CC BY
65
ней ритмической стимуляции. У больных первой основной группы результаты обследования до проведенного курса лечения составили 32,42±14,76, после курса лечения — 56,42±18,92 (р<0,001). Во второй основной группе до лечения 32,75±22,86, после лечения — 72,33±32,31 (р<0,001). Изучая вышеприведенные данные, можно отметить лучший процент реабилитации во второй основной группе, где использовался в качестве дополнительного метод внешней ритмической стимуляции.
Чтобы наиболее полно отразить все возможные параметры боли и наглядно отследить картину болевого синдрома в динамике в ходе исследования нами была использован опросник Pain DETECT. Опросник предназначен для заполнения врачом и объединяет в себе схему распределения болевых расстройств в виде картинки со шкалой ВАШ и опросником, направленным на выявление спонтанных и вызванных симптомов нейропатической боли. Так же, при помощи рисунка, оценивается характер течения боли: постоянный, приступообразный, постоянный с приступами и т.д. Вопросник наиболее полно отражает все возможные параметры боли и позволяет очень наглядно отслеживать картину болевого синдрома в динамике. Его чувствительность равна 83% [14]. Данные результатов до и после лечения методом ВРС составили: в первой подгруппе: до лечения 31,63±8,99, после лечения — 13,57±15,67 балла (р<0,001). Во второй подгруппе до лечения 8,97±2,46, после лечения — 5,13±2,93 балла (р<0,01). Для диагностики и дифференциальной диагностики нейропатической боли использовался опросник DN-4. Опросник состоит из двух
блоков: первый заполняется на основании опроса пациента, второй блок на основании клинического осмотра. Первый блок позволяет оценить позитивные сенсорные симптомы, такие как спонтанную боль (ощущение жжения; болезненное ощущение холода; ощущение как от ударов током) и парестезии и дизестезии (ощущение ползания мурашек, покалывание, онемение, зуд). Второй блок позволяет врачу выявить аллодинию и негативные сенсорные симптомы. Валидность опросника БЫ4 подтверждена соответствующим исследованием. Он правильно идентифицирует нейропатическую боль у 86% пациентов, а также обладает высоким уровнем чувствительности — 82,9% и специфичности — 89,9% [14]. Результаты исследования в первой подгруппе до лечения составили 7,16±2,67, после лечения — 2,97±3,27 балла (р<0,001). Во второй подгруппе до лечения 0,87±0,36, после лечения — 0,43±0,24 балла (р<0,01).
Таким образом, можно достоверно отметить уменьшение болевого синдрома, как невропатического, так и локального, у больных второй основной группы после лечения методом ВРС. Использование метода ВРС в комплексной реабилитации больных, перенесших церебральный ишемический инсульт с различными болевыми синдромами, способствует скорейшему и эффективному восстановлению сенсомоторных функций, улучшению качества жизни и уменьшению болевого синдрома (включая невропатический болевой синдром). Что позволяет рекомендовать его в качестве дополнительного в систему комплексной реабилитации данной группы больных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Баринов А.Н., Яхно Н.Н. Лечение невропатической боли // Русский медицинский журнал. — 2003. — № 25. — С.1419-1422.
2. Баринов А.Н., Новосадова М.В., Строков И.А. Периферические невропатии: практический подход к диагностике и лечению // Неврологический журнал. — 2002. — №4. — С. 53-56.
3. Баринов А.Н. Современные достижения в понимании механизмов формирования и лечения хронической боли // Неврологический журнал. — 2003. — №5б. — С.57-61.
4. Быков Ю.Н. Церебральная дезинтеграция: диагностика и коррекция. — Иркутск, 2002. — С. 47.
5. Вейн А.М., Авруцкий М.Я. Боль и обезболивание. — М.,
1997. — 280 с.
6. Гехт А.Б. Ишемический инсульт: вторичная профилактика и основные направления фармакотерапии в восстановительном периоде // Consilium medicum. — 2001. — Т.3. №5. — С 1-10.
7. Демиденко Т.Д., Ермакова Н.Г. Основы реабилитации неврологических больных. — СПб.: Фолиант, 2004. — С. 304.
8. Инсульт: практ. Руководство для ведения больных / Под ред. Ч.П. Ворлоу, М.С. Деннис, Ж. Ванн Гейн, и др. — СПб.,
1998. — 632 с.
