CC BY
34
Науковий вюник Льв1вського нацюнального утверсигету ветеринарно! медицини та бютехнологш 1мен1 С.З. Гжицького Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7014
ISSN 2413-5550 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/ УДК 619:636.52/.58:616.41+612.112/616.-008.9
"W" • • • ^ • • | • • •
1мунопстох1М1чна характеристика суопопуляцш л1мфоцит1в у селезшщ
о ••• •• • 1 «о ^ •
куреи при вакцинацп ix проти 1нфекц1иного оронхггу
С.В. Гуральська guralska@ukr.net
Житомирський нацгональний агроекологгчний утверситет, Старий бульвар, 7, м. Житомир, 10002, Украна
У роботг з'ясовано гмуноггстохгмгчну характеристику субпопуляцш CD4+, CD8+, CD45RA+ - лгмфоцитгву селезтщ ку-рей, вакцинованих проти тфекцтного бронхту. Ыуноггстохгмгчт дослгдження засвгдчили, що змти кластергв iмунних клтин тсля iмунiзацií мали в селезтщ певт особливостi. Проведет нами до^дження показали, що вакцинащя проти тфекцшного бронхту курей на першу, 13 та 33, 83 та 103 добу впливала на змту вiдсотка клтин кластера CD4+ (хелпери). Так, тсля введення вакцини на 8 добу спостеркалася тенденщя до збтьшення його до 9,23 + 0,39% проти 6,91 +0,26% у контролi. Але вже на 20 добу вiдзначалося суттеве збтьшення ^brn^i хелперiв - 10,07 + 0,44% (р < 0,01) проти 8,51 +0,31% - у контролi. Ранш супресивш прояви рееструвались на 8 добу. Вiдзначалося рiзке збшьшення кiлькостi CD8+ у до^днт грут, де ктьюсть клтин i3 цим маркером перевищувала аналогiчнi показники в контролi бтьш, шж у два рази. Так, при вивченнi субпопуляцп лiмфоцитiв з маркером CD8+ встановлено вмкт Их в контролi - 9,88 + 0,38%; у курей, яю отримали вакцину в даний перюд ктьюсть CD8+ становив 24,99 +0,46% (р < 0,001). На 8 добу спостеркалася достовiрне збтьшення кiлькостi CD45RA+ до 14,22 + 0,18% (р < 0,001), у контрольнш групi даний показник становив 9,95 +0,38%. Максимальне тдвищення вiдзначене на 40 добу, коли показник CD45RA+ у групi тутзованих курей становив 14,74 +0,29% (р < 0,05).
Knwuoei слова: кури, селезiнка, лжфоцити, CD4+, CD8+, CD45RA+, тфекцшний бронхт, вакцинащя, iмуногiстохiмiчнi до^дження.
Иммуногистохимическая характеристика субпопуляций лимфоцитов в селезёнке кур при вакцинации их против инфекционного бронхита
С.В. Гуральская guralska@ukr.net
Житомирский национальный агроэкологический университет, Старый бульвар, 7, г. Житомир, 10002, Украина
В работе выяснено иммуногистохимическую характеристику субпопуляций CD4+, CD8+, CD45RA+ - лимфоцитов в селезёнке кур, вакцинированных против инфекционного бронхита. Иммуногистохимические исследования показали, что изменения кластеров иммунных клеток после иммунизации имели в селезёнке определенные особенности. Проведенные нами исследования показали, что вакцинация против инфекционного бронхита кур на 1, 13, 33, 83 и 103 сутки влияла на изменение процента клеток кластера CD4+ (хелперы). Так, после введения вакцины на 8 день наблюдалась тенденция к увеличению его к 9,23 +0,39% против 6,91 + 0,26% в контроле. Но уже на 20 сутки отмечалось существенное увеличение количества хелперов (10,07 +0,44% (р <0,01) против 8,51 +0,31% - в контроле. Ранние супрессивное проявления регистрировались на 8 сутки. Отмечалось резкое увеличение количества CD8+ в опытной группе, где количество клеток с этим маркером превышала аналогичные показатели в контроле больше, чем в два раза. Так, при изучении субпопуляции лимфоцитов с маркером CD8+ установлено содержание их в контроле 9,88 +0,38 %, у кур, которые получали вакцину в данный период,
Citation:
Guralska, S.V. (2016). Immunohistochemical characterization of lymphocyte subpopulations in the spleen of chickens after vaccination against infectious bronchitis. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 18, 3(70), 62-66.
