CC BY
16
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ТАБЛИЦА. СОДЕРЖАНИЕ АКТИВАТОРА ПРЕКАЛЛИКРЕИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ АЛЬБУМИНА ЧЕЛОВЕКА ОТЕЧЕСТВЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА (К ТЕЗИСАМ КРИВЫХ М.А. И ДР.)
Группировочное наименование лекарственного препарата (концентрация) Содержание активатора прекалликреина, МЕ/мл
№ образца хромогенный кинетический метод хромогенный метод по конечной точке
Альбумин человека (10%) 1 5,3±0,3 5,8±0,4
Альбумин человека (10%) 2 1,1±0,1 1,9±0,2
Альбумин человека (10%) 3 4,7±0,2 4,7±0,3
Альбумин человека (10%) 4 Менее 1 Менее 1
Альбумин человека (10%) 5 Менее 1 Менее 1
Альбумин человека (10%) 6 9,1±0,6 14,7±0,7
Альбумин человека (20%) 7 5,4±0,4 5,9±0,5
Альбумин человека (10%) 8 9,1±0,6 9,5±0,5
Цель. Изучить количественное содержание активатора прекалликреина в лекарственных препаратах альбумина человека отечественного производства.
Материалы и методы. Использовали образцы лекарственных препаратов альбумина человека, раствор для инфузий, 100 мг/мл (10%) и 200 мг/мл (20%) отечественного производства; стандартный образец активатора прекалликреина в альбумине BRP EP CRS, серия № 3 (кат. № Y0000263). Использовали исследуемые образцы без предварительного разведения, раствор прекалликреина (American Diagnostica Gmbh, Кат. № ADG472) в разведении 1:100. Определение проводили хромогенным кинетическим методом и с оценкой по конечной точке. Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистическими методами с использованием компьютерной программы Microsoft Office Excel. Результаты представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения
(X±Sx).
Результаты. Проведено исследование количественного содержания активатора прекалликреина в образцах 8 серий лекарственных препаратов альбумина человека отечественного производства. Полученные значения содержания активатора прекалликреина составили менее 15,4 МЕ/мл (табл.), что соответствует фармакопейным требованиям, предъявляемым к данной группе лекарственных препаратов.
Заключение. Содержание активатора прекалликреина в изученных сериях лекарственных препаратов альбумина человека отечественного производства находится на уровне, позволяющем обеспечить их специфическую безопасность, и соответствует современным международным стандартам качества.
ИММУНОКОРРИГИРУЮЩАЯ И ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛИСАХАРИДА ИЗ МОРСКИХ БАКТЕРИЙ PSEUDOALTEROMONAS NIGRIFACIENS ПО ОТНОШЕНИЮ К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
Крылова Н.В., Смолина Т.П., Леонова Г.Н.
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Т.П. Сомова, Владивосток, Россия
Клещевой энцефалит (КЭ) относится к числу опасных нейровирусных инфекций, регистрируемых на Евразийском континенте. Для лечения пациентов с диагно-
зом КЭ лицензированных антивирусных препаратов до сих пор не существует. Установлена способность вируса КЭ (ВКЭ) модулировать иммунный ответ хозяина, что может оказывать решающее влияние на течение и исход заболевания (Robertson, 2009; Ye, 2013). В этой связи, актуальным является поиск противовирусных препаратов, которые могли бы не только ингибировать репликацию вируса, но и корригировать иммуносупрессию, индуцированную вирусом.
Цель. Комплексное изучение иммунокорригирующей и противовирусной активности капсульного полисахарида из морских бактерий Pseudoalteromonas nigrifaciens в отношении вируса КЭ.
Материалы и методы. Капсульный полисахарид (КПС) получен в Тихоокеанском институте биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН. Оценку уровня экспрессии мембранных молекул (CD69, HLA-DR, CD107a) на моноцитах, NK-клетках и CD8-T-лимфоцитах осуществляли стандартным методом двух- или трехцветного иммунофлюоресцентного окрашивания цельной крови здоровых доноров на проточном цитофлюориме-тре FACSCalibur (Becton Dickinson, США). Противовирусную активность соединения оценивали по цитопати-ческому действию (ЦПД) вируса на монослой культуры клеток СПЭВ, инфицированных ВКЭ и обработанных КПС (в диапазоне от 10 до 12000 мкг/мл).
Результаты. Установлено, что через 24 ч после инфицирования лейкоцитов крови здоровых доноров вирусом КЭ (moi 0.01) в инфицированных пробах, необработанных КПС, процент вирус-положительных клеток составил 57±8%; в пробах, обработанных 100 мкг/мл КПС, обнаружено 11±4% вирус-инфицированных клеток. Добавление 100 мкг/мл КПС к образцам цельной крови, инфицированным ВКЭ, приводило к увеличению (в 1,3-2,6 раза) уровня экспрессии активационных маркеров CD69 и HLA-DR на моноцитах, NK- и CD8-клетках, по сравнению с необработанными инфицированными образцами (p < 0,05). Кроме того, подобная обработка КПС инфицированных образцов крови повышала процент NK-и CD8+ клеток, экспрессирующих маркер дегрануляции CD107a (до 8,3-10,2%), по сравнению с необработанными инфицированными образцами (1,1-2,3%).
Исследование противовирусной активности КПС в отношении ВКЭ показало, что на 6 сут после инфицирования культуры клеток СПЭВ тестируемый полисахарид (в концентрации 1000 мкг/мл) снижает титр вируса на
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммуномодуляторы эндогенной и экзогенной природы Immunomodulators of endogenous and exogenous nature
4,75 ^10ТСГО50/мл. IC50 данного полисахарида (концентрация, снижающая ЦЦД вируса на 50% по сравнению с контролем) составила 814,5мкг/мл, SI (селективный индекс) — 13,4.
