ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ У ДЕТЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Вятский медицинский вестник, № 4(68), 2020

УДК 616.5-002-056.3:612.017-053.2 DOI 10.24411/2220-7880-2020-10121

ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ У ДЕТЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА

Суслова Е.В., Хлебникова Н.В., Суетина И.Г., Иллек Я.Ю.

ФГБОУ ВО Кировский государственный медицинский университет Минздрава России, Киров, Россия (610998, г. Киров, ул. К. Маркса, 112), e-mail: yamUek@gmai.com

В работе приведены результаты, полученные при исследовании особенностей распределения антигенов HLA-комплекса при атопическом дерматите у детей разного возраста.

Под наблюдением находилось 78 пациентов с младенческой формой атопического дерматита, 34 пациента - с детской формой заболевания и 22 пациента с подростковой формой атопического дерматита, у которых изучали особенности распределения антигенов HLA-комплекса I и II классов. Установлено, что в качестве иммуногенетического маркера младенческой формы атопического дерматита может служить повышенная выявляемость в тканях HLA-антигенов А1, В17, В18 и DRB1*04, иммуногенетического маркера детской формы атопического дерматита - HLA-антигенов В15, DRB1*13 и DQB1*0602-8, иммуногенетического маркера подростковой формы заболевания - HLA-антигенов В15, В16, В17, DRB1*13 и DQB1*0602-8. Идентификацию антигенов главного комплекса гистосовместимо-сти рекомендуется использовать для выявления детей, предрасположенных к атопическому дерматиту.

Ключевые слова: дети, атопический дерматит, антигены главного комплекса гистосовместимости, иммуноге-нетические маркеры.

IMMUNOGENETIC PARAMETERS IN CHILDREN OF DIFFERENT AGES WITH ATOPIC DERMATITIS

Suslova E.V., Khlebnikova N.V., Suetina I.G., Illek Ya. Yu.

Kirov State Medical University, Kirov, Russia (610998, Kirov, K. Marx St., 112), e-mail:yanillek@gmai.com

The article presents the results obtained in the study of the distribution of HLA-complex antigens in children of different ages with atopic dermatitis (AD).

78 patients with infantile-onset AD, 34 patients with childhood AD, and 22 patients with adolescent variant of the disease took part in the research. The distribution of class I and class II HLA-complex antigens in these patients was studied.

It has been found out that the increased frequency of HLA antigens A1, B17, B18 and DRB1*04 in tissues can serve as an immunogenetic marker of infantile-onset AD. The increased frequency of HLA-antigens B15, DRB1*13 and DQB1*0602-8 in tissues can serve an immunogenetic marker of childhood AD. The increased frequency of HLA antigens B15, B16, B17, DRB1*13 and DQB1*0602-8 is the immunogenetic marker of the adolescent form of the disease. Identification of the major histocompatibility complex antigens is recommended for AD early diagnosis.

Keywords: children, atopic dermatitis, antigens of the main histocompatibility complex, immunogenetic markers.

Введение

У детей разного возраста выявляются особенности клинических проявлений атопического дерматита и изменений иммунологических показателей, что может быть связано с неоднозначным характером иммунного ответа организма в разные возрастные периоды. Принимая во внимание непосредственное участие аллелей НЬА-комплекса в реализации различных этапов иммуного ответа организма, представляло интерес провести изучение распределения антигенов главного комплекса гистосовместимости у детей с разными возрастными формами атопического дерматита [1, 2].

Цель исследования: определить иммуногенети-ческие маркеры младенческой, детской и подростковой форм атопического дерматита.

Материал и методы

Под нашим наблюдением находилось 78 детей с младенческой формой атопического дерматита (возраст пациентов от 8 месяцев до 2 лет), 34 ребенка с детской формой атопического дерматита (возраст па-

циентов от 5 до 10 лет) и 22 ребенка с подростковой формой заболевания (возраст пациентов от 12 до 15 лет), у которых исследовали распределение ^А-антигенов I и II классов.

Серологическое типирование лимфоцитов по антигенам НЬА I класса выполнялось у больных ато-пическим дерматитом (АтД) в стандартном микро-лимфоцитотоксическом тесте [3] с помощью гистоти-пирующих панелей ^А-А и ^А-В (ЗАО «Гисанс», г. Санкт-Петербург), которые позволяют идентифицировать 19 НЬА-антигенов локуса А и 35 НЬА-антигенов локуса В. Лимфоциты для постановки микролимфоци-тотоксической пробы выделяли из гепаринизирован-ной крови методом градиентного центрифугирования с применением раствора фиколл-верографина. Пробу выполняли в микропланшетах Терасаки.

