CC BY
24
Науковий вюник Льв1вського нацюнального утверсигету ветеринарно! медицини та бютехнологш 1мен1 С.З. Гжицького Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7024
ISSN 2413-5550 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:616.15:616.155.392
Змши в кров1 щурiв шсля iмушзащl препаратом «Лейкозав» проти лейкозу
велико'! рогато'! худоби
А.1. Завiрюха1, О.1. Вiщур2, Г.А. Завiрюха1 [email protected]
1 ДНУ «Державний центр шновацтних бютехнологш», вул. Донецька, 30, м. Кигв, 03151, Украгна; 21нститут бюлоги тварин НААН, вул. Василя Стуса, 38, м. Львiв, 79000, Украгна
В статт1 представлен результати гематологгчних дослгджень кровг щургв за дгг препарату «Лейкозав» проти лейкозу великогрогатогхудоби.Досл1дним тваринам препарат «Лейкозав» вводився двгчг з Iнтервалому 14 дгб по 0,5 см3.
До введення г тсля введення дослгджено гематологгчнг показники: число лейкоцитгв, еритроцитгв г тромбоцитгв та гх гндекси, вмгст гемоглобту.
За результатами дослгджень встановлено, що кглькгсть еритроцит1в, вмгст гемоглобту та величина гематокриту зменшуються в межах статистичних похибок г не мають негативного впливу на здоров 'я лабораторних тварин.
Введення препарату «Лейкозав» щурам не спричиняло вгроггдних змт щодо показниюв тромбоцитарних гндексгв у кровг тварин на сьому добу тсля щеплення.
Встановлено зменшення юлькостг сегментоядернихнейтрофтв г зростання юлькостг лгмфоцитгв в одиницг об'ему кровг (1 мкл) на 14 та 30 добу тсля щеплення (р < 0,05 — 0,01)та збыьшення кглькостг моноцитгв в 1,6рази через 30 дгб тсля гмутзаци (р < 0,05) у поргвнянт з довакцинальним пергодом.
Пгд впливом препарату «Лейкозав» через два тижнг тсля гмутзацп в кровг тварин збыьшуеться кглькгсть базофтв (в 2 — 2,5 рази). У поргвнянт з контрольною групою тварин еозинофыи кровг пгддослгдног групи щургв знаходяться у межах показниюв фгзгологгчног норми.
Ключовi слова: лейкоз великог рогатог худоби, тфекцшне захворювання,профглактика, препарат, випробування, гематологгчнг показники.
Изменения в крови крыс после иммунизации препаратом «Лейкозав» против лейкоза крупного рогатого скота
А.И. Завирюха1, О.И. Вищур2, А.А. Завирюха1 [email protected]
1 ГНУ «Государственный центр инновационных биотехнологий, ул. Донецкая, 30, г. Киев, 03151, Украина; 2 Институт биологии животных НААН, ул. Василия Стуса, 38, г. Львов, 79000, Украина
В статье представлены результаты гематологических исследований крови крыс при действии препарата «Лейкозав» против лейкоза крупного рогатого скота. Опытным животным препарат «Лейкозав» вводился дважды с интервалом в 14 дней по 0,5 см3.
До введения и после введения исследованы гематологические показатели: число лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов и их индексы, содержание гемоглобина.
Citation:
Zaviriukha, A.I., Vischu, O.I., Zaviriukha, H.A. (2016). Changes in blood of rats after immunization preparation «Leykozav» against leukemia cattle.
Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 18, 3(70), 103-107.
По результатам исследований установлено, что количество эритроцитов, содержание гемоглобина и величина гема-токрита уменшаються в пределах статистических погрешностей и не оказывают негативного влияния на здоровье лабо-раторних животных.
Введение препарата «Лейкозав» крысам не вызывало достоверных изменений по показателям тромбоцитарных индексов в крови животных на седьмые сутки после прививки.
Установлено уменьшение количества сегментоядерных нейтрофилов и рост количества лимфоцитов в одинице объема крови (1 мкл) на 14 и 30 сутки после прививки (р < 0,05 — 0,01) и увеличение количества моноцитов в 1,6раза через 30 дней после иммунизации (р < 0,05) по сравнению с довакцинальным периодом.
Под влиянием препарата «Лейкозав» через две недели после иммунизации в крови животных увеличивается количество базофилов (в 2 - 2,5 раза). По сравнению с контрольной груп пой животных эозинофилы крови подопытной группы крыс находятся в пределах показателей физиологической нормы.