9. Методические рекомендации по диагностике и лечению невропатической боли / Под. ред. Н.Н. Яхно. — М., 2008. — 26 с.
10. Скворцова В.И., Евзельман М.А. Ишемический инсульт. — Орел, 2006. — С. 360.
11. Строков И.А., Баринов А.Н. Клиника, патогенез и лечение болевого синдрома при диабетической полиневропатии // Неврологический Журнал. — 2001. — №6. — С. 47-55.
12. Штрибель Х.В. Терапия хронической боли (Практическое руководство) — М., 2005. — 26 с.
13. Ellison N., Loprinzi C.L., Kugler J., et al. Phase III placebo-controlled trial of capsaicin in the management of surgical neuropathic pain in cancer patients//J Clin Oncol — 1997. — №15. — Р. 2974-80.
14. Freynhagen R., Baron R., Gockel U., Tolle T. Pain DETECT: a new screening questionnaire to detect neropathic components in patients with back pain. //Curr Med Res Opin. — 2006. — № 22. — P. 20.
15. Menkes D.L. Neuropathic pain: a literature based, cost-effective treatment method // Peripheral Neuropathy, Ed: Didier Cros. — 2001. — Р. 403-422.
16. Somers D.L., Somers M.F. Treatment of neuropathic pain in a patient with diabetic neuropathy using transcutaneous electrical nerve stimulation applied to the skin of lumbar region // Phys Ther. — 1999. — №79. — Р. 767-775.
17. Hojsted J., Sjogren P. Addiction to opioids in chronic pain patients: A literature review // European Journal of Pain. — 2007. — №5. — Р. 490-505.
18. Schlaier J.R., Eichhammer P., Langguth B., et al. Effects of spinal cord stimulation on cortical excitability in patiets with chronic neuropathic pain: A pilot study // European Journal of Pain. — 2007. — №8. — P. 863-869.
19. Thomas P.K. Mechanisms and treatment of pain // Philadelphia. — 1999. — Р. 387-395.
Информация об авторах: 664078, г. Иркутск, м-н Зелёный д.23, кв. 53,
Березовская Анна Петровна — аспирант кафедры нервных болезней ИГМУ, E-mail: [email protected]; Быков Юрий Николаевич — проректор ИГМУ, д.м.н., профессор кафедры нервных болезней ИГМУ
© МИРОНОВ А.Н., БУШМЕНКОВ Д.С., КУПИНА Н.В., РОМАНОВА А.А., ЦААН А.А., МЕРКУЛОВ В.А., СТЕПАНОВ Н.Н., БРЫЗГАЛОВА С.И. — 2010
ИММУНОГЕННЫЕ И ПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ПАНДЕМИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ «ИНФЛЮВИР»
А.Н. Миронов1, Д.С. Бушменков1, Н.В. Купина1, А.А. Романова1, А.А. Цаан1,
В.А. Меркулов2, Н.Н. Степанов2, С.И. Брызгалова3 ('ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, Москва, и.о. генерального директора — Л.В. Григорьев;
2Филиал ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ — ВЦ», Сергиев Посад, начальник филиала — д.м.н., проф., В.П. Бондарев; 3Иркутское предприятие по производству бактерийных препаратов, директор — С.И. Брызгалова)
Резюме. Проведены доклинические исследования вакцины «ИНФЛЮВИР», включающие оценку иммуноген-ных и протективных свойств на хорьках. Показано, что применение вакцины «ИНФЛЮВИР» интраназально двукратно с интервалом 10 суток у хорьков вызывает формирование стойкого иммунитета и защищает от заражения «диким» штаммом пандемического гриппа 100% иммунизированных животных.
Ключевые слова: пандемия гриппа, вирус гриппа A/H1N1, живая гриппозная вакцина, безопасность, иммуно-генность, протективность.
