Химиотерапия Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ХИМИОТЕРАПИЯ

Е.Н. Амосова, Е.П. Зуева, Т.Г. Разина, С.Г. Крылова Препараты из растений как антиметастатические средства при хирургическом удалении опухоли

ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск

Введение. Хирургическое удаление опухоли продолжает оставаться одним из основных способов лечения больных со злокачественными новообразованиями. Однако даже в случае радикально выполненной операции больные нередко погибают от метастазов и рецидивов.

Цель исследования. Экспериментальный поиск препаратов природного происхождения, обладающих антиметастатическими свойствами и увеличивающих резистентность организма при хирургическом удалении опухоли.

Материалы и методы. В экспериментах использовали 2 экспериментальные модели: удаление первичного опухолевого узла у мышей с карциномой легких Льюис (ЬЬС) и операцию «пробная лапаротомия» у крыс с перевитой подкожно лимфосаркомой Плисса (Ь8). Эффективность лечения оценивали, определяя массу опухоли, процент торможения её роста, количество метастазов в легких и их площадь, частоту метастазирова-ния, индекс ингибирования метастазирования.

Результаты. При удалении у мышей с ЬЬС первичной опухоли высокую антиметастатическую активность обнаружили экстракты бадана тихоокеанского, левзеи сафлоровидной, облепихи крушиновидной, одуванчика лекарственного, осины обыкновенной, препарат подорожника и глицирам (полученный из солодки), введение которых оперированным животным приводило к снижению частоты метастазирования, количества и площади метастазов и других показателей, характеризующих тяжесть метастатического поражения. Наряду с антиметастатической активностью глицирам и экстракты одуванчика лекарственного, коры и побегов облепихи крушиновидной оказывали антирецидивное действие. Препарат подорожника ингибировал метастатический процесс у крыс с Ь8 и оказывал регулирующее влияние на гипофиз-адреналовую систему в условиях операционного стресса. Выявлено, что экстракты бадана тихоокеанского, левзеи сафлоровидной, облепихи крушиновидной, осины обыкновенной и препарат подорожника обладают антистрес-сорным действием, а экстракты бадана, облепихи и осины, кроме того, обладают анальгетической активностью. Доказано, что препарат подорожника и экстракт коры и побегов облепихи оказывают модулирующее воздействие на функциональную активность имму-нокомпетентных клеток (клеток лимфоузлов, естественных киллеров), что сопровождается повышением резистентности организма, о чем свидетельствует подавление процесса метастазирования.

Выводы. Увеличение под действием препаратов из растений эффективности хирургического лечения и влияние на различные регуляторные системы организма позволяют отнести их к группе модификаторов биологических реакций и с успехом использовать на различных этапах лечения больных со злокачественными новообразованиями в качестве средств дополнительной терапии.

Г.Н. Апрышко, В.В. Решетникова, Г.К. Герасимова Информационно-технологические аспекты регистрации новых субстанций в банке данных по противоопухолевым веществам РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Необходимым условием эффективного использования Базы данных (БД) РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН по противоопухолевым веществам для различных аналитических исследований является ее наполнение корректными сведениями о свойствах и биологической активности веществ.

Цель исследования. Создать современную информационную технологию первичной регистрации новых веществ в БД РОНЦ, обеспечивающую правильный и быстрый ввод данных по структуре и свойствам веществ в объеме, соответствующем потребностям их последующего использования.

Материалы и методы. Использованы СУБД ISISBase, текстовый редактор Microsoft Office Word и паспортные данные по свойствам около 10000 веществ из БД РОНЦ.

Результаты. Разработана единая форма паспортов, составляющихся авторами синтеза нового вещества или его выделения из природного сырья, содержащая данные в объеме, достаточном для однозначной идентификации субстанции, правильного планирования и проведения ее биологического изучения, анализа полученных результатов. Специалисты, имеющие программу ISISBase и умеющие работать с нею, могут получить в группе Банка данных комплект файлов для заполнения электронного паспорта, представляющих собой незаполненные БД вместе с интерфейсами для ввода данных и электронными словарями, которые рекомендуется использовать при вводе данных. Специалисты, не имеющие возможности подготовить паспорта в электронном виде с помощью программы ISISBase, могут получить в группе Банка данных бумажные бланки, полностью соответствующие интерфейсу заполнения электронных паспортов, или их электронный вариант в текстовом формате. В обоих случаях химики обеспечиваются инструкцией по заполнению паспортов в бумажном или электронном виде. Заполненные паспорта могут быть переданы в группу Банка данных непосредственно или по электронной почте. Как ручному вводу, так и импорту электронных паспортов в БД предшествуют предмашинный контроль и корректировка данных. При регистрации в Банке данных новому фармакологическому веществу присваивается уникальный идентификационный номер (ID), который в дальнейшем используется при поиске в БД и составлении всех видов документации по веществу.

A.М. Арнополъская1, В.Н. Митин1, В.Н. Кулаков2,

B.Ф. Хохлов2, А.А. Портнов3 Сравнительная оценка

эффективности терапии спонтанной меланомы ротовой полости собак разными методами

1ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ФГУП ГНЦИнститут биофизики, Москва 3МИФИ, Москва

Введение. Проведено сравнительное изучение эффективности лечения 67 собак со спонтанной меланомой ротовой полости традиционными методами и методами нейтронзахватной терапии с использованием препаратов 10В-борфенилаланина (БНЗТ) и дипентаста с гадолинием (ГНЗТ).

Материалы и методы. Распределение животных по группам: I гр. (контрольная, без лечения) - 9; II гр. (хирургическое лечение) - 9; III гр. (дистанционная гамма-терапия) - 8; IV гр. (нейтронная терапия) -5; V гр. (БНЗТ) - 14; VI гр. (ГНЗТ) - 14; VII гр. (НЗТ и адъювантная иммунотерапия) - 5; VIII гр. (НЗТ без адъювантной иммунотерапии)

- 3. Специально сравнивалась терапевтическая эффективность НЗТ в частом виде и в сочетании с адьювантной терапией ронколейкином. Лучевую терапию проводили на аппарате «АГАТ-Р» (радионуклид 60Co 4,52х103 Кю, мощность экспозиционной дозы 3,4x10 4 А/кГ/ 1 м). Опухоль слизистой ротовой полости облучали на расстоянии от центра опухоли = 75 см с двух встречных полей фракциями по 5-7 Гр по

2-3 фракции в неделю (варианты: 5х2; 4х3). Суммарная очаговая доза = 30-60 Гр. Облучение в условиях БНЗТ и ГНЗТ проводили на ядерном реакторе ИРТ МИФИ. Характеристика пучка нейтронов: поток тепловых нейтронов (E<0,5 эВ) - 1,1х109 н/см2/с; поток эпитепловых нейтронов (0,5 эВ<Е<10 кэВ) - 1,6х108 н/см2/с; поток быстрых нейтронов (E>10 кэВ) - 5,8х107 н/см2/с; доза быстрых нейтронов в пучке на тепловой нейтрон - 5,6х10-13 Гр-см2/н; доза быстрых нейтронов в пучке на эпитепловой нейтрон - 4,2х10-12 Гр-см2/н; доза фотонов на тепловой нейтрон - 1,5 х10-13 Гр-см2/н.

Результаты. Средний срок жизни животных 1 группы с меланомой на IIB-III стадиях болезни составлял 38,0±13,6 дней. 100 % животных контрольной группы были усыплены по просьбе владельцев. Причины -увеличение объема опухоли более, чем в 2 раза, обильное кровотечение при приеме пищи, некроз опухоли. Признаки генерализации опухолевого процесса отсутствовали. II группа: электроэксцизия меланомы выполня-лясь при локализации опухоли на десне, а у собак с локализацией опухоли

на слизистой губы и мягкого неба проводили иссечение опухоли по всем правилам абластики. Рецидив возникал в 100% случаев в срок от 14 до 45 дней. Продолжительность безрецидивного периода была от 14 (50 %) до 45 дней (абластичное иссечение опухоли). Среднее значение этой величины - 26,0±12,5 дней.

Реакция опухоли на различные виды лучевого воздействия приведена в таблице:__________________________________________________________

Реакция опухоли Гамма излучение, III гр. Тепловые нейтроны, IV гр. БНЗТ, V гр. ГНЗТ, VI гр.

Полная регресия ПР 12,5 % 80 % 78 % 54 %

Частичная регрессия ЧР 12,5 % 20 % 22 % 46 %

Стабилизация роста СР 75 % - - -

Число рецидивов 100 % 100 % 14 % 46 %

Безрецидивный период (дни) 30±5,5 101+28,8 52+10,6 106+7,5

Выводы. Получено доказательство повышения терапевтической эффективности НЗТ в сочетании с адъювантной терапией ронколейкином: средняя продолжительность жизни животных VIII гр. составила 305±70,5 дней, в то время как в VIII гр. этот показатель был существенно ниже -113±7,6 дней. В то же время у животных обеих групп избежать дальнейшей генерализации опухолевого процесса не удалось, хотя в VII гр. мета-стазирование наступало в более ранние сроки.

Работа выполнена в рамках проектов МНТЦ № 1951 и 3341.

К.А. Атрошкин, Н.Л. Шимановский, А.В. Семейкин,

Е.А. Кирсанова, М.А. Секирина Влияние гестагенов

на жизнеспособность клеток культуры HeLa и экспрессию фактора bcl-2 при изолированном применении и в сочетании с цитостатическими средствами

Российский государственный медицинский университет, Москва

Цель исследования. Изучить влияние нового соединения с геста-генной активностью (17а-ацетокси-3в-бутаноилокси-6-метил-прегна-4,6-диен-20-он (АБМП)) и препаратов сравнения (прогестерон, мед-роксипрогестерона ацетат, левоноргестрел), а также перечисленных веществ в сочетании с доксорубицином на апоптоз клеток-мишеней (клетки культуры аденокарциномы шейки матки человека HeLa).

Задачи исследования: 1) изучить влияние АБМП и препаратов сравнения, а также их комбинации с доксорубицином на жизнеспособность клеток-мишеней методом МТТ-теста; 2) изучить влияние АБМП и препаратов сравнения отдельно и в сочетании с доксорубицином на экспрессию фактора bcl-2 методом иммуноцитохимического окрашивания.

Материалы и методы. Клетки культуры HeLa инкубировали при 37 °С в течение 48 ч в присутствии АБМП (в концентрации 10 6,10 8М), прогестерона (в концентрации 10 6,10 8М), медроксипроге-стерона ацетата (в концентрации 10 6,10 8 М), и левоноргестрела (в концентрации 10 6,10 8М), а также в тех же условиях с добавлением доксорубицина в концентрации 10 6М. Также клетки инкубировали отдельно с доксорубицином в концентрации 10 6М в тех же условиях, что и исследуемые образцы. Контрольную группу клеток инкубировали в тех же условиях, что и исследуемые образцы, в отсутствие соединений. После инкубации оценивали жизнеспособность клеток методом МТТ-теста по стандартному протоколу. Параллельно окрашивали фиксированные формалином образцы всех перечисленных групп моноклональными антителами к фактору bcl-2 (Dako, USA, методику окрашивания проводили в соответствии с оригинальным протоколом производителя). Результаты окрашивания оценивали с использованием специализированного программного обеспечения (автоматизированный расчет параметров оценки).