Ключевые слова: лейкоз крупного рогатого скота, инфекционноезаболевание, профилактика, препарат, испытания, гематологические показатели.
Changes in blood of rats after immunization preparation «Leykozav» against
leukemia cattle
A.I. Zaviriukha1, O.I. Vischu2, H.A. Zaviriukha1 [email protected]
1 State Center of Innovation Biotechnologies, Donetsk Str., 30, Kyiv, 03151, Ukraine;
2 Institute of animal biology NAAS, Vasyl Stus Str., 38, Lviv, 79000, Ukraine
The article presents the results of research of hematological blood of rats under the influence of the drug «Leykozav» against bovine leukemia. Experienced animal drug «Leykozav» introduce twice at an interval of 14 days at 0.5 cm3.
Before the introduction and after the introduction of studied hematologic parameters: the number of white blood cells, red blood cells and platelets and their indices, the hemoglobin content.
According to the research found that the number of red blood cells, hemoglobin and hematocrit values are reduced to within statistical error, and no adverse effects on the health of laboratory animals.
The introduction of the drug «Leykozav» rats did not cause any significant changes in terms ofplatelet indices in the blood of animals on the seventh day after the inoculation.
The decrease number of segmented neutrophils and increase in the number of lymphocytes in the blood unit volume (1 at 14 and 30 days after inoculation (r < 0.05 - 0.01) increase the number of monocytes and 1,6 times at 30 days after immunization (r < 0,05) compared to before vaccination period.
Influenced «Leykozav» preparation two weeks after immunization animals increases the amount of blood basophils (2 - 2,5 mkl). Compared with the control group of animals of the experimental group of blood eosinophils of rats indices are within physiological norms.
Key words: leukemia cattle, infectious disease prevention, testingpreparation, hematology.
Вступ
Лейкоз велико! рогато! худоби (ВРХ) -хротчна шфекцшна хвороба, що характеризуеться злояшсним розростом кровотворно! тканини, порушенням дозрь вання кровотворних клггин, шф1льтращею оргашв цими клтшнами i утворенням пухлин (Sjurin et al., 2001). Лейкоз велико! рогато! худоби - хрошчне ш-фекцшне захворювання, яке значно поширене у кра!-нах свиу. Етзоотична ситуащя щодо лейкозу ВРХ вже бшьше десяти рошв залишаеться напруженою. Незважаючи на зниження загально! шлькосл хворих тварин в усьому свт шфекцшна хвороба рееструеть-ся у кра!нах £вропи - Полыщ, Молдову Босни, Хорват, Сербп, Греци та в Росп, Бшорусп Казахстан^ Узбекистан Таджикистан та шших кра!нах (Gorbatenko and Shapovalova, 2013; Gorbatenko et al., 2014).
Етзоотична ситуащя щодо лейкозу ВРХ в Укра!т сввдчить про зниження шлькосл уражених вiрусом лейкозу тварин та шлькосл неблагополучних пунклв (Busol, 2003; Gorzhejev, 2013; Epizootychna sytuacija,
2015). В остант роки в Укра!т завдяки зусиллям ветеринарно! служби оздоровлений ряд регюшв ввд цього захворювання. Проте, лишаеться ще багато областей, де лейкоз широко розповсюджений, а тому е актуальною ветеринарною проблемою.
У багатьох кра!нах зарубiжжя та на Укра!ш прово-дяться пошуки iмуногенних препаралв проти онко-генного вiрусу лейкозу (Nagajeva and Aranchij, 2003; Krushel'nyc'kyj and Markiv, 2004). Останшм часом з'явились науковi пращ про розробку шактивованих вакцин, як вселяють надш про створення в майбут-ньому ефективних засобiв боротьби з щею шфекцш-ною хворобою (Zavirjuha et al., 2003; Tons'ka, 2013; Zavujuha, 2014).
Незважаючи на досягнул позитивш результати у боротьбi з лейкозом ВРХ в Укра!т проблема оздоровления худоби ввд захворювання лейкозом залишаеться актуальною. Стшке благополуччя молочних стад можна виршити застосуванням профiлактичних щеп-лень поголiв'я iнактивованою iмуногенною вакциною. Для ефективно! боротьби i профiлактики захво-
Приметка. У цш та наступит таблицях * - p < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001— в1ропдтсть у тварин дослщно! групи, поргвняно до контрольно!. N = 5 - кшьюсть тварин у контрольны грут; n = 6- кшьюсть тварин у до&шдшй грут
рювання необхвдно впровадження нових протилейко-зних засоб1в.