THE IMMUNOGENIC AND PROTECTIVE PROPERTIES OF LIVE INFLUENZA PANDEMIC VACCINE «INFLUVIR»
A.N. Mironov1, D.S. Bushmenkov1, N.V. Kupina1, A.A. Romanova1, A.A. Tsaan1,
V.A. Merkulov2, N.N. Stepanov2, S.I. Bryzgalova3 ('MICROGEN Federal State Scientific-Industrial Company for Immunobiological Medicines of the Ministry of Health of Russia (MICROGEN Federal State Company), Moscow, 2”48 Central Research Institute of Ministry of Defence of Russian Federation” — “Virologist Center”, Sergiev Posad, 3Enterprise for Manufacturing of Bacterial Preparations, Irkutsk)
Summary. The nonclinical studies of vaccine “INFLUVIR” including assessment of immunogenic and protective properties have been conducted on ferrets. It is shown, what vaccine “INFLUVIR” during intranasal application two times a day with 10 days interval in ferrets causes forming of stable immunity and protects from infected «wild» strain of pandemic influenza in 100 % of immunized animals.
Key words: flu pandemic, virus A/H1N1, live influenza vaccine, safety, immunogeneity, protectivity.
Появление и циркуляция в человеческой популяции нового вируса гриппа типа А/НЩ^топе, вызвавшее массовые заболевания людей на многих континентах Земного шара, привели к объявлению 11.06.2009 г. ВОЗ 6 фазы, означающей начало глобальной пандемии гриппа [10]. Основной причиной столь быстрого распространения вируса гриппа серотипа А/НЩ^топе по различным регионам мира явился тот факт, что основная масса населения Земного шара не имела антител к данному варианту вируса гриппа (население «наивно» в отношении А/ НЩ^топе). В первую очередь это связано со структурной особенностью природной «химеры», в состав которой входят структурные компоненты различного видового происхождения: НА и ЫА от свиного гриппа, РА и РВ2 от птичьего, РВ1 от человеческого [11].
В связи с возникшей угрозой распространения вируса гриппа А/НШ^'шпе на территории РФ, в целях обеспечения защиты населения от инфекции, на филиале ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Иркутске «Иркутское предприятие по производству бактерийных препаратов», была разработана пандемическая вакцина «ИНФЛЮВИР» — вакцина гриппозная живая моновалентная, штамм А/17/Калифорния/2009/38 (НШ1).
Штамм А/17/Калифорния/2009/38 (НШ1) (проф. Л.Г. Руденко), использованный для создания вакцины, получен методом классической реассортации «дикого» штамма гриппа А/СаМогша/7/2009(Н1Ш) и холодоадаптированного донора аттенуации А/ Leningrad/134/17/57(H2N2), который успешно применяется при создании безопасных и иммунологически эффективных сезонных (Н1Ш и Н3Ы2) и препандеми-ческой (Н5Ш) гриппозных вакцин.
Изучение иммуногенных и протективных свойств вакцины «ИНФЛЮВИР» продиктовано необходимостью оценки эффективности вакцины на лабораторных животных в отношении пандемического гриппа типа А/ НШ1. Данное исследование проведено на лабораторной базе Федерального государственного учреждения «48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации» — «Вирусологический центр».
Целью исследования являлось проведение доклинического изучения иммуногенных и протективных свойств вакцины «ИНФЛЮВИР».
Материалы и методы
Исследования были проведены на беспородных хорьках обоего пола, серонегативных к циркулирующим вирусам гриппа и к исследуемому штамму (А/17/ Калифорния/2009/38 (НШ1)). Исследование было проведено на 10 хорьках, рандомизированно по массе распределенных на 4 группы: 2 опытные группы (группы №№1 и 2, по 4 животных в каждой) и 2 контрольные группы (группы №№3 и 4, по одному хорьку в каждой).
Животным опытных групп вводили вакцину «ИНФЛЮВИР» интраназально двукратно с интервалом в 10 (группа №1) и 21 (группа №2) сут. по одной прививочной дозе (по У дозы в каждый носовой ход). Животным контрольных групп вводили интраназально двукратно с интервалом в 10 (группа №3) и 21 (группа №4) сут. воду для инъекций по 0,25 мл в каждый носовой ход.
Безопасность вакцины «ИНФЛЮВИР» изучали по данным клинического осмотра каждого животного один раз в сутки до начала введения препаратов и ежедневно в последующем. При этом регистрировали гибель, измеряли массу тела животных, а также возможные клинические симптомы интоксикации.
Для оценки иммуногенных свойств вакцины «ИНФЛЮВИР» сыворотки крови лабораторных животных забирали до первой иммунизации, перед второй иммунизацией и на 14 сут. после второй иммунизации. Титр антител определяли в РМН и РТГА с куриными эритроцитами, обработанными КОЕ.