Результаты. По данным МТТ-теста АБМП, медроксипрогестерона ацетат и левоноргестрел в данных условиях не оказывали значимого влияния на жизнеспособность клеток. При действии прогестерона в концентрации 10 6М подавление жизнеспособности по сравнению с контролем составило 21,8±11,2 % (достоверные отличия от контроля при р<0,05). Доксорубицин в концентрации 10 6М не оказывал значимого

воздействия на клетки исследуемой культуры по сравнению с контролем. Сочетание соединений с доксорубицином приводило к подавлению жизнеспособности клеток при концентрации АБМП, медрокси-прогестерона ацетата, левоноргестрела и прогестерона 10 6М и 10 8М (подавление жизнеспособности по отношению к контролю составило 52,5±2,5 % и 40,7±1,5 % для АБМП, 52,34±11,2 % и 33,3±10,9 % для медроксипрогестерона ацетата, 39,9±12,9 % и 27,7±5,8 % для левоноргестрела, и 37,0±5,7 % и 55,3±4,1 % для прогестерона соответственно). При этом не наблюдалось статистически достоверных отличий в экспрессии фактора bcl-2, оцененной по результатам иммуноцитохимического окрашивания, в исследуемых и контрольных образцах.

Выводы. При действии исследуемых гестагенов при данной дозе и времени действия происходит дозозависимое снижение жизнеспособности клеток культуры аденокарциномы шейки матки человека HeLa. При действии комбинаций гестагенов также снижается жизнеспособность клеток, более выражено, чем при действии отдельно гестагенов и доксорубицина в тех же условиях. При этом не происходит значимого изменения экспрессии фактора bcl-2 в клетках-мишенях.

С.Б. Ахметова, Р.Б. Сейдахметова, С.М. Адекенов Скрининг на цитотоксичность природных сесквитерпеновых лактонов и алкалоидов и их производных

АО «Научно-производственный центр «Фитохимия», Караганда, Казахстан

Изучено влияние 29 сесквитерпеновых лактонов и 47 алкалоидов, выделенных из растений Казахстана и их производных, на личинки морских рачков Artemia salina (Leach) в условиях культивирования in vitro для выявления потенциала цитотоксической активности.

В эксперименте использовали личинки 2-дневного возраста морских рачков Artemia salina(Leach), рассчитывали половинную токсическую дозу LD50, верхний и нижний токсические лимиты, пробит-коэффициент для каждого образца, показавшего цитотоксическую активность.

Среди изученных образцов сесквитерпеновых лактонов и их производных сравнительно высокой цитотоксической активностью в отношении личинок морских рачков Artemia salina обладают нативный арглабин, гидрохлорид диметиламиноарглабина, дихлоркарбен-производное арглабина, метилйодид диметиламино-арглабина, тетра-хлоркарбенпроизводное эстафиатина, изоэпокси-эстафиатин, этилйо-дид диэтиламино-гроссгемина, бромкарбен-производное арглабина, метилйодид диэтиламиноарглабина, оксим гроссмизина, метилйодид диметиламиноарголида, из алкалоидов и их производных - оксим папаверина, гидрохлорид гармина, 8-бром-гармин, метилйодид гармина, N-окись гармина, пеганин, вазицинон, метилйодид пеганина, 2'S,3R-гексагидроникотинамид-(-)-(1R,3R)-3-хлоркамфорной кислоты, 2'S,3R-гексагидроникотинамид-2'S,3R-гексагидроникотинилами-домалеиновой кислоты.

Т.А. Богуш, Е.А. Дудко, В.А. Рыбко, Е.А. Богуш,

Г.Ю. Чемерис, М.И. Давыдов АВС-транспортеры Pgp и MRP -маркеры устойчивости к тамоксифену рака молочной железы с положительным статусом эстрогеновых рецепторов ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Экспрессия в опухоли эстрогеновых рецепторов (ЭР+) является главным маркером чувствительности к тамоксифену (ТАМ) рака молочной железы (РМЖ), однако в ряде случаев гормональная терапия ЭР+ РМЖ оказывается неэффективной. Принимая во внимание данные о взаимодействии ТАМ с Pgp, мы предположили, что конкуренция АВС-транспортеров, ассоциированных с фенотипом множественной лекарственной резистентности (MDRabc) за связывание ТАМ с эстрогеновыми рецепторами, может быть одной из причин устойчивости ЭР+ РМЖ к ТАМ.

Цель исследования. Проверка правильности этого предположения, для чего изучено влияние ТАМ на взаимодействие специфических антител с АВС-транспортерами - Pgp и MRP.

Материалы и методы. Исследование проведено методом проточной цитофлюориметрии в модельной системе на клеточных ли-

ниях HeLa (рак шейки матки), Calu-1 (эпидермоидный рак легкого), Н-358 (бронхоальвеолярная карцинома), а также на суспензии клеток, полученных из хирургического материала РМЖ. MDRabc фенотип исследованных клеток (Pgp+и/или MRP+) оценивали по изменению внутриклеточного накопления модельного препарата доксору-бицина в ответ на воздействие специфических ингибиторов Pgp и MRP - верапамила и генистина соответственно. Все исследования проведены методом проточной цитофлюориметрии.

Результаты. В диапазоне линейной зависимости флюоресценции клеток с фенотипом MDRabc от концентрации специфических антител выявлено значительное (от 1,5 до 3 и более раз) снижение флюоресценции клеток во всех исследованных культурах при предварительной инкубации с ТАМ. Аналогичный эффект продемонстрирован при исследовании ex vivo клеток РМЖ, в которых выявлена экспрессия функциональной активности Pgp и/или MRP.

Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о конкурентном по отношению к моноклональным антителам взаимодействии ТАМ с Pgp и MRP, что указывает на существование конкуренции между АВС-транспортерами, локализованными на плазматических мембранах и клеточных органеллах, с ядерными и внегеномными ЭР. Результатом этого должно быть снижение «активной» внутриклеточной концентрации ТАМ и, следовательно, антиэстрогенной эффективности ТАМ. Такой механизм устойчивости к ТАМ может реализоваться у каждой 4-й больной с ЭР+ РМЖ, так как в таких опухолях MDRabc фенотип выявляется приблизительно в 25% случаев [Bogush T. et al. // Breast Cancer Res Treat. - 1999. - 13(l). - P. 64]. Таким образом, экспрессия АВС-транспортеров Pgp и MRP может рассматриваться как неблагоприятный прогностический маркер эффективности ТАМ при лечении рака молочной железы с положительным статусом эстроге-новых рецепторов.

Исследование поддержано Грантом РФФИ (№ 07-04-00082).

А.В. Бородина, М.В. Нехорошее Противоопухолевые препараты в некоторых морских продуктах питания

Институт биологии южных морей им. А.О. Ковалевского НАН Украины, Севастополь

Известно, что некоторые каротиноиды, содержащиеся в морских продуктах питания, обладают противоопухолевыми свойствами. Такими каротиноидами у съедобных бурых водорослей (Undaria pinnatifida, Laminaria japónica, Hizikia fusiformis, Cystoseira barbata) является фукоксантин и неоксантин. Содержание фукоксантина в Черноморской бурой водоросли C. barbata составляет 0,3-0,4 мг/100 г сыр. массы, что сравнимо с содержанием этого каротинои-да в дальневосточной ламинарии и ундарии. Известны работы по изучению влияния этих каротиноидов на апоптоз клеток рака простаты [Eiichi Rotake-Nara et al., 2001], а также по их использованию при лечении и профилактике лейкемии и карциономы. 2 вида водорослей - U. pinnatifida, L. Japónica - являются повседневным блюдом питания жителей восточной и южной Азии, где статистика показывает снижение на порядок уровня заболеваемости указанными выше видами рака. Интерес представляют каротиноиды не только растительного происхождения, но и животного, особенно такие, которые накапливаются у видов, подвергающихся постоянным стрессам (температурным, солевым, гипоксии). Очевидно, что ферментативная система таких видов будет способствовать накоплению каротиноидов с более выраженными антиоксидантными свойствами. Одним из таких животных может быть моллюск Crassostrea gigas, встречающийся в последнее время не только в Средиземном и Японском, но и в Черном морях. Эта устрица накапливает такие каротиноиды, как митилоксантин, фукоксантин и пиридинин [T. Maoka et al., 2005], обладающие антиканцерогенными свойствами [Suzuki M. et al., 2003; Nishino H. et al,. 1998]. Содержание последних двух каротиноидов в черноморской устрице может доходить до 1,7 мг/100 г. сыр. массы.

Таким образом, употребление морских продуктов питания, таких как бурые водоросли и двустворчатые моллюски, играют важную роль в профилактике онкозаболеваний. Также необходимо отметить возможность использования этих морепродуктов для получения биологически активных веществ.

П.М. Бычкоеский1, Т.Л. Юркшшоеич1, Ф.Н. Капуцкий1,

С.А. Беляев1, Д.А. Адамчик1 , Д.В. Шибко1, Е.А. Корошкееич2, Э.А. Жаерид2, А.В. Ваккер2, А.Ф. Смеяноеич3, Ю.Г. Шанько3, А.В. Бокач3, И.В. Тарасюк4

Опыт применения отечественного препарата цисплацел в химиотерапии злокачественных новообразований головы и шеи

1НИИ физико-химических проблем Белгосуниверситета, Минск, Беларусь

2НИИ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова, Минск, Беларусь

3ГУ «РНПЦ неврологии и нейрохирургии» МЗ РБ, Минск, Беларусь 4ГУО «БелМАПО», Минск, Беларусь

Низкая эффективность современных комплексных схем лечения злокачественных новообразований в области головы и шеи, в том числе низкодифференцированных глиом головного мозга, ставит вопрос о разработке и использовании принципиально новых подходов к ее терапии и является одной из самых актуальных проблем нейрохирургии и онкологии. Один из перспективных методов лечения этих заболеваний - локальная химиотерапия с использованием цитостатических препаратов, иммобилизованных на биодеградируемых носителях.

В работе исследован процесс иммобилизации на биодегради-руемом полимере - монокарбоксилцеллюлозе (МКЦ) цисплатина (ЦП), одного из наиболее эффективных противоопухолевых препаратов для системной и внутриартериальной химиотерапии злокачественных новообразований. Методом ИК-спектроскопии показано, что сорбция протекает по механизму физической сорбции, подтверждением является отсутствие химического взаимодействия между сорбатом и сорбентом. Установлено, что процесс сорбции ЦП МКЦ из водных растворов описывается аналогом уравнения Лэн-гмюра, определены константы сорбционного равновесия, предельной сорбционной емкости, коэффициенты межфазного равновесия, рассчитаны значения свободной энергии сорбции.

В условиях in vitro и in vivo показано, что препарат цисплацел не обладает выраженным нейротоксическим действием на интактную ткань головного мозга как в месте имплантации, так и на отдалении, и полностью сохраняет цитостатические свойства исходного цисплатина.

Клинические испытания препарата цисплацел были проведены у 90 больных с низкодифференцированными глиомами головного мозга (рТ2MOG3-4 стадии опухоли) и у больных с различными злокачественными новообразованиями головы и шеи. Медиана выживаемости больных, которым была проведена локальная химиотерапия препаратом цисплацел, составила 433 дня, что в 2 раза превышало этот показатель при стандартном комбинированном лечении (214 дней).

Л.Ю. Владимироеа, Я.В. Сеетицкая Возможности неоадьювантной химиотерапии местнораспространенного рака молочной железы

ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Росмедтехнологий», Ростов-на-Дону

Цель исследования. Изучение эффективности и токсичности неоадъювантной полихимиотерапии (НАХТ) на белковом концентрате аутоплазмы у 34 больных местнораспространенным раком молочной железы (РМЖ) III-IV стадий (Т2 4N1 2M0 1, где М1 - метастазы в надключичные лимфоузлы на стороне поражения) в возрасте от 27 до 77 лет.

