CC BY
250
■ ■
39
Цель исследования. Оценка прямого цитотоксического действия на опухолевые клетки разных режимов УЗ-воздействия и в сочетании с препаратом ТФ.
Материал и методы. ТФ (окта-4,5-карбоксифталоцианин кобальта II) синтезирован в ФГУП ГНЦ «НИОПИК». УЗ-воздей-ствие на клетки проводили на ультразвуковой установке, специально разработанной для исследований in vitro. Суспензию клеток асцитного рака Эрлиха (106 кл./мл) в среде RPMI-1640 с 10 % фетальной сыворотки помещали в 20 мл флаконы и инкубировали 2 ч при температуре 37 °С в присутствии ТФ (10 7М, 10 6М, 10 5М) или без ТФ (контроль). Затем клетки отмывали от препарата и помещали в свежую питательную среду. УЗ-воздействие осуществляли в течение 3 мин через дно флакона, помещенного в воду (37 °С) как проводящую среду. Режимы УЗ-воздействия: режим 1 — с одного поля при частоте 2,64 или 0,7 МГц разной мощности; режим 2 — с двух полей с такими же характеристиками. Затем клетки инкубировали в СО2 термостате при 37 °С в течение 48 ч, после чего оценивали их жизнеспособность с помощью МТТ-теста.
Результаты. Установлено, что УЗ-воздействие с одного поля частотой 2,64 МГц и мощностью 1,3 Вт/см2 не влияет на жизнеспособность опухолевых клеток. При увеличении мощности в диапазоне 1,7—3,3 Вт/см2 наблюдается гибель 80 % клеток. УЗ-воздействие с 1 поля при частоте 0,7 МГц и мощности в диапазоне
0,9-2,3 Вт/см2 не изменяет жизнеспособность клеток. Воздействие на клетки УЗ с 2 полей (1-е поле — 2,64 МГц, 1,3 Вт/см2, 2-е поле — 0,7 МГц, 0,9-2,3 Вт/см2), каждое из которых не обладает прямым цитотоксическим действием, также не влияло на жизнеспособность клеток. Если клетки перед УЗ-воздействием инкубировали в течение 2 ч в среде с разными концентрациями ТФ, то число жизнеспособных клеток снижалось в прямой зависимости от концентрации ТФ: на 40 % при 10 7М ТФ, на 60 % при 10 6М и на 80 % при 10 5М. Без УЗ-воздействия ТФ в исследованном диапазоне концентраций не влиял на жизнеспособность клеток.
Выводы. Таким образом, ТФ является сильным соносенсибилизатором, значительно усиливающим прямое повреждающее действие УЗ на клетки.
Работа выполнена в рамках НТП «Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов и средств диагностики и лечения злокачественных и других заболевании».
Е. Л. Членова, Л. М. Михайлова, Н. Ю. Кулъбачевская, И. Б. Меркулова, О. И. Коняева, Н. П. Ермакова,
Т. В. Абрамова
Влияние ультразвука на токсичность карбоплатина
ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
Цель исследования. Изучение влияния ультразвука УСДТ-установ-ки, предназначенной для сонодинамической терапии онкологических больных, на токсичность противоопухолевого препарата карбоплатина.
Материал и методы. Исследования проведены на 160 неинбред-ных крысах-самцах массой 250-300 г. Карбоплатин (РИагша-ыа&Цр^оЬп) применяли внутривенно однократно и многократно (3 раза) ежедневно в диапазоне доз 30-120 мг/кг. Суммарные дозы при многократном введении препарата соответствовали МПД и */4 МПД при однократном применении карбоплатина. Через 15-20 мин после введения препарата крысы подвергались воздействию ультразвука (УЗ) в терапевтическом фиксированном режиме под водой (в ванне) с двух полей: 1-е — 0,88 МГц мощностью 1 Вт/см2; 2-е — 2,7 МГц мощностью 2 Вт/см2. Температура воды 34,5-35,0 °С. Время воздействия во всех исследованиях 10 мин. После многократного воздействия проводили функциональную и гистологическую оценку влияния карбоплатина в комбинации с УЗ на органы и ткани животных.
Результаты. Установлено, что УЗ не изменяет переносимости животными карбоплатина, а именно: не увеличивает количество павших животных, не влияет на величину токсических доз карбоплатина, не изменяет сроков гибели и картину интоксикации у животных. УЗ-воздействие на животных, получавших многократно карбоплатин в МПД, не усиливает его гематологической токсичности (лейко-и тромбоцитопении) и функциональных изменений в почках (клетки крови и белок в моче). Однако УЗ усиливает у животных морфологические проявления нефро- и гепатотоксического действия карбоплатина. УЗ-воздействие на животных, получавших многократно карбоплатин в дозе */4 МПД, не оказывает влияния на морфофункциональные изменения в органах и тканях крыс, вызванных препаратом.
Выводы. УЗ не увеличивает токсичности карбоплатина по критериям острой токсичности. УЗ усиливает морфологические изменения в печени и почках, не влияя на изменения функционального состояния систем и органов животных, вызванные препаратом. Зафиксированные морфофункциональные изменения после применения карбоплатина и его комбинации с УЗ носят обратимый и дозозависимый характер.
Исследование поддержано Правителъством Москвы.
-Q-
АРГЛАБИН
УДК 615.277.3.038«Арглабин»
С. М. Адекенов
Оригинальный препарат арглабин. Перспективы фармакологических исследований и применение в клинике
Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан
Противоопухолевые препараты растительного происхождения находят широкое применение в комплексной химиотерапии при лечении гематобластозов и многих солидных опухолей, таких как рак легкого, молочной железы, саркома. Во флоре Казахстана насчитывается более 6 тыс. видов растений, из которых лишь 150 используются в медицине.
В Институте фитохимии проведено химическое исследование экстрактов 160 видов растений Казахстана с одновременным скринингом на биологическую активность. Перспективными для дальнейшего углубленного изучения оказались 52 вида, экстрактивные вещества которых проявили биологическую активность. Сравнительно выраженной противоопухолевой активностью среди них обладал экстракт наземной части эндемичного растения полыни гладкой (Artemisia glabella Kar. et Kir.) [12]. Химическое изучение полыни гладкой показало содержание в его цветочных корзинах, листьях и бутонах сесквитерпеновых лактонов (арглабин (1), арголид (2) и дигидроарголид (3)) [1; 19], флавоноидов (цирсилинеол, кастицин,
лютеолин, бонанзин, триптофан, пектолинаригенин) [14], эфирного масла (1,8-цинеол, линалоол, терпинеол-4, а-терпинеол) [7], аминокислот (глутамин, аргинин, глутаминовая кистота, пролин, тирозин, триптофан, лейцин), углеводов (глюкоза, рамноза, дульцит), феноло-кислот (галловая, кофейная, салициловая, коричная) [9].
(1) (2) (3)
По результатам биоскрининга ряда сесквитерпеновых лактонов установлены выраженные противоопухолевые свойства арглабина (1), что обусловило выбор его в качестве источника для разработки нового лекарственного препарата [2]. На следующем этапе как для исследования зависимости структура — биологическая активность, так и для поиска новых биологически активных соединений нами получено 37 производных арглабина.
№1/том 5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
-Q-
Скрининг арглабина и его производных показал, что сравнительно выраженной противоопухолевой активностью в отношении большинства перевиваемых штаммов обладают эпоксиарглабин (4) и гидрохлорид диметиламиноарглабина (5), для которых степень ингибирования роста перевиваемых опухолей составляет от 36 до 88 % [3].