Для определения протективных свойств животных инфицировали на 14 сутки после второй иммунизации вирулентным штаммом вируса гриппа А/ СаМогша/7/2009(Н1Ш) с активностью не менее 7,0 ^ ЭИД50. За животными наблюдали в течение 14 дней после зара50жения. Затем животных усыпляли и проводили макроскопическое исследование всех органов и гистопатологические исследования основных тканей и органов организма (легкие, печень, почки, надпочечников, селезенка, сердце и тимус).
Опыты проводились с учетом требований обращения с экспериментальными животными и «Международными рекомендациями по проведению биомедицинских исследований с использованием животных» принятыми Международным Советом Медицинских Научных Обществ (CЮMS) в 1985 г.
Таблица 1
Изменение массы тела хорьков
№ группы Масса тела животного на ... сутки наблюдения, кг,
1-24 25-35 35-39 40-49
Группа №1 1,00±0,03 0,95±0,03 0,94±0,03 -
0,95±0,02 0,91±0,02 0,89±0,02 -
1,05±0,02 1,03±0,02 1,01±0,02 -
0,90±0,01 0,88±0,01 0,87±0,03 -
Группа №2 0,95±0,01 0,93±0,01 0,87±0,02 0,82±0,03
0,85±0,02 0,84±0,03 0,79±0,02 0,73±0,02
1,05±0,02 0,89±0,02 0,87±0,02 0,89±0,03
0,95±0,02 0,88±0,03 0,86±0,03 0,91±0,02
Группа №3 0,70±0,03 0,67±0,03 0,61±0,03 -
Группа №4 0,85±0,03 0,83±0,03 0,80±0,03 0,74±0,03
Таблица 2
Изменение температуры тела хорьков
№ группы Температура тела животного на ... сутки наблюдения, °С,
1-24 25-30 31-35 36-39 40-49
Группа №1 38,76±0,24 38,84±0,32 38,66±0,24 38,71±0,24 -
38,65±0,32 38,77±0,31 38,72±0,32 38,68±0,32 -
38,81±0,32 38,85±0,22 38,79±0,32 38,80±0,32 -
38,79±0,27 38,97±0,21 38,81±0,27 38,78±0,27 -
Группа №2 38,77±0,24 38,81±0,22 38,76±0,24 38,72±0,24 38,81±0,32
38,78±0,31 38,82±0,12 38,65±0,32 38,67±0,32 38,79±0,27
38,83±0,33 38,82±0,22 38,81±0,32 38,80±0,32 38,81±0,32
38,82±0,26 38,80±0,24 38,79±0,27 38,77±0,27 38,79±0,27
Группа №3 38,81±0,32 39,63±0,24 38,82±0,29 38,82±0,29 -
Группа №4 38,79±0,27 38,78±0,26 38,82±0,12 39,95±0,27 38,79±0,28
Для проведения статистических исследований были использованы как классические методы, так и программы: Statistica, SPSS. Для создания базы данных была использована программа MS Excel. Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием параметрических и непараметрических методов. Критический уровень значимости при проверке гипотез р=0,05.
Результаты и обсуждение
За время наблюдения за животными опытных групп каких-либо отклонений в соматическом и неврологическом статусе не выявлено. В контрольных группах после инфицирования диким штаммом вируса гриппа А/ H1N1 отмечалась незначительная адинамия, вялость и клинические проявления заболевания животных гриппом (чихание, снижение аппетита и истечение из носа).
Всех животных взвешивали до начала исследования и в последний день периода наблюдения непосредственно перед эвтаназией. Данные, полученные при взвешивании, свидетельствовали о положительной динамике увеличения массы тела животных, привитых вакциной «ИНФЛЮВИР», и о некотором снижении массы тела у хорьков контрольных групп после инфицирования диким штаммом вируса гриппа A/H1N1 (табл. 1).
Ежедневное измерение температуры тела у хорьков опытных и контрольных групп в течение срока наблюдения не выявило каких-либо отклонений от нормы. Однако, в контрольных группах, у хорьков была отмечена повышенная температура в период с 25 до 39 сут (интервал введения плацебо 10 сут), и с 35 по 49 сут (интервал введения плацебо 21 сут) после инфицирования. Отмеченное повышение температуры у животных, сопровождавшееся клинической картиной, характерной для гриппа, свидетельствовало о манифестном проявлении инфекционного процесса у хорьков (табл. 2).