количество СВ8+ составил 24,99 +0,46% (р < 0,001). На 8 день наблюдалась достоверное увеличение количества CD45RA+ до 14,22 +0,18% (р < 0,001), в контрольной группе данный показатель составлял 9,95 +0,38%. Максимальное повышение отмечено на 40-й день, когда показатель CD45RA+ в группе иммунизированных кур составил 14,74 +0,29% (р < 0,05).
Ключевые слова: куры, селезенка, лимфоциты, СD4+, СD8+, CD45RA+, инфекционный бронхит, вакцинация, иммуноги-стохимические исследования.
Immunohistochemical characterization of lymphocyte subpopulations in the spleen of chickens after vaccination against infectious bronchitis
S.V. Guralska guralska@ukr.net
Zhytomyr national agroecologycal university, Staryj Boulevard, 7, Zhytomyr, 10002, Ukraine
In the work the immunohistochemical characterization of subpopulations of СD4+, СD8+, CD45RA+ lymphocytes in the spleen of chickens vaccinated against infectious bronchitis clarified. Immunohistochemical studies have shown that changes in the clusters of immune cells after immunization was certain features in the spleen. Our studies showed that vaccination against infectious bronchitis of chickens in the first, 13 and 33, 83 and 103 day influenced on the change in the percentage of cells in the cluster of СD4+ (helper cells). So, after the introduction of the vaccine on the 8 th day, there was a tendency to increase to 9.23 ± 0,39% against 6,91 ± 0.26% in the control group. But at 20 days there was a significant increase in the number of helpers (of 10.07 ± 0,44% (p < 0.01) against 8.51 ± 0.31% in the control. Early supresion manifestations were recorded on 8th day. There has been a dramatic increase in the number of СD8+ in the experimental group, where the number of cells with the marker were higher than in control more than in two times. So, when studying subpopulations of lymphocyte marker СD8+ installed content control for 9.88 ± 0.38% in Chicks which received the vaccine in this period, the number of СD8+ amounted to 24.99 ± 0,46% (p < 0.001). On the 8th day there was a significant increase in the number of CD45RA+ to 14.22 ± 0.18% (p < 0.001), in control group this indicator amounted to 9.95 ± 0.38% Maximum increase observed on the 40th day, when the CD45RA+ in the group immunized chickens amounted to 14.74 ± 0.29% (p < 0.05).
Key words: chickens, spleen, lymphocytes, СD4+, СD8+, CD45RA+, infectious bronchitis, vaccination, immunohistochemistry.
Вступ
1нфекцшний бронхи птиц рееструеться в ycix кра-1нах свиу i спричиняе значш eKOHOMÍHHÍ збитки про-мисловим i фермерським птахогосподарствам. Однь ею з актуальних проблем в птахiвництвi залишаеться вибiр оптимальних програм iмyнiзацil пищ щодо шфекцшного бронхпу курей (Parsons et al., 1992; Ignatov, 2003; Seyfi Abad Shapouri et al., 2003; Beato et al., 2005).
Засоби дiагностики вiрyсних хвороб птиш, що ви-користовуються на сьогодшшнш день, трудомютш та е недостатньо чутливими та специфiчними.