...\ Ме
N-Me
(4)
(5)
Для дальнейших исследований нами выбран гидрохлорид диметиламиноарглабина (5), обладающий высокой противоопухолевой активностью и являющийся водорастворимым веществом. На его основе разработан оригинальный противоопухолевый препарат арг-лабин [4-6; 20].
Противоопухолевые, токсические и фармакологические свойства препарата арглабин в эксперименте исследованы в 1982-1991 гг. на базе Казахского научно-исследовательского института онкологии и радиологии МЗ РК г. Алматы [15; 21].
В период с 1994 по 1999 г. препарат арглабин прошел 3 фазы предрегистрационных клинических испытаний на базах клиник Казахского научно-исследовательского института онкологии и радиологии, Карагандинского областного онкологического центра, Актю-бинского онкодиспансера.
I фаза клинических испытаний проведена у 53 больных с III-IV стадией злокачественного процесса по 2 локализациям путем внутривенного введения препарата; II фаза — у 72 больных с IV стадией опухолевого процесса различной локализации. При этом объективный положительный эффект получен у 44 % больных, субъективный — у 28 %. Сравнительно выраженный эффект препарат показал в случае первичного рака печени, молочной железы, легких и яичников. В процессе проведения I-II фазы испытаний выявлено, что препарат не вызывал токсических иммунодепрессивных реакций и не влиял на кроветворение.
В рамках III фазы клинических испытаний изучение противоопухолевой активности препарата проведено у75 больных раком печени, легкого и молочной железы.
По итогам доклинических исследований и результатам 3 фаз клинических испытаний препарат арглабин зарегистрирован в Республике Казахстан в качестве противоопухолевого средства (регистрационное удостоверение РК-ЛС-5 №003950 от 12.1999 г.). Решением Коллегии Агентства Республики Казахстан по делам здравоохранения № 10/1 от 22.12.2000 г. препарат арглабин включен в «Список основных жизненно важных лекарственных средств и средств дезинфекции Республики Казахстан». В 2005 г. арглабин прошел перерегистрацию в качестве противоопухолевого средства и Приказом Министерства здравоохранения РК повторно включен в «Список основных жизненно важных лекарственных средств Республики Казахстан».
За период с 2000 по 2006 г. проведен широкий комплекс экспериментальных и клинических исследований противоопухолевого препарата арглабин.
В РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (Москва) проведено экспериментальное изучение радиосенсибилизирующего действия препарата арглабин при облучении перевивных опухолей мышей, а также при локальном облучении кожи, рассматриваемой как пример нормальной ткани. В экспериментах использовано три вида опухолей: карцинома легких Льюис, солидная карцинома Эрлиха линии ELD и меланома В16. Установлено, что арглабин усиливает лучевое поражение опухолей, что приводит к значительному уменьшению оптимальной дозы облучения. В то же время под влиянием препарата не усиливаются лучевые реакции нормальных тканей, т. е. он может рассматриваться как средство, обладающее радиосенсибилизирующим действием на опухоли [8].
Эффективность применения арглабина в клинической практике также подтверждена в РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. Клинические испытания, проведенные на 20 больных местнораспространен-
ным раком молочной железы, показали, что арглабин обладает выраженным радиосенсибилизирующим действием, что приводит к увеличению частоты полных регрессий опухоли до 20 % в сравнении с5%в контроле. При этом достоверно повышается вероятность лучевого патоморфоза в опухоли III-IV степени [10].
В Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии (НИИЭМ) им. Н. Ф. Гамалеи РАМН (Москва) исследовано влияние препарата арглабин (гидрохлорида диметиламиноарглабина (5)) и арглабина нативного (1) на интерфероновый и цитокино-вый статус in vitro. Выявлено, что у относительно здоровых добровольцев применение арглабина в дозе 4 мкг/мл может вызывать индукцию генов цитокинов, вырабатываемых ТЫ- и ТИ2-лим-фоцитами, т. е., по-видимому, препарат может быть использован для профилактики ряда заболеваний. Кроме того, выявлено, что использование арглабина и арглабина нативного (4 мкг/мл) у больных ревматоидным артритом может приводить к активации генов цитокинов, вырабатываемых ТЫ- и ТИ2-лимфоцитами, а также фактора противоопухолевой защиты NF-каппаВ и супрессорного цитокина TGF-p. Данные, полученные в условиях in vitro, подтвердились и при проведении клинических испытаний арглабина в режиме монотерапии у 18 больных местнораспространенным раком молочной железы. Установлено, что препарат обладает определенным цито-токсическим действием, сопоставимым с воздействием стандартной полихимиотерапии в режиме CMF, что подтверждается лекарственным патоморфозом опухоли. При этом доказано, что арглабин восстанавливает механизм синтеза следующих цитокинов: ИФН-у, ИЛ-
2, антивоспалительного цитокина ИЛ-4, ФНО-а, обладающего избирательной цитотоксичностью в отношении опухолевых клеток, а также ИЛ-1Р, способного опосредовать развитие системного острофазного ответа и в значительной степени сходного с ФНО-а по функциональной активности. Полученные данные свидетельствуют
о высокой иммунокорригирующей способности арглабина у больных местнораспространенным раком молочной железы [11].
При использовании препарата арглабин в комбинации с химиотерапией у 34 инкурабельных и ослабленных больных (индекс Кар-новского 60-70 %) при выраженном прогрессировании процесса и устойчивости к стандартной химиотерапии профессором Альбертом Шеллером (Leonardis Klinik, г. Бад-Хайльбрун, Германия) был достигнут положительный эффект в 44 % случаев. Полученные результаты свидетельствуют о химиосенсибилизирующей способности арглабина. Арглабин является препаратом выбора у ослабленных и инкурабельных больных, когда другие виды стандартной противоопухолевой терапии неприемлемы [18].
При сочетании лучевой терапии с арглабином у больных местнораспространенным раком молочной железы отмечается позитивный эффект арглабина, проявляющийся как в ограничении интенсификации ПОЛ, так и в снижении степени эндотоксемии. Таким образом, полученные данные показали, что в крови больных местнораспространенным раком молочной железы наблюдается синхронное усиление окислительной модификации белков и активации перекисного окисления липидов. Данные изменения сохраняются или нарастают на фоне лучевой терапии, тогда как арглабин ограничивает интенсивность окислительного стресса в крови больных [16].
На 40 больных с хроническими гемобластозами изучена возможность применения арглабина в режиме монотерапии и в сочетании с химиотерапией. Установлено, что арглабин оказывает положительный эффект при лечении хронических лимфопролиферативных заболеваний, более выраженный при комбинации с цитостатиками. Применение арглабина сопровождается положительными сдвигами показателей иммунного статуса, коагулограммы, улучшением качества жизни больных [17].
В 2004 г. арглабин зарегистрирован в качестве противоопухолевого средства в Кыргызской Республике и Республике Таджикистан, а в 2006 г. — в Российской Федерации и Грузии. Проведена первичная экспертиза препарата в Государственном фармакологическом центре Министерства здравоохранения Украины, материалы переданы для проведения специализированной оценки.
В марте 2005 г. в рамках IV Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» на базе ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина состоялся сателлитный симпозиум «Экспериментальные и клинические аспекты применения про-
№1/том 5/2006
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
тивоопухолевого препарата арглабин». Решением симпозиума стало признание создания нового оригинального противоопухолевого препарата арглабин и рекомендация его широкого применения в Российской Федерации после регистрации в установленном порядке, а также проведение широкомасштабных многоцентровых клинических исследований препарата в лечении рака предстательной железы, мочевого пузыря, яичников, шейки и тела матки, легкого и пищевода при сочетании с химио- и лучевой терапией.