Данные некропсии показали, что состояние органов и тканей животных из опытных групп достоверно не отличалось по массе от состояния аналогичных органов и тканей животных из контрольных групп после инфицирования вирулентным штаммом гриппа А (H1N1) (табл. 3).
При инфицировании лабораторных животных однократно интраназально диким штаммом A/California/7/2009(H1N1) (по % дозы в каждый носовой ход) с активностью не менее 7,0 lg ЭИД50, установлено, что у лабораторны5х0 животных из групп контроля в
исследуемых органах отмечены морфологические изменения. У животных опытных групп в исследованных образцах органов патологических изменений не обнаружено (табл. 4).
Оценка иммуногенности вакцины «ИНФЛЮВИР» включала в себя определение гуморального иммунного ответа. Забор сывороток крови лабораторных животных проводили до первой иммунизации, перед второй иммунизацией и на 14 сут. после второй иммунизации. Результаты определения титра вирусспецифи-ческих антител у лабораторных животных представлены (табл. 5).
Как видно из результатов, представленных в таблице 5, введение хорькам вакцины «ИНФЛЮВИР» двукратно интраназально по одной прививочной дозе (по У в каждый носовой ход) с интервалом в 10 сут вызывает формирование гуморального иммунитета. Величина титра вирусспецифических антител в РТГА/РМН составила от 1:40 до 1:160 и от 1:80 до 1:160, соответственно; в свою очередь, введение вакцины двукратно интраназально по одной прививочной дозе (по У в каждый носовой ход) с интервалом в 21 сут также вызывает формирование стойкого иммунитета (величина титра вирусспецифических антител в РТГА/РМН — от 1:20 до 1:80 и от 1:40 до 1:80, соответственно).
В результате проведенных исследований было установлено, что инфицирование интактных животных вирулентным штаммом вируса гриппа А А/ СаШшша/7/2009(НЩ1) с активностью не менее 7,0 ^ ЭИД50 гибели хорьков не вызывает. Однако, принимая во вн50имание биологические свойства штамма вируса гриппа А А/СаН1шша/7/2009(ШШ), была проведена оценка его репродукции в органах и тканях инфицированных животных.
При инфицировании хорьков из числа опытных групп штаммом А/СаШшша/7/2009(НЩ1) и последующим гистологическим изучении органов животных патологических изменений не обнаружено. Репродукции вируса в органах не выявлено. Однако, в контрольных группах при инфицировании животных штаммом А/ СаНЮгша/7/2009(ШШ) были выявлены патологические изменения в следующих органах: селезенке, легких, головном мозгу, обонятельных луковицах и носовых раковинах; при этом наблюдалась вирусемия в крови у животных (табл. 4, 6).
За время наблюдения за животными в опытных группах каких-либо отклонений в соматическом и неврологическом статусе не выявлено. У хорьков контрольных групп после инфицирования диким штаммом вируса гриппа А отмечалась незначительная адинамия,
Таблица 3
Оценка состояния внутренних органов и тканей хорьков, подвергнутых эвтаназии
№ группы Название органа (ткани), масса органа (соотношение массы органа к массе тела, %)
Печень Почки и надпочечники Тимус и жировая клетчатка средостения Сердце Легкое Селезенка
Группа №1 38,97 (3,5) 6,67 (0,61) 1,71 (0,15) 6,22 (0,57) 6,58 (0,59) 5,80 (0,52)
38,99 (3,5) 6,26 (0,61) 1,76 (0,15) 6,22 (0,57) 6,53 (0,59) 5,82 (0,52)
