CC BY
2С.В. Гомбоева, канд. биол. наук, доц., e-mail: sv2@rambler.ru В.Ж. Цыренов, д-р биол. наук, проф., e-mail: vtsyrenov@gmail.com Е.В. Захаров, аспирант, e-mail: zeu.ewg@yandex.ru Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления, г. Улан-Удэ
Г.О. Жданова, науч. сотрудник Д.И. Стом, д-р биол. наук, проф., зав. лаб.; e-mail: stomd@mail.ru Иркутский государственный университет, г. Иркутск
УДК 579.017.8: 628.35
ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ КОММЕРЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ «БАЙКАЛ ЭМ-1»
И «БИЭМ», СПОСОБНЫХ ЭЛИМИНИРОВАТЬ ЛИПИДНЫЕ, БЕЛКОВЫЕ И УГЛЕВОДСОДЕРЖАЩИЕ КОМПОНЕНТЫ СТОЧНЫХ ВОД
Выделены штаммы микроорганизмов из коммерческих биопрепаратов «Байкал ЭМ-1» и «БиЭМ». Проанализированы морфологические, тинкториальные, биохимические свойства выделенных штаммов микроорганизмов. Идентифицировано 4 штамма микроорганизмов, выделенных из препарата «БиЭМ» S. aureus, A. oryzae, S. cerevisiae, Lactobacillus sp. и 4 штамма из препарата «Байкал ЭМ-1» L. lactis, E. coli, B. subtilis, B. thuringiensis. Также описана возможность использования данных изолированных штаммов микроорганизмов в исследовании биоферментативных свойств и создании коммерческого биопрепарата для элиминирования липидных, белковых и углеводсодержащих компонентов сточных вод. Среди выделенных микроорганизмов наиболее перспективными для элиминирования липидных, белковых и углеводсодержащих компонентов сточных вод оказались штаммы Saccharomyces cerevisiae и Bacillus thuringiensis.
Ключевые слова: микроорганизмы, жировые компоненты, сточные воды, биологическая очистка, органические загрязнения.
S.V. Gomboeva, Cand. Sc. Biology, Assoc. Prof. V.Zh. Tsyrenov, Dr. Sc. Biology, Prof.
I.V. Zakharov, P.G.
G.O. Zhdanova, Researcher D.I. Stom, Dr. Sc. Biology, Prof.
IDENTIFICATION AND STUDY OF MICROORGANISMS ISOLATED FROM COMMERCIAL BIOLOGICAL PRODUCTS "BAIKAL EM-1" AND "BIEM", CAPABLE TO ELIMINATE LIPID, PROTEIN AND CARBOHYDRATE-CONTAINING
COMPONENTS OF WASTEWATER
The paper discusses methods for the isolation of microorganisms from the commercial biological preparations "Baikal EM-1" and "Bi EM". The morphological, tinctorial, biochemical properties of isolated strains of microorganisms are analyzed. 4 strains of microorganisms isolated from the "Bi EM" preparation: S. aureus, A. oryzae, S. cerevisiae, Lactobacillus sp. and 4 strains from the "Baikal EM-1" preparation: L. lactis, E. coli, B. subtilis, B. thuringiensis have been identified. Also, the possibility of using these isolated strains of microorganisms in the study of biofermentative properties and the creation of a commercial bio-preparation for the elimination of lipid, protein and carbohydrate-containing components of wastewater is described. Among the isolated microorganisms, Saccharomyces cerevisiae and Bacillus thuringiensis strains were the most promising for the elimination of lipid, protein and carbohydrate-containing components of wastewater.
Key words: microorganisms, fat components, sewage, biological treatment, organic pollution.
Высокая концентрация сточных вод молочных производств, а также неравномерность их поступления приводят к перегрузке некоторых городских очистных сооружений и их неудовлетворительной работе. Загрязненность данных стоков значительно превышает требования,
предъявляемые к приему сточных вод в системы канализации населенных пунктов. Общая масса загрязнений сточных вод предприятий молочной и мясной промышленностей Российской Федерации оценивается в 400 тыс. т ежегодно, из них по Республике Бурятия - 9,3 тыс. т, что непосредственно влияет на экологию региона и оз. Байкал [1].
Имеется потребность в очистке сточных вод и оборудования от молочных и жировых компонентов. Существует несколько способов очистки (физический, химический и биологический). Из них наиболее безопасным и эффективным способом очистки является биологический способ, который применяется для биотрансформации молочных и жировых компонентов с помощью микроорганизмов-деструкторов.