Во исполнение решения вышеуказанного симпозиума на базе Карагандинского областного онкологического центра проводятся клинические испытания препарата арглабин в качестве радиомодификатора у больных раком пищевода и шейки матки в комбинации с лучевой терапией динамическим фракционированием дозы. Исследуются непосредственный клинический эффект, особенности динамики регрессии объема опухоли и результаты лечения в динамике.
На базе Национального центра онкологии МЗ Кыргызской Республики (Бишкек) проводятся клинические испытания препарата арглабин у больных раком шейки матки.
На базе Центра молекулярно-генетической диагностики А. Х. Сабирова (Тюмень) запланированы испытания арглабина при лечении рака печени и у больных с мутациями гена K-ras. Известно, что при патологических изменениях печени значительное количество нарушений имеют гены группы ras, в большей степени это касается гена K-ras, имеющего высокую степень встречаемости внутри этой группы. Нарушения онкогена K-ras встречаются примерно в V3 случаев при солидных опухолях. Так, при опухолях толстой кишки и аденокарциноме поджелудочной железы более 90 % мутаций приходится на ген K-ras. В большинстве опухолей с дефектным онкогеном K-ras выявляются точечные мутации в 12-м кодоне. Мутации гена K-ras обычно происходят на более ранних стадиях онкогенеза, чем мутации в гене р53, что в сочетании с высокой чувствительностью метода, основанного на ПЦР, создает возможность доклинической диагностики заболевания, что, несомненно, положительно скажется на эффективности лечения. Представляет значительный интерес оценка эффективности использования арглабина при лечении рака печени в сравнении со стандартными методиками лечения, а также определение, является ли данный препарат таргетным для данной патологии.
Перспективным направлением в плане применения арглабина в клинической практике считается проведение рандомизированных клинических испытаний при раке молочной железы по международным стандартам с привлечением мониторов, обладающих сертификатом FDA.
Кроме того, в Институте фитохимии проводятся работы как по выявлению других видов биологической активности арглабина, так и по получению его новых производных с целью поиска соединений, обладающих более выраженными противоопухолевыми свойствами. Так, изучено противовирусное действие арглабина в отношении вируса иммунодефицита человека и вируса гриппа А. Установлено, что арглабин препятствует заражению вирусом иммунодефицита клеток перевиваемой линии лимфоцитов человека. При этом выраженный эффект чаще наблюдался при предварительном внесении арглабина, чем при одновременном внесении лактона и вируса. На культуре фи-бробластов легких эмбриона человека доказано, что арглабин проявляет 100%-й ингибирующий эффект в отношении вируса гриппа А. В параллельных исследованиях доказано снижение репродукции вируса геморрагической лихорадки и вируса полиэдроза ядер на 90-98 % при совместной инкубации указанных вирусов с арглабином на перевиваемых культурах клеток [13].
В связи с тем что для многих сесквитерпеновых лактонов характерно наличие выраженных антибактериальных и противогрибковых свойств [22], нами изучалось аналогичное действие арглабина и его производных. Антибактериальное действие изучали для арглабина и его 6 производных. Установлено, что сравнительно высокой антибактериальной активностью среди изученных производных обладает дибромкарбенпроизводное арглабина (6), оказывая сопоставимое с препаратами сравнения действие. Остальные производные показали слабую и умеренно выраженную антибактериальную активность.
Противогрибковая активность арглабина превосходит эффект препарата сравнения нистатина, а его изученные производные обладают менее выраженными противогрибковыми свойствами.
При изучении фармакологических свойств арглабина на модели экспериментального хронического эндометрита установлены его выраженные противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства. По влиянию на органы иммунной системы арглабин оказывает сопоставимое с тималином действие, а по некоторым показателям превосходит его.
Экспериментальные данные подтвердились и в условиях клиники. При изучении иммунологической эффективности арглабина в терапии рака молочной железы установлено его выраженное иммунокорригирующее действие.
В результате присоединение атомов хлора по обеим двойным связям в молекуле арглабина приводит к получению бисдихлорме-тиленового производного (7), обладающего выраженной противоопухолевой активностью.
.В г
(7)
(8)
В ходе скрининга установлено, что новое производное (7) значительно превосходит по цитотоксической активности исходный лактон (1). Следовательно, бисдихлорметиленовое производное арглабина может рассматриваться как перспективное соединение для дальнейших углубленных исследований и, в конечном итоге, для разработки нового высокоэффективного противоопухолевого препарата. Помимо выраженных цитотоксических свойств, указанное производное арглабина обладает выраженными фагоцитозсти-мулирующими и противотрихомонадными свойствами.
Также у (7) проявляются умеренные противотрихомонадные и противогрибковые свойства. При присоединении атомов брома вместо атомов хлора получено производное (8), обладающее выраженной противогрибковой активностью.
В целом в результате химической модификации сесквитерпено-вого лактона арглабина получен ряд производных, обладающих различными видами биологической активности: антибактериальной, противогрибковой, противовоспалительной, анальгетической, про-тивопаразитарной и др.
Результаты исследований, связанных с влиянием различных функциональных групп в молекуле арглабина и его производных на их биологическую активность, представлены на рис. 1.
Реакции по эпоксидному циклу (раскрытие или его инверсия) приводят к значительному снижению противоопухолевой активности. Эпоксидирование по олефиновой двойной связи вызывает значительное повышение противоопухолевой активности. Гидрокси-лирование по двойной связи а-метилен-у-лактонного цикла приводит к снижению биоактивности. Интерес представляют амино-и диалкилфосфонатные производные арглабина. Так, введение аминогруппы по двойной связи лактонного цикла приводит к получению водорастворимых производных. В ряду данных производных получены сравнительно эффективные соединения с противоопухолевой активностью. Одновременно аминопроизводные обладают выраженной иммуномодулирующей, умеренной противовоспалительной, противогрибковой и антибактериальной активностью. Введение диалкилфосфонатной группы вызывает снижение противоопухолевой активности, однако появляются выраженные противовоспалительные и слабые антибактериальные свойства. Особый интерес представляют производные, полученные в ходе реакций одновременно по нескольким функциональным группам, как, например, (7) и (8).
Инверсия эпоксидного цикла или его раскрытие приводит к снижению противоопухолевой активности
-о-
Введение аминогруппы позволяет получить водорастворимые производные. Однако противоопухолевая активность при этом зависит от скорости гидролитического дезаминирования. Сравнительно легкое дезаминирование наблюдается в ряду четвертичных аммониевых солей, которые и обладают самой высокой противоопухолевой активностью. Также аминопроизводные
иммуномодулирующей, противовоспалительной, противогрибковой и антибактериальной активностью
Введение диалкилфосфонатной группы снижает биологическую активность. Однако при увеличении длины алкильных заместителей противоопухолевая активность незначительно повышается, что связано с увеличением липофильности
Одновременно появляется выраженная противовоспалительная и слабая
Рис. 1. Влияние различных функциональных групп в молекуле арглабина на его биологическую активность
Таким образом, сесквитерпеновый лактон арглабин (1), выделенный из надземной части полыни гладкой (Artemisia glabella Kar. et Kir.), является не только источником для получения одноименного противоопухолевого препарата, но и перспективен для создания на основе его производных оригинальных лекарственных препаратов, обладающих широким спектром терапевтической активности.
Литература
1. Адекенов С. М., Мухаметжанов М. М., Куприянов А.Н., Кагарлицкий А. Д. Арглабин — новый сесквитерпеновый лактон из Artemisia glabella Kar. et Kir. // Химия природных соединений. — 1982. — № 5. — С. 655.
2. Адекенов С. М., Рахимов К. Д., Айтуганов К. А., Кагарлицкий А. Д. О противоопухолевой активности сесквитерпеновых лактонов // Сборник работ по химии. — Алма-Ата, 1988. — Вып. 11. — С. 112-115.