39,02 (3,5) 6,31 (0,61) 1,72 (0,15) 6,23 (0,57) 6,59 (0,59) 5,81 (0,52)
39,02 (3,5) 6,31 (0,61) 1,72 (0,15) 6,23 (0,57) 6,59 (0,59) 5,81 (0,52)
Группа №2 38,98 (3,5) 6,22 (0,61) 1,75 (0,15) 6,26 (0,57) 6,54 (0,59) 5,83 (0,52)
38,96 (3,5) 6,24 (0,61) 1,73 (0,15) 6,21 (0,57) 6,59 (0,59) 5,80 (0,52)
38,98 (3,5) 6,28 (0,61) 1,78 (0,15) 6,21 (0,57) 6,53 (0,59) 5,80 (0,52)
38,98 (3,5) 6,28 (0,61) 1,78 (0,15) 6,21 (0,57) 6,53 (0,59) 5,80 (0,52)
Группа №3 38,97 (3,5) 6,24 (0,61) 1,79 (0,15) 6,27 (0,57) 6,55 (0,59) 5,92 (0,57)
Группа №4 38,99 (3,5) 6,27 (0,61) 1,75 (0,15) 6,23 (0,57) 6,57 (0,59) 5,96 (0,56)
Таблица 4
Результаты гистологических исследований внутренних органов хорьков контрольных групп
№ п/п Фото Наименование органа и характеристика поражения
1. V V ' ' • • Л о-*. * у л V V -л ■ ■ - , «V/ * .• . > ■•■ я Надпочечники - сосуды резко полнокровны, местами с мелкими периваскулярными кровоизлияниями, корковый и мозговой слои различимы
2. '•‘а •' '' V' , -4 - Селезенка - строма с умеренными явлениями фиброза. Фолликулы редки, просматриваются не в каждом поле зрения, различных размеров. Зародышевые центры в некоторых фолликулах просматриваются, в некоторых нет, занимают от 1/3 до половины объема фолликула
3. - ' - -. • 1 ' - -—: . . = ^-.~ ' =~ • чЛ V*■: — Л- X ? л, г: ^ V < . .. . . Миокард - сосуды расширены, полнокровные, умеренный межмышечный отек
4. дащ ■;:у идо1нЭ&йк2& '-■>: :!М-‘ Почки - капсула Шумлянского Боумена различима, сосуды полнокровные, эпителий канальцев сохранен, без особенностей
5. КР Печень - резко полнокровная, с эктазированными сосудами. Перипортальные тракты умеренно отечные, мелкие с неярко выраженной лимфоцитарной инфильтрацией. Умеренная зернистая дистрофия гепатоцитов
6. |||| Легкие - сосуды полнокровные, умеренный интерстициальный отек, эпителий с подушкообразной деформацией
Таблица 5
Результаты оценки уровня антител в крови хорьков иммунизированных Вакциной «ИНФЛЮВИР»
№ группы Препарат, интервал введения Титр вирусспецифических антител в РТГА/РМН, ~ ^ • ' геометр
До первой иммунизации Перед второй иммунизацией 14 суток после второй иммунизации
Группа №1 Вакцина «ИНФЛЮВИР», 10 сут <1:1О/<1:1О 1:24/1:34 (1:1О-1:4О/1:2О-1:8О) 1:8О/1:95 (1:4О-1:16О/1:8О-1:16О)
Группа №2 Вакцина «ИНФЛЮВИР», 21 сут <1:1О/<1:1О 1:24/1:28 (1:1О-1:4О/1:2О-1:4О) 1:4О/1:48 (1:2О-1:8О/1:4О-1:8О)
Группа №3 Вода для инъекций, 10 сут <1:1О/<1:1О <1:1О/<1:1О <1:1О/<1:1О
Группа №4 Вода для инъекций, 21 сут <1:1О/<1:1О <1:1О/<1:1О <1:1О/<1:1О
а также некоторая вялость и клинические проявления заболевания, характерные для гриппа (чихание, снижение аппетита, истечение из носа, повышение температуры).
Гистопатологический анализ выявил, что масса органов хорьков опытных групп достоверно не отличалась по массе от состояния аналогичных органов и тканей животных из контрольных групп после инфицирования вирулентным штаммом гриппа А (H1.N1). При этом, в контрольных группах при инфицировании животных штаммом А/СаЦгогша/7/2009(ШШ) были выявлены патологические изменения в следующих органах: селезенке, легких, головном мозгу, обонятельных луковицах и носовых раковинах; наблюдалась вирусемия в крови у животных.