Заключение. Продемонстрирована ex vivo способность капсульного полисахарида из морских бактерий Pseudoalteromonas nigrifaciens повышать активационный и цитотоксический потенциал клеток крови человека, сниженный под воздействием ВКЭ. Показана in vitro противовирусная активность этого полисахарида в отношении ВКЭ. Полученные данные об иммунокорриги-рующей и противовирусной активности КПС свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения этого гликополимера как перспективного противовирусного препарата в комплексной терапии КЭ.
ИЗУЧЕНИЕ ПРОТЕКТИВНОЙ И АДЪЮВАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ГЕРМАНИЯ И РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ В ОПЫТЕ НА ЛАБОРАТОРНЫХ ГРЫЗУНАХ
Лаврентьева И.Н.1, 2, Семенов А.В. 1 3, Сухобаевская Л.П.1, 2, Зарубаев В.В.1, 2, Арсентьева Н.В.1, 2, Амбросов И.В. 1 2
1ФБУН«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург, Россия
2 ООО «ВДС Фарма», Москва, Россия
3 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Цель. Сравнение иммуномодулирующей и адъювант-ной активности препарата германия WDS-9 (АД1) и препарата растительного происхождения IMOD (АД2) при экспериментальной гриппозной инфекции у мышей.
В задачи исследования входило определение уровня протективной активности соединений АД1 и АД2 при экспериментальной летальной гриппозной инфекции; их прямого вирусингибирующего действия при экспериментальной нелетальной гриппозной инфекции и содержания в плазме крови животных опытных и контрольных групп некоторых иммунологических маркеров.
Использованы: вирус гриппа (ВГ), штамм А/ Aichi/2/68 (H3N2); перевиваемая культура клеток MDCK; фармацевтические препараты сравнения — осельтамивир (тамифлю) или циклоферон. Исследование проведено на взрослых белых беспородных нелинейных мышах весом 14-16 г. В двух экспериментов мыши были распределены на 4 группы (n = 10 каждая), зараженные интраназально вирусом гриппа. За 1 день до заражения и один раз в сутки в течение 3 дней после инфицирования животным группы 1 вводили плацебо (контроль действия вируса); животным групп 2 и 3 — препараты АД1 или АД2; 4-й группы — препараты сравнения тамифлю или циклоферон. Препараты АД1, АД2 и препараты сравнения вводили внутрибрюшинно.
Результаты. Под действием IMOD отмечали снижение смертности мышей с индексом защиты, равным 20%, а также достоверное снижение репродукции вируса гриппа в легких мышей на 3-и сутки после инфицирования, когда титр вируса составил 3,9±1,9 lgEID50/0,2 мл в опытной группе против 5,1±2,1 lgEID50/0,2 мл в контрольной группе. Протективное и вирусингибирующее действие препарата WDS-9 не выявлено.
В группе мышей, инфицированных вирусом гриппа, через 7 суток после заражения отмечено нарастание количества NK-клеток и цитотоксических лимфоцитов (CTL), а также В-клеток (CD19) при практически не измененных показателях активности Т-лимфоцитов (Т-клетки, Th-клетки). На 25 сутки после инфицирования на фоне снижения активности NK-клеток и CTL, регистрировали увеличение общего числа Т-клеток и Т-хелперов, а также дальнейший прирост количества В-клеток.
Под воздействием циклоферона напротив, отмечено снижение количества CTL на 7 сутки после заражения вирусом гриппа и более чем двукратный прирост их количества через последующие 18 суток (25 день после заражения мышей). Содержание NK-клеток через 7 суток незначительно повышалось, снижаясь через 25 суток наблюдения. Концентрация маркеров Т- и В-клеточного звена иммунитета повышалась к 25 суткам. Схожая динамика иммунного ответа наблюдалась у животных, получавших препарат IMOD.
В группе животных, получивших препарат WDS-9, наблюдали снижение содержания общего количества Т-клеток к 25 дню, при существенном нарастании количества В-клеток на этом же сроке наблюдения, что свидетельствует о стимулировании преимущественно гуморального компонента адаптивной иммунной системы. В пользу предположения о переключении иммунного ответа ТЫ на Th2 говорит снижение содержания маркеров провоспалительного врожденного иммунного ответа (NK-клетки), а также отсутствие выраженной динамики изменения CTL в данной группе.
Заключение. Полученные результаты могут свидетельствовать о преимущественно протективном и прямом ви-русингибирующем действии препарата IMOD и преимущественно адъювантом действии препарата WDS-9.
ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА ИСПЫТАНИЯ ПРИ ОЦЕНКЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Лысикова С.Л., Головинская О.В., Зубков Д.А., Мовсесянц А.А.
ФГБУ«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
В настоящее время в клинической практике широко применяются биотехнологические препараты, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК, к качеству которых предъявляются серьезные требования. Физико-химические характеристики биотехнологических препаратов (подлинность, количественное и качественное содержание родственных соединений и примесей, молекулярно-массовое распределение и др.) не являются достаточными для прогнозирования проявлений их биологической активности, определяющих эффективность препаратов при клиническом применении. Оценка специфической биологической активности в тестах in vitro и in vivo, в свою очередь, позволяет количественно охарактеризовать фармакологическое действие лекарственного средства и направленно изучить механизмы его терапевтических эффектов, что свидетельствует о высокой важности этого показателя при оценке качества биотехнологических лекарственных препаратов.