3. Адекенов С. М., Рахимов К. Д., Айтуганов К. А., Верменичев С. М. Противоопухолевые соединения на основе арглабина // Сборник работ по химии. — Алма-Ата, 1990. — Вып. 12. — С. 78-83.
4. Адекенов С. М. Способ получения гидрохлорида 1р, 10р-эпок-си-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированно-го — противоопухолевого средства арглабин лиофилизированный и устройство для его осуществления. Европейский патент Patent WO 98/28303 от 02.07.98 г. (РСТ/KZ 97/00006).
5. Адекенов С. М. Способ получения гидрохлорида 1р, 10р-эпок-си-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированно-го — противоопухолевого средства арглабин лиофилизированный и устройство для его осуществления. Патент КНР № 97549 от 12.11.02 г.
6. Адекенов С. М. Способ получения гидрохлорида 1 р, 10р-эпок-си-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного, противоопухолевого средства арглабин из растительного сырья, устройство для экстрагирования растительного сырья. Патент РК №10913 от 07.01.04 г.
7. Атажанова Г. А., Дембицкий А. Д., Жижин Н. И., Адекенов С. М. Химический состав эфирного масла полыни гладкой — Artemisia glabella Kar. еt Kir. // Химия природных соединений. — 1999. — № 2. — С. 193-196.
8. Вайнсон А. А., Мещерикова В. В., Касаткина Н. Н. Изучение радиомодифицирующего действия препарата арглабин при локальном облучении перевивных опухолей и нормальной ткани (кожи) мышей // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 32-34.
9. Итжанова X. И. Фармакогностическое изучение полыни гладкой и разработка лекарственной формы арглабина: Автореф. дис... канд. фарм. наук. — Томск, 2003. — 27 с.
10. Манзюк Л. В., Ткачев С. И., Иванов С. М. и др. Предоперационная химиолучевая терапия местнораспространенного рака молочной железы с использованием арглабина в качестве радиосенсибилизатора // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 68-71.
11. Мезенцева М. В., Щербенко В. Э., Ершов Ф. И. и др. Иммунологическая эффективность арглабина в терапии рака молочной железы // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 64-67.
12. Мухаметжанов М. М., Адекенов С. М., Турмухамбетов А. Ж. и др. О противоопухолевой активности экстрактивных веществ из растений семейства сложноцветных. В кн.: Проблемы рационального использования лекарственно-технических растений Казахстана.
— Алма-Ата: Наука, 1986. — С. 230-232.
13. Невинский Г. А. Антивирусные свойства арглабина. В кн.: Клинические аспекты применения противоопухолевого препарата арглабин. — Караганда, 2002. — С. 213.
14. Прибыткова Л. Н., Адекенов С. М. Флавоноиды растений рода Artemisia. — Алматы: FbrnbiM, 1999. — 180 с.
15. Рахимов К. Д. Фармакологическое и доклиническое изучение нового противоопухолевого препарата арглабин // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 15-17.
16. Сирота В. Б., Муравлева Л. Е. ПОЛ-АОЗ и ОМБ крови больных раком молочной железы при комбинированной терапии с аргла-бином // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 80-84.
17. Тургунова Л. Г, Досмагамбетова Р. С., Умбеталина Н. С. Применение арглабина в терапии гемобластозов // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 96-99.
18. Шеллер А. Арглабин в лечении диссеминированных опухолевых процессов // Рос. биотер. журн. — 2005. — Т. 4, №2. — С. 62-63.
19. Adekenov S. M., Rakhimova B. B., Dzhazin K. A. et al. Sesquiterpene lactones from Artemisia glabella // Fitoterapia. — 1995.
— Vol. LXVI, No. 2. — Р. 142-146.
20. Adekenov S. M. Method and device for production of lyophilized hydrochloride-1 p,10p-epoxy-13-dimethylaminoguaia-3(4)-en-6,12-olide. Patent USA 6,242, 617,B1, Jun.5.2001.
21. Arglabin. Its structure, properties and usage. — Virginia, USA: Virginia Beach 1997. — 38 p.
22. Pieman A. K. Biological Activities of Sesquiterpene Lactones // Biol. System. Ecol. — 1986. — Vol. 14, No. 3. — Р. 225-281.
Поступила 10.02.2006.
А. Ж. Абилъдаева, С. Б. Ахметова, С. М. Адекенов Кинетические параметры арглабина в составе стандартных и кислотоустойчивых капсул
Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан
Цель исследования. Изучить динамику концентрации арглабина в сыворотке крови после введения в составе стандартной и кислотоустойчивой капсул.
Материал и методы. В условиях in vivo определяли устойчивость сесквитерпенового лактона арглабина (АН) в зависимости от типа лекарственной формы: стандартные капсулы и кислотоустойчивые капсулы. Нами проведен сравнительный анализ концентрации АН в сыворотке крови. В эксперименте использовали 6 беспородных собак массой 10-15 кг. 3 особям с пищей вводили арглабин в обычной капсуле, 3 собакам — в кислотоустойчивой капсуле. В обоих случаях использовали капсулы с содержанием действующего вещества из расчета 10 мг/кг индивидуально для каждой собаки. Через 1 ч животных фиксировали и из бедренной вены брали кровь в объеме 5 мл. Сыворотку отделяли центрифугированием при 3000 об./мин в течение 15 мин. Экстракцию арглабина из сыворотки крови проводили по следующей методике: сыворотку обрабатывали холодным этанолом в соотношении 1:5 (сыворотка/этанол) для осаждения белков, тщательно перемешивали в течение 15 мин, центрифугировали 15 мин при 3000 об./мин, забирали органическую фракцию, обрабатывали хлороформом в соотношении 1:1, тщательно перемешивали в течение 15 мин, центрифугировали в тех же условиях. Отбирали хлороформно-спиртовую фракцию, фильтровали ее и проводили анализ на газожидкостном хроматографе.
Результаты. Концентрация АН, введенного в состав в кислотоустойчивой капсулы в сыворотке крови животных через 1 ч после введения, в 3 раза (3,05±0,15 мкг/мл) превосходила концентрацию АН в стандартной капсуле (1,06±0,12 мкг/мл). Через 2 ч концентрация АН в кислотоустойчивых капсулах в крови составила 1,28±0,1 мкг/мл, тогда как в стандартных капсулах — 0,48±0,12 мкг/мл, т. е. в 2,68 раза превосходила концентрацию последнего. Спустя 3 ч после введения АН не был обнаружен в сыворотке крови при обоих вариантах введе-
№1/том 5/2006
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ния. По-видимому, имеет место перераспределение АН из центральной камеры в периферическую. Через 6 ч концентрация АН в кислотоустойчивых капсулах в сыворотке крови животных составила 2,1364±0,10 мкг/мл, тогда как АН в составе стандартных капсул в сыворотке крови не был обнаружен.
Выводы. Для дальнейших доклинических и клинических испытаний необходимо использовать кислотоустойчивые пероральные лекарственные формы арглабина.
Л. Б. Айтишева., Г. А. Омарова
Изменение показателей резистентности облученного организма на фоне профилактического введения арглабина в эксперименте
Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
Цель исследования. Изучение влияния арглабина на различные компоненты нейрогуморальной регуляции при остром лучевом поражении, в частности на уровень эндогенных радиопротекторов (серотонина и гистамина).
