически у всех пациентов способности к продукции ИФН-а, показателя функциональной активности В-лимфоцитов и состояния противовирусной защиты организма;
— снижение у 80 % обследованных способности к продукции ИФН-у, показателя функциональной активности Т-лимфоцитов и способности к активации иммунной системы;
— снижение чувствительности к иммуномодулирующим препаратам и препарату арглабин в 60-80 % случаев;
— повышение ИФН-ингибирующей активности сыворотки крови у 20-40 % пациенток.
Результаты исследования ИФН-статуса больных после химиотерапии одновременно с применением препарата арглабин показали:
1. Отсутствие у всех пациентов спонтанно вырабатываемого ИФН, показателя аутоиммунных процессов.
2. Повышение до нормы способности к продукции ИФН-а и ИФН-у в среднем у 40 % больных.
Таблица 1
Нарушения интерферонового статуса у больных раком молочной железы
Показатели ИФН-статуса Количество больных (п=18) с нарушениями ИФН статуса, %, После лечения
До лечения После лечения Улучше- ние Ухудше- ние
Циркулирующий ИФН в плазме крови 0 0 0 0
Спонтанно вырабатываемый ИФН 5 0 5 0
Продукция ИФН-а 94 83 40 27
Продукция ИФН-у 80 67 44 17
Чувствительность к препаратам ИФН-а 72 33 44 б
Чувствительность к ИФН-у 72 77 11 17
ИФН-а-ингибирующая активность плазмы крови 22 11 11 11
ИФН-у-ингибирующая актив» ность плазмы крови 40 40 22 22
Чувствительность к индукторам ИФН
Ридостан 40 17 40 17
Циклоферон 61 72 28 40
Амшссин 67 56 40 28
Чувствительность к препарату арглабин
Нативный 72 44 44 11
Гидрохлорид диметияамино-арглабина 83 50 50 17
3. Повышение чувствительности к препаратам ИФН-а и ИФН-у у 44 и 11 % больных соответственно.
4. Чувствительность к иммуномодулирующим препаратам улучшалась в 30-40 % случаев, а к исследуемому препарату арглабин — в 40-50 % случаев.
Описанные изменения ИФН-статуса являются положительным прогностическим признаком при терапии, что и соответствовало клиническим наблюдениям.
Следует отметить, что у 10-20 % обследованных больных обнаружено ухудшение некоторых показателей ИФН-статуса после лечения (см. табл. 1).
Для более подробного выяснения направления изменений в иммунном ответе больных РМЖ мы воспользовались методом оценки экспрессии генов ряда цитоки-нов по продукции их мРНК. В табл. 2 представлены данные о количестве здоровых добровольцев и больных РМЖ до начала лечения с выявленной мРНК цитокинов.
Показано, что при исследуемой патологии по сравнению со здоровыми добровольцами повышалось количество больных, у которых определялись мРНК ИФН-а,
Таблица 2.
мРНК цитокинов у здоровых добровольцев (и=40) и больных раком молочной железы (и=18) до и после лечения
мРНК Количество людей с выявленной мРНК цитокинов, % Количество больных после лечения, %
Цито- Здоровые Больные до Больные по- Изменения Появле- Исчезнове-
кинов добро- вольцы лечения сле лечения в продукции мРНК ние мРНК ние мРНК
ИФН-а 2 100 100 0 0 0
ИФН-у 30 22 22 22 11 11
ФНО-а 75 78 44 44 5 39
шыр 35 83 94 22 17 5
ИЛ-2 0 67 89 33 28 5
ИЛ-4 0 44 39 61 28 33
ИЛ-6 20 61 78 39 28 11
ИЛ-8 10 83 67 50 17 33
ИЛ-10 20 39 44 50 28 22
ИЛ-12 70 28 11 39 11 28
ИЛ-18 30 94 94 10 5 5
ИЛ-1р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 и ИЛ-18. При этом, по сравнению со здоровыми добровольцами, выявлено снижение количества пациентов с обнаруженной мРНК ИФН-у и ИЛ-12. Следует отметить, что у 78 % обследованных больных отмечена экспрессия гена ФНО-а на том же уровне, что и у здоровых добровольцев.