Материалы и методы. Сравнительная характеристика больных проводилась по следующим критериям: возрасту, состоянию менструальной функции, степени распространения опухолевого процесса, клинико-анатомической форме РМЖ, данным гистологического исследования. Диагноз был верифицирован цитологически из первичной опухоли и лимфоузлов. Всем больным проводили 2 курса НАХТ на белковом концентрате аутоплазмы по схеме CMFA с перерывом 3 нед. Препараты вводили внутривенно капельно: метотрексат по 25 мг в 1-й и 8-й дни лечения, циклофосфан по 200 мг, 5-фторурацил по 500 мг, доксорубицин по 20 мг в 1-й, 3-й, 5-й, 8-й, 10-й и 12-й дни цикла. Для выделения белкового концентрата аутоплазму, полученную методом дискретного гравитационного плазмафереза, подвергали фильтрационной детоксикации с использованием фильтра F60S. Полученный белковый концентрат аутоплазмы объемом 700-800 мл помещали в стерильные флаконы порциями, равными объему и соот-

ветствующими числу планируемых введений цитостатиков. Флаконы с концентратом аутоплазмы хранили в холодильнике при -20 °С. При проведении ПХТ белковый концентрат аутоплазмы размораживали при +4 °С. Каждый противоопухолевый препарат разводили в 10 мл физиологического раствора, вводили во флакон с белковым концентратом, инкубировали и реинфузировали внутривенно капельно.

Результаты. Эффективность по критериям ВОЗ составила: 82,4 % (28) - частичная регрессия, 17,6 % (6) - стабилизация при отсутствии прогрессирования опухолевого процесса. Осложнения, оцененные согласно критериям ВОЗ, составили: гастроинтестинальная токсичность I степени

- 17,6 % (12), II степени - 8,9 % (6), III - 2,9 % (2). Стоматит I степени -2,9 % (2), II - 4,4 % (3). Гематологическая токсичность проявилась лейкопенией II степени - 8,9 % (6), III - 7,3 % (5). Медикаментозный флебит и общетоксические симптомы по 11,8 % (8), кардиалгия -5,9 % (4). В ряде случаев отмечен лекарственный патоморфоз Ш-IV степени с полным регрессом опухолевого очага.

Выводы. Клинический эффект и низкая степень выраженности осложнений способствуют переводу больных в операбельное состояние и выполнению комплексного лечения в полном объеме при РМЖ с высокой степенью местной распространенности.

Е.Л. Водовозова, Н.Р. Кузнецова, А.Г. Кандыба,

Г.В. Пазынина, Е.В. Моисеева Диглицеридный конъюгат метотрексата в липосомальных формах: устойчивость к эстеразам плазмы крови и противоопухолевая активность на мышиной модели лимфолейкоза

Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

Введение. Известно, что липофильные пролекарства обладают улучшенной фармакокинетикой. Нами синтезированы пролекарства широко применяемых в клинике препаратов - сарколизина и метотрексата (МТХ) - с целью включения их в липидный бислой липосом-носителей. Для увеличения селективности действия были сконструированы липосомы, несущие молекулярные адреса углеводной природы. Показана эффективность предлагаемого подхода на примерах резкого улучшения противоопухолевых свойств сарколизина на мышиных моделях лимфолейкоза и рака молочных желез. Преодоление клеточной устойчивости, обусловленной трансмембранным переносом, показано на примере ингибирования пролиферации МТХ-резистентных клеток лейкемии человека липосомами, нагруженными диглицеридным конъюгатом метотрексата (MTX-DG).

Задачи исследования. Исследовать устойчивость MTX-DG в ли-посомальной форме к действию эстераз плазмы крови. Изучить противоопухолевое действие адресных и контрольных липосом, нагруженных MTX-DG, по сравнению с интактным МТХ на перевиваемой мышиной модели Т-лимфолейкоза. В качестве углеводного адреса был выбран тетрасахарид SiaLeX, поскольку ранее методом цитоф-люориметрии подтверждено наличие селектинов (рецепторов SiaLeX) на поверхности клеток опухоли.

Материалы и методы. Экструзионные (100 нм) липосомы состава фосфатидилхолин - фосфатидилинозит - MTX-DG, 8:1:1 (мольн.), инкубировали с плазмой крови человека при 37 °С и анализировали на MTX-DG и МТХ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии каждый час. Препараты, в т.ч. липосомы с 2 мол. % конъюгата SiaLeX, вводили внутривенно (v. caudalis) мышам A/Sn на

3-е, 5-е, 10-е и 12-е сутки после перевивки опухоли.

Результаты. 1) МТХ-DG был устойчив к гидролизу вплоть до 24 ч инкубации. 2) В леченых группах наблюдалось торможение роста опухоли. По сравнению с контролем (n=3) лечение МТХ (n=5) дало увеличение продолжительности жизни на 23 %, липосо-мами с MTX-DG (n=6) - на 29 %, адресными липосомами (n=6) - на 43 % (различия достоверны).

Выводы. 1) Липосомы защищают МТХ-DG от преждевременного действия эстераз плазмы крови. 2) Лечение адресными липосомами с МТХ-DG приводит к выраженному улучшению выживания по сравнению как с метотрексатом, так и с MTX-DG-липосомами без углеводного лиганда.

Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант № 06-04-49432).

А.М. Гарин

Таргетные препараты - прожекты и достигнутые результаты терапии

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Большинство химиотерапевтических препаратов, сейчас применяемых, были созданы до 1975 года - в период непонимания и незнания генетических и биохимических механизмов патогенеза рака.

Клиническая реализация достижений молекулярной биологии в онкологии началась в конце прошлого века. И хотя в настоящее время в арсенале лекарств против солидных опухолей -10, а против гематологических новообразований - 7 таргетных препаратов, нужно признать, что практическое внедрение отстает от глубокой расшифровки фундаментальными исследователями сигнальных путей от мембранных рецепторов - в ядра, секретов подавления апоптоза в опухолевых клетках, нелимитированной репликации, неоваскуляризации, подробных недогматических (анатомических) представлений о фазах метастазирования и инвазии, роли угнетенных супрессоров в беззащитности клеток и воспроизводстве новых с генетическими дефектами.

Большинство существующих таргетных препаратов против солидных опухолей попадают пока не в «яблочко», а в «молоко» мишеней. Тем не менее они приводят у диссеминированных больных к более продолжительному контролю болезни, редко к выздоровлению и к возможному развитию резистентности.

В докладе будут проиллюстрированы реальные достижения от каждого из зарегистрированных в нашей стране таргетных препаратов для лечения солидных опухолей.

Л.Х. Гаркави, Ф.М. Захарюта, Г.В. Жукова,

О.Ф. Евстратова, Т.А. Бартенева, Л.Н. Логинова Вариант эффективного режима применения тималина

при злокачественных опухолях в эксперименте

ФГУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи», Ростов-на-Дону

Введение. В связи с активным развитием методов иммунотерапии опухолей представляется актуальной проблема разработки эффективных режимов применения иммуномодуляторов, способствующих значительному повышению противоопухолевой резистентности организма. Ранее было показано, что факторы физической и биохимической природы, вызывающие развитие общих неспецифических антистрессорных адаптационных реакций организма (Гаркави Л.Х., 1968; Гаркави Л.Х., Уколова М.А., Квакина Е.Б., 1975, диплом на открытие № 158), тем самым способствуют повышению его неспецифической противоопухолевой резистентности. При этом были выявлены зависимости между динамикой изменения биотропных параметров воздействия и влиянием действующих факторов на характер развивавшихся адаптационных реакций, обобщенные в форме принципов активационной терапии.

Цель исследования. Изучение эффектов иммуномодулятора тима-лина, применявшегося в соответствии с принципами активационной терапии, на развитие опухоли и состояние организма-опухоленосителя в эксперименте.

Материалы и методы. Эксперименты проводили на 20 белых беспородных половозрелых крысах-самцах с перевивной саркомой 45. Тима-лин вводили внутримышечно раз в 3 дня в дозе, в 5 раз меньшей терапевтической. Первоначальную дозу 0,14 мг/кг в течение курса воздействий изменяли на 10-25 % в зависимости от динамики характера адаптационных реакций организма экспериментальных животных. Продолжительность курса составила 4 нед. По окончании эксперимента проводили гистологическое исследование органов иммунной системы.

Результаты. Введение тималина в соответствии с алгоритмами активационной терапии позволило при отсутствии цитостатиков получить регрессию опухолей на 60-100 % у 65 % животных, у которых в течение курса воздействий удавалось поддерживать реакцию спокойной активации. При этом отмечены выраженные признаки активизации лимфопролиферативной активности и межклеточных взаимодействий в тимусе и селезенке (р<0,05-0,01).

Выводы. Таким образом, результаты исследования свидетельствуют

о целесообразности применения принципов активационной терапии при использовании иммуномодуляторов в комплексном противоопухолевом лечении.

И.Г. Гатауллин, С.В. Петров, А.В. Жинов, С.В. Городнов Изменение иммуноморфологического фенотипа рака прямой кишки после предоперационной лучевой терапии

Клинический онкологический диспансер МЗ РТ, Казань Областной онкологический диспансер, Ульяновск

Введение. Дальнейший прогресс в улучшении отдаленных результатов лечения рака прямой кишки следует связывать с мерами, обеспечивающими максимальное подавление агрессивности опухоли до начала оперативного вмешательства.

Цель исследования. Изучение иммуногистохимических характеристик рака прямой кишки до и после комбинированного лечения.

Материалы и методы. В основу работы положены данные о 123 больных первично-операбельным раком прямой кишки. 1-й группе -64 больных - было выполнено только радикальное оперативное вмешательство. Больные 2-й группы (59 пациентов) получали неоадъю-вантное лечение по 2 схемам: 30 пациентов получили предоперационную лучевую терапию средними фракциями, у 29 предоперационная лучевая терапия сочеталась с магнитотерапией, как радиомодифицирующим фактором. Иммуногистохимические исследования проведены с помощью набора моноклональных антител к белку Кі-67, белку Ьс1-2, раково-эмбриональному антигену (РЭА), Е-кадгерину, CD68 (маркеру гистиоцитов/макрофагов), белку р21, антигену CD45RO, CD95/Fas.

Результаты. При анализе спектра биомаркеров рака прямой кишки отмечен высокий уровень экспрессии раковоэмбрионального антигена (РЭА), маркера клеточной пролиферации Кі-67. Слабо- и умеренноположительная экспрессия CD68 и инфильтрация Т-лимфоцитами - во всех случаях. Слабоположительная экспрессия р21 - в половине случаев. Слабоположительная экспрессия Е-кадгерина - в 33,3 %. Отрицательная реакция на Ьс1-2 и CD95 - во всех наблюдениях. После предоперационной лучевой терапии отмечали подавление пролиферативной активности и уменьшение экспрессии р21. Статистически значимых изменений других тканевых маркеров в ответ на лечение не выявлено. После лучевой терапии с радиомодификацией магнитными полями отмечали уменьшение экспрессии р21, подавление экспрессии Кі-67. Не выявлено изменений уровня экспрессии раково-эмбрионального антигена, Ьс1-2, CD68, CD45 и CD95. Отмечено выраженное повышение Т-клеточной инфильтрации и увеличение экспрессии е-кадгерина.

Выводы. Предоперационная лучевая терапия с радиомодификацией вихревыми магнитными полями изменяет иммуноморфологический фенотип рака прямой кишки, проявляющийся в снижении пролиферативной активности опухоли, усилении ее дифференцировки и повышении внутритканевого иммунитета.

И.Г. Гатауллин, С.В. Петров. А.А. Валиев, Р.К. Шакиров Иммуноморфологическая характеристика колоректального рака

Казанская государственная медицинская академия Клинический онкологический диспансер МЗ РТ, Казань

Введение. Современные концепции лечения больных колоректальным раком должны основываться на использовании молекулярно-генетических данных о развитии злокачественных опухолей у человека.

Цель исследования. Изучение иммуноморфологических параметров опухолей прямой и ободочной кишок.

Материалы и методы. Работа основана на анализе результатов клинического обследования и лечения 104 пациентов с колоректальным раком. Все больные подвергнуты оперативному вмешательству в зависимости от локализации опухоли и ее распространенности. Им-муногистохимические исследования проводили с помощью набора моноклональных антител к тканевому РЭА, мутантному белку гена р53, маркеру клеточной пролиферации Кі-67, фактору неоангиогенеза СD31, онкобелку Нег-2/пеи, гену апоптоза Вс1-2, цитокератину № 7.