Материал и методы. В эксперименте использовались беспородные половозрелые крысы-самцы массой 180-200 г. Модель радиационного поражения воспроизводили путем острого тотального однократного облучения животных на гамма-установке «Рокус» мощностью 1,5 Гр/мин в дозе 8 Гр. Проведены следующие серии эксперимента: 1-я — группа интактных животных; 2-я — группа сравнения по облучению (с моделью радиационного поражения); 3-я — группа с профилактическим введением препарата арглабин (препарат вводили внутривенно за 3 дня до облучения в дозе 10 мг/кг). Забой животных осуществляли методом декапитации в первую половину дня через 1, 3, 7, 14, 21 и 30 сут после облучения. Цельную кровь собирали в пробирки. Определение серотонина и гистамина проводили флюорометрическим путем в одной пробе (Л. Я. Прошина, 1982).
Результаты. Установлено, что при остром тотальном гамма-облучении животных группы сравнения уровень серотонина достоверно снижался на протяжении всего периода наблюдения (до 10 сут после облучения в связи со 100%-й гибелью животных) с подъемом на 3-и сутки. Уровень гистамина в группе сравнения имел тенденцию к снижению на протяжении периода наблюдения по сравнению с интактными. В группе с профилактическим введением препарата арглабин мы наблюдали непрерывный рост уровня серотонина в сыворотке крови с максимальным повышением нейромедиатора на
14-е сутки на 158 % по сравнению с интактными животными. Уровень гистамина в сыворотке крови достоверно повышался в 4 раза по сравнению с интактными с 1-х до 14-х суток (с незначительным снижением на 7-е сутки после облучения) и оставался в этих пределах до конца наблюдения (30-е сутки).
Выводы. Уровень серотонина в сыворотке крови животных в группе с профилактическим введением арглабина имеет картину волнообразного повышения вплоть до 14-х суток после облучения, что значительно выше показателя уровня серотонина в группе сравнения по облучению, с последующей тенденцией к снижению, оставаясь выше уровня интактных животных к концу наблюдения (30-е сутки). Гистамин в группе сравнения по облучению имел тенденцию к снижению, при коррекции арглабином в сыворотке крови животных повышение сохранялось на протяжении всего срока наблюдения.
А. X. Досаханов, Е. В. Кострова, Н. В. Бочкова, В. Б. Сирота Радиомодификация арглабином и кселодой при нестандартном фракционировании при раке молочной железы
Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
КГКП «Карагандинский областной онкологический центр», Казахстан
Цель исследования. Оценка эффективности применения арглабина и кселоды при нестандартном режиме лучевой терапии (ЛТ) у больных раком молочной железы (РМЖ).
Материал и методы. В настоящее исследование включена 101 больная РМЖ. Средний возраст пациенток составил 50,2 года, со II стадией — 61 больная, с III стадией — 40. Лечение больных РМЖ
проводилось методом слепой рандомизации. Выделено три группы больных. 1-я группа — 50 больных РМЖ, получавших предоперационную дистанционную гамма-терапию средним фракционированием с дневным дроблением дозы (ДГТ СФ ДДД), ежедневно 4 Гр, РОД 2 Гр 2 раза в сутки с интервалом между фракциями 4,5 ч на каждый объем. СОД 28-32 Гр. Операцию выполняли через 1-2 сут после окончания ЛТ всем больным в объеме радикальной мастэкто-мии по Маддену. 2-я группа — 26 больных РМЖ, в комплексное лечение которых включен курс неоадъювантной монотерапии арглабином при ДГТ СФ ДДД. Арглабин вводили по 185 мг/м2 в виде 2% раствора внутривенно за 15-20 мин до сеанса ЛТ. Количество введений преапарата — 8, суммарная доза варьировала от 1920 до 3520 мг. 3-я группа — 25 больных РМЖ, в комплексное лечение которых включен курс неоадъювантной монотерапии кселодой при ДГТ СФ ДДД. Кселода применялась перорально по 2 г 2 раза в сутки ежедневно перед облучением в течение 8 дней.
Результаты. При сравнении клинического эффекта ЛТ СФ ДДД с арглабином и с кселодой не получено достоверной разницы между этими группами. Положительный клинический эффект наблюдался у 34,0±6,7 % пациенток в группе, получавших только ЛТ СФ ДДД, у 46,5±9,8 % больных, получавших ЛТ с арглабином, у 44,0±9,9 % пациенток, получавших ЛТ с кселодой. В 1-й группе больных объем опухоли уменьшился в 1,2 раза, во 2-й — в 1,9 раза, в 3-й — в 1,8 раза. I и II степень патоморфоза оказались одинаковыми у пациенток всех групп. III степень патоморфоза отмечалась в 2,3 раза чаще у больных, получавших ЛТ СФ ДДД с арглабином, ив 1,3 раза чаще у пациенток с кселодой по сравнению с группой больных без радиомодификации.
Выводы. При предоперационной ЛТ СФ ДДД у больных РМЖ более выраженный радиомодифицирующий эффект выявлен при использовании арглабина, который проявился в повышении положительного клинического эффекта на 12,5 %, большем регрессе самой опухоли и учащении постлучевого патоморфоза опухоли III степени в 2,3 раза.
П. К. Казымбет, Д. Д. Абдирасилова Оценка эффективности арглабина при комбинированном радиационно-термическом поражении в микроядерном тесте
Казахская государственная медицинская академия М3 РК, Астана
Цель исследования. Оценить цитогенетическую эффективность арглабина в микроядерном тесте при воздействии комбинированного радиационно-термического поражения на организм животных
Материал и методы. Опыты проводились на 33 белых беспородных крысах обоего пола массой 170-190 г, разделенных на 3 группы. 1-я группа — интактные крысы, контрольные, 2-я группа — крысы с комбинированным воздействием термического ожога и гамма-облучения, 3-я группа — крысы с комбинированным воздействием термического ожога и облучения, которым вводился арглабин в течение 3 дней перед воздействием в дозе 5 мг/кг внутрибрюшин-но. Облучение проводили на базе онкологического диспансера г. Астана. Крыс помещали в специальные коробки из органического стекла и облучали на гамма-установке «Агат-С» в дозе 7 Гр при мощности дозы 714 мГр/мин однократно.
Комбинированное радиационно-термическое воздействие проводили последовательным сочетанием облучения и термического ожога. Костный мозг для микроядерного теста отбирали на 7-е и 14-е сутки после воздействия термического ожога и облучения и их сочетания. Умерщвление животных производили эфирной передозировкой. Приготовление препаратов для микроядерного теста проводили стандартным методом. Окрашивали микропрепараты красителем Гимзы, микроскопировали под световым микроскопом с объективом х100. Идентификацию микроядер (МЯ) проводили в неповрежденных полихроматофильных эритроцитах (ПХЭ), имеющих вид центрически расположенных, правильной округлой формы телец с окраской, подобной ядрам клеток. Подсчет частоты МЯ проводили в 1000 ПХЭ. Полученные данные обрабатывали статистически с использованием 1-критерия Стьюдента.
Результаты. Изменение цитогенетической активности комбинированного воздействия термического ожога и облучения показало, что на 7-е сутки частота МЯ возросла до 3,04 % (р<0,001), на 14-е
-Q-
сутки, несмотря на снижение на 35,1 %, частота МЯ остается более высокой. Комбинированное радиационно-термическое воздействие, по нашим данным, повышает уровень хромосомных повреждений в костномозговых клеточных элементах.
Было установлено, что наиболее всего цитогенетические повреждения клеток проявляются во время прохождения первых клеточных элементов, приводящих к задержке митозов, хромосомным повреждением и гибели клеток. Так, известно, что пик снижения митотического индекса и повышения клеток с хромосомными аберрациями приходится на 1-е сутки после облучения, что предположительно можно связать с прямым генотоксическим действием радиации. Комбинированное радиационно-термическое воздействие, по нашим данным, обладает большей цитогенетической активностью, о чем свидетельствует более высокая частота МЯ в костномозговых клеточных элементах. Нами установлено 7-кратное увеличение частоты МЯ по сравнению с контролем. В то же время модификация мутагенного эффекта спонтанного воздействия термического ожога и облучения не является аддитивной в сравнении с раздельным воздействием.
