CC BY
19
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммуномодуляторы эндогенной и экзогенной природы Immunomodulators of endogenous and exogenous nature
4,75 ^10ТСГО50/мл. IC50 данного полисахарида (концентрация, снижающая ЦЦД вируса на 50% по сравнению с контролем) составила 814,5мкг/мл, SI (селективный индекс) — 13,4.
Заключение. Продемонстрирована ex vivo способность капсульного полисахарида из морских бактерий Pseudoalteromonas nigrifaciens повышать активационный и цитотоксический потенциал клеток крови человека, сниженный под воздействием ВКЭ. Показана in vitro противовирусная активность этого полисахарида в отношении ВКЭ. Полученные данные об иммунокорриги-рующей и противовирусной активности КПС свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения этого гликополимера как перспективного противовирусного препарата в комплексной терапии КЭ.
ИЗУЧЕНИЕ ПРОТЕКТИВНОЙ И АДЪЮВАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ГЕРМАНИЯ И РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ В ОПЫТЕ НА ЛАБОРАТОРНЫХ ГРЫЗУНАХ
Лаврентьева И.Н.1, 2, Семенов А.В. 1 3, Сухобаевская Л.П.1, 2, Зарубаев В.В.1, 2, Арсентьева Н.В.1, 2, Амбросов И.В. 1 2
1ФБУН«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера», Санкт-Петербург, Россия
2 ООО «ВДС Фарма», Москва, Россия
3 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Цель. Сравнение иммуномодулирующей и адъювант-ной активности препарата германия WDS-9 (АД1) и препарата растительного происхождения IMOD (АД2) при экспериментальной гриппозной инфекции у мышей.
В задачи исследования входило определение уровня протективной активности соединений АД1 и АД2 при экспериментальной летальной гриппозной инфекции; их прямого вирусингибирующего действия при экспериментальной нелетальной гриппозной инфекции и содержания в плазме крови животных опытных и контрольных групп некоторых иммунологических маркеров.
Использованы: вирус гриппа (ВГ), штамм А/ Aichi/2/68 (H3N2); перевиваемая культура клеток MDCK; фармацевтические препараты сравнения — осельтамивир (тамифлю) или циклоферон. Исследование проведено на взрослых белых беспородных нелинейных мышах весом 14-16 г. В двух экспериментов мыши были распределены на 4 группы (n = 10 каждая), зараженные интраназально вирусом гриппа. За 1 день до заражения и один раз в сутки в течение 3 дней после инфицирования животным группы 1 вводили плацебо (контроль действия вируса); животным групп 2 и 3 — препараты АД1 или АД2; 4-й группы — препараты сравнения тамифлю или циклоферон. Препараты АД1, АД2 и препараты сравнения вводили внутрибрюшинно.
Результаты. Под действием IMOD отмечали снижение смертности мышей с индексом защиты, равным 20%, а также достоверное снижение репродукции вируса гриппа в легких мышей на 3-и сутки после инфицирования, когда титр вируса составил 3,9±1,9 lgEID50/0,2 мл в опытной группе против 5,1±2,1 lgEID50/0,2 мл в контрольной группе. Протективное и вирусингибирующее действие препарата WDS-9 не выявлено.
В группе мышей, инфицированных вирусом гриппа, через 7 суток после заражения отмечено нарастание количества NK-клеток и цитотоксических лимфоцитов (CTL), а также В-клеток (CD19) при практически не измененных показателях активности Т-лимфоцитов (Т-клетки, Th-клетки). На 25 сутки после инфицирования на фоне снижения активности NK-клеток и CTL, регистрировали увеличение общего числа Т-клеток и Т-хелперов, а также дальнейший прирост количества В-клеток.
Под воздействием циклоферона напротив, отмечено снижение количества CTL на 7 сутки после заражения вирусом гриппа и более чем двукратный прирост их количества через последующие 18 суток (25 день после заражения мышей). Содержание NK-клеток через 7 суток незначительно повышалось, снижаясь через 25 суток наблюдения. Концентрация маркеров Т- и В-клеточного звена иммунитета повышалась к 25 суткам. Схожая динамика иммунного ответа наблюдалась у животных, получавших препарат IMOD.
В группе животных, получивших препарат WDS-9, наблюдали снижение содержания общего количества Т-клеток к 25 дню, при существенном нарастании количества В-клеток на этом же сроке наблюдения, что свидетельствует о стимулировании преимущественно гуморального компонента адаптивной иммунной системы. В пользу предположения о переключении иммунного ответа ТЫ на Th2 говорит снижение содержания маркеров провоспалительного врожденного иммунного ответа (NK-клетки), а также отсутствие выраженной динамики изменения CTL в данной группе.
Заключение. Полученные результаты могут свидетельствовать о преимущественно протективном и прямом ви-русингибирующем действии препарата IMOD и преимущественно адъювантом действии препарата WDS-9.
ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА ИСПЫТАНИЯ ПРИ ОЦЕНКЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Лысикова С.Л., Головинская О.В., Зубков Д.А., Мовсесянц А.А.