Результаты. Анализ биомаркеров колоректального рака на основе значительного клинического материала дал следующие результаты: отмечен высокий уровень экспрессии раково-эмбрионального антигена (РЭА) в 75 %, мутантного белка гена р53 в 82 %, маркера клеточной пролиферации Кі-67 - в 75 %, фактора неоангиогенеза CD31 - в 81 %.

Имелась положительная иммуногистохимическая реакция на цитокератин №7 - в 29 %, онкобелок HER-2/neu и ген апоптоза Вс1-2 - в 20 % каждый. Исследование иммуноморфологического фенотипа колоректального рака в зависимости от клинико-морфологических данных показало, что существует четкая связь между уровнем экспрессии тканевых маркеров и патоморфологическими и клиническими характеристиками опухоли.

Выводы. Дальнейшее изучение иммуноморфологических характеристик опухолевой ткани колоректального рака позволят провести подробный анализ основных процессов, характеризующих онкологический процесс, и осуществлять целенаправленную (таргетную) терапию колоректального рака.

Л.Г. Гатинская1 , К.А. Волков2, Н.А. Дмитричева1,

Е.В. Игнатьева1 , В.М. Негримовский2, И.В. Ярцева1 Изучение электронных спектров поглощения октакис(децилтио)октахлорфтолоцианина цинка

1ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Москва

Октакис(децилтио)хлорфталоцианин цинка (ДХФЦ) - новый липо-фильный фотосенсибилизатор ближнего инфракрасного диапазона, синтезированный во ФГУП «ГНЦ «НИОПИК» и предназначенный для фо-тодинамической терапии злокачественных опухолей.

Цель исследования - изучение спектров ДХФЦ, необходимое для стандартизации субстанции.

Образцы всех исследованных серий ДХФЦ представляют собой тягучую вязкую массу темно-зеленого цвета. Они практически нерастворимы в воде и спирте этиловом 95 %, умеренно растворимы в хлороформе (1:50), толуоле (1:30) и гептане (1:30).

Электронные спектры поглощения ДХФЦ, измеренные в органических растворителях (хлороформ, толуол), имеют характерный вид и подтверждают наличие фталоцианинового макрокольца в молекуле ДХФЦ. Показано, что существенное влияние на характер спектра - число и интенсивность сигналов - оказывают следы кислых примесей в растворителе, приводящие к протонированию макрокольца фталоцианина по мезо-атомам азота. Поэтому в качестве растворителя выбран толуол, практически не содержащий, в отличие от хлороформа, кислых примесей и не требующий специальной подготовки.

Спектр поглощения 0,0006 % раствора ДХФЦ в толуоле в области 300-800 нм содержит максимумы поглощения 726±3 нм, 655±3 нм, 383±3 нм. Измерением оптической плотности в наиболее интенсивном максимуме (726±3 нм) установлено, что растворы ДХФЦ в толуоле подчиняются закону Бугера-Ламберта-Бэра в необходимом диапазоне концентраций от 6 до 12 мкг/мл. Удельный показатель поглощения на этой длине волны для изученных образцов колебался в интервале 740-880 при сохранении соотношений между полосами поглощения, что указывает на присутствие в образцах неокрашенных примесей, вероятнее всего, последнего использовавшегося при выделении ДХФЦ растворителя.

Работа поддержана Правительством г. Москвы.

Е.Д. Гольдберг, Т.Г. Боровская, А.В. Пахомова,

А.В. Перова, В.Е. Гольдберг

Возможность сохранения женской репродуктивной функции при применении цитостатических препаратов

ГУ НИИ Фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск

Задачи исследования. Изучение в эксперименте возможности защиты женской репродуктивной функции от токсического действия цитостатических препаратов с помощью лекарственных средств гормонального происхождения, а также антиоксидантной терапии.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на 150 крысах-самках популяции Вистар. В качестве модели цитостатического воздействия были использованы цисплатин, карбоплатин, этопозид. Противоопухолевые препараты вводили однократно в МПД. Средства, обладающие антиоксидантными свойствами (серосодержащий синтетический препарат, экстракт шлемника байкальского), вводили в течение 2 нед, начиная со следующего дня после введения цитостатика. Применение гормональных средств, останавливающих функциониро-вание яичников (логест, бусерелин), предшествовало цитостатическому воздействию. В предвари-

тельных экспериментах было показано, что используемые средства не снижают лечебных эффектов цитостатических воздействий. Состояние репродуктивной системы крыс-самок изучалось в отдаленные сроки после начала опыта (3, 6 мес). Защитные свойства гормональных корректоров оценивались на серийных срезах по количеству структурнофункциональных элементов яичников. Защитный эффект средств, обладающих антиоксидантными свойствами, проводился по показателям эмбриональной гибели и жизнеспособности потомства.

Результаты. Установлено, что через 6 мес после сочетанного введения цитостатического препарата (этопозид) как с эстроген-гестагенным препаратом (логест), так и с гипоталамическим регулятором функции гипофиза (бусерелином) количество многослойных фолликулов в яичниках превышало таковое у животных, получавших один цитостатик. На фоне введения логеста отмечалось и повышенное число желтых тел. При сочетанном введении крысам-самкам ци-тостатических препаратов (платидиам, карбоплатин) с антиоксидантами эмбриональная смертность и жизнеспособность потомства оставалась на уровне контрольных значений, в то время, как при введении одного цитостатика эти показатели были снижены.

Выводы. Гормональные препараты, останавливающие функционирование яичников, и средства, обладающие антиоксидантны-ми свойствами, могут предотвращать наступление бесплодия у женщин, перенесших цитостатическую химиотерапию.

А.М. Горбунов1, В.А. Ильенко2, О.А. Бочарова2 Структура и значение связанной воды в препарате фитомикс-40

1ИФХЭ РАН, Москва

2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

В настоящее время особое внимание многих биологов, физиологов, медиков и физиков привлечено к биоэнергетическим явлениям, определяющим жизнеобеспечение биологических систем после действия активированной воды (подвергнутой действию электромагнитных полей, графических изображений, различного рода конструкций, растворенных в воде веществ и др.). Ранее было выявлено, что необычные свойства активированной воды начинают проявляться, когда в ней благодаря растворенному углекислому газу и кислороду образуются аква-комплексы, определяющие ее физико-химические свойства. Изучение биологической активности воды, подвергнутой действию внешних факторов, показало, что для нормализации метаболических процессов структура воды должна соответствовать определенным спектральным характеристикам, в частности, наличию в спектре поглощения полос при 1209 и 1217 см *. Целью данной работы явилось изучение структуры связанной воды в препарате фитомикс-40, который по результатам клинико-экспериментальных исследований обладает высокими иммунобиологическими эффектами. Изучение структуры связанной воды в препарате фитомикс-40 методом ИК-Фурье-спектроскопии показало, что в области 1200-1225 см 1 наблюдается появление полосы поглощения при 1217 см 1. На основании вышеизложенного можно предположить, что иммунобиологическая активность фитомикса-40 может быть связана с формированием аква-комплексов и потенцированием эффектов растительных экстрактов, входящих в состав препарата.

О.В. Горюнова1, Г.М. Захарчук2, О.С. Жукова1 Получение дипептидных производных ^рибозида индоло[2,3-а]-пирроло[3,4-с]карбазола -потенциальных противоопухолевых агентов

1ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ЦВТХИМРАР, Москва

Введение. В ряду индоло[2,3-а]карбазолов - соединений широкого спектра биологического действия - класс №гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазолов обладает наиболее выраженной противоопухолевой активностью. Анализ литературных данных, а также результаты, полученные ранее в лаборатории химического синтеза РОНЦ, свидетельствуют о перспективности изучения противоопухолевой активности индолокарбазолов указанной конфигурации, замещенных в гетероцикле остатками аминокислот или пептидов. Целью данной работы явился синтез новых дипептидных производных (1а-е) на примере рибозида индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазола и изучение их цитоток-сической активности.

Материалы и методы. Метиловые эфиры дипептидов были получены исходя из L-, D- и ß-аланина и у-аминомасляной кислоты.

Результаты. Обработкой L-, D- или ß-аланина в метаноле в присутствии тионилхлорида получали эфиры соответствующих аминокислот и конденсировали их методом смешанных ангидридов, используя изобутилхлорформиат, с Вос-Ы-замещенными производными ß-аланина или у-аминомасляной кислоты, полученными действием Вос-азида на аминокислоту. Вос-группу удаляли затем действием HCl в тетрагидрофуране. Пер-О-ацетат Ы12-рибопиранозил-Ы13-метилиндоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазола (ФК) был синтезирован, исходя из оксалата индолина. Индолин гликозилировали D-рибозой. После ацетилирования уксусным ангидридом в пиридине и дегидрирования диоксидом марганца кристаллизованный пер-О-ацетат N-рибозилиндола конденсировали с N-метилиндолилуксусной кислотой и получили ФК, взаимодействие которого с эфирами дипептидов проводили в диметилформамиде с триэтиламином при 130 °С. Дез-ацетилирование действием К2СО3 в метаноле привело к получению соединений (Ia-e). Структуру полученных соединений подтвердили с помощью данных NMR- и LH-MS-спектроскопии. Их цитотоксичность в МТТ-тесте изучили на культуре клеток карциномы яичника человека SKOV3, для рибозида (Id) IC50 составила 0,8x10 5М.

Выводы. Предполагается дальнейший синтез и изучение пептидов N-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазола в качестве потенциальных противоопухолевых агентов.

Е.А. Гуськова, Е.Ю. Златник, Г.И. Закора Применение ронколейкина и реаферона для биотерапии рецидивного и генерализованного рака шейки матки

Научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону

Введение. Лечение рецидивного и генерализованного рака шейки матки (РШМ) является сложной проблемой современной онкологии, поскольку эффективность химиотерапии (ХТ) снижается в связи с развитием химиорезистентности. Известно, что некоторые иммунопрепараты способны ее восстанавливать, что обосновывает их применение в комплексном лечении таких больных. Нашей задачей явилось исследование действия ронколейкина (РЛ) и реаферона (РФ) на культуру клеток РШМ HeLa in vitro, а также эффективности применения этих препаратов в курсе ХТ у больных рецидивным и генерализованным РШМ.

Материалы и методы. Использовали культуральные методы: клетки HeLa выращивали в виде монослоя на покровных стеклах в полной среде; в опытные пробы вносили по 0,1 МЕ/100 мкл РЛ или РФ, в контрольные - равный объем среды. Через 24 ч инкубации при 37 °С в присутствии 5% СО2 состояние культуры оценивали по способности формировать монослой, проценту погибших, неизмененных и дистрофически измененных клеток. В клиническое исследование была включена 31 больная рецидивным и генерализованным РШМ (16 больных основной группы получали РЛ по 10 млн. МЕ на курс, РФ по 9 млн. МЕ и ХТ по схеме САР; 15 больных контрольной группы получали только ХТ).

Результаты. После инкубации с РЛ количество неизмененных клеток HeLa составило 17,5±2,4 %, после инкубации с РФ 24,7±2,5 %, в контроле 63,0±1,55 %. РЛ вызывает гибель 55,7±5,79 % клеток HeLa, РФ - 51,0±3,84 %, в контроле гибель составила 12 %. Отмечено, что РЛ вызывает кариолизис и лизис цитоплазмы клеток, а РФ - преимущественно кариорексис. При инкубации с иммуномодуляторами клетки HeLa теряют способность формировать монослой, угнетается их митотическая активность. Интенсивность отмеченных изменений сравнима с регистрируемой при действии на культуру химиопрепаратами. Клинические наблюдения показали, что в основной группе произошла полная резорбция опухолевых очагов у 4 больных после 3 курсов лечения, частичная регрессия (50-60 %) выявлена у 6 больных, у 3 произошла стабилизация процесса. В контрольной группе полная регрессия не была достигнута ни у одной больной, частичная - отмечена в 5, а стабилизация - в 6 случаях. Прогрессирование процесса произошло у 3 больных из основной и 4 - из контрольной групп. Введение иммунопрепаратов переносилось удовлетворительно, из побочных реакций отмечался только кратковременный субфебрилитет.