Iмyногiстохiмiчнi дослвдження у ветеринари застосовуються для дiагностики шфекцшних хвороб, в тому числ шфекцшного бронхгту курей (Collisson et al., 2000; Krasnikov et al., 2004; Shutchenko, 2007; Gavrylin et al., 2011; Medvid', 2011). Гаврилш П.М. Прокушенкова О.Г., Недзвецький В.С. (Gavrylin et al., 2011) отримали результати дослщжень, яш сввдчать про те, що iмyногiстохiмiчнi методи виявлення антигешв вiрyсних хвороб птищ можуть надати значну шформацш про iмyногеннi особливосл вiрyса, тропшсть i шльшсний вмют в органах i тканинах. Ряд авторiв використовували iмyногiстохiмiчнi методи при дослщженш лiмфоlдних утворень у курей (Seo and Collisson, 1997; Erf et al., 1998; Yasuda et al., 2002; Olah et al., 2003; Nagy and Olah, 2007; Medvid', 2011). Так, Fredericksen Т. та Gilmour D. (Fredericksen and Gilmour, 1983) показали, що шльшсть iмyнокомпетентних Т-клгган у селезшщ
тдвищувалася в перший тиждень тсля вилуплення i продовжувала зростати до 42-1 доби тсля виведення. Bemdt A. та Methner U. (Bemdt and Methner, 2001) вивчали розповсюдження та шльшсть субпопуляцш Т-клiтин у слшш кишцi, бурсi Фабрицiуса, селезшщ тсля зараження курчат S. typhimurium. У селезiнцi CD8+ локалiзувалися в оболонщ перiартерiальних лiмфатичних судин i в марпнальних зонах. За даними Шутченко П.О. (Shutchenko, 2007) шльшсть Т-лiмфоцитiв з кластерами CD4+ у селезiнцi значно зростае у iмунiзованих курчат, у той час як у шфпсованих - стабшьшше зростае кiлы(iсть клiтин з маркерами CD3+, CD8+, TcRl та TcR2. N. Nagi i I. Olah (Nagy and Olah, 2007) при дослвдженш тлоричного мигдалика курей, встановили, що CD45RA+-позитивнi кл1тини виявлялися у iнтерфолiкулярних дiлянках та 6йльшйсть у гермiнативних центрах лймФо1'дних вузлишв.
Перспективнiсть розвитку iмуногiстохiмiчних до-слщжень полягае в тому, що вони поеднують у собi можливостi сучасно! гiстологil та iмуногiстохiмiчного аналiзу на клггинному та тканинному рiвнях i дають можливiсть проводити дiагностику у фшсованому матерiалi навiть пiсля тривалого його зберiгання (Kiernan, 1981). Iмуногiстохiмiчнi методи досл1дження на теперiшнiй час е невщ'емною частиною наукових дослщжень. Застосування iмуногiстохiмil значно ро-зширюе можливостi морфолог^' як у вивченш етiоло-гй', патогенезу патологiчних процеав, так i в дiагнос-тичнш практицi.
Метою роботи е дослщження морфофункщона-льного стану селезшки курей при вакцинаци проти шфекцшного бронхгту. Для досягнення мети необхГд-но виршити наступш завдання: 1. визначити вм1ст, розмщення i кшьшсне сшввщношення субпопуляцш CD4+ - лiмфоцитiв у селезшщ курей рiзного вiку при вакцинаци проти шфекцшного бронхiту; 2. визначити вмГст, розмiщення i шльшсне спiввiдношення субпо-пуляцiй CD8+ - тмфоципв у селезiнцi курей рiзного вiку при вакцинаци проти шфекцшного бронхгту; 3. визначити вмiст, розмщення i к1льк1сне сшввщно-шення субпопуляцш CD45RA+ - лiмфоцитiв у селезь нцi курей рiзного вiку при вакцинаци проти шфекцшного бронхгту.
Матергал i методи досл1джень
Для дослгду було вiдiбрано групу курчат кросу Хайсекс вшом 1 доба, вирощених в умовах СТОВ
«Старосолотвинська птахофабрика» БердичГвсько-го району Житомирсько! областi, роздiлених за принципом аналопв на двГ групи по 70 гол1в в кожнш.