ФГБУ«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
В настоящее время в клинической практике широко применяются биотехнологические препараты, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК, к качеству которых предъявляются серьезные требования. Физико-химические характеристики биотехнологических препаратов (подлинность, количественное и качественное содержание родственных соединений и примесей, молекулярно-массовое распределение и др.) не являются достаточными для прогнозирования проявлений их биологической активности, определяющих эффективность препаратов при клиническом применении. Оценка специфической биологической активности в тестах in vitro и in vivo, в свою очередь, позволяет количественно охарактеризовать фармакологическое действие лекарственного средства и направленно изучить механизмы его терапевтических эффектов, что свидетельствует о высокой важности этого показателя при оценке качества биотехнологических лекарственных препаратов.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Пригодность и надежность аналитической методики, используемой при оценке качества лекарственных средств, подтверждается ее специфичностью, чувствительностью, диапазоном аналитической области, устойчивостью, линейностью, достоверностью и прецизионностью. Устойчивость аналитической методики определяется как способность сохранять найденные для нее в оптимальных условиях характеристики при вероятных небольших отклонениях от этих условий проведения анализа. Согласно положениям ГФ XIII, устойчивость должна изучаться в тех случаях, когда методика основана на использовании особо чувствительных к внешним условиям методов анализа, однако не является обязательной характеристикой для всех методик количественного определения. Методики определения биологической (специфической) активности характеризуются особой чувствительностью к изменению внешних условий, что обусловлено участием в испытаниях различных биологических объектов, таких как культуры клеток, экспериментальные животные и др. Анализ факторов, влияющих на устойчивость аналитических методик определения биологической (специфической) активности биотехнологических лекарственных препаратов, показал, что результаты количественного определения при проведении испытаний на культурах клеток зависят от условий восстановления клеточной культуры, жизнеспособности клеток, концентрации клеточной суспензии, числа пассажей культуры клеток, условий и продолжительности хранения клеточной суспензии до момента использования в испытании, условий и продолжительности хранения питательных сред и растворов, продолжительности и условий инкубации на разных этапах проведения испытания, диапазона и шага разведения образцов, критериев пригодности, качества реактивов и материалов. Для указанных факторов должны быть определены диапазоны значений, в пределах которых их влияние на результаты анализа исключено, а также установлены критические условия и параметры, отклонение от которых недопустимо. При проведении испытаний in vivo важен выбор вида и линии животных, возраста, пола, массы тела, условий содержания, поставщика лабораторных животных и др. Особое внимание следует уделять установлению четких критериев приемлемости результатов испытания, а также использованию аттестованных стандартных образцов, положительного и отрицательного контроля. Все условия выполнения методики должны быть четко отражены в документах, регламентирующих проведение испытаний по оценке качества лекарственных препаратов по показателю «Специфическая (биологическая) активность».
Учитывая особую чувствительность биологических объектов, изучение устойчивости должно быть обязательным при подтверждении пригодности методов оценки специфической активности биотехнологических лекарственных средств. Это особенно важно на этапе разработки препаратов, оценки их качества, выбора метода для обоснования включения в спецификацию, что в конечном итоге должно обеспечить высокий уровень качества указанной группы препаратов при их внедрении и дальнейшем использовании в практической медицине.
ИНГИБИРОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ АКТИВИРУЮЩЕГО РЕЦЕПТОРА NK-КЛЕТОК NKG2D РЕКОМБИНАНТНЫМ БЕЛКОМ MICA
Лысюк Е.Ю.1' 2, Шуленина Е.А.3, Посвятенко А.В.1, 2 4, Кибардин А.В.1, 2, Абакушина Е.В.5
1 Институт биологии гена РАН, Москва, Россия
2 Национальный научно-практический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д. Рогачева, Москва, Россия
3 Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова, Москва, Россия
4 ФГБОУ«Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
5 Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Министерства здравоохранения РФ, Обнинск, Россия
Одним из важных активирующих рецепторов NK-клеток является рецептор NKG2D, необходимый для обнаружения и уничтожения трансформированных и инфицированных клеток. Лигандами для NKG2D являются, в том числе, стресс-индуцируемые неканонические молекулы главного комплекса гистосовместимости I класса MICA/B. Эти белки отсутствуют или слабо экспрес-сируются в большинстве нормальных клеток, в то время как в опухолевых и инфицированных вирусами клетках их количество существенно повышено. Взаимодействие NKG2D с молекулами MIC играет важную роль в регуляции противоопухолевых иммунных реакций и может способствовать ускользанию опухолевых клеток от иммунного надзора.
Цель. Оценка блокирующего эффекта растворимого рекомбинантного человеческого белка MICA (rhsMICA) на активирующий рецептор цитотоксических лимфоцитов человека NKG2D. Для этого оценивали фенотипиче-ские изменения лимфоцитов крови человека при кратковременном воздействии на них различных концентраций rhsMICA.
Материалы и методы. Исследование проводили на лимфоцитах периферической крови 12 здоровых доноров. Периферическую кровь выделяли в градиенте плотности фиколла (r = 1,077, GE Healthcare) фракцию мононукле-арных клеток (ПМК) обрабатывали различными концентрациями рекомбинантного MICA человека (rhsMICA, ЗАО «Протеинсинтез», Россия) в течение 30 минут, в качестве контроля использовали ПМК, инкубировавшиеся в тех же условиях, но без добавления rhsMICA. В обработанных и контрольных ПМК оценивали субпопуляци-онный состав T- и NK-лимфоцитов, для чего проводили цитофлуориметрический анализ клеток, окрашенных антителами к CD3, CD56, CD16, CD314 (NKG2D), CD25, CD69, анализ проводили на проточном цитофлуориметре FC 500 MPL (Beckman Coulter).
Результаты. Обработка ПМК различными концентрациями MICA (5 мкг/мл, 1 мкг/мл, 10 нг/мл и 100 пг/мл) не влияла на количество CD3-CD56+ NK-клеток (8,2±7,2%, 9,0±4,7%, 11,2±6,9 и 14,2±6,4% соответственно против 11,2±5,6% в контроле). В то же время инкубация с MICA 5 мкг/мл существенно снижала долю NKG2D+NK-клеток (33,7±20,7% по сравнению с 51,9±19,5% в контроле, p < 0,05). Количество NKG2D+ NK-клеток при инкубации