После лечения у тех же больных в среднем обнаружено снижение активности мРНК ФНО-а, ИЛ-8 и ИЛ-12, а также активация экспрессии генов ИЛ-1(3, ИЛ-2 и ИЛ-6.
При этом отмечено, что при положительном клиническом эффекте у большинства пациентов (7 женщин) определялась мРНК ФНО-а (70 % больных), а при отсутствии эффекта терапии ■— мРНК ФНО-а была выявлена лишь в 36 % случаев.
Также показано, что у всех больных с положительным клиническим эффектом при терапии препаратом арглабин (исключая пациентку с IV стадией заболева-
ния) отмечена экспрессия генов ИФН-у и ИЛ-2 (50 %) или только ИЛ-2 (50 %). При этом активность генов этих цитокинов у остальных пациентов отмечена лишь в 27 и 73 % случаев соответственно. Известно, что эти цитокины вырабатываются ТЫ -лимфоцитами, а подавление активности ТЫ со снижением выработки ГИБ-у или ИЛ-2 приводит к более тяжелому течению заболевания. Таким образом, терапия с применением арглаби-на, судя по этим показателям, может быть эффективна.
Отмечено, что при положительном клиническом эффекте терапии с применением препарата арглабин мРНК ИЛ-12 — цитокина, принимающего участие в развитии типа ТЫ иммунного ответа, — определялась у 60 % больных, что в 2 раза чаще, чем у остальных пациентов.
Проведенные исследования также показали, что мРНК ИЛ-1(3 определялась практически у всех обследованных больных после лечения. При этом отмечена активность мРНК ИЛ-6 и ИЛ-8 при положительном клиническом эффекте у 70 и 60 % пациентов соответственно, а при стабилизации состояния — у 80 и 70 % больных соответственно. Поскольку ИЛ-1(3, ИЛ-6 и ИЛ-8 являются медиаторами воспаления, полученные результаты могут указывать на недостаточность проведенной терапии. Об этом может также свидетельствовать факт активации экспрессии генов анти-воспалительных цитокинов (ИЛ-4 или ИЛ-10) у 70 % больных после лечения, т. к. известно, что увеличение синтеза именно этих цитокинов приводит к подавлению активности ТЫ со снижением выработки ЮТ-у и более тяжелому течению заболевания.
Одновременно с исследованием ИФН-статуса и оценкой экспрессии генов цитокинов по уровню синтеза их мРНК у тех же больных РМЖ определяли содержание цитокинов (методом ИФА) в сыворотке крови и при культивировании клеток крови (табл. 3).
При этом у пациентов до лечения были выявлены следующие изменения:
1. Обнаружено повышенное содержание в сыворотке крови (>50 пкг/мл) ИЛ-1(3, ИЛ-4 и ФНО-а у 30-40 % больных, а ИЛ-2 и ИФН-у—у 60-70 % пациентов.
Таблица 3
Количественная характеристика цитокинового статуса у больных раком молочной железы
Цитокин Количество больных (п=18) с повышенным содержанием цитокинов в сыворотке крови (>50 пкг/мл) или клетках крови, %
До лечения После лечения Улучшение* Ухудшение”
ИЛ-1р 40 33 17 17
ИЛ-2 67 56 28 28
ИЛ-4 28 28 17 б
ФНО-а 33 22 22 11
ИФН-а в сыворотке крови 0 0 0 0
ИФН-а спонтанный 0 0 0 0
ИФН-у в сыворотке крови 61 44 40 22
ИФН-у спонтанный 6 0 6 0
* Снижение количества цитокина.
** Повышение количества цитокина после лечения.
2. Выявлено снижение количества ИФН-а в сыворотке крови всех обследованных (<50 пкг/мл).
3. Следует отметить, что способность клеток крови больных к продукции ИФН-а и ИФН-у (спонтанная продукция этих цитокинов) была снижена практически у всех пациентов как до, так и после терапии.
После курса проведенного лечения отмечена нормализация или тенденция к нормализации количества исследованных цитокинов, определяемых в сыворотке крови, у 20-40 % обследованных женщин. При этом также показано, что у 10-30 % больных в сыворотке крови повышалось содержание цитокинов, что может свидетельствовать об активации иммуножомпетентных клеток.
При сравнении данных, полученных разными методами (биологический, ИФА и ОТ-ПЦР), был отмечен ряд закономерностей изменения синтеза некоторых цитокинов, соответствующих положительному или отрицательному клиническому эффекту (табл. 4).