Молекулярное типирование НЬА-генов DRB1 и DQB1 (антигены НЬА II класса) у наблюдаемых больных атопическим дерматитом выполняли методом по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) с набором сиквенс-специфических праймеров [4, 5], который включает в

себя серию различных участков HLA-генов II класса и называется PCR-mSSR (polymerase-chain reaction sequence primer mixed). Набор реагентов позволяет выявлять 14 аллелей гена DRB1 (DrB1*01, 04, 07, 08, 09, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 17, 18) и 12 аллелей и групп аллелей гена DQB1 (DQB1*0201, 0301, 0302m 0303, 0304, 0305, 0401-2, 0503, 0601, 0602-8). ДНК выделяли из мононуклеаров крови больных атопическим дерматитом путем трехкратной обработки лизирующим буфером и центрифугированием. Выделенную ДНК амплифицировали в полимеразной цепной реакции.

Расчет иммуногенетических параметров у больных атопическим дерматитом осуществляли с помощью формул, принятых в популяционной статистике. Частоту встречаемости HLA-антигенов определяли как процентное отношение индивидов, несущих антиген, к общему числу обследованных в группе [6], и сопоставляли с характером распределения HLA-антигенов в здоровой популяции детей, проживающих в Кировской области РФ.

Для установления существенности различий в характере распределения HLA-антигенов в сравниваемых группах детей определяли критерий согласия (х2) c поправкой на непрерывность вариаций по формуле: X2 = [(ad - bc) - 05]2/ (a + b) x (c +d) x (a + c) x (b + d), где а - количество пациентов, имеющих данный антиген, аллель или сочетание, b - количество пациентов, у которых данный антиген, аллель или сочетание отсутствует, с - количество здоровых детей, имеющих данный антиген, аллель или сочетание, d - количество здоровых детей, у которых отсутствует данный антиген, аллель или сочетание. С помощью специальных математических формул х2 переводили в коэфициент достоверности различий Стъюдента (р).

Степень ассоциации того или иного иммуно-генетического параметра с особенностями иммунологической реактивности у больных атопическим дерматитом оценивали по критерию относительного риска (RR) по формуле: RR = fn x (1-fk)/ fk x (1-fn), где fn - частота встречаемости антигена в исследуемой группе (в десятичных дробях), fk - частота встречаемости того же антигена в контрольной группе (в десятичных дробях). Показатель относительного риска RR обнаруживает, насколько чаще данное заболевание или ответная реакция организма развивается у лиц, имеющих определенный HLA-антиген, по сравнению с теми, у которых его нет. При нулевом значении одного из составляющих величину RR рассчитывали по формуле Haldane J. [7]. Принято считать, что при RR, равном 2,0 и больше, существует положительная ассоциация признака с заболеванием (предрасположенность к развитию болезни), тогда как значения RR меньше 1,0 указывают на резистентность индивида к данной патологии.

Этиологическую фракцию (EF), характеризующую силу положительной HLA-ассоциации [8], рассчитывали при значении величины критерия относительного риска RR больше 2,0 по формуле: EF =

RR — 1

-xF, где F - частота встречаемости HLA-антигена.

RR

выраженная в десятичных дробях. Превентивную фракцию (PF), характеризующую силу отрицательной HLA-ассоциации [8], рассчитывали при значении величины критерия относительного риска RR

меныне 1,0 по формуле: PF = —--:—--, где F

Ktfx(l-F)+F

Клиническая медицина

- частота встречаемости НЬА-антигена, выраженная в десятичных дробях. При одинаковых значения критерия относительного риска RR значение EF будет больше в том случае, когда связанный с развитием болезни НЬА-маркер имеет большое распространение. В случае, если критерий относительного риска RR меньше 1,0 (при уменьшенном риске развития заболевания), вместо EF (этиологическая фракция) используют PF (превентивная фракция). Данный показатель характеризует превентивные свойства определенного НЬА-маркера на популяционном уровне, а также зависит как от показателя RR, так и от частоты встречаемости данного НЬА-маркера в исследуемой группе.

Математическую обработку результатов НЬА-типирования у больных атопическим дерматитом выполняли на персональном компьютере с использованием специальной программы, составленной сотрудниками лаборатории иммуногематологии ФГУ «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови» Росмедтехноло-гий на основании указанных выше математических формул. Контрольную группу в этих исследованиях составили 153 практически здоровых ребенка, проживающих в Кировской области РФ.