Мета i завдання дослгдження. Дослщити вплив препарату «Лейкозав» проти лейкозу велико! рогато! худоби на гематолопчш показники кров1 лаборатор-них тварин (щур1в). Дослвдити гематолопчш показники: число лейкоципв, еритроципв i тромбоципв та !х iидекси, вмiст гемоглоб^.
Матерiал i методи досл1джень
Для проведения дослвджень у вiварi! 1нституту бь ологi!' тварин НААН були ввдбраш статево зрiлi щурi (n = 50 гол.), аналоги за живою масою (250 - 300 г) та вшом. Ва тварини у тдготовчий перiод, який тривав 20 дiб, отримували стандартний повнощнний рацiон з вiльним доступом до води. Протягом дослвду спосте-р^али за поведiнкою щурiв, !х руховою актившстю, споживанням корму та води, станом волосяного та шкiрного покриву, дихально! i травно! систем, зверта-ли увагу на iншi iндивiдуальнi особливостi.
Шсля завершення шдготовчого перiоду вiдiбраио 10 тварин (контроль), яким внутрiшньом'язево вводили фiзрозчин, пiсля чого !х пвд легким хлороформним наркозом декаштовано i вiдiбраио зразки кровi для вивчення iмунологiчних та бiохiмiчних дослщжень. 1ншим 40 тваринам, вiдповiдно до шструкци, внутрь шньом'язево, пiсля завершення шдготовчого перiоду (дослвд; 0 доба) та через 14 дiб вводили препарат «Лейкозав» у дозi 0,5 см3 .
Шсля декаштаци щурiв, ввдбирали кров у пробiр-киз К2ЕДТА. Використовували для отримання плазми i формених елементiв кровi, для отримання сироватки ставили пробiрку зi зразком кровi в термостат на 60 хв
_Гематолопчш показники кров1 щурiв за
при 37°С, пiсля чого центрифугували 15 хв при 2000 тис об/хв i ввдбирали сироватку в iншу пробiрку. Дос-лвджували наступнi гематологiчнi показники:число лейкоцитiв, еритроцитiв i тромбоцитiв та !х iндекси, вмiст гемоглобiну.
Ва манiпуляцi!' з тваринами проводили зпдно з Свропейською конвенцieю про захист хребетних тварин, що використовуються для дослвдних та iнших наукових цшей та Закону Укра!ни«Про захист тварин вщ жорстокого поводження».
Статистичну обробку одержаних результатiв дос-лвджень проводили з використанням програми «Ехсе11 2011» для Windows iз обчисленням середшх значень (M), середньоквадратичних вщхилень (m) i порiвня-льних середшх значень iз використанням параметри-чного t - Стьюдента, з урахуванням порогу вiрогiдно-стi в1д р < 0,05 до р < 0,001.
Результати та ix обговорення
Результати гематолопчних дослвджень кровi щурiв показали, що через 7 дiб пiсля введення препарату кiлькiсть лейкоципв збiльшуeться в 1,2 рази. На 14 i 30 добу збшьшуеться або зменшуються показники пiдрахунку в межах статистичних похибок. К1льк1сть еритроципв, вмiст гемоглобiну та величина гематок-риту зменшуються в межах статистичних похибок i не мають негативного впливу на здоров'я тварин (табл. 1).
Шсля iмунiзацi! лабораторних щурiв препаратом «Лейкозав» через 7 дiб в !х кровi збiлыпуeться к1ль-шсть лейкоцитiв, майже на 20% (19,7%) що суттево вiдрiзняeться вiд показнишв, як1 були виявленi у тва-рин перед щепленням.