В настоящее время на практике применяются коммерческие биопрепараты «Доктор Ро-бик» (ООО «ВИПЭКО», г. Москва), «ВОН» (ООО «ЭМ-Кооперация» г. Москва), «Байкал ЭМ-1» и «БиЭм» (ООО «НПО ЭМ-центр», Улан-Удэ) и т.п., содержащие различные микроорганизмы, которые способны биотрансформировать различные компоненты сточных вод, но не оценена их способность элиминировать молочные и жировые компоненты сточных вод, а также сим-биотическая и антагонистическая взаимосвязь данных микроорганизмов.
Цель работы - выделение микроорганизмов из различных источников и изучение их способности к элиминированию липидных, белковых и углеводсодержащих компонентов сточных вод.
Задачи:
1) выделить микроорганизмы из коммерческих биологических препаратов («Байкал ЭМ-1» и «БиЭМ») в качестве биотестов;
2) идентифицировать изоляты по морфологическим, тинкториальным и биохимическим признакам;
3) изучить способность данных изолятов элиминировать липидные, белковые и углевод-содержащие компоненты сточных вод.
Материалы и методы исследования
В данной работе рассмотрены результаты выделения из коммерческих биопрепаратов микроорганизмов - деструкторов органических веществ и их идентификация. В модельных опытах с использованием соответствующих субстратов (жиров и молочных продуктов) изучены ферментативные активности (липаз, амилаз, протеиназ), необходимых для элиминирования молочных и жировых компонентов сточных вод.
Выделение штаммов микроорганизмов и введение их в чистые культуры осуществляли методом Коха. Для их идентификации использовали общеизвестные микробиологические методы, руководствуясь их перечнем для идентификации бактерий [2].
Использовались основные среды для выделения и идентификации микроорганизмов [3]. В качестве основных источников липидных, белковых и углеводсодержащих компонентов сточных вод использовали продукты растительного и животного происхождения, широко представленные на потребительском рынке. Потенциальную способность к элиминированию липидных, белковых и углеводсодержащих компонентов сточных вод, выделенных штаммов микроорганизмов из биопрепаратов оценивали по наличию протеолитической, амилолитиче-ской, липолитической, лактазной активности.
Амилолитическую активность определяли по изменению окрашивания среды, содержащей крахмал. Чем больше размер светлой зоны, тем выше амилолитическая активность [4].
Определение липолитической активности проводили на бульоне Штерна. Исследуемые микроорганизмы культивировали в термостате при 24-37 °С и отмечали изменение цвета среды, рН (лакмусовой бумагой), помутнение, наличие образования хлопьевидного осадка [5].
Активность липазы определяли по модифицированному методу Ота-Ямада [4]. В колбу с нейтральным субстратом, вносили фосфатный буфер (рН=7,0) и интенсивно встряхивали. Затем добавляли 1 мл культуральной жидкости микроорганизмов, встряхивали в течение 2114
3 мин на качалке. Гидролиз проводили в течение 2 ч при 24-37°С, после чего приливали этанол для прекращения реакции. Продукты гидролиза оттитровывали 0,05 М раствором NaOH в присутствии 1 % раствора тимолфталеина. Специфическая активность липазы была выражена в микромолях олеиновой кислоты, освобождающейся за 1 ч при гидролизе субстрата с помощью 1 мл культуральной жидкости.
Окислительную активность исследуемых микроорганизмов определяли по выделению углекислого газа. Культивирование микроорганизмов проводили в колбах, встряхивая на качалках в течение 3 сут. В качестве питательной среды использовалась минеральная среда (250 мл) с добавлением источника углерода (1%) и 5 мл суточной культуры микроорганизмов. Количество образованного углекислого газа определяли титрованием 0,1н HCl. В качестве поглотителя используется 0,1н NaOH. [2, 3].
Определение протеолитической активности проводили различными методами: разжижение желатина, створаживание и протеолиз казеина на агаре Эйкмана. Активность ферментов определяли по характеру роста и учету изменений желатина. Под действием фермента жела-тиназы происходит расщепление белков желатина, отмечается визуальное разжижение питательной среды. Степень створаживания молока различной жирности в течение 3 сут указывает на ферментативную активность протеазы [5, 6].
Протеолиз казеина на молочном агаре Эйкмана проводили по измерению зон просветления среды вокруг колоний микроорганизмов. Чем больше диаметр светлой зоны, тем выше казеинолитическая активность микроорганизмов [5, 7].