Результаты и их обсуждение

Результаты, полученные при исследовании распределения антигенов НЬА-комплекса I и II классов у общей группы больных атопическим дерматитом и у пациентов с младенческой, детской и подростковой формами заболевания представлены в таблице.

Исследования показали (таблица), что у общей группы больных атопическим дерматитом констатировалось значительное повышение частоты встречаемости антигенов НЬА-комплекса I класса А1 (32,0% против 17,7%; х2 = 7,1, р<0,01, RR = 2,2, EF = 0,18) и В17 (14,1% против 5,9% в контроле; х2= 5,9, р<0,05, RR = 2,6, EF = 0,09), а также значительное повышение частоты встречаемости антигенов НЬА-комплекса II класса DRB1*04 (41,5% против 20,4% в контроле; х2 = 6,8, р<0,01, RR = 2,8, EF = 0,27), DRB1*13 (34% против 13,6% в контроле; х2 = 7,7, р<0,01, RR = 2,3, PF = 0,45) и DQB1*0602-8 (б0,4% против 37,9% в контроле; х2 = 6,3, р<0,02, RR = 2,5, EF = 0,36). Представительство указанных выше антигенов НЬА-комплекса I и II классов ассоциировалось с повышением относительного риска развития атопического дерматита у детей в 2,2-2,8 раза (RR = 2,2-2,8). В то же время представительство НЬА-антигена II класса DRB1*07 ассоциировалось с определенной резистентностью к развитию атопического дерматита у детей (9,4% против 30,1% в контроле; х2 = 7,3, р<0,01, RR = 0,2, PF = 0,23).

У пациентов с разными возрастными формами атопического дерматита регистрировалась ассоциативная связь заболевания с разными антигенами главного комплекса гистосовместимости (таблица).

У пациентов с младенческой формой атопи-ческого дерматита (таблица) отмечалась высокая частота встречаемости антигенов НЬА-комплекса I класса А1 (35,1% против 17,7% в контроле; х2 = 7,6, р<0,01, RR = 2,5, EF = 0,21), В17 (17,6% против 5,9% в контроле; х2 = 6,5, р<0,02, RR = 4,0, EF = 0,13), В18 (16,2% против 6,5% в контроле; х2 = 4,3, р<0,05, RR = 4,3, EF = 0,11) и антигена НЬА-комплекса II класса DRB1*04 (39,5% против 20,4% в контроле; х2 = 4,8,

Вятский медицинский вестник, № 4(68), 2020

р<0,05, RR = 2,5, EF = 0,21). Представительство в тканях указанных антигенов НЬА-комплекса ассоциировалось с повышением относительного риска развития младенческой формы атопического дерматита в 2,5-4,3 раза ^ = 2,5-4,3).

У пациентов с детской формой атопического дерматита (таблица) констатировалась высокая частота встречаемости антигена НЬА-комплекса I класса В15 (28,1% против 7,8% в контроле; х2 = 8,9, р<0,01, RR = 4,6, EF = 0,22), а также антигенов НЬА-комплекса II класса DRB1*13 (33,0% против 13,6% в контроле; X2 = 4,9, р<0,05, RR = 3,1, EF = 0,22) и DQB1*0602-8 (70,0% против 37,9% в контроле; х2 = 8,4, р<0,01, RR = 3,8, EF = 0,50), представительство которых в тканях ассоциировалось с повышением относительного риска развития заболевания в 3,1-4,6 раза (RR = 3,1-4,6). В то же время представительство антигенов II класса DRB1*07 (10,0% против 30,1% в контроле; х2 = 6,0, р<0,02, RR = 0,3, PF = 0,22), DRB1*11 (10,0% против 25,2% в контроле; х2 = 4,1, р<0,05, RR = 0,3, PF = 0,17) и DQB1*0303 (6,7% против 23,2% в контроле; х2 = 5,2, р<0,05, RR = 0,2, PF = 0,18) ассоциировалось с определенной резистентностью к развитию указанной формы заболевания (RR = 0,-0,3).