Выводы. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют

о возможности повышения клинической эффективности ХТ путем

применения цитокиновых иммуномодуляторов (РЛ и РФ) при рецидивном и генерализованном РШМ.

Н.П. Ермакова, О И. Коняева, Е.Л. Членова,

Н.Ю. Кульбачевская, А.И. Мишин,

А.А. Сергеев]Л.М. Михайлова \

Лечение острых отравлений, вызванных терафталом ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Острые отравления терафталом (ТФ) могут возникнуть в случае передозировки препарата в результате неправильного применения, несоблюдения правил безопасности или повышенной индивидуальной чувствительности, аварии на производстве или неправильного хранения при использовании препарата.

Цель исследования. Лечение острых отравлений, вызванных те-рафталом.

Материалы и методы. Исследования проведены на 500 мышах-самцах гибридах Б1 (СВАхС57В1^). ТФ вводили однократно внутривенно в виде 1% раствора в среднесмертельной дозе (ЛД50), равной 130 мг/кг, и в интервале доз (от 90 до 200 мг/кг). Оценивали влияние антидотов и комплексонов (унитиола, тетацина кальция, тиосульфата натрия, купренила), препаратов активной детоксикации (гемодеза, полиглюкина, реополиг-люкина, лазикса), препаратов симптоматического лечения и их комбинаций (мезатона, строфантина, преднизолона, гепарина, глюконата кальция, дексаметазона, пирацетама, раствора хлорида натрия 0,9%, адреналина, кофеина, димедрола) на «острую» токсичность ТФ. Препараты применяли после ТФ однократно в разных временных интервалах (одновременно, через 15-30 мин, 1 ч, 2 ч) в дозах, адекватных по токсичности высшей разовой дозе человека при рекомендованном пути введения. Критерием оценки совместимости ТФ с препаратами служили данные об изменении «острой» токсичности ТФ (ЛД50), сроков гибели животных, поведенческих реакций, клинической картины интоксикации при его совместном применении с препаратами. Расчет токсических доз произведен методом Кербера.

Результаты. Антидоты и комплексоны, введенные после ТФ, увеличивают его токсичность: ЛД50 ТФ = 140 мг/кг, ЛД50

ТФ+унитиол =110 мг/кг, ЛД50 ТФ+ тетацин кальция = 90 мг/кг, ЛД50 ТФ+купренил = 80 мг/кг, ЛД50 ТФ+ тиосульфат натрия = 98 мг/кг. Препараты активной детоксикации не влияют на токсичность ТФ или снижают ее. ЛД50 ТФ+реополюглюкин = 160 мг/кг, ЛД50 ТФ+гемодез = 130 мг/кг, ЛД50 ТФ+лазикс = 119 мг/кг. Препараты симптоматического лечения (гепарин, глюконат кальция, адреналин, мезатон, эфедрин, кофеин, пирацетам, димедрол, дексамета-зон) не влияют на токсичность ТФ. Совместное применение ТФ с комбинацией мезатон + строфантин + преднизолон увеличивает токсичность ТФ (ЛД50= 91 мг/кг).

Выводы. Специфических методов лечения острых отравлений, вызванных ТФ, не найдено. При отравлении ТФ следует применять препараты симптоматической терапии: гепарин, глюконат кальция, адреналин, мезатон, эфедрин, кофеин, пирацетам, димедрол, декса-метазон.

Л.А. Ефимова1, С.Г. Крылова 1, Ю.С. Хотимченко 2 Некрахмальные полисахариды в комплексной терапии перевиваемых опухолей

1ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск 2Институт биологии моря ДВО РАН, Владивосток

Введение. Пектиновые вещества представляют интерес в качестве потенциального источника новых лекарственных препаратов в связи с наличием широкого спектра фармакологической активности. Известны противоопухолевые свойства пектинов, однако сведений о возможности использования их в качестве средств, повышающих эффективность химиотерапии злокачественных новообразований, нет.

Цель исследования. Изучение влияния низкоэтерифицированного пектина, альгината и пектата кальция на развитие аденокарциномы Эрлиха и карциномы легких Льюис у мышей и эффективность лечения цикло-фосфаном.

Материалы и методы. Аденокарциному Эрлиха (АКЭ) перевивали по 7,5х106 клеток в 0,2 мл физиологического раствора внутрибрюшинно беспородным мышам-самкам. Трансплантацию солидной карциномы легких Льюис (ЬЬС) проводили гомогенатом опухолевой ткани в физио-

логическом растворе по 5х106 опухолевых клеток в 0,1 мл внутримышечно мышам-самкам линии C57BI/6. Пектины вводили внутрижелудочно в дозах 50 и 100 мг/кг мышам с АКЭ ежедневно в течение 7 сут, начиная через 24 ч после перевивки, животным с LLC - в течение 12 сут с 7 сут развития опухоли. Циклофосфан (ЦФ) вводили мышам с АКЭ однократно внутримышечно в дозе 150 мг/кг через 72 ч после перевивки, мышам с LLC - однократно внутрибрюшинно на 13 сут развития опухоли. Вычисляли массу первичного опухолевого узла, количество метастазов на одну мышь, их среднюю площадь, процент торможения роста опухоли, индекс ингибирования метастазирования, частоту метастазирования.

Результаты. Применение циклофосфана приводило к достоверному уменьшению объема опухолевых клеток у мышей с АКЭ в 1,7-2,5 раза по сравнению с таковым у нелеченых животных. Изолированное введение мышам альгината и пектата кальция в дозе 100 мг/кг вызывало ингиби-цию роста опухоли. Сочетанное применение низкоэтерифицированного пектина (100 мг/кг) с цитостатиком повышало эффективность последнего, что выражалось в снижении объема опухолевых клеток в 1,7 раза. На модели LLC низкоэтерифицированный пектин и пектат кальция в дозе 100 мг/кг при изолированном введении тормозили рост первичного опухолевого узла. Совместное применение циклофосфана с пектатом кальция (50 мг/кг) и низкоэтерифицированным пектином (в обеих дозах) приводило к снижению числа животных с метастазами в легких. При введении ЦФ с альгинатом кальция (50 мг/кг) отмечено снижение количества и площади метастатического поражения в 2,3 и 5,8 раза.

А.Н. Жабаева, Х.И. Итжанова, С.М. Адекенов Разработка метода количественного определения арглабина нативного в капсулах

АО «Научно-производственный центр «Фитохимия», Караганда, Казахстан

Арглабин нативный - сесквитерпеновый лактон гвайанового типа, выделенный из эндемичного растения полыни гладкой (Artemisia glabella Kar. et Kir.) и обладающий иммуномодулирующим и противовоспалительным действием, представляет собой порошок от белого до белого с желтоватым оттенком цвета. Результаты фармакологических исследований свидетельствуют, что кислотоустойчивая лекарственная форма оптимальна для перорального введения арглабина нативного.

Нами разработана капсулированная форма препарата арглабин с использованием биологически индифферентных вспомогательных веществ: наполнителей, таких, как лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, позволяющих регулировать объемную плотность и придавать необходимую сыпучесть; скользящие кальция стеарат, тальк, придающие необходимую сыпучесть; дезинтегрант и влагорегулятор аэросил. Опытные партии капсул арглабина нативного проанализировали по показателям качества с применением фармакопейных тестов. Для количественного определения содержания арглабина нативного в капсулах разработали методику на приборе Hewlett Packard Agilent 1100 Series методом ВЭЖХ.

Испытуемый раствор и раствор рабочего стандартного образца арг-лабина попеременно хроматографировали на жидкостном хроматографе с УФ - детектором, получая не менее 5 хроматограмм, в следующих условиях: колонка размером 4,6x150 мм, заполненная Zorbax SB C18 с размером частиц 5 мкм; подвижная фаза: ацетонитрил - вода очищенная (50:50), дегазированная любым удобным способом; скорость подвижной фазы 0,75 мл/мин; детектирование при длине волны 204 нм; температура колонки 20 °С. Для подтверждения достоверности, линейной зависимости, правильности и воспроизводимости методики количественного анализа активного компонента в лекарственной форме нами проведена работа по проверке пригодности хроматографической системы. Она считается пригодной, если выполняются следующие условия: эффективность аналитической колонки, рассчитанная по пику РСО арглабина на хромато-граммах РСО арглабина, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок, а коэффициент асимметрии пика, рассчитанный по пику РСО арглабина на хроматограммах РСО аргла-бина, должен быть не более 2 %.

Таким образом, для стандартизации капсулированной формы арг-лабина нативного разработана методика количественного содержания действующего вещества в капсулах и значение его регламентировано в пределах от 46,25 до 53,75 мг, считая на среднюю массу содержимого капсулы.

Е.А. Жданова, Г.Л. Левит, А.Н. Гришаков, В.П. Краснов Метод определения стереоизомерной чистоты компонентов лизомустина

Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург

Противоопухолевый препарат лизомустин по химическому составу представляет собой смесь изомеров положения нитрозогруппы:

9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-Ь-гомоцитруллин (1) и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-Ь-гомоцитруллин (2). Опытные партии субстанции препарата выпускаются ООО «АКАДЕМФАРМ», лекарственной формы -

ООО «Фирма ГЛЕС».

При нарушении технологических процессов в ходе производства субстанции лизомустина возможны колебания стереоизомерной чистоты входящих в состав препарата нитрозопроизводных 1 и 2, связанные с тем, что исходный (5)-лизин в процессе химических превращений может претерпевать частичную рацемизацию.

Задачей настоящего исследования являлась разработка метода определения стереоизомерной чистоты входящих в состав препарата лизомустин нитрозопроизводных.

Метод анализа энантиомерной чистоты соединений 1 и 2 основан на разложении их смеси в воде при комнатной температуре в течение 5 ч с последующим концентрированием (упариванием в вакууме при комнатной температуре) реакционной массы; отделением основной массы непрореагировавшего продукта от раствора, содержащего лизин; его фталоилированием; этерификацией метанолом и хроматографическим выделением на колонке фракции, обогащенной метиловым эфиром ^^6-дифталоил-лизина. Энантиомеры последнего разделяли методом ВЭЖХ на хиральной неподвижной фазе Chiralcel OD-H, детектирование при 230 нм, элюент - гексан-iPrOH 4:1. Скорость элюирования 1,0 мл/мин. Времена удерживания (R)- и (S)-стереоизомеров составляют tr 32,3 и 37,7 мин соответственно. Определяемый минимум (К)-изомера менее 0,1 %.

Разработанный методом поведен анализ 5 партий субстанции ли-зомустина. Показано, что при соблюдении нормативных параметров технологических процессов рацемизации не происходит.

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦНТП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 г.г.» (Государственный контракт № 02.522.11.2003) и РФФИ (грант № 06-03-08177-офи).

Е.В. Игнатьева, Л.Г. Гатинская, С.Ф. Голубева,

Н.А. Дмитричева, И.В. Ярцева

Стандартизация лиофилизированной липосомаль-ной формы тиосенса

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Тиосенс - комплексное соединение алюминия из класса фенилтиофталоцианинов, полученное в ФГУП «ГНЦ «НИОПИК» и предназначенное для фотодинамической терапии опухолей. В ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН разработана лиофилизированная ли-посомальная лекарственная форма тиосенса (ЛЛФТ-лио).

Цель исследования. Первичная химико-фармацевтическая стандартизация ЛЛФТ-лио.