Тесты на наличие каталазы производили путем посева в пробирки на скошенный мясо-пептонный агар. После инкубации приливали 1 мл 3%-ной перекиси водорода. Образование пузырьков означает положительную реакцию и параллельно добавляли несколько капель 3%-ной перекиси водорода и к колониям на чашке или к зонам обильного роста, который может наблюдаться на поверхности полужидкой среды [8, 9].
Результаты и их обсуждение
В ходе работы было отобрано 4 штамма микроорганизмов, выделенных из препарата «БиЭМ» - 1А, 2В, 5Е, 7G, и 5 штаммов из препарата «Байкал ЭМ» - 3C, 4D, 6F, 6.1F, 8H. Для идентификации изолятов исследовали их морфологические, тинкториальные, биохимические признаки.
На принадлежность культуры 1А к семейству микрококков указала положительная проба на каталазу, так как другие кокки (в частности стрептококки) каталазу не образуют. Для установления принадлежности культуры к роду Staphylococcus использованы два основных метода - культуральный и биохимический. С помощью культурального метода было выяснено, что на агаризованной плотной среде выросли стафилококки, так как именно колонии микроорганизмов этого рода способны к окрашиванию в отличие от стрептококков. На основании биохимического метода можно сказать, что выделенные микроорганизмы относятся к роду Staphylococcus, так как стафилококки являются факультативными анаэробами, микрококки - облигатными аэробами, и последние не способны к ферментации глюкозы в анаэробных условиях. Видовая идентификация стафилококков проведена с помощью методов по определению наличия ферментов: плазмокоагулазы, лецитиназы и ДНК-азы, все тесты на данные ферменты были положительными, поэтому микроорганизмы рода Staphylococcus предположительно относятся к виду S. aureus [9, 10, 11].
Для выращивания плесневых грибов (культура 2В) использовали селективные среды Са-буро с последующим пересевом на естественную среду, содержащую пшеничную муку, крахмал и источники фосфора (KH2PO4). Выросшие плесневые грибы на средах Сабуро и пшенице по форме и цвету колоний и мицелия, по литературным данным, предположительно соответствовали грибам рода Aspergillus вида A. oryzae [5].
С целью выделения лактококков пробирки с исследуемым молоком оставляли для само-
заквашивания при 26 °С в стационарных условиях. Затем проводили отбор пробирок, в которых плотный молочный сгусток формировался после ряда пассажей за 10-12 ч, что характерно для гомоферментативных лактококков. Затем проводили высевы на агаровую среду из гидро-лизованного молока с добавлением панкреатина. Выделенный штамм молочнокислых бактерий 3С соответствовал по всем морфобиологическим признакам роду Lactococcus, виду L. lactis.
Бактерии культуры кишечной палочки (к которым была отнесена культура 4D) очень неприхотливы и хорошо растут на обычных элективных питательных средах при pH 7,2-7,4. На плотных питательных средах был замечен рост гладких, плоско-выпуклых, круглых, мутноватых колоний зеленоватого цвета. На среде Эндо колонии кишечной палочки окрашены в красно-фиолетовый цвет с металлическим блеском. При росте на жидких средах культура кишечной палочки дает помутнение и осадок. Таким образом, изолят 4D был отнесен к роду Escherichia sp. и предположительно к виду E. coli.
Физиолого-биохимические характеристики культуры дрожжей 5E исследовали на питательной среде с пептоном, индикатором «бромтимоловый синий», растворами сахаров в концентрации 10 % - галактоза, лактоза, мальтоза, раффиноза, сахароза, ксилоза, арабиноза, глюкоза, пентоза, крахмал. Изменение цвета индикатора указывало на образование кислых или щелочных (вследствие разложения пептона) продуктов метаболизма. Результаты наблюдений сравнивали с показателями роста в контрольной среде, не содержащей испытуемого источника углерода. Таким образом, выделенный штамм 5E по морфобиохимическим показателям соответствовал роду Saccharomyces, предположительно к виду S. cerevisiae.
Культуры 6F и 6.1F - это грамположительные тонкие палочки, располагаются одиночно, в виде нитей или цепочек. Они содержат овальные споры, не превышающие в поперечнике ширины микробной клетки. Капсулу не образуют. Для дальнейших исследований отбирали штаммы, которые на плотной питательной среде образовывали колонии мучного цвета, мелкоскладчатые, на мясо-пептоном бульоне растущие в виде морщинистой пленки. Изучение биохимических свойств выделенных бактерий, а также результаты проведения дополнительных тестов позволили предположительно отнести их к видам B. subtilis и B. thuringiensis.