Частота выявления антигенов HLA-ко^

У пациентов с подростковой формой атопического дерматита (таблица) отмечалась высокая частота встречаемости антигенов НЬА-комплекса I класса В15 (25,0% против 7,8% в контроле; х2 = 7,8, р<0,01, RR = 3,9, EF = 0,19), В16 (35,0% против 13,7% в контроле; х2 = 4,4, р<0,05, RR = 5,3, EF = 0,15), В17 (25,0% против 5,9% в контроле; х2 = 6,3, р<0,02, RR = 5,3, EF = 0,20) и антигенов НЬА-комплекса II класса DRB1*13 (33,0% против 13,6% в контроле; х2 = 4,3, р<0,05, RR = 3,1, EF = 0,22), DRB1*0602-8 (70,0% против 37,9% в контроле; х2 = 8,4, р<0,01, RR = 3,8, EF = 0,50), представительство которых ассоциировалось с повышением относительного риска развития этой возрастной формы заболевания в 3,1-5,3 раза (RR = 3,1-5,3). Вместе с тем, представительство антигена НЬА-комплекса I класса В12 (0 против 20,3% в контроле; х2 = 6,4, р<0,02, RR = 0,1) и антигенов НЬА-комплекса II класса DRB1*11 (10,0% против 25,2% в контроле; х2 = 4,1, р<0,05, RR = 0,3, PF = 0,17) и DQB1*0303 (6,7% против 23,3% в контроле; х2 = 5,2, р<0,05, RR = 0,2, PF - 0,18) ассоциировалось с определенной резистентностью к развитию подростковой формы атопического дерматита (RR = 0,1-0,3).

Таблица

1екса у детей с атопическим дерматитом

Частота

Антигены НЬА-комплекса выявления,%

здоровые дети, п=153 больные АтД х2 р RR EF PF

Общая группа больных АтД, п = 134

А1 17,7 32,0 7,1 <0,01 2,2 0,18 -

В17 5,9 14,1 5,9 <0,05 2,6 0,09 -

DRB1*04 20,4 41,5 6,8 <0,01 2,8 0,27 -

DRB1*13 13,6 34,0 7,7 <0,01 2,3 - 0,45

DQB1*0602-8 DQB1**07 37,9 30,1 60,4 9,4 6,3 7,3 <0,02 <0,02 2,5 0,2 0,26 0,23

Пациенты с младенческой формой АтД, п = 78

А1 17,8 35,2 7,7 <0,01 2,5 0,21 -

B17 5,8 17,5 6,4 <0,02 4,0 0,13 -

B18 6,6 16,3 4,4 <0,05 4,3 0,11 -

DRB1*04 20,3 39,4 4,7 <0,05 2,5 0,21 -

Пациенты с детской формой АтД, п = 34

B15 7,8 28,1 8,9 <0,01 4,6 0,22 -

DRB1*13 13,6 32,0 4,9 <0,05 3,1 0,22 -

DQB1*0602-8 DRB1*07 37,9 30,1 70,0 10,0 8,4 6,0 <0,01 <0,02 3,8 0,3 0,50 0,22

DRB1*11 25,2 10,0 4,1 <0,05 0,3 - 0,17

DQB1*0303 23,3 6,7 5,2 <0,05 0,2 - 0,18

Пациенты с подростковой формой АтД, п = 22

B15 7,8 25,0 7,8 <0,01 3,9 0,10 -

B16 13,7 35,0 4,4 <0,05 3,4 0,25 -

B17 5,9 25,0 6,3 <0,02 5,3 0,20 -

DRB1*13 13,6 33,0 4,3 <0,05 3,1 0,22 -

DQB1*0602-8 B12 37,9 20,3 70,0 0,0 8,4 6,4 <0,01 <0,02 3,8 0,1 0,50 -

DRB1*11 25,2 10,0 4,1 <0,05 0,3 - 0,17

DQB1*0303 23,3 6,7 5,2 <0,05 0,2 - 0,18

Заключение

Результаты исследований свидетельствуют о том, что для выявления детей, предрасположенных к развитию атопического дерматита, может быть использована идентификация антигенов главного

комплекса гистосовместимости. У детей с атопиче-ским дерматитом отмечается высокая частота встречаемости в тканях НЬА-антигенов I класса А1, В17 и НЬА-антигенов II класса DRB1*04, DRB1*13. При этом в качестве иммуногенетического марке-

1_

J

ра младенческой формы атопического дерматита может служить высокая частота встречаемости в тканях HLA-антигенов А1, В17, В18 и DRB1*04, иммуногенетического маркера детской формы заболевания - высокая частота встречаемости в тканях HLA-антигенов В15, DRB1*13 и DQB1*0602-8, иммуногенетического маркера подростковой формы заболевания - высокая частота встречаемости в тканях HLA-антигенов В15, В16, В17, DRB1*13 и DQB1*0602-8.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Литература / References

1. Иллек Я.Ю., Зайцева Г.А., Галанина А.В. Ассоциации HLA-антигенов при тяжелом течении атопического дерматита у детей раннего возраста // Педиатрия. Журнал им. Г.Н. Сперанского. 2008. Т. 87. № 4. С. 18-20. [Illek YaYu., Zaitseva G.A., Galanina A.V Associations of HLA antigens in severe atopic dermatitis in young children. Pediatriya. Zhurnal im. G.N. Speranskogo. 2008;87(4):18-20. (In Russ.)]