Результаты. Исследования проводились по критериям: описание, подлинность, средняя масса содержимого флакона, размер липосо-мальных везикул, рН, количественное определение тиосенса. Подлинность препарата подтверждается электронным спектром поглощения, характерным для тиосенса. Средний диаметр везикул и стандартное отклонение их распределения определяли на лазерном корреляционном спектрометре Submicron Particle Sizer NICOMP-380 (США). Величину рН получали потенциометрически, содержание тиосенса во флаконе - методом прямой спектрофотометрии. Наиболее воспроизводимые результаты отмечены при работе с хлороформно-спиртовыми растворами. Определение проводили в максимуме поглощения при 720±4 нм. Установлено, что вспомогательные вещества, входящие в состав ЛЛФТ, не имеют в этой области собственного поглощения, но влияют на положение аналитического максимума в спектре основного вещества. Обычно наблюдается его батохромный сдвиг (до 8 нм) относительно спектра субстанции. В качестве раствора сравнения использовали хлороформно-спиртовый раствор. Относительная ошибка определения не превышает 2,0 %.

Основные показатели качества ЛЛФТ-лио приведены в таблице.

Описание Подлин- ность Сред- няя масса, г рН Раз- мер вези- кул, нм Содержание тиосенса во флаконе, мг

Сухая пористая масса светло- зеленого цвета ЭСП должен иметь максимумы поглощения при 342 нм , 648 нм, 720 нм 0,55- 0,61 1 Г-7 С", in' Не более 300 1,3—1,7

Работа поддержана Правительством г. Москвы.

Е.В. Исаева, С.Н. Корякин, В.А. Ядровская, А.П. Баранов,

С.Е. Ульяненко

Изучение накопления меркаптододекабората, меченного радиоактивным йодом, в опухолевых клетках меланомы В16

ГУ Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск

Задачи исследования. Оценить соотношение между накоплением меркаптододекабората натрия, меченного радиоактивным йодом, в опухолевых клетках (меланома В16) и межклеточном пространстве в зависимости от способа введения борсодержащего соединения (внут-рибрюшинное или внутриопухолевое).

Материалы и методы. Работа выполнена на мышах-самцах линии C57BI/6 массой 20-22 г с имплантированной под кожу бедра меланомой B-16. Для изучения зависимости клеточного и межклеточного накопления 131I-BSH в опухолевой ткани от способа введения соединения, мышам внутрибрюшинно и в опухоль вводили по 0,2 (0,3 МБк) и 0,1 мл (0,15 МБк) меченого соединения соответственно. Через 3; 6 и 12 ч (при внутрибрюшинном введении) и 0,5; 1 и 2 ч (при внутриопухолевом введении) у декапитированных под наркозом животных выделяли опухоль. Затем ее измельчали и трипсинизировали при 37 °С (0,25 % раствор трипсина) при постоянном перемешивании в течение 15 мин. После этого клеточную суспензию центрифугировали 15 мин при 2000 об/мин. Супернатант и осадок отбирали в пробирки для подсчета радиоактивности.

Результаты. Исследование накопления меркаптододекабората, меченного радиоактивным йодом, в опухолевых клетках показало, что через 3 и 6 ч после внутрибрюшинного введения 131I-BSH наблюдается значительно большее накопление соединения в межклеточном пространстве (65,3±1,7 % и 63,0±3,0 %) по сравнению с клеточным содержанием (34,7±1,7 % и 37,0±3,0 %) соответственно. К 12 ч данное соотношение по накоплению соединения становится одинаковым, что свидетельствует о достижении диффузного равновесия между поступлением препарата из межклеточного пространства в опухолевые клетки и обратно. При внутриопухолевом введении 131I-BSH уже через 30 мин наблюдается примерно равное накопление соединения в межклеточном пространстве и опухолевых клетках.

Выводы. При внутриопухолевом введении 131I-BSH соединение быстро поступает в опухолевые клетки и достигается примерно равное соотношение между содержанием соединения в клетках и межклеточном пространстве, что делает данный способ введения перспективным для нейтронозахватной терапии, особенно при ее сочетании с дистанционной нейтронной терапией.

Работа поддержана Советом по грантам Президента РФ № МК-4562.2007.7 и проектом МНТЦ№ 3437.

Е.Н. Карева, Н.Д. Гаспарян, А.Е. Маняхина, О.С. Горенкова Персонализация гормональной противорецидив-ной терапии

гиперпластических процессов эндометрия

РГМУ, МОНИИАГ, Москва

Введение. Гиперпластические процессы эндометрия (ГПЭ) развиваются у 50% женщин позднего репродуктивного и перимено-паузального возраста, при этом рецидивирующая форма ГПЭ служит фоном для развития злокачественных поражений слизистой оболочки матки. Один из стратегических подходов в терапии ГПЭ -применение гестагенов - часто не оправдывает ожиданий в силу

устойчивого мнения о взаимозаменяемости различных прогестинов и отсутствия индивидуального подбора препаратов.

Задача исследования. Выявление маркера эффективности про-тиворецидивной гормональной терапии ГПЭ, что необходимо для персонализации тактики лечения конкретного больного.

Материалы и методы. Были обследованы 89 женщин позднего репродуктивного возраста, которым проводилось трансвагинальное ультразвуковое сканирование (УЗИ) органов малого таза, а затем выскабливание стенок матки под контролем гистероскопии или забор биоптатов эндометрия эндорамом. На основании результатов гистологического исследования пациентки разделены на 3 группы:

1-ю группу (сравнения) составили 24 пациентки с неизмененным эндометрием; во 2-ю (основную) вошли 34 женщины с железистыми полипами эндометрия (ПЭ); 3-я основная группа представлена 31 больной с простой железистой ГЭ. Цитозольную фракцию био-птатов эндометрия выделяли методом дифференциального ультрацентрифугирования (105000g). Определение рецепторов прогестерона (РП) и эстрадиола (РЕ) в цитозоле проводили радиолигандным методом (EORTC) с использованием 3Н-прогестерона или 3Н-эстрадиола («Amersham» GB) в конечных концентрациях 20 и 5 нМ соответственно. Специфическое связывание препаратов с РП оценивали по проценту вытеснения метки тестируемыми гестагенами (дидрогестероном, норэтистерона ацетатом, медроксипрогестерона ацетатом). Все исследования проводили в триплетах. Эффективность терапии оценивалась на основании клинических симптомов и данных УЗИ.

Результаты. При первичном обследовании у 54 % пациенток с ГПЭ в анамнезе были рецидивы заболевания. После противореци-дивной гормонотерапии методом слепой выборки (без учета результатов рецепторного анализа) по стандартным схемам эффективность терапии составила 84,6 %. У 10 женщин (15,4 %) были рецидивы ГПЭ. Им проводился повторный курс противорецидивной терапии с учетом анализа специфического связывания тестируемых гестагенов с РП.. Индивидуальный подбор гестагенотерапии позволил повысить эффективность лечения до 94 %.

Выводы. Маркером прогноза эффективности противореци-дивной гестагенотерапии ГПЭ, необходимым для персонализации тактики лечения, может служить сила специфического связывания синтетического гестагена с РП конкретной пациентки.

С.Ш. Каршиева1, Т.Г. Николаева1, Н.Т. Райхлин1,

Е.М. Трещалина1 , А.Ю. Барышников1, В.Е. Небольсин2 Особенности роста различных моделей меланомы животных и человека при цитодифференцирующей терапии дикарбамином

}ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ОАО «Отечественные лекарства», Москва

Введение. Ранее нами было показано, что Dcr индуцирует диффе-ренцировку в клетках меланомы человека путем интенсификации меланиногенеза. Это стало основанием для изучения противомела-номного действия Dcr на других моделях с использованием методов контроля популяционного состава и морфологических изменений в опухоли.

Цель исследования. Изучить особенности цитодифференцирующего действия Dcr на рост меланомы у животных и человека.

Материалы и методы. Опыты с меланомой В16 проведены на мышах BDFi, опыты с п/к ксенографтами меланомы человека (штаммы Mel6 пигментная, неметастазирующая и Mel7 беспигментная ме-тастсзирующая в легкие) - на мышах-самках Balb/c nude собственного разведения. Dcr изучен в диапазоне разовых доз 0,5-4,5 мг/кг при ежедневном per os введении 5-30-кратными курсами. Лечение начинали на 2-10-е сут. Группы формировали из 10-15 особей, опыты многократно воспроизведены. Об эффективности судили по критериям ТРО %, T/C % или УПЖ %, о дифференцирующем действии - по распределению клеток по фазам клеточного цикла (ДНК-цитометрия), активности меланиногенеза (индекс интенсивности ме-ланиногенеза, ИИМ) и морфологическим изменениям в цитологических мазках (индекс пролиферации, ИП) и гистологических срезах опухоли (световая микроскопия). Различия считали достоверными при p<0,05 (метод Стьюдента).

Результаты. В16. Показано что Dcr достоверно и длительно ингибирует рост опухоли: ТРО=69-93 %, УПЖ=41 % (p<0,05). Воспроизводимый эффект получен при разовой дозе 4,5 мг/кг 15-30-кратным курсом. В опухоли: накопление клеток в G0/G1 фазе (90 % против 82 % в контроле), 2-кратное уменьшение доли пролиферирующих клеток в S- и Gi/M-фазах и увеличение числа клеток с признаками апоптоза и площади некроза. Mel6. Dcr в дозах 1,0—1,5 мг/кг

10-дневным курсом слабо, но достоверно ингибировал рост п/к ксе-нографта: T/C=57 % (p<0,05). В опухоли: достоверно в 14 раз увеличивалось число содержащих меланосомы клеток, в 1,6 раза — число меланосом в клетке, ИИМ=19,0; отмечено достоверное накопление клеток в фазе G0/G1 в течение 48 ч после отмены Dcr, увеличение площади некроза в 3—6 раз и числа клеток с признаками апоптоза до 2—3 % без изменения их митотической активности.

Mel7. Dcr в дозе 4,5 мг/кг 5-дневным курсом слабо, но достоверно ингибировал рост п/к ксенографта: Т/С=51 % (p<0,05). В опухоли: накопление клеток в фазе G0/G1 с уменьшением доли G2/M-клеток, 2-кратное снижение ИП, 2—5-кратное увеличение числа клеток с признаками апоптоза, 1,5—2-кратное увеличение площади некроза с достоверным снижением активности митоза в 1,5—2,5 раз во время лечения и в 4—6 раз после его окончания.

Выводы. Dcr в дозах 1,5—4,5 мг/кг при длительном 5—30-кратном введении проявляет противомеланомный и цитодифференцирующий эффект на моделях животных и человека путем перераспределения клеток из пролиферирующей фракции в стационарную, усиления процесса апоптоза, увеличения зоны некроза и снижения их митотической активности, в том числе при интенсификации меланиногенеза в меланинсинтезирующих клетках.

А.А. Кладиев1, Н.А. Лесная2, В.И. Романенко2,

Е.М. Трещалина2

Новый взгляд на применение проспидина в комбинированной химиотерапии диссеминированной меланомы

1 Биотехнологическая компания «ТНК», Москва 2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Известно, что противоопухолевый препарат проспидин (Pr) отличается от других алкилирующих цитостатиков отсутствием лимитирующей гематологической токсичности. Это открывает широкие возможности для его изучения в комбинированной химиотерапии диссеминированной меланомы с использованием дакарбазина (DTIC) и схемы цисплатин+араноза (DDP+Ar), которые характеризуются высокой гематологической токсичностью.

Цель исследования. Разработка схем комбинированной химиотерапии диссеминированной меланомы с использованием Pr.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на мышах BDF1 с меланомой В16. Все препараты вводили внутрибрюшинно (в/б) одновременно последовательно ежедневно в оптимальных терапевтических дозах при п/к перевивке на 2—4-е дни, при в/м перевивке на 6—8-е дни после трансплантации. Эффективность лечения оценивалась по стандартным показателям ТРО % и УПЖ %. О переносимости судили по состоянию, поведению и картине аутопсии мышей, о гематологической токсичности — по массе селезенки. Значимыми считали различия при p<0,05.