Таблиця 1
дц препарату ^<Лейкозав» (М ± m; п = 5 - 6)_
Показники
перед щепленням (контроль)
7 доба тсля вакцина_Д1!_
Перюд дослiджеиь
14-та доба тсля вак_цииацii_
30-та доба пiсля вакцииацii
WBC, 109/l
8,63 ± 0,60
10,33 ± 1,11
7,85 ± 0,93
6,95 ± 0,75
RBC, 1012/l
6,83 ± 0,22
6,44 ± 0,37
6,11 ± 0,61
6,31 ± 0,66
HGB, g/l
120,5 ± 2,33
114,17 ± 4,54
107,33 ± 10,84
113,20 ± 10,01
HCT, l/l
0,359 ± 0,009
0,342 ± 0,014
0,314 ± 0,030
0,335 ± 0,032
MCV, fl
52,72 ± 0,74
53,55 ± 1,65
51,50 ± 0,98
53,36 ± 1,00
MCH, pg
17,72 ± 0,46
17,88 ± 0,61
17,57 ± 0,48
18,10 ± 0,44
MCHC, g/l
334,6 ± 6,13
333,5 ± 2,06
341,5 ± 7,55
339,0 ± 3,55
RDW, %
14,50 ± 0,48
15,07 ± 0,29
13,55 ± 0,25
14,64 ± 0,54
PLT, 109/l
317,25 ± 41,42
297,00 ± 45,30
326,40 ± 44,89
334,00 ± 62,75
MPV, fl
7,12 ± 0,70
6,28 ± 0,25
6,87 ± 0,27
7,28 ± 0,97
PCT, cl/l
0,286 ± 0,057
0,366 ± 0,053
0,208 ± 0,054
0,361 ± 0,063
PDW, %
17,68 ± 1,81
16,57 ± 1,00
19,43 ± 1,12
15,7 ± 1,57
Однак щ показники були невiрогiднi (зб№шення лейкоцитiв в кровi щурiв на сьому добу тсля щеп-лення, можна пояснити тим, що введений антиген у виглядi у виглядi лейкозного iмунного препарату е концентрованими гетерогенними бiлками, як1 спри-чиняють формування специфiчного протилейкозного iмунiтету.
Змши показника в1дносно! ширини розподiлу еритроципв характеризують гетерогеннiсть доменних елеменпв i характеризуе, як коефiцiент варiацii' !х серед цього об'ему. На 14 добу шсля щеплення препаратом величина даного показника була вiрогiдно менша, н1ж у щурiв на сьому добу тсля iмунiзацii.
Введення препарату «Лейкозав» щурам не спри-чиняло вiрогiдних змiн щодо показнишв тромбоцита-
рних 1ндекс1в у кров1 тварин на сьому добу тсля ще-плення. Представлена лейкограма (табл. 2) сввдчить про зменшення шлькосл сегментоядерних нейтрофь лшв i зростання шлькосл л1мфоцит1в в одинищ об'ему кровi (1 мкл) на 14 та 30 добу шсля щеплення (р < 0,05 - 0,01). Так змiни можуть вказувати на те, що введення проти лейкозного антигену, як специфь чного бшку, до якого тварини не були генетично при-стосованi у процес еволюцй' спонукали зниження клiтинних факторiв захисту i пiдвищення гумораль-них факторiв супротиву iмунно! системи. Зб№шення кiлькостi моноцитiв в 1,6 рази через 30 дiб пiсля iму-
тзацп (р < 0,05) у порiвняннi з довакцинальним перь одом сввдчать про активiзацiю фагоцитарно! активно-стi клiтинного iмунiтету. Моноцити е попередниками плазматичних клiтин, якi формуються, як наслiдок з'еднання з антигеном. Таке з'еднання забезпечуе унiкальнiсть макрофапв в шактивацп чужорвдного антигену, що попав в русло кровг Макрофаги, як основа фагоцитарно! системи оргатзму об'еднують функцп найбiльш активного фагоцитозу, потужного цитотоксичного агента i досить активно! антигенпре-зентуючо! клiтини. Моноцити забезпечують функцю-нальну активнiсть макрофапв в плазмi кровi.
Таблиця 2
Лейкограма KpoBi щурiв за дй' препарату «Лейкозав», % (М ± m; п = 5 - 6)
Показники Перюд дослiджень
перед щепленням (контроль) 7 доба тсля вакцинацп 14-та доба пiсля вакцинацп 30-та доба тсля вакцинацп
Базофши 0,25+ 0,50+ 0,50+ 0,75+
Еозинофши 2,25 + 0,75 1,25 + 0,25 2,00 + 0,71 1,75 + 0,48
Ют 0 0 0 0
Паличкоядерт 1,25 + 0,25 1,75 + 0,48 2,25+0,48 1,25 + 0,25
Сегментоядернi 35,75 + 1,49 36,25 + 2,21 28,75+2,02*° 25,75 + 1,25**
Л1мфоцити 55,50 + 1,55 56,25 + 1,65 61,75+2,72 62,75 + 1,89*
Моноцити 5,00 + 0,82 4,00 + 0,91 4,75+0,85 8,00 + 0,71*
N = 5 - кшьюсть тварин у контрольны грут; n = 6 - кшьюсть тварин у дослiднiй групi
З даних табл. 2 видно, що шд впливом препарату «Лейкозав» через два тижш тсля iмунiзацi!' в кровi тварин збiльшуеться кiлькiсть базофшв (в 2 -2,5 рази). У порiвняннi з контрольною групою тварин еозинофiли кровi пiддослiдно! групи щурiв знахо-дяться у межах показнишв фiзiологiчно! норми.