Таблица 1
Способность изолятов, выделенных из коммерческих биопрепаратов «БиЭм» и «Байкал ЭМ»,
использовать углеводы в качестве субстратов
Культура микроорганизмов Глюкоза Сахароза Маннит Мальтоза Сорбит Лактоза Крахмал
S. aureus 1A + + + + + - -
A. oryzae 2B + + + + + + +
L. lactis 3C + + + + - + -
E. coli 4D + + + + + + +
S. cerevisiae 5E + + + + - + +
B. subtilis 6A + + + + + + +
Lactobacillus sp. 7G + + + + - + -
B. thuringiensis 6.1B + + + - - + +
Практически все выделенные изоляты использовали предложенные углеводы. S. aureus не усваивал лактозу и крахмал, L. lactis не усвоил сорбит и крахмал, штаммы S. cerevisiae и Lactobacillus sp. не использовали сорбит, B. thuringiensis - мальтозу и сорбит.
Наибольшей активностью обладали культуры микроорганизмов Staphylococcus aureus, Saccharomyces cerevisiae, Bacillus subtilis и Lactobacillus casei.
Таблица 2
Результаты идентификации штаммов микроорганизмов, выделенных из биопрепаратов «Байкал ЭМ-1» и «БиЭМ»
Штаммы, выделенные из биопрепарата «БиЭМ» Штаммы, выделенные из биопрепарата «Байкал ЭМ»
Staphylococcus aureus 1А Lactococcus lactis 3C
Aspergillus oryzae 2B Escherichia coli 4D
Saccharomyces cerevisiae 5E Bacillus subtilis 6A
Lactobacillus sp. 7G Bacillus thuringiensis 6.1B
Таблица 3
Определение амилолитической активности выделенных штаммов микроорганизмов
Культура микроорганизмов Зоны гидролиза d, см
S. aureus 1A 1,6-2,8
A. oryzae 2B 1,4-2,0
L. lactis 3C -
E. coli 4D -
S. cerevisiae 5E 3,2
B. subtilis 6A 4,3
Lactobacillus sp. 7G 4,9-5,2
B. thuringiensis 6.1B -
Наибольшая амилолитическая активность отмечена у изолятов Lactobacillus sp. 7G - 4,95,2 d, см. У остальных культур активность амилазы не превышала 3,2-4,3 d, см. Наименее активными были культуры микроорганизмов L. lactis 3C, E. coli 4D, B. thuringiensis 6.1B.
Выяснено, что культуры микроорганизмов Staphylococcus aureus, Saccharomyces cerevisiae и Bacillus subtilis способны проявлять липолитическую активность по отношению к липидным, белковым и углеводсодержащим компонентам сточных вод.
Изучена окислительная способность выделенных культур микроорганизмов по отношению к жирам животного (свиной и говяжий жиры) происхождения.
Наибольшую активность показала культура Lactobacillus sp. 7G - 162,67 мг СО2/г субстрата. На основании экспериментов по определению протеолитической активности микроорганизмов можно сделать вывод, что наибольшей активностью обладают штаммы микроорганизмов S. cerevisiae и B. thuringiensis.
На основании экспериментов по определению протеолитической активности микроорганизмов можно сделать вывод, что наибольшей активностью по отношению желатины и молока обладают культуры микроорганизмов S. cerevisiae 5E и B. thuringiensis 6.1B. При образовании светлых зон на агаре Эйкмана активность проявили культуры A. oryzae 2B и B. thuringiensis 6.1B.
Выделенные из коммерческих биологических препаратов («Байкал ЭМ-1» и «БиЭМ») микроорганизмы-деструкторы органических веществ, которые на основании исследования морфологических, тинкториальных, биохимических свойств идентифицированы как S. aureus 1A, A. oryzae 2B, L. lactis 3C, E. coli 4D, S. cerevisiae 5E, B. subtilis 6A, Lactobacillus sp. 7G, B. thuringiensis 6.1B.