Перша група - контрольна, друга - дослвдна, курчат яко! вакцинували зпдно плану щеплень ремонтного молодняку на 1, 13, 33, 83 та 103 добу. При вико-нанш роботи використовували анатомiчнi, органомет-ричш, пстолопчш та ГмунопстохГмГчш досладження.
Гiстологiчне дослiдження проводили на кафедрГ анатоми i пстологи факультету ветеринарно! медици-ни Житомирського нацюнального агроекологiчного унiверситету. Матерiалом була селезшка курей вщб-рана вгд птищ контрольно! та дослГдних груп на 7 добу шсля вакцинаци, вГдповГдно на 8, 20, 40, 90 та 110 добу. Для проведения пстолопчних досл1джень застосовували загальноприйиятi методи фшсаци тканин та виготовлення пстозрГзГв (Avtandilov, 1990, Goral's'kyj et al., 2005). Iмуногiстохiмiчне досл1дження проводили в патоморфологiчнiй лабораторй' «CSD» м. Ки1в. На пстолопчних зрiзах з використанням ми-шинних моноклональних антитш (датсько! фГрми DAKO) виявляли субпопуляци лГмфоципв, експресу-ючих антигеннi маркери CD4+ (Т-хелпери), CD8+( Т-цитотоксичш кл1тини i нормальнi Т-к1лери), CD45RA+ (В-лГмфоцити). За допомогою свГтлового мшроскопа визначали вмют, розмiщения i шльшсне спiввiдношения субпопуляцш. У цих органах пГдра-ховували вГдсоткове спiввiдношения позитивно фар-бованих дГлянок або окремих скупчень коричневого кольору до вае! незабарвлено! площГ зрГзу. Обчис-лення середньостатистичного значення (М), стандартного вщхилення середнього (m) та ступеня достовГр-носп (р) здшснювали за допомогою комп'ютерно! програми Excel.
лГмфоципв у птищ 90-а добового вшу розташоваш у лГмфатичних вузликах, де формують скупчення у виглядГ «розеток» (рис. 2.).
Вгдсоток кл1тин кластера CD4+ (хелпери) змГнюва-вся в процеа розвитку реакци (рис. 3.). Так, шсля введення вакцини на 8 добу спостериалася тенденщя до збГльшення його до 9,23 + 0,39% проти 6,91 + 0,26% у контроль Але вже на 20 добу вщзнача-лося суттеве збшьшення шлькосп хелперГв (10,07 + 0,44% (р < 0,01). проти 8,51 + 0,31% - у конт-ролГ). На 40 добу рГзниця мгж контрольною та дослгд-ною групами була достовГрною, рГвень л1мфоципв з поверхневим маркером CD4+ помттно зростав до 12,32 + 0,43% (проти контролю 10,02 + 0,39%). Реак-щя хелперГв на вакцинний штам з 90-1 та 110-1 доби починала згасати в порГвнянш з попередшм перюдом. Так, якщо в курей 90 добового вГку досладно! групи вмют CD4+ становив 11,77+0,54%, то на 110 добу даний показник становив - 11,04 + 0,52%.