Полученное нами устойчивое снижение показателей соотношения молодых и зрелых форм эритроцитов может быть результатом задержки митозов эритробластов, последней стадии делящихся клеток эритроцитарного ростка, которые и являются предшественниками ПХЭ и НХЭ, или повышенная гибель от цитотоксического эффекта.
Как свидетельствуют полученные нами данные, применение препарата арглабина в дозе 5 мг/кг ежедневно однократно за 3 дня перед облучением дает благоприятный эффект. На это указывают более низкие значения частоты МЯ в ПХЭ костного мозга на 7-е и 14-е сутки после комбинированного воздействия факторов. Так, на 7-е сутки частота МЯ составляет 1,25 % (p<0,05), на 14-е сутки — 1,18% (p<0,05), что существенно отличается от данных без применения препарата. Под влиянием арглабина нормализуется соотношение молодых и зрелых форм эритроцитов после воздействия исследованных факторов.
Выводы. Применение иммуномодулятора арглабина перед комбинированным радиационно-термическим поражением значительно ослабляет цитогенетический эффект действующих агентов, ускоряет процессы восстановления гемопоэза.
Р С. Кузденбаева1, Н. В. Козаченко3, А. Е. Гуляев2,
Е. А. Омаров2
Возможность изменения клеточной проницаемости для антибиотиков с помощью арглабина
1 Националъный центр экспертизы лекарственных средств М3 РК, Алматы, Казахстан
2 Информационный лекарственный центр проекта «ЗдравПлюс», USAID, Караганда, Казахстан
3 Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
Известно, что, несмотря на беспрецедентные успехи в терапии ВИЧ-инфекции, СПИД является главной мировой проблемой здравоохранения, оставаясь 1-й причиной смерти в Африке и 4-й ведущей причиной смерти во всем мире вследствие осложнений, связанных с внутриклеточным инфицированием (А. Pani et al., 2002). Лечение инфекций с внутриклеточной локализацией возбудителей — одна из самых трудных проблем современной антибиотикотерапии (P. S. Hiemstra, 2001). Антибиотики при лечении СПИД-ассоцииро-ванных инфекций имеют гораздо меньший эффект, чем можно было бы ожидать (L. O. Eckert et al., 2003; C. A. Benson et al., 2003). Есть основания предполагать, что сниженный эффект антибиотиков в этой ситуации может быть связан с пониженной проницаемостью мембран лейкоцитов (С. И. Ревенко и др., 2005). Предпринимаются попытки поиска модификаторов проницаемости мембран. В качестве такового апробируется сесквитерпеновый лактон арглабин. В условиях in vitro проведено изучение количественных показателей связывания ряда антибиотиков (рифампицин, доксициклин, эритромицин, азитромицин, цефтриаксон) полиморфно-ядерными лейкоцитами и лимфоцитами, полученными у ВИЧ-инфицированных (23 человека). Определено, что связывание антибиотиков у ВИЧ-инфицированных отличается от связывания их у здоровых людей, количественные показатели проникновения антибиотиков в лейкоциты снижены на 50-75 %. Добавление в среду инкубации субстанции ар-
глабина (10 мкг/мл) в определенной степени влияет на параметры связывания антибиотиков: связывание рифампицина (на 62 % в лимфоцитах и 90 % в полиморфно-ядерных лейкоцитах), доксициклина (на 50 % в обоих случаях) и цефтриаксона (на 33 и 10 % соответственно) возрастает; при этом связывание азитромицина и эритромицина в условиях нашего эксперимента не изменялось. В тех же условиях эксперимента клетки здоровых людей мало реагировали на присутствие в среде инкубации арглабина: связывание антибиотиков лимфоцитами не менялось вообще, из 4 антибиотиков только в случае с цефтриаксоном показатель связывания полиморфно-ядерными лейкоцитами увеличивался на 36 %.
Полученные данные позволяют предполагать возможность включения сесквитерпенового лактона арглабин в число препаратов, апробируемых в системе лечения СПИД-ассоциированных заболеваний. Необходимо дальнейшее, более подробное исследование возможности влияния арглабина на проницаемость клеточных мембран.
М. В. Мезенцева1, А. Ж. Абилъдаева2, С. М. Адекенов2 Влияние сесквитерпенового лактона арглабин на цитокиновый статус в условиях in vitro
1 НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, Москва
2 Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан
Цель исследования. Изучить влияние сесквитерпенового лактона арглабин (АН) на цитокиновый статус в условиях in vitro.
Материал и методы. Проведено исследование цитокинового профиля у 12 больных ревматоидным артритом (РА) и у 12 относительно здоровых добровольцев без аутоиммунных и системных заболеваний в динамике до и после воздействия АН в дозе 4-8 мг/мл на клетки крови обследованных. В исследованиях была использована стандартная методика определения ИФН-статуса.
Результаты. У относительно здоровых добровольцев АН в исследуемых концентрациях (в большей степени — 4 мкг/мл) влиял на экспрессию генов цитокинов следующим образом: повышалось количество выявленных мРНК ИФН-у, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6 в 42 % случаев, ИЛ-10 — в 83 % случаев, ИЛ-18, TGF-p и ИЛ-1р — в17 % случаев; снижалось количество выявленных мРНК ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, NF-kappaB в клетках крови 17-33 % добровольцев и мРНК TGF-P — у 58-67 % обследованных, т. е. у относительно здоровых добровольцев под воздействием АН (4 мкг/мл), подобно препарату ридостин, можно предполагать активацию экспрессии генов цитокинов, вырабатываемых ТЫ - и ТЫ-лимфоцитами. АН в исследуемых концентрациях воздействовал на экспрессию генов цитокинов в клетках крови больных РА практически так же, как и в клетках доноров, за исключением того, что в большей степени повышалось количество выявленных мРНК NF-kappaB и TGF-p. Данные, полученные в ходе исследования параметров состояния системы цитокинов у больных РА при воздействии АН на клетки крови in vitro, могут свидетельствовать
0 его высокой иммунокорригирующей способности у данной группы больных. Чувствительность к АН была выше у больных РА, чем у относительно здоровых добровольцев. Наилучший потенциальный терапевтический эффект АН проявлял в дозе 8 мг/мл.
Выводы. Исходя из полученных данных, можно предполагать, что у относительно здоровых добровольцев применение АН (4 мкг/мл) может вызывать индукцию генов цитокинов, вырабатываемых ТЫ- и Thl-лимфоцитами, т. е., по-видимому, препарат может быть использован для профилактики ряда заболеваний. Полученные данные указывают на то, что использование АН в дозе 4 мкг/мл у больных РА может приводить к активации генов цитокинов, вырабатываемых ТЫ- и Thl-лимфоцитами, а также фактора противоопухолевой защиты NF-kappaB и супрессорного цитокина TGF-p.
М. В. Мезенцева1, А. Ж. Абилъдаева2, С. М. Адекенов2 Исследование влияния сесквитерпенового лактона арглабин и гидрохлорида его иметиламинопроизводного на интерфероновый статус в условиях in vitro
1 НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, Москва
2 Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан
Цель исследования. Изучить влияние сесквитерпенового лактона арглабин (АН) и гидрохлорида его диметиламинопроизводного (ГДА) на интерфероновый статус в условиях in vitro.