Результаты. Комбинация Pr+DTIC на п/к В16 оказалась достоверно более эффективной, чем монотерапия Pr или DTIC: ТРО=93 % против 56 % и 8 %; УПЖ=120 % против 87 % и 0 % соответственно. Переносимость комбинации удовлетворительная, во всех группах средняя масса селезенки в пределах контроля. Комбинация Pr+DDP+Ar на п/к В16 (2 опыта) оказалась достоверно более эффективной, чем двойная комбинация DDP+Ar: ТРО=96,9—88 % против 42—55 %; УПЖ=77—102 % против 25—60 % соответственно. Переносимость лечения п/к В16 удовлетворительная, но средняя масса селезенки при тройной комбинации была достоверно меньше 86±2 мг против 146±19 мг соответственно. Комбинация Pr+DDP+Ar на развившейся в/м В16 (Vcp=0,4 см3) оказалась достоверно более эффективной, чем двойная комбинация DDP+Ar: ТРО=75 % против 65 %; УПЖ=82 % против 35 % соответственно. Переносимость лечения в/м В16 была удовлетворительной, средняя масса селезенки во всех группах не отличалась от контроля.

Выводы. Разработаны 2 новые схемы комбинированной химиотерапии Pr+DTIC и Pr+DDP+Ar, ориентированные на лечение диссеминированной меланомы. Тройная схема с проспидином может сопровождаться усилением гематотоксичности.

Е.С. Клинцова, Т.Г. Щербатюк Эффективностью озона, 5-фторурацила и доксорубицина

в терапии экспериментальных опухолей

ГОУ ВПО НижГМА Росздрава, Нижний Новгород

Введение. В настоящее время противоопухолевая химиотерапия, наряду с хирургическим вмешательством и лучевой терапией, является одним из важнейших и наиболее динамично развивающихся разделов современной онкологии. Поиск способов повышения ее эффективности с минимальным отрицательным воздействием на нормальные клетки остается актуальным.

Цель исследования. Изучение противоопухолевого эффекта комбинированного введения озона и химиопрепаратов по степени ингибирования роста опухоли и продолжительности жизни животных с гепатомой 27 (Г-27) и гепатомой Зайделя (ГЗ).

Материалы и методы. Эксперименты выполнены на 230 белых нелинейных крысах-самцах массой 200±25 г. Животным с Г-27 и ГЗ инъекции 5-фторурацила (5-ФУ) в дозе 500 мг/м2 в/м общим курсом 10 дней и озонированного физиологического раствора (ОФР) с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси 0,2 мг/л в/б проводили таким образом, что введение озона чередовалось с введением химиопрепарата. Доксоруби-цин (ДР) в дозе 60 мг/м2 и 30 мг/м2 вводили в/в крысам с ГЗ на 12-е сут роста опухоли. Предварительно с 7 сут ежедневно вводили ОФР в/б (концентрация 0,2 мг/л). Озонокислородную смесь получали из медицинского сверхчистого кислорода на озонаторе (А0Т-НСК-01-«С (А-16)», РФЯЦ-ВНИИЭФ, г. Саров). Оценку противоопухолевого эффекта по массе опухоли проводили по окончании опыта после умерщвления животных передозировкой эфирного наркоза, а также по увеличению продолжительности жизни после окончания опыта и гибели всех животных. Статистическая обработка полученных результатов проводились с использованием программы Statistica 6.0.

Результаты. Проведенные исследования показали, что комбинированное введение ОФР и 5-ФУ крысам приводит к увеличению ТРО Г-27 и ГЗ на 22 % и 26 % и УПЖ на 30 % и 27 % соответственно (р<0,5) по сравнению с 5-ФУ. Снижение дозы ДР в 2 раза в комбинации с озоном приводит к увеличению ТРО на 25 %, т.е сохраняется высокий противоопухолевый эффект на уровне комбинации озона и стандартной терапевтической дозы ДР (29%) (р<0,5).

Выводы. Комбинированное введение озона и 5-фторурацила крысам с гепатомой 27 и гепатомой Зайделя тормозит рост перевивных опухолей и увеличивает продолжительность жизни экспериментальных животных; совместное введение озона и доксорубицина позволяет снизить дозу доксорубицина, не ослабляя при этом противоопухолевый эффект.

Е.С. Клинцова, Т.Г. Щербатюк, Д.В. Давыденко Свободнорадикальное окисление липидов в организме крыс с гепатомой Зайдля на фоне введения озона и доксорубицина

ГОУ ВПО НижГМА Росздрава, Нижний Новгород

Введение. Инициация апоптоза опухолевых клеток некоторыми цитостатическими веществами происходит в результате образования свободных радикалов, однако свободнорадикальному повреждению в результате химиотерапевтического воздействия подвергаются и нормальные клетки организма-опухоленосителя.

Цель исследования. Изучить влияние комбинированного введения озонированного физиологического раствора (ОФР) и доксоруби-цина (ДР) на состояние свободнорадикальных процессов в плазме крови крыс с гепатомой Зайделя (ГЗ).

Материалы и методы. Эксперименты выполнены на 60 белых нелинейных крысах-самцах массой 200±25 г. ДР в дозах 60 мг/м2 и 30 мг/м2 вводили в/в крысам с ГЗ на 12-е сут роста опухоли. Предварительно с 7 сут ежедневно в/б вводили ОФР с концентрацией озона в озоно-кислородной смеси 0,2 мг/л. Озонокислородную смесь получали из медицинского сверхчистого кислорода на озонаторе (АОТ-НСК-01-«С (А-16)», РФЯЦ-ВНИИЭФ, г. Саров). Параметры свобод-

норадикальной активности плазмы крови оценивались хемилюми-несцентным методом, молекулярные продукты перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков - спектрофотометрически (HELIOS ESCORT-300C, Thermo Spectronic, USA). Статистическая обработка полученных результатов проводились с использованием программы Statistica 6.0.

Результаты. Подтверждено усиление свободнорадикальной активности на фоне введения ДР (60 мг/м2): повышается максимальная интенсивность хемилюминесцентного свечения (Imax) на 16 %, уровень МДА на18 % по сравнению с контрольными животными. ДР в дозе 30 мг/м2 достоверно не изменяет уровень свободнорадикальных реакций. Комбинированное применение ОФР и ДР в дозах 60 мг/м2 и 30 мг/м2 приводит к нормализации окислительных процессов в плазме крови экспериментальных животных. Происходит снижение максимальной интенсивности хемилюминесцентного свечения (Imax) на 10 %, 9 %, диеновых конъюгатов - на 55 %, 28 % соответственно (р<0,05). Уменьшение дозы ДР в два раза (30 мг/м2) способствует снижению концентрации малонового диальдегида - одного из токсических продуктов перекисного окисления липидов на 30 %, т.е. позволяет уменьшить окислительную нагрузку на здоровые ткани.

Выводы. Таким образом, совместное применение озонированного физиологического раствора и доксорубицина приводит к нормализации показателей свободнорадикальных реакций. Снижение дозы химиопрепарата при совместном применении с озоном позволяет уменьшить повреждающее действие доксорубицина на ткани организма, не затронутые опухолью.

М.Б. Козлова, Е.М. Франциянц, Р.Н. Салатов,

В.В. Курилкина, М.В. Кашубина, О.Н. Кошелева Влияние неоадъювантной аутогемохимиотерапии на статус половых гормонов у больных раком Педжета молочной железы

ФГУ Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Росмедтехнологий, Ростов-на-Дону

Введение. Статус половых гормонов у больных злокачественной патологией молочной железы может быть одним из значимых эндогенных факторов в развитии опухолевой болезни. В связи с этим важно исследование особенностей изменений гормонального гомеостаза в результате противоопухолевой лекарственной терапии.

Цель исследования. Изучение влияния неоадъювантной аутогемохимиотерапии на содержание половых гормонов в крови больных раком Педжета молочной железы.

Материалы и методы. Под наблюдением находились репродуктивные и менопаузальные пациентки, получившие лекарственную терапию по схеме CAP. До начала лечения и через 3-4 нед после его завершения в крови больных радиоиммунным методом с использованием стандартных тест-наборов фирмы «Иммунотех» (Чехия) определяли содержание эстрадиола, прогестерона, пролактина, тестостерона, фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов.

Результаты. На фоне рака Педжета молочной железы ряд исследованных показателей достоверно изменен по сравнению со значениями у здоровых женщин, при этом выявленные нарушения отличаются у менопаузальных и репродуктивных пациенток. При отсутствии репродуктивной функции у больных содержание эстрадиола повышено в 1,6 раза, а прогестерона снижено в 1,5 раза, имеется направленность к полуторакратному увеличению концентрации в крови тестостерона. У пациенток с сохраненной менструальной функцией повышены концентрации в крови фолликулостимулирующего, лютеинизирующего гормонов и тестостерона в обеих фазах цикла и снижено содержание пролактина и прогестерона, наиболее выраженное в1-й фазе. Под влиянием лекарственной терапии у менопаузальных пациенток отмечено дальнейшее снижение уровня прогестерона в среднем в 2,6 раза без достоверных изменений со стороны других исследованных показателей. В отличие от этого у репродуктивных больных наблюдался более широкий спектр нарушений гормонального гомеостаза - повышение концентрации тропных гормонов гипофиза, наиболее выраженное в 1-й фазе цикла, и разнонаправленные изменения в содержании прогестерона, эстрадиола и пролактина, более выраженные во 2-й фазе. Анализ особенностей изменения содержания гормонов у пролеченных больных выявил связь динамики уровня прогестерона со степенью эффективности химиотерапии. Регресс опухоли отмечен у пациенток на фоне его сниженной или неизмененной по сравнению с исходной кон-

центрации, тогда как у больных со стабилизацией процесса содержание гормона в крови после лечения было повышенным.

Выводы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что влияние неоадъювантной аутогемохимиотерапии на статус половых и тропных гормонов у больных раком Педжета молочной железы зависит от состояния репродуктивной функции, а изменения уровня прогестерона в крови после лечения отличаются у больных с разной эффективностью лекарственного воздействия.

О.И. Коняева, Н.Ю. Кульбачевская, Е.Л. Членова,

И.Б. Меркулова, Т.В. Абрамова, Р.И. Якубовская,

А.А. Панкрашов,\Л.М. Михайлова \

Токсичность препарата фталосенс-лио при применении собакам ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В ФГУП ГНЦ «НИОПИК» и МНИОИ им. П.А. Герцена разработан оригинальный лекарственный препарат для фотодинамической терапии злокачественных новообразований -препарат фталосенс-лио, 10 мг.

Цель исследования. Доклиническое изучение общетоксического действия препарата фталосенс-лио (ФС) при многократном применении собакам.

Материалы и методы. Исследования были проведены на собаках породы «английский бигл», самках и самцах. ФС в лиофилизирован-ной лекарственной форме в виде 0,2% раствора (растворитель - 0,9% NaCl) вводили животным внутривенно ежедневно в течение 10 дней в суммарных дозах 100 и 10 мг/кг. Оценивали количественную токсичность ФС и его влияние на функциональное состояние органов и тканей животных (качественная токсичность). Срок наблюдения за животными составлял 60 сут.

