CC BY
9
140
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
МФ в масштабируемых количествах. В докладе обсуждаются принципы получения иМФ, наиболее перспективные направления их использования, вопросы безопасности клинического применения, а также суммируются результаты собственных исследований иМФ.
В результате собственных исследований отработана модель и различные протоколы получения иМФ, показано, что иМФ имеют характерную для МФ морфологию и фенотип (CD14+CD45+CD11b+), экспрессируют маркеры характерные для «наивных» неполяризованных МФ (фенотип CD163+/lowCD206+/lowHLA-DR+/lowCD86+/lowCD80low), ко-продуцируют про- и противо-воспалительные цитокины/хе-мокины (IL-6, CCL2, CXCL1, CXCL8, CXCL10, IL-10, IL-1RA, CCL22 и др.), отвечают на воспалительные сигналы (LPS/ IFN-y), обладают высокой фагоцитарной активностью, способны эффективно подавлять бактериальную инфекцию в модели in vitro. Сравнительный анализ иМФ, полученных с использованием различных протоколов, показал, что все иМФ имеют сходные морфологические и фенотипи-ческие характеристики, однако различаются по деталям транскриптомного профиля (экспрессии генов, ассоциированных с воспалительным ответом, липидным обменом, презентацией антигена) и траекториям дифференцировки. С использованием системы CRISPR/Cas9 разработана модель и показана возможность получения генетически модифицированных иМФ человека с индуцибельной экспрессией генов, участвующих в регуляции воспалительного и противоинфекционного иммунитета.
В целом, разработана модель получения иМФ и генетически модифицированных иМФ человека, которая может быть использована для изучения механизмов и разработки методов коррекции воспалительного и про-тивоинфекционного иммунитета, а в перспективе — для коррекции нарушенных функций макрофагов в клинике. Работа поддержана грантом РНФ № 19-075-1076. Работа проводилась с использованием оборудования ЦКП ИБР им Н.К. Кольцова РАН.
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ
ОЦЕНКА МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ
И АУТОФАГОЦИТАРНЫХ МАРКЕРОВ ПРИ
СТАРЕНИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА
А.С. Магнаева1, Т.И. Баранин1' 2, А.А. Гофман2,
Д.Н. Воронков1, В.С. Сухоруков1
1 ФГБНУ Научный центр неврологии, Москва, Россия
2 РНИМУ им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия
e-mail: alinamagnaeva03@gmail.com
Ключевые слова: митохондрия, аутофагия, старение головного мозга, нейродегенерация.
За последние десятилетия было показано, что при старении головного мозга поддержание функционального пула нейронов тесно связано с постоянным обновлением цитоплазмы и окислительным фосфорилированием, что определяет актуальность изучения аутофагии и митохондрий для разработки таргетной терапии возраст-ассоци-ированных нейродегенеративных заболеваний [1].
Цель исследования — определение уровней экспрессии маркеров шаперон-опосредованной аутофагии HSP70, LAMP2A, макроаутофагии LC3B, V ферментного комплекса митохондрий ATP5A, контроля качества митохондрий DJ1 в нейронах различных зон головного мозга человека при старении.
Аутопсийный материал был получен от 30 умерших старческого возраста, причиной смерти которых
явилась тромбоэмболия легочной артерии. Для сравнительного анализа был использован аутопсийный материал лиц 35-45 лет (n=10), умерших от внезапной сердечной смерти. В анамнезе больных отсутствовали указания на когнитивные и двигательные нарушения. Иммуногистохимическое исследование было проведено с использованием антител к LC3B, HSP70, LAMP2, ATP5A и DJ1. Оптическая плотность оценивалась в пе-рикарионе 150 крупных нейронов V слоя коры пре-центральной извилины, стриатума, пирамидного слоя гиппокампа. Для выявления различий между группами использовали критерий Краскела-Уоллиса.
Результаты иммуногистохимического исследования выявили увеличение экспрессии HSP70 в примерно 2 раза, а LAMP2A и LC3B в 1,5 раза в старческой возрастной группе по сравнению с контролем. Экспрессия ATP5A в нейронах коры, стриатума, гиппокампа в группе старческого возраста по сравнению группой молодого возраста была выше на 42%, 26% и 41%, соответственно. Во всех изученных зонах при старении отмечалась тенденция к снижению значений DJ1, однако статистически значимых различий между группами выявлено не было.
Таким образом можно предположить, что обнаруженные нами изменения уровней маркеров различных типов аутофагии, АТФ-синтетазы и маркера качества митохондрий, вероятно, способствуют выживаемости нейронов при возрастной инволюции за счет поддержания проте-остаза и адекватного уровня энергии в клетках, а дальнейшее изучение вышеуказанных белков с помощью различных методов клеточной и молекулярной биологии может внести вклад в понимание механизмов старения.
Литература:
1. Mattson M.P., Arumugam T.V. Cell Metab. 2018 Jun
5;27(6):1176-1199.
БЕЗАНТИТЕЛЬНЫЙ ХИМЕРНЫЙ РЕЦЕПТОР FLT3-CAR ДЛЯ ТАРГЕТИРОВАНИЯ ТИРОЗИНКИНАЗНОГО РЕЦЕПТОРА FLT3 — МАРКЕРА ПЛОХОГО ПРОГНОЗА ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ
В.Е. Майорова, М.Д. Моллаев, П.Н. Вихрева,
Е.А. Кулаковская, Д.Е. Першин,
А.В. Кибардин, М.А. Масчан, С.С. Ларин
ФГБУ НМИЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дм. Рогачева МЗ РФ, Москва, Россия
Ключевые слова: химерные рецепторы CAR, лейкоз, FLT3.
Химерные рецепторы CAR — трансмембранные рецепторы, последовательность которых методами генной инженерии собрана из двух функциональных частей: внеклеточная часть химерного рецептора, узнающая опухолевый антиген на поверхности клетки-мишени, и внутриклеточная часть, состоящая из последовательности активирующего домена Т-клеточного рецептора CD3Z, а также одного или нескольких ко-стимулирующих доменов. В результате узнавания внеклеточной частью химерного рецептора CAR опухолевого антигена происходит активация CAR Т-клетки с последующим специфическим элиминированием опухолевой клетки.
Традиционно дизайн внеклеточной части рецептора CAR включает создание генетической конструкции, кодирующей одноцепочечный фрагмент вариабельной части (scFv) известного моноклонального антитела против
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