Материал и методы. Проведено исследование интерферонового (ИФН) статуса у 12 больных in vitro ревматоидным артритом (РА) и у 12 относительно здоровых добровольцев в динамике до и после воздействия АН на клетки крови обследованных. Использована стандартная методика определения ИФН-статуса с изучением следующих показателей: продукция ИФН-а, ИФН-у, уровень циркулирующего ИФН в плазме крови, спонтанно продуцируемого ИФН, уровень чувствительности к препаратам ридостин, циклоферон, АН и ГДА в 2 концентрациях (4 и 8 мкг/мл) уровень чувствительности к препаратам ИФН-а (с использованием прайминг-эффекта).
Результаты. В результате исследований ИФН-статуса и цитоки-нового профиля больных РА установлено изначальное нарушение ряда показателей иммунитета у обследованных пациентов. Выявлены отклонения от нормы: повышение спонтанно вырабатываемого ИФН, косвенный показатель аутоиммунных процессов, снижение способности к продукции ИФН-а, показателя функциональной активности В-лимфоцитов и состояния противовирусной защиты организма. Снижение способности к продукции ИФН-у, показателя функциональной активности Т-лимфоцитов и способности к активации иммунной системы зарегистрировано у 60 % обследованных. Отмечено снижение чувствительности к химиопрепаратам: ридостин (33 % больных), циклоферон (50 % пациентов), амиксин (8 % больных), АН (17-33 % пациентов) и ГДА (33-50 % обследованных), снижение чувствительности к препаратам ИФН-а и ИФН-у — в 50-60 % случаев. Наблюдается повышение ИФН-а- и ИФН-у-ин-гибирующей активности сыворотки крови у 40 и 50 % пациентов соответственно. Следует отметить, что чувствительность к препаратам АН и ГДА была выше у больных РА, чем у относительно здоровых добровольцев без аутоиммунных и системных заболеваний. При этом наибольший потенциальный терапевтический эффект препараты проявляли в дозе 8 мг/мл.
Выводы. Данные, полученные в ходе исследования параметров состояния системы интерферона у больных ревматоидным артритом при воздействии АН и ГДА на клетки крови in vitro, могут свидетельствовать об их высокой иммунокорригирующей способности у данной группы больных.
И. М. Омарова, Л. Е. Муравлева, В. В. Койков Состояние окислительного метаболизма у больных первичным раком печени на фоне монотерапии арглабином
Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
Цель исследования. Изучение влияния арглабина на окислительный метаболизм крови больных первичным раком печени (ПРП).
Материал и методы. Объектом исследования служила кровь 74 больных ПРП IV стадии. Выделено три группы больных: 1-я получала химиотерапию (ХТ), 2-я — монотерапию арглабином и 3-я — ХТ с арглабином. Арглабин вводили внутривенно в дозе 185 мг/м2, всего 15 инъекций. До и после лечения определяли показатели спонтанной окислительной модификации белков (ОМБ), степень фрагментации белков при спонтанной окислительной модификации, уровень средних молекул, а также кислоторастворимые фракции (КРФ) нуклеиновых кислот и гистоноподобные белки.
Результаты. При ПРП выявлено достоверное увеличение ката-болитов ОМБ в плазме крови, степени фрагментации белков и аккумуляции средних молекул в эритроцитах, высокий уровень КРФ, изменения соотношения гистоноподобных белков. После ХТ содержание всех катаболитов ОМБ и средних молекул было не только достоверно выше нормы, но и превосходило таковые до лечения. Монотерапия арглабином оказала более выраженное позитивное действие на содержание катаболитов ОМБ. После ХТ с арглабином выявлена отчетливая тенденция к снижению содержания катаболитов ОМБ основного и нейтрального характера, средних молекул. После ХТ в плазме крови больных ПРП все показатели фрагментации белков достоверно превышали значения нормы. Выявлена тенденция к снижению этих показателей после монотерапии арглабином. Отмечено достоверное снижение показателей степени фрагментации белков после ХТ с арглабином. После ХТ и монотерапии арглабином содержание КРФ в крови больных ПРП продолжало достоверно превышать значение контроля. После ХТ с арглабином на-
блюдалось выраженное снижение содержания КРФ. Эти показатели были ниже, чем при назначении ХТ и монотерапии арглабином. После сочетанного применения химиотерапии и арглабина у больных ПРП наблюдалось выраженное перераспределение соотношения типов гистоноподобных белков. Так, при одновременном достоверном росте содержания фракции гистонов Н1 достоверно снижается суммарная фракция гистонов Н2А, Н3, Н4. Зафиксирована также выраженная тенденция к снижению гистонов Н 2В.
Выводы. Монотерапия арглабином и особенно его применение в комплексе с химиопрепаратами ограничивают нарушения биохимических процессов, что выражается в снижении степени интоксикации у больных первичным раком печени.
Г. А. Омарова, Л. Б. Айтишева Экспериментальное изучение терапевтической эффективности арглабина на модели радиационного поражения у крыс
Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
Введение. Исследуемый препарат арглабин выделен из полыни гладкой, эндемичной для Казахстана. Получен в Институте фитохимии МОН РК (Караганда) под руководством проф. С. М. Адекенова. В ранее опубликованных нами работах сообщалось, что введение данного препарата в профилактическом режиме (за 3 дня до облучения) увеличивало выживаемость облученных животных до 65 %, а средняя продолжительность жизни (СПЖ) повышалась в 3,7 раза относительно контроля (облученные животные без введения препарата). Уменьшалась степень истощения циркулирующего пула клеток крови, в значительной степени сохранялась способность гемо-поэтических клеток к репарации. Арглабин также оказывал стабилизирующий эффект на состояние окислительного метаболизма, калликреин-кининовой системы (ККС) и показатели тиреоидного гомеостаза.
Цель исследования. Оценить возможность фармакологической коррекции (лечебно-профилактический режим введения) препарата арглабин при исследованиях метаболических процессов на мембрано-молекулярном уровне организма при воздействии гамма-облучения.
Материал и методы. Модель радиационного поражения (РП) воспроизводили путем острого тотального облучения крыс-самцов массой 180-200 г на гамма-установке «Рокус» (60Со) в дозе 8 Гр мощностью 1,5 Гр/мин. Препарат вводили в виде 2% водного раствора внутривенно из расчета 10 мг на 1 кг массы животного.
Результаты и выводы. Установлено, что введение препарата арглабин в лечебно-профилактической дозе (3 дня до и 10 дней после облучения) увеличивало выживаемость облученных животных до 77 % (относительно контроля), повышало СПЖ до 19 сут, способствовало ускорению процессов восстановления периферической крови в более поздние сроки, оказывало позитивное действие на состояние окислительного метаболизма, снижая интенсивность ПОЛ и повышая АОЗ; приводило к повышению уровня трийодтиронина и тетрайодтиронина. Это, по-видимому, должно способствовать некоторой стабилизации процессов, пролонгированию гомеостаза и пролиферативных процессов в органах и тканях, более активному формированию адаптивных реакций, участвующих в снижении последствий биологического действия радиации.
В. Б. Сирота, Г. О. Олжатаева, С. С. Алъжанов Лучевая терапия с арглабином в лечении рака шейки матки
Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
КГКП «Карагандинский областной онкологический центр», Казахстан
Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан
Цель исследования. Оценка непосредственных результатов применения арглабина при лучевой терапии (ЛТ) рака шейки матки (РШМ).