Рис. 1. СД 45RA+-лiмфоцити у селезшщ 40-а добово'' курки, вакциновано'1' проти шфекцшного бронхгту. Х 400
Рис. 2. СД 8+-лгмфоцити у селезшщ 90-а добово'1 курки, вакциновано'1 проти шфекцшного бронхгту. Х 400
Результати та i'x обговорення
1мунопстохГмГчними досладженнями встановлено, що в селезшщ вах вшових трупах курей субпопуляци лГмфоципв з кластерами CD4+, CD8+, CD45RA+ роз-мщеш дифузно та поодиноко. СD45RA+-лiмфоцити у курей 40 добового вшу формують бГля капсули селезшки «ланцюжки» (рис. 1.). Частина CD4+, CD8+-
Вивчення субпопуляцш клттин ГмунГтету в селезь нщ засввдчило, що шсля вакцинаци виявлялись чпта прояви змш Т-клгтин селезшки (CD8+) уже на 8 добу (рис. 4.). Тут також чгтко i з високим ступенем досто-вГрносп спостериалася динамша змш шлькосп субпопуляци. Рант супресивш прояви рееструвались на 8 добу коли вГдсоток вмюту клттин з маркером CD8+ у груш Гмушзованих курей, вщзначалося рГзке збшь-
memm KijibKocri CD 8+ y gocjiigrnn rpyni, ge KijibKicTb KjiTHH i3 цнм MapKepoM nepeBH^yBana aHanoriHHi noKa3HHKH b Kompom 6inbme, Hi® y gBa pa3H. TaK, npu BHBneHHi cy6nonyj^ii fliм$oцнтiв 3 MapKepoM CD8+ BCTaHoBjieHHH BMicT b kohtpoJ 9,88 + 0,38% y KypnaT, aKi oTpHMajH вaкцннy b gaHun nepiog KijbKicTb CD8+ CTaHoBHB 24,99 + 0,46% (p < 0,001). Ha 40, 90 go6y o3HaKH nocujeHHa CD8+ b rpyni iMyHi3oBaHHx KypnaT 3racajH, i KijbKicTb kjthh cy6nonyja^i cTaHoBHja 11,88 + 0,39% (p < 0,05) Ta 12,32 + 0,35% (p < 0,05) BignoBigHo. y Komponbrnn rpyni gaHun noKa3HHK y 40-a go6oBoMy вiцi cTaHoBHB - 13,19 + 0,35% Ta 13,51 + 0,31% y 90 go6oBoMy вiцi (puc. 4.)
PHC. 3. ^unaMiua 3MiH cy6nony.HuiT .iM^ouuTiB 3 noBepxHeBHM MapKepoM CD4+ y ce.e3mui Kypeö npH BaKuu^^! ix npoTH ilKlK'K'iiiiiiiolo 6poHxiTy
n KOHTponb Q iMyHi3
40 gis 90 aiO
PHC. 4. ^"HaMiKa 3Mm cy6nony.HuiT .iM^ouuTiB 3 noBepxHeBHM MapKepoM CD8+ y ce.e3mui Kypeö npu BaKuu^^! ix npoTH ilKlK'K'iiiiiiiolo 6poMxiTy
HacTynHHH nepiog 110 go6u xaparcreproyBaBca He-BejHKHM 36ijbmeHHaM KijbKocri цнх KjiTHH 3 He3Han-hhm nepeBH^eHHHM nopiBHaHo i3 KoHTponbHoro rpynoro 3 13,06 ± 0,34% go 13,95 ± 0,11% (p < 0,05) y gocnigi.
^ocToBipHe 36inbmeHHa BigcoTKoBoro BMicTy Big-3HaneHa y cy6nonyja^I CD45RA+ nicja iMyrn3a^i Kypen (puc. 5).
PHC. 5. 4"HaMika 3Mm cy6nony.HuiT .iM^ouuTiB 3 noBepxHeBHM MapKepoM CD45RA + y ce.e3mui Kypeö npu BaiKimiaiiM ix npoTH ilKlK'K'iiiiiiiolo 6poM\i'iy
Ha 8 go6y cnocrepiraflaca gocTOBipHe 36iflbmeHHa KiflbKocTi CD45RA+ go 14,22+0,18% (p < 0,001), y koh-TpoflbHin rpyni gaHHH noKa3HHK CTaHOBHB 9,95 + 0,38%. MaKCHMa^bHe nigBH^eHHa Big3HaneHe Ha 40 go6y, KoflH noKa3HHK CD45RA+ y rpyni iMyHi30BaHHx Kypen CTaHO-bhb 14,74 + 0,29% (p < 0,05). PeaKqia B-fliM$oqrniB Ha BaKquHHHH mTaM 3 90 Ta 110 go6u nonuHafla 3racaTH b nopiBHHHHi 3 nonepegHiM nepiogoM. TaK, aK^o b Kypen 90 go6oBoro BiKy gocfligHoi rpynu BMicT CD45RA+ CTaHoBHB 11,91 + 0,91% (p < 0,01), to y KompoflbHin rpyni gaHun noKa3HHK CTaHoBHB - 13,75 + 0,21% (puc. 5.).