Висновки
1. В органiзмi щурiв пiсля вакцинацп спостерйа-еться тенденця до зменшення у кровi кiлькостi ерит-роципв, вмiсту гемоглобiну та величини гематокриту, що може вказувати про шпбуючий вплив iмунiзацi! на еритроцитопоез i еритроцити.
2. При дослщженш кiлькостi лейкоцитiв i стввщ-ношення !х окремих форм у кровi щурiв на 14- i 30-ту добу пiсля щеплення встановлено зменшення шль-костi сегментоядерних нейтрофшв i збiльшення числа лiмфоцитiв (р < 0,05 - 0,01) i моноцитiв (р < 0,05)на 30-ту добу пiсля iмунiзацi!. При цьому рiзницi у шль-косп лейкоцитiв у кровi були невiрогiднi. Так1 змiни можуть свiдчити про зниження активносп клiтинних i пвдвищення гуморальних факторiв захисту пiд впли-вом препарату.
3. Введення препарату «Лейкозав» щурам не спри-чиняе негативного впливу на гематолопчш показники пщдослвдних тварин i !х здоров'я.
Перспективи подальших досл1джень. Проведення досл1джень iмунобiологiчних i бiохiмiчних показникiв кровi лабораторних щурiв за д^' препарату «Лейкозав» проти лейкозу ВРХ.
Biß^iorpa^iHHi noen^aHHfl
Sjurin, V.N., Samujlenko, A.Ja., Solov'jov, B.V., Fomina N.V. (2001). Virusnye bolezni zhivotnyh. Moskva: VNITIBP (in Russian).
Gorbatenko, S.K., Shapovalova, O.V., Kornjejkov, O.M., Zdanjevych, P.P. (2014). Naprjamky zapobigannja recydyvu epizootii' lejkozu velykoi' rogatoi' hudoby, Veterynarna medycyna. 98, 84-87 (in Ukrainian).
Gorbatenko, S.K. Shapovalova, O.V. (2013). Do vykorinennja lejkozu velykoi' rogatoi' hudoby v tvarynnyctvi Ukrai'ny. Veterynarna medycyna Ukrai'ny. 212, 17-19 (in Ukrainian).
Busol, V. (2003). Problema likvidacii' lejkozu. Rannij vyjav ta znyshhennja dzherela infekcii' chy zastosuvannja vakcyny? Zdorov'ja tvaryn ta liky. 7, 6-7 (in Ukrainian).
Gorzhejev, V.M. (2013). Suchasnyj epizootychnyj stan jak zakljuchnyj etap gradacii' lejkozu velykoi' rogatoi' hudoby v Ukrai'ni. Veterynarna medycyna. 97, 164166 (in Ukrainian).
Epizootychna sytuacija v Ukrai'ni stanom na zhovten' 2015 roku [Elektronnyj resurs] -http://www.vetgov.ua/node/4321. (in Ukrainian).
Krushel'nyc'kyj, Z., Markiv V. (2004). Ozdorovlennja gospodarstva vid lejkozu velykoi' rogatoi' hudoby iz zastosuvannjam vakcyny. Veterynarna medycyna Ukrai'ny. 5, 27-28 (in Ukrainian).
Nagajeva, L.I., Aranchij, S.V. (2003). Diagnostyka ta profilaktyka lejkozu velykoi' rogatoi' hudoby, Biblioteka veter. Med. Kyi'v. 3. (in Ukrainian).
Zavirjuha, A.I., Zavirjuha, G.A., Gopka, T.B. i insh. (2003). Rezul'taty vykorystannja vakcyny «Lejkozav» u profilaktyci i borofbi z lejkozom velykoi' rogatoi'
hudoby, Veterynarna medycyna. Mizhvid. temat. nauk. Zb. Harkiv. 82, 240-246 (in Ukrainian).
Tons'ka, T.G. (2013). Doslidzhennja profilaktychnyh protylejkoznyh preparativ na vivcjah, Naukovi praci PF NUBiP Ukrai'ny «KATU». 155, 281-286 (in Ukrainian).
Zavirjuha, A.A. (2014). Rezul'taty issledovanij krovi molodnjaka krupnogo rogatogo skota do i posle immunizacii vakcinoj «Lejkozav». Jepizootologija Immunologija Farmakologija Sanitarija.
Mezhdunarod. Nauchn. 2, 24-28 (in Ukrainian).
Cmammn nadiümna do peda^ii 5.10.2016