Материал и методы. В исследование включено 22 больных РШМ. Средний возраст пациенток составил 47,1 лет, со II стадией рака — 14 больных, с III стадией — 6 и с I стадией — 2. Выделено
две группы больных. 1-я группа — 10 пациенток РШМ, получавших сочетанное лучевое лечение. Курс дистанционной гамма-терапии проводился в режиме классического фракционирования по 2 Гр 5 раз в неделю на аппаратах «Рокус-АМ» и «АГАТ-Р» до суммарной очаговой дозы 40-46 Гр + внутриполостная ЛТ по 4 укладки препаратами кобальта 1 раз в неделю до суммарной дозы в точке А 65-85 Гр. Эти больные составили группу контроля. Хирургическому лечению подверглись все 7 пациенток через 2-3 нед. после окончания ЛТ. 2-я группа — 12 больных РШМ, которым в комбинированное лечение включен курс монотерапии арглабином при сочетанной ЛТ. Арглабин вводили из расчета 185 мг/м2 в виде 2% раствора внутривенно за
15-20 мин до сеанса ЛТ. Количество введений арглабина — 15-20, суммарная доза варьировала от 3600 до 8000 мг. Из этой группы 10 больных подверглись оперативному вмешательству. Оценку непосредственного объективного эффекта терапии проводили по методике, предложенной ВОЗ (1978). Цитологически в динамике оценивали степень дистрофических изменений опухолевых клеток, определяли выраженность лучевого повреждения опухоли.
Результаты. Изучение непосредственного клинического эффекта ЛТ показало, что ее эффективность у больных, получавших дополнительно арглабин, несколько выше по сравнению с группой без арглабина. Средний объем опухоли до лечения в группе пациенток, получавших ЛТ без арглабина, составил 120,2 см3, в группе, получавших дополнительно арглабин, — 144,8 см3. В 1-й группе больных объем опухоли уменьшился в 1,2 раза, во 2-й — в 1,9 раза (с 144,8 до 74,4 см3). При анализе цитограмм, взятых в середине ЛТ у больных, дополнительно получавших арглабин, выявлены признаки дисплазии, дистрофии и лизиса опухолевых клеток у 10 пациенток, чего не наблюдали у больных контрольной группы. Постлуче-вой патоморфоз опухоли III степени выявлен у 3 больных в группе, получавших арглабин, и ни у одной больной в контрольной группе.
Выводы. Выявлено положительное влияние арглабина на непосредственные результаты комбинированного лечения РШМ.
В. Б. Сирота, К. Ж. Мусулманбеков, Н. В. Бочкова,
Е. В. Кострова
Применение арглабина как радиомодификатора при раке пищевода
Карагандинская государственная медицинская академия М3 РК, Казахстан
КГКП «Карагандинский областной онкологический центр», Казахстан
Цель исследования. Оценить эффективность применения арглабина при лучевой терапии (ЛТ) динамическим фракционированием дозы у больных раком пищевода (РП).
Материал и методы. Проанализированы результаты лечения 40 больных РП. Средний возраст больных составил 64,7 года, со II стадией опухолевого процесса — 18 больных, с III — 22. 50 % больных получали ЛТ динамическим фракционированием: первые 3 дня РОД — 4,5 Гр, далее методом мультифракционирования: РОД 1,2 Гр
2 раза в день с интервалом в 4,5 ч до СОД, эквивалентной 60-68 Гр классического фракционирования. Остальным 50 % пациентов ежедневно перед утренним сеансом вводили внутривенно 2% раствор арглабина из расчета 185 мг/м2. Общее количество инъекций арглабина — 20. Суммарная доза препарата варьирует от 4000 до 9000 мг. Оценку непосредственного клинического эффекта проводили согласно рекомендациям ВОЗ.
Результаты. В исследуемой группе больных полный регресс опухоли отмечен в 7 (35±10,7 %) случаях, частичный регресс — в 10 (50±11,2 %), стабилизация процесса — в 3 (15±8,0 %), ни у одного больного не было прогрессирования опухоли. В контрольной группе больных, получавших ЛТ динамическим фракционированием дозы без арглабина, полная регрессия достигнута у 4 (20±8,9 %) больных, частичная — у 10 (50±11,2 %), стабилизация — у 6 (30±10,2 %). Положительный клинический эффект в исследуемой группе наблюдали
у 85 % больных, в контрольной — у 70 %. Средний объем опухоли до лечения составил в контрольной группе 7,6±0,3 см3, после лечения — 3,5±0,3 см3; в основной группе до лечения — 9,6±0,2 см3, после лечения — 2,9±0,3 см3. У больных, получавших ЛТ с арглабином, опухоль уменьшилась в 3,3 раза, у больных контрольной группы — в 2,2 раза (р < 0,001). Необходимо отметить лучшую клиническую переносимость лучевого лечения при использовании арглабина. При контрольном рентгенологическом исследовании пищевода через 2-3 мес. после ЛТ в исследуемой группе больных у 15 из 20 пациентов контуры пищевода ровные, без дефектов наполнения и сужения. В контрольной группе пациентов аналогичная рентгенологическая картина наблюдалась только у 9 больных.
Выводы. Применение арглабина в монорежиме у больных РП повышает эффективность ЛТ динамическим фракционированием дозы на 15 % и требует дальнейшего изучения.
Е. М. Тажбаев1, Е. В. Тихонова2, М. Ж. Буркеев1,
С. М. Адекенов2
Перспективы применения полимеров для создания новых лекарственных форм препарата арглабин
1 Карагандинский государственный университет им. Е. А. Букетова, Казахстан
2 Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан
Введение. В течение последних 100 лет наука о полимерах прошла развитие от спорной теории о существовании макромолекул до применения в форме сложных систем в медицине. Из спектра общих концепций фармакологической активности полимеров одной из наиболее перспективных является конструирование противоопухолевых препаратов на полимерной основе в виде наночастиц и нанокапсул. Оригинальным противоопухолевым препаратом растительного происхождения является арглабин, применяемый для химиотерапевтического лечения злокачественных опухолей печени, легких, молочной железы и яичников.
Цель исследования. Создание новых лекарственных форм арглабина, обеспечивающих его пролонгированное действие и целенаправленный транспорт в орган-мишень.
Результаты. Разработан эмульсионный способ получения полимерных наночастиц, иммобилизированных арглабином. В качестве полимерной основы испытаны известные виниловые мономеры метилметакрилат, этилакрилат, акриловая кислота и др., а также новые дивиниловые и винилацетиленовые мономеры. Медико-биологические испытания показали, что индивидуальные полимеры не обладают противоопухолевой активностью в отношении клеток карциномы Н157 и меланомы НТ144. Однако при включении в состав арглабина наблюдается значительное повышение противоопухолевого эффекта. Наиболее перспективным является полимер на основе Р-винилоксиэтиламида акриловой кислоты, из матрицы которого арглабин диффундирует, не теряя своей физиологической активности. Наряду с отсутствием цитотоксичности это свидетельствует о его нейтральности. Новый полифункциональный дивиниловый мономер — Р-винилоксиэтиламид акриловой кислоты (Р-ВОЭА АК) получен из дешевого и доступного сырья. Физические и физико-механические свойства полимеров Р-ВОЭА АК можно направленно изменять в широких пределах благодаря наличию в структуре мономера неравнозначных по активности двух двойных связей. В состав макромолекул Р-ВОЭА АК входят связи -СО-КН-, идентичность строения которых с пептидной группой белков, возможно, и будет определять биосовместимость полимеров. Нами установлено, что гидролиз -СО-КН- связи в молекулах гомо- и сополимеров Р-ВОЭА АК протекает значительно быстрее в присутствии некоторых ферментов. Этот процесс регулируется содержанием в цепи звеньев Р-ВОЭА АК и зависит от внешних условий среды. Таким образом, появляется возможность решения проблемы деградации и вывода полимерного носителя из организма.