TaKHM hhhom, iMyHoricToxiMiHHi gocflig^eHHa 3a-CBigHH^H, ^o 3MiHH KflacrepiB iMyHHux KfliTHH nicna iMyHi3aqii MaflH b cefle3iHqi neBHi oco6flHBocTi.
BuCMOBKM
1. BigcoTOK KfliTHH Kflacrepa CD4+ (xejinepu) 3Mi-HMBaBca b пpoцeci po3BHTKy peaKqii. TaK, nicna BBe-geHHH BaKquHH Ha 8 go6y cnocrepiraflaca TeHgeHqia go 36i^bmeHHH noro go 9,23 + 0,39% npoTH 6,91 + 0,26% y Kompofli. Afle B®e Ha 20 go6y Big3Hanafloca cyrreBe 36i^bmeHHH KiflbKocTi xeflnepiB (10,07 + 0,44% (p < 0,01) npoTH 8,51 + 0,31% - y Kompofli.
2. BuBneHHa cy6nonynaqin KfliTHH iMyHiTeTy b cefle-3iHqi 3acBig^Hflo, ^o nicna BaKquHaqii BuaBnaflucb Hira npoaBH 3MiH T-KfliTHH cefle3iHKH (CD8+) y®e Ha 8 go6y. TyT TaKo® niTKo i 3 bhcokhm CTyneHeM gocToBipHocTi cnocTepiraflaca guHaMiKa 3MiH KiflbKocTi cy6nonyflaqii.
3. nopiBHHHo HH3bKa aKTHBHicTb CD45RA+ y cefle3i-Hqi Kypen gocfligHoi rpynu 3 90 no 110 go6y cBignufla npo BigHocHo cfla6Ky ynacTb qboro opraHy b npogyKqii ryMopaflbHux aHTHTifl npu BaKquHaqii npoTH iH^eKqin-Horo 6poHxiTy Kypen.
nepcneKTHBH nogaflbmux gocflig®eHb. nflaHyeTbca npoBecTH iMyHoricToxiMinHi gocflig^eHHH opraHiB iMy-HoreHe3y Ta KpoBoTBopeHHH npu m^eKqinHoMy 6poHxiTi Kypen.
Bi6^iorpa$iHMi iIOCM. lainm
Ignatov, M.M. (2003). Naukove obg'runtuvannja vakcynoprofilaktyky infekcijnogo bronhitu kurej: avtoref. dys. na zdobuttja nauk. stupenja kand. vet. nauk: spec. 16.00.08 «Epizootologija ta infekcijni hvoroby». UAAN. In-t eksperym. i klinich. vet. medycyny. 22 (in Ukrainian). Parsons, D., Ellis, M.M., Cavanagh, D., Cook J.K.A. (1992). A «new» strain of infectious bronchitis virus infecting domestic fowl in Great Britain. Veterinary Record. 130, 493-494. Seyfi Abad Shapouri, M.R., Mayahi, M., Assasi, K., Charkhakar, S. (2003). A survey of the prevalence of infectious bronchitis virus type 4/91 in Iran. Acta Veterinaria Hungarica. 52, 163-166. Beato, M.S., Battisti, C.De., Terregino, C., Drago A. (2005). Evidence of circulation of a Chinese strain of infectious bronchitis virus (QXIBV) in Italy. The Veterinary Record. 156-172.