Изучение иммуно-генных свойств показало, что введение хорькам вакцины «ИНФЛЮВИР» двукратно интраназаль-но по одной прививочной дозе (по У в каждый носовой ход) с интервалом в 10 сут. вызывает формирование стойкого иммунитета. При этом, величина титра вирус-специфических антител в РТГА/РМН составила от 1:40 до 1:160 и от 1:80 до 1:160, соответственно; в свою очередь, введение вакцины двукратно интраназально по одной прививочной дозе (по У
в каждый носовой ход) с интервалом в 21 сут. также вызывает формирование стойкого иммунитета (величина титра вирусспеци-фических антител в РТГА/ РМН — от 1:20 до 1:80 и от 1:40 до 1:80, соответственно). Проведенные исследования свидетельствуют о положительном влиянии вакцины «ИНФЛЮВИР» на иммунную систему и о том, что она вызывает полноценное формирование гуморального звена иммунного ответа.
Результаты изучения иммуногенных свойств вакцины «ИНФЛЮВИР» позволили определить оптимальный интервал введения вакцины — 10 сут.
Проведенные исследования показали, что двукратная иммунизация хорьков вакциной «ИНФЛЮВИР» не вызывает гибели животных, индуцирует развитие стойкого иммунного ответа и защищает 100 % лабораторных животных от заражения диким вирулентным штаммом вируса гриппа А А/СаШЪгша/7/2009(ШШ).
Таким образом, проведенные доклинические исследования показали, что вакцина «ИНФЛЮВИР» безопасна, обладает выраженными иммуногенными и протек-тивными свойствами, что позволило запланировать и провести клинические исследования на добровольцах.
Таблица 6
Изучение протективных свойств вакцины «ИHФЛЮBИР»
Количество животных ...
Вид животного Интервал введения вакцины, сутки Количество животных Инфициро- ванных Не заболевших (вирус не выделен из органов, органы не содержали патоморфологических изменений) Заболевших (выделен вирус из органов, органы содержали патоморфологические изменения) Показатель защиты, %
1О 4 4 4 0 1ОО
Хорек 21 4 4 4 0
контроль 1 1 0 1 О
контроль 1 1 0 1
ЛИТЕРАТУРА
1. Вирусология в 3-х т. / Под ред. Б. Филдса, Д. Найпа. — Т.
1. — М.: Мир, 1989. — 492 с., ил.
2. Воробьев А.А. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. — М.: Медицина, 1999. — 464 с., ил.
3. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. — 4-е изд., испр. и доп. — СПб.: СпецЛит, 2008. — 767 с.
4. Медицинская вирусология. Часть вторая / Под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. — СПб., 2002. — 163 с.
5. Пшеничнов В.А., Семенов Б.Ф., Зезеров Е.Г Стандартизация методов вирусологических исследований. — М., 1974. — 123-128 с.
6. Руководство по инфекционным болезням / Под ред. Ю.В. Лобзина. — СПб.: Фолиант, 2000. — 506 с.
7. Урбах В.Ю. Биологические методы. — М., 1964. — 415 с.
8. Экология вирусов // Медицинская вирусология / Под ред. Д. К. Львова. — М., 2008. — С. 101-118.
9. Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я. Лекции по инфекционным болезням. — 3-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 2007. — 1032 с.
10. Chan M. World now at the start of 2009 influenza pandemic // Statement to the press by WHO Director-General Dr Margaret Chan. — WHO. — 11 June 2009.
11. Garten R.J., Davis C.T., Russell C.A., et al. Antigenic and genetic characteristics of swine-origin 2009 A (H1N1) influenza viruses circulating in humans // Science. — 2009. — Vol. 325. — P 197-201.
Информация об авторах: 115088, г. Москва, ул. Дубровская, д. 15, ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, тел.: (495) 790-77-73 (доб. 20-98), е-таіі: [email protected].
Миронов Александр Николаевич — д.м.н., начальник Управления регистрации и медицинских исследований «НПО
«Микроген» МЗ РФ,
Бушменков Дмитрий Сергеевич — начальник отдела доклинических исследований,
Купина Наталья Викторовна — начальник отдела клинических исследований,
Романова Анна Александровна — начальник отдела Фармаконадзора,
Цаан Андрей Александрович — главный специалист отдела клинических исследований,
Меркулов Вадим Анатольевич — д.м.н., проф, заместитель начальника филиала по научной работе, Степанов Николай Николаевич — к.б.н., начальник научно-исследовательского отдела,
Брызгалова Светлана Ивановна — директор филиала.