Результаты. Определены 2 уровня токсических доз ФС: высокая токсическая (ВТД = МПД)=100 мг/кг и низкая токсическая

(НТД)=10 мг/кг. Установлена хорошая переносимость ФС животными во всех изученных дозах. ФС в ВТД и НТД вызывал увеличение в 1,5 раза уровня альбумина и щелочной фосфатазы в сыворотке крови собак по сравнению с фоновыми показателями. ФС в ВТД и НТД оказывал влияние на периферическую кровь собак, уменьшая в 1,5-2 раза общее число эритроцитов, количество гемоглобина, снижая в 1,5-2 раза гема-токритное число и увеличивая в 1,5-2 раза СОЭ. При введении животным ФС во всех изученных дозах наблюдалось окрашивание мочи, слизистых оболочек и кожи в синие-зеленый цвет. Интенсивность и длительность окраски зависели от величины примененной дозы. ФС во всех изученных дозах вызывал резкое дозозависимое обратимое снижение количества железа в 1,5-10 раз в сыворотке крови животных. ФС вызывал изменения показателей свертывающей системы крови животных: в ВТД - увеличение концентрации фибриногена в 2-6 раз и уровня Д-димера в 2-7 раз, а в НТД - увеличение концентрации фибриногена в 1,5-2 раза и не влиял на уровень Д-димера. Восстановления концентрации фибриногена при применении ФС во всех изученных дозах и уровня Д-димера при применении препарата в ВТД до исходных значений не наблюдалось. ФС в НТД вызывал уменьшение агрегации тромбоцитов в 2 раза, а в ВТД в 2-3 раза по сравнению с исходными данными. При этом число тромбоцитов в периферической крови колебалось в пределах физиологической нормы для собак.

Выводы. Установлено дозозависимое обратимое влияние ФС на периферическую кровь, свертывающую систему крови и электролитный баланс. Препарат не оказывает токсического действия на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы, почек, легких, желудочно-кишечного канала и поджелудочной железы.

С.Н. Корякин, В.А. Ядровская, А.П. Баранов, Е.В. Исаева,

С.Е. Ульяненко

Распределение 131I-BSH в меланоме В16 и окружающих тканях мышей в зависимости от способа введения соединения

ГУ Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск

Задачи исследования. Изучить распределение меркаптододекабората натрия (препарата для нейтронозахватной терапии), меченного радиоактивным йодом (131I-BSH), в опухолевой и окружающих тканях при различных способах введения: 1-кратное и 2-кратное внутриопухолевое, под ложе опухоли.

Материалы и методы. Исследования проводили на мышах-самцах линии C57BI/6 массой 20-22 г с имплантированной под кожу бедра меланомой B-16, которым в опухоль (однократно и двукратно) и под ложе опухоли вводили по 0,1 мл меченого соединения с радиоактивностью ~ 0,15 МБк. Содержание 131I-BSH в опухоли и окружающих тканях (кровь, кожа, мышца) регистрировали через 15 мин, 30 мин, 1 ч и 3 ч после введения соединения по уровню радиоактивности у декапитированных под наркозом животных.

Результаты. Изучение динамики накопления 131I-BSH в меланоме В16 и окружающих тканях при различных способах введения соединения показало, что во всех случаях наблюдается значительное накопление 131I-BSH в опухоли. Наибольшее накопление соединения отмечено через 1 ч после введения, что составляет в процентах от введенного количества на 1 г опухоли: 11,60±1,68 % при 1-кратном, 11,26±0,88 % при 2-кратном внутриопухолевом введении и 10,69±2,54 % при введении под ложе опухоли. Ранее нами при внутрибрюшинном введении получено более низкое накопление 131I-BSH в опухоли. Так максимальное накопление отмечалось через 1-3 ч после введения на уровне 1,14^3,24 %, что в несколько раз ниже, чем при внутриопухолевом введении. Следует отметить, что при исследованных в настоящей работе способах введения меченого соединения наблюдается также более низкое содержание 131I-BSH в окружающих тканях по сравнению с накоплением в опухоли. Соотношения опухоль/окружающие ткани уже через 30 мин после введения у большинства животных выше 3.

Выводы. При внутриопухолевом введении борсодержащего соединения его концентрация в опухолевой ткани и градиент накопления опухоль/окружающие ткани более, чем в 3 раза выше таких же показателей при внутрибрюшинном введении. Данное обстоятельство перспективно для нейтронозахватной терапии. При этом нужно учитывать, что большое значение приобретают исследования места локализации бора-10 (в клетке или в межклеточном пространстве).

Работа поддержана Советом по грантам Президента РФ № МК-4562.2007.7 и проектом МНТЦ№ 3437.

Е.Н. Кособокова, В.С. Косорукое Получение субстанции белка рекомбинантного интерферона альфа2б на основе технологии слитных белков

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Последние 20 лет интенсивно изучается роль интерферонов (ИФН) в лечении различных онкологических заболеваний. В прошлом ИФН занимали ведущее место в терапии волосатоклеточного лейкоза и, как было показано, эффективны против некоторых лимфом при комбинировании с химиотерапией. С появлением нового агента (2-хлородиоксиденозина) роль ИФН-а в лечении этих заболеваний сильно снизилась. Но в ряде случаев ИФН остается основным препаратом, используемым как в монотерапии, так и в комплексе с другими агентами. Прежде всего это хронический миелолейкоз, Т-клеточная лимфома кожи, множественная миелома, злокачественная меланома и рак почки.

Противоопухолевый эффект интерферонов связан с их способностью замедлять или подавлять рост клеток в культуре и активировать противоопухолевые механизмы иммунной системы. Все противоопухолевые эффекты интерферонов делятся на прямые и непрямые. Прямые заключаются в непосредственном действии на опухолевые клетки, их рост и дифференцировку. Непрямые проявляются в усилении способности иммунокомпетентных клеток обнаруживать и уничтожать атипичные клетки организма.

В настоящее время в онкологической практике используются ин-трон-А, роферон-А, реаферон, ферон, гаммаферон, берофор, вэлифе-рон, ребир и эгиферон. Все они высокоочищенные препараты, на производство которых требуются большие затраты. В результате многим больным интерферонотерапия недоступна.

Нашей целью стала разработка метода получения высокоочи-щенного препарата интерферона-а2Ь, позволяющего упростить и, главное, удешевить производство белковой субстанции. Для решения этой проблемы мы использовали технологию слитных белков, основанную на том, что искусственно добавленные участки белко-

вой последовательности обладают сильным аффинным сродством к определенному сорбенту, что делает возможным использовать высокоспецифичную аффинную хроматографию для выделения целевого белка. В качестве продуцента для получения рекомбинантного белка использовали бактериальную культуру клеток E. coli. Мы создали ряд генетических конструкций, модифицированных для оптимизации бактериальной системы экспрессии и несущих аффинный домен (HIS6). Экспрессирующийся в цитоплазму бактериальной клетки белок формировал тельца включения, что значительно упрощало процесс первичной очистки. Для удаления аффинного участка после очистки белок обрабатывали специфической проте-инкиназой человека. Такой подход позволил совместить несколько этапов очистки и рефолдинга в одном этапе технологического процесса, что сокращает время и затраты на очистку, а также снижает потери белка. Также нашей группой было проведено сравнение выхода белка ИФН в различных штаммах E. Coli с целью повышения выхода продукта, в результате чего были отобраны штаммы серии BL21 и BLR.

К.В. Костин, Е.В. Игнатьева, О.Л. Орлова, М.А. Кортава, Д.В. Соколова,

М.А. Рубцова, Н.Ф. Купенкова, Н.А. Оборотова Оценка эффективности включения лизомустина в липосомы ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм в НИИ ЭДиТО ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН предложена липосомаль-ная лекарственная форма лизомустина для внутривенного введения. Одним из основных критериев, показывающим оптимальность технологии получения липосомального лизомустина, является процент включения препарата в липосомы.

Цель исследования. Оценить эффективность включения лизому-стина в липосомальную дисперсию.

Материалы и методы. Субстанция лизомустина (ООО «АКАДЕМФАРМ»), липосомальная дисперсия лизомустина, полученная в лаборатории разработки лекарственных форм, сорбент Sephadex G-50 «Sigma-Aldrich». Все вспомогательные вещества соответствуют нормативной документации.

Для очистки липосомальной дисперсии от невключенного в липосомы лизомустина использовали метод колоночной хроматографии (гель-фильтрация) на колонке С-16 «GE Healthcare» с использованием геля-сорбента Sephadex G-50.

Методика. Хроматографическую колонку набивали кашицей сорбента, уравновешивали сорбент, путем пропускания деионизированной воды через колонку. Затем на колонку наносили 1 мл липосомальной дисперсии лизомустина, равномерно распределяя препарат по всей поверхности сорбента. В качестве элюента использовали деионизированную воду. В процессе работы контролировали скорость прохождения разделяемых объектов (0,5 мл/мин) с помощью насосной системы Liposomat.

По мере прохождения препарата через колонку происходит разделение липосомальной формы от невключенного лизомустина.

Контроль разделения фракций осуществляли с помощью проточного спектрофотометра Uvis-920. Для оценки количественного содержания включенного в везикулы лизомустина после очистки дисперсии липосом от невключенного препарата применили методику спектрофотометрии. В электронном спектре поглощения спиртового раствора лизомустина наблюдается интенсивная полоса поглощения с максимумом 230±2 нм.

Результаты. После прохождения липосомальной дисперсии лизомустина через колонку получали две фракции: I фракция -липосомальная дисперсия, мутный непрозрачный раствор; II фракция - свободный лизомустин, прозрачный раствор. Данный процесс так же фиксировался самописцем в виде спектров, которые отображают 2 фракции высвобождения исследуемых объектов в виде 2 пиков.

Выводы. Таким образом, с помощью метода гель-фильтрации удалось оценить эффективность включения лизомустина в липосомы. Количественное содержание лизомустина в липосомах составило 8192 %. Данный метод позволяет получить точные и воспроизводимые результаты.

Б.А. Крапивкин1, О.А. Бочарова2, О.П. Шейченко3, Е.В. Уютова3, О.Н. Толкачев3, Р.В. Карпова2,

Е.В.Бочаров4, В.А.Быков3

Анализ летучих соединений комплексного фитоадаптогена фитомикс-40 методом хромато-масс-спектрометрии

1ФГУВсероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, Москва 2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

3ГУ Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений, Москва 4ГУ НИИ общей патологии и патофизиологии, Москва

Стандартизация и определение подлинности комплексного фитоадаптогена фитомикса-40 (ФМ-40) представляют определенные трудности ввиду многокомпонентности его состава. В предыдущих исследованиях проведен аналитический контроль ФМ-40 с использованием ЯМР- и УФ- спектрометрии. Целью настоящей работы явилось определение химического состава летучих соединений (эфирных масел) фитоадаптогена методом хромато-масс-спектрометрии (ХМС) и выявление возможности применения данного метода для стандартизации ФМ-40.

Используя современную комбинированную систему ХМС в сочетании с автоматической обработкой данных, были проанализированы водно-спиртовой экстракт ФМ-40 (образец А) и продукт его экстракции метил-трет-бутиловым эфиром (образец Б). Анализ проводили на хромато-масс-спектрометре Saturn 2000 (Varian).

Согласно литературным данным эфирные масла содержатся в18 растениях, входящих в состав препарата. На хроматограмме образца А обнаружен 51 пик, 34 из которых были идентифицированы по библиотеке масс-спектров NIST 98 в составе программного обеспечения Saturn WS (Varian). Полученные экспериментальные данные сопоставляли с литературными относительно набора летучих веществ в составе отдельных растений. На хроматограмме образца Б обнаружено 85 пиков, 57 из которых были идентифицированы с известными природными соединениями.

Таким образом методом ХМС в препарате ФМ-40 выявлено и идентифицировано 60 соединений, причем их количество в определенной степени обусловлено методикой приготовления образцов для анализа (А и Б). В связи с этим рекомендуется использовать обе методики при определении летучих веществ. Метод ХМС перспективен для определения состава летучих компонентов комплексного фитоа-даптогена и может быть использован для установления подлинности и стандартизации препарата.

Ю.В. Красоткина1, Г.А. Посыпанова2, Н.Н. Соколов1 Разработка лекарственного препарата бактериальной