Gavrylin, P.M. Prokushenkova, O.G., Nedzvec'kyj, V.S. (2011). Metodychni osoblyvosti zastosuvannja imu-nogistohimichnogo analizu dlja diagnostyky virusnyh hvorob ptyci [Elektronnyj resurs] (in Ukrainian).
Krasnikov, G.A. Shutchenko, P.A., Berndt, A. (2004). Primenenie immunogistohimicheskih metodov issle-dovanija pri izuchenii immuniteta zhivotnyh. III kon-ferencija Vseukraïns'kogo tovaristva veterinarnih patologiv, 21-23 kvitnja 2004 r. Harkiv. 4(1), 35-38 (in Ukrainian).
Medvid', K.O. (2011). Vyvchennja dynamiky nakopychennja subpopuljacij imunokompetentnyh klityn u selezinci kurchat za eksperymental'nogo zarazhennja virusom nyz'kopatogennogo grypu ptyci. Problemy zooinzhenerii' ta veterynarnoi' medycyny : zb. nauk, prac' Harkivs'koi' derzhavnoi' zooveterynar-noi' akademii'. 1, 23, 2, 61-64 (in Ukrainian).
Shutchenko, P.O. (2007). Imunogistohimichna diagnostyka ta ocinka klitynnogo imunitetu pry sal'monel'ozi kurej: avtoref. dys. na zdobuttja nauk. stupenja kand. vet. nauk: spec. 16.00.03 «Veterynarna mikrobiologija ta virusologija». Harkiv. 21 (in Ukrainian).
Cytotoxic, T.W., Collisson, E., Pei, J., Dzielawa, J., Seo S.H. (2000). lymphocytes are critical in the control of infectious bronchitis virus in poultry. Dev. Comp. Immunol. 24, 187-200.
Seo, S.H., Collisson, E.W. (1997). Specific cytotoxic T lymphocytes are involved in in vivo clearance of infectious bronchitis virus. J. Virol. 71, 5173-5177.
Yasuda, M., Tanaka, S., Arakawa, H. [et al.] (2002). A comparative study of Gut- Associated Lymphoid Tis-
sue in calf and chicken. The Anatomical Record. 266, 207-217.
Erf, G.F., Bottje, W.G., Bersi, T.K., Headrick M.D. (1998). Effects of dietary vitamin E on the immune system in broilers: Altered proportions of CD4 T cells in the thymus and spleen. Poultry Science. 77, 529537.
Nagy, N., Olah, I. (2007). Pyloric tonsil as a novel gut-associated lymphoepithelial organ of the chicken. Journal of Anatomy. 211(3), 407-411.
Olah, I., Nagy, N., Magyar, A. (2003). Esophageal tonsil: a Novel gut-associated lymphoid organ. Poultry Science. 82, 767-770.
Fredericksen, T.L., Gilmour, D.G. (1983). Ontogeny of conA and PHA responses of chicken blood cells in MHC-compatible lines 6(3) and 7(2). J. Immunol. 130, 2528-2533.
Berndt, A., Methner, U. (2001). Gamma-delta T-cell response of chickens after oral administration of attenuated and non-attenuated Salmonella typhimurium strains. Vet. Immunol. Immunopathol. 78, 143-161.
Kiernan, J.A. (1981). Histological and histochemical metods: theory and practice. N.Y.: Pergamon Press. 81.
Avtandilov, G.G. (1990). Medicinskaja morfometrija: [rukovodstvo]. M.: Medicina (in Russian).
Goral's'kyj, L.P., Homych, V.T., Konons'kyj O.I. (2005). Osnovy gistologichnoi' tehniky i morfofunkcional'ni metody doslidzhennja u normi ta pry patologii': [navch. posibnyk]. Zhytomyr: Polissja (in Ukrainian).
Cmammn nadiumm do peda^ii 25.09.2016