2. Иллек Я.Ю., Зайцева Г.А., Галанина А.В., Муратова Н.Г. HLA-ассоциации при тяжелом течении атопического дерматита и атопической бронхиальной астмы у детей // Фундаментальные исследования. 2009. № 5. С. 19-21. [Illek Ya.Yu., Zaitseva G.A., Galanina A.V., Muratova N.G. HLA-associations

Клиническая медицина

in severe atopic dermatitis and atopic bronchial asthma in children. Fundamental'nye issledovaniya. 2009;5:19-21. (In Russ.)]

3. Terasaki P., Park M., Bemoco P. Ower wiem of the 1980 International Histocompanibility Workshop. In Histocompani Fersting. Los Angeles. 1980. p.1.

4. Алексеев Л.П., Болдырева М.Н., Трофимова Д.Ю. Первый отечественный опыт селекции донора аллогенной почки на основе HLA-DRB1-генотипирования // Иммунология. 1997. № 5. C. 21-23. [Alekseev L.P., Boldyreva M.N., Trofimova D.Yu. First domestic experience of selection of an allogeneic kidney donor based on HLA-DRB1 genotyping. Immunologia. 1997;5:21-23. (In Russ.)]

5. Поиск неродственного донора для трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Пособие для врачей. Москва, 2000. 84 с. [Poisk nerodstvennogo donora dlya transplantatsii gemopoetitcheskikh stvolovykh kletok. Manual. Moscow, 2000. 84 p. (In Russ.)]

6. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенети-ка. Санкт-Петербург, 1994. 236 с. [Zaretskaya Yu.M. Klinicheskaya immunogenetika. St-Petersburg, 1994. 236 p. (In Russ.)]

7. Певницкий Л.А. Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеваниями // Вестник академии медицинских наук СССР. 1988. № 7. C. 48-55. [Pevnitskii L.A. Statistical evaluation of HLA-antigen associations with diseases. Vestnik akademii meditsinskikh nauk SSSR. 1988;7:48-55. (In Russ.)]

8. Sveigaard A., Ryder L.P. HLA and disease assotions: ditecting the strongest associations. Tussue Antigens. 1994;43:18-27.

УДК 616.12-008.331.1 DOI 10.24411/2220-7880-2020-10122

ПОДРОСТОК С АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ - КАКОЙ ОН?

Краева Н.В., 1,2Шумов А.В., 1Макарова В.И., Избенко Н.Л., 1Макаров А.И.

'ФГБОУ ВО «Северный государственный медицинский университет» Минздрава России, Архангельск, Россия (163000, г. Архангельск, Троицкий пр., 51), e-mail:yanv-1985@yandex.ru

2ФГБУЗ «Северный медицинский клинический центр им. Н.А. Семашко» ФМБА России, Архангельск, Россия (163000, г. Архангельск, Троицкий пр., 115)

Проблема артериальной гипертензии (АГ) у подростков актуальна до сих пор, поскольку эта патология берет свое начало в детском возрасте. Вопросы диагностики и лечения постоянно освещаются в современной литературе. Целью настоящего исследования явилось определение критериев формирования группы риска по развитию артериальной гипертензии у подростков на основании комплексного кли-нико-инструментального обследования пациентов с синдромом артериальной гипертензии. Под наблюдением находились 199 подростков в возрасте от 12 до 18 лет с различной степенью выраженности АГ, верифицированной по результатам комплексного обследования в условиях стационара. Группу сравнения составили 30 детей с признаками синдрома вегетативной дисфункции без АГ и факторов риска развития АГ. В контрольную группу включили 50 здоровых детей подросткового возраста с отсутствием признаков СВД и факторов риска по развитию АГ. Использованы адекватные приемы статистической обработки. Полученные результаты позволили создать «портрет» подростка, страдающего синдромом артериальной гипертензии, который определен следующими признаками - это юноша 15-18 лет с жалобами на головную боль, с избыточной массой тела и отягощенной наследственностью. Субъективная симптоматика дополняется объективными симптомами: раннее изменение сосудов глазного дна, регистрирующиеся еще на стадии лабильной АГ; гиперхолестеринемия, уменьшение концентрации липо-протеидов высокой плотности и гипертриглицеридемия; напряжение симпатико-адреналовой системы.

Ключевые слова: артериальная гипертензия, подростки, факторы риска.