Таблица 4
Изменение синтеза цитокинов при разном клиническом эффекте у больных раком молочной железы, леченных арглабином
Цитокин Этап синтеза цитокинов Клинический эффект
Положительный Отрицательный
ИФН-а мРНК т т
Продукция т 1
ИФН-у мРНК т 1
Продукция т 1.
ИФН-у + ИЛ-2 мРНК т 1
ШГ-1Р мРНК 1- т
Продукция N
ИЛ-4 мРНК т 1
Продукция N >н
ИЛ-12 мРНК т 1
ФНО-а мРНК т г
Продукция N
* Наличие или отсутствие мРНК цитокинов — показатель нарушений на уровне транскрипции, продукция — конечный этап синтеза цитокинов.
**л (активация), V (подавление), \ (активация/подавление), N — норма.
Показано, что механизм выработки ИФН-а у больных РМЖ был нарушен на посттранскрипционном уровне, у всех пациентов отмечено наличие мРНК ИФН-а, но в то же время обнаружено снижение продукции этого цитокина (биологический метод и ИФА). Выявленные нарушения восстанавливались после курса терапии препаратом арглабин или имели тенденцию к восстановлению у 7 (40 %) больных из 18 обследованных, что соответствовало положительному клиническому эффекту у этих пациентов.
Что касается изменений в синтезе ИФН-у и других исследованных цитокинов, у обследованных пациентов в процессе лечения отмечена тенденция
к нормализации их синтеза на уровне транскрипции (ОТ-ПЦР) и продукции (ИФА / ИФН-статус).
Именно у пациентов с клиническим улучшением (7 из 18 обследованных) в большинстве случаев отмечено восстановление механизмов синтеза следующих цитокинов (см. табл. 4):
— активация цитокинов, вырабатываемых ТЬ1-лимфоцитами, как ИФН-у, так и ИЛ-2 (обязательно — оба), а также — ИЛ-12, принимающего участие в развитии типа ТЫ иммунного ответа;
— антивоспалительного цитокина ИЛ-4 (обязательно — активность до или после терапии);
— ФНО-а, обладающего избирательной цитотоксичностью в отношении опухолевых клеток (обязательно — активность до или после терапии), а также — ИЛ-1(3, способного опосредовать развитие системного острофазного ответа и в значительной степени сходного с ФНО-а ло функциональной активности.
ВЫВОДЫ
Таким образом, данные, полученные в ходе исследования состояния системы интерферона и цитокинов у больных раком молочной железы в рамках клинического испытания препарата арглабин, свидетельствуют о высокой иммунокорригирующей способности и клинической эффективности исследованного препарата у данной группы больных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Баймахашева А. Н. Изменчивость иммунобиологического гомеостаза организма больных раком молочной железы в результате проведения полихимиотерапии //Материалы респ. конф. — Алматы, 2000. С. 105-106.
2. БалдуеваИ А. Иммунофенотип и функциональные характеристики Т-лимфоцитов у больных раком молочной железы в процессе комплексного лечения: Автореф. дис... канд. мед наук. — СПб., 1996. — 27 с.
3. Есенкулов А. Е., Байшева С. А. Клинико-патогенетические и иммуноэндокринологические аспекты рака молочной железы. — Алматы, 1996. — 268 с.
4. Кулъбачевская Н. Ю., Беневский А. И., Медведев С. В., Андрианов О. В. Некоторые аспекты иммунотерапии злокачественных опухолей // Труды Междунар. конф. — М., 2002. С. 174-175.
5. Рябых Т. П., Маливанова Т. Ф„ Литвинов С. В. и др. Зависимость частоты выявления антител к ММТУ у человека от факторов риска рака молочной железы // Вопр. онкологии. — 1996. — Т. 42, № 2. — С. 40-45.
6. Танатова 3. А., Сандыбаев М. Н., Эрайзер Л. А. и др. Иммунологический статус у больных раком молочной железы в Семипалатинском регионе // Материалы респ. конф. — Алматы, 2000. С. 137-139.
7. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения // Иммунология. — 2000. — № 5. — С. 4-7.
8. Ярилин А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии // Иммунология. — 1997. — № 5. — С. 7-14.