В модельных опытах изучена способность выделенных микроорганизмов элиминировать молочные и жировые компоненты сточных вод. На основании результатов исследования у культур микроорганизмов Staphylococcus aureus 1A, Escherichia coli 4D и Bacillus
thuringiensis 6.1B выявлена активность липолитических ферментов по отношению к оливковому и подсолнечному маслам. S. aureus 1A проявляет наибольшую активность в отношении к соевому маслу. Культура микроорганизмов Saccharomyces cerevisiae способна в лучшей степени элиминировать льняное масло.
Культура микроорганизмов A. oryzae 2B наивысшую липолитическую активность проявляет к сладкосливочному маслу выше, чем остальные выделенные микроорганизмы. Относительно культуры B. thuringiensis 6.1B имеет наилучший показатель активности к шоколадному маргарину.
По результатам окислительной способности культура микроорганизмов B. Thuringiensis 6.1B показала лучшие значения элиминирования липидных, белковых и угле-водсодержащих компонентов сточных вод по сравнению с остальными микроорганизмами. Также следует отметить, что жиры животного происхождения окислялись исследуемыми культурами микроорганизмов сложнее, что, вероятно, связано с наличием в их составе до 50 мас.% насыщенных жирных кислот.
Эксперименты по определению протеолитической активности микроорганизмов, показывают, что наилучший результат показали культуры микроорганизмов S. cerevisiae 5E и B. thuringiensis 6.1B.
На основании результатов по определению амилолитической активности микроорганизмов, можно сделать вывод, что наибольшей активностью обладают культуры микроорганизмов S. aureus 1A, S. cerevisiae 5E и B. subtilis 6A.
В литературных источниках описывается широкий круг микроорганизмов-деструкторов различных органических веществ, к примеру, в статье [12] обсуждаются методы изучения ли-политических свойств выделенных микроорганизмов из сточных вод после эмульсионного обезжиривания меховой овчины. В источнике [13] описываются данные по использованию изолированных штаммов из препарата «Восток» в микробных топливных элементах, показана перспективность использования ЭМ-препарата «Восток», а также изолированных из него микроорганизмов для получения электрической энергии в микробных топливных элементах. Консорциумы микроорганизмов, входящие в состав ЭМ-препарата «Восток», как и изолированные из него индивидуальные штаммы, способны элиминировать различные компоненты сточных вод. На базе ИРНИТУ (г. Иркутск) рассматриваются консорциумы, которые могли бы использоваться для элиминирования различных компонентов сточных вод, в частности жировых и молочных.
Рассмотренные литературные данные показывают, что поиск микроорганизмов-деструкторов, изолированных из различных источников, а также консорциумов поможет решить вопрос с загрязнениями сточными водами.
Вывод
На основании проведенных исследований можно сделать вывод, что выделенные и идентифицированные микроорганизмы - деструкторы органических веществ могут быть использованы для элиминирования основных молочных и жировых компонентов сточных вод на предприятиях молочной промышленности для устранения загрязнений. По итогам исследований ферментативной активности пришли к выводу, что среди всех выделенных микроорганизмов наиболее эффективно элиминируют липидные, белковые и углеводсодержащие компоненты сточных вод такие культуры, как S. cerevisiae 5E и B. subtilis 6A.
Статья написана при финансовой поддержке гранта РФФИ «Изучение взаимодействия отдельных штаммов и микробных ассоциаций, обладающих электрогенной активностью в МТЭ, с загрязнителями хозяйственно-бытовых сточных вод и разработка рекомендаций по интенсификации их очистки», проект № 18-48-030019.
Библиография
1. О состоянии и охране окружающей среды Республики Бурятия: Государственный доклад Министерства природных ресурсов Республики Бурятия. - 2018. - 190 с. [Электронный ресурс] - URL: http://www.minpriroda-rb.ru/activity/index.php?section_id=921&element_id=52670 (дата обращения: 14.06.2018).
2. Губонина З.И., Владимиров С.Н. Промышленная экология. Проблемы питьевой воды: учеб. пособие. - М.: Изд-во МГОУ, 2010. - 101 с.
3. Блинов Л.Н., ГутеневМ.С., Перфилова И.Л. и др. Санитарная микробиология: учеб. пособие КПТ. - СПб.: Лань КПТ, 2016. - 240 с.
4. Ota Y., Yamada K., Tomizuka N. Lipase from Candida cylindraceae. I. Purification and properties // Agric. and Biol. Chem. - 1966. - Vol. 30. - P. 576-584.
5. Джей Д.М., ЛесснерМ.Д. Современная пищевая микробиология / пер. с англ. Е.А. Баранова. - М.: БИНОМ. ЛЗ, 2012. - 886 c.
6. Емцев В.Т., Мишустин Е.Н. Микробиология. - 8-е изд. - М., 2017. - 245 с.
7. Бун Д., Гаррити Дж., Кастенхольц Р. и др. Определитель бактерий Берджи / пер. с англ. под ред. акад. РАН Г.А. Заварзина. - М.: Мир, 2001. - Т. 1. - 722 c.
8. Госманов Р.Г. [и др.]. Микробиология. - СПб.: Лань, 2011. - 496 c.
9. Бун Д., Гаррити Дж., Кастенхольц Р. и др. Определитель бактерий Берджи / пер. с англ. под ред. акад. РАН Г.А. Заварзина. - М.: Мир, 2009. - Т. 2. - 1106 c.
10. Бун Д., Гаррити Дж., Кастенхольц Р. и др. Определитель бактерий Берджи / пер. с англ. под ред. акад. РАН Г.А. Заварзина. - М.: Мир, 2012. - Т. 3. - 1450 с.
11. Петров В.Г., Шумилова М.А., Столов В.В. Разложение водно-жировых эмульсий в сточных водах молочного производства с использованием коагулянтов // Вестник Удмуртского ун-та, 2013. -Вып. 4. - 27-32 с.
12. ШалбуевДм.В. Изучение липолитических свойств микроорганизмов, выделенных из сточных вод после эмульсионного обезжиривания // Кожа и мех в XXI веке: технология, качество, экология, образование. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГУТУ, 2016. - С. 6.
13. Стом Д.И., Коновалова Е.Ю. [и др.]. Использование в микробных топливных элементах штаммов, изолированных из препарата «ВОСТОК» // Известия Самарского науч. центра. - Самара, 2013. - С. 1153-1156.
Bibliography
1. State report "On the state and protection of the environment of the Republic of Buryatia". - Ministry of Natural Resources of the Republic of Buryatia. - 2018. -190 p. internet resource: http://www.minpriroda-rb.ru/activity/index.php?section_id=921&element_id=52670
2. Gubonina Z.I., Vladimirov S.N. Industrial ecology. Problems of drinking water: textbook. - M.: Publ. house of MRSU, 2010. - P. 101.
3. Blinov L.N., GutenevM.S., Perfilova I.L. et.al. Sanitary microbiology: textbook KPT. - SPb.: Lan KPT, 2016. - 240 p.
4. Ota Y., Yamada K., Tomizuka N. Lipase from Candida cylindraceae. I. Purification and properties // Agric. and Biol. Chem. - 1966. - Vol. 30. - P. 576-584.
5. Jay D.M., Lessner M.D. Modern food microbiology / transl. from Engl. by E.A. Baranova. - M.: BINOM. LZ, 2012. - P. 886.
6. Emtsev V.T., Mishustin E.N. Microbiology. - M., 2017. - N 8. - P. 245.
7. Boone D., Garrti G., Kastenholts R. et al. The determinant of bacteria Berdzhi / Translated from English by acad. of RAS G.A. Zavarzin. - M.: Mir publ. house, 2001. - Vol. 1. - P. 722.
8. GosmanovR.G. [et al]. Microbiology. - SPb.: Lan, 2011. - P. 496.
9. Boone D., Garrti G., Kastenholts R. et al. The determinant of Berdzhi bacteria / Translated from English by acad. of RAS G.A. Zavarzin. - M.: Mir publ. house, 2009. - Vol. 2. - P. 1106.
10. Boone D, Garrti G., Kastenholts R. et al. The determinant of Berdzhi bacteria / Translated from English by acad. of RAS G.A. Zavarzin. - M.: Mir publ. house, 2012. - Vol. 3. - P. 1450.
11. Petrov V.G., ShumilovaM.A., Stolov V.V. Decomposition of water-fat emulsions in sewage waters of dairy production using coagulants // Bulletin of the Udmurt University. - 2013. - Issue 4. - P. 27-32.
12. Shalbuev Dm.V. Study of the lipolytic properties of microorganisms isolated from sewage after emulsion degreasing // Leather and fur in the XXIst century: technology, quality, ecology, education. - Ulan-Ude: ESSUTM, 2016. - P. 6.
13. Stom D.I., Konovalova E.Yu. [et al.]. The use of strains isolated from the drug "VOSTOK" in microbial fuel cells // Proceedings of the Samara Scientific Center. - Samara, 2013. - P. 1153-1156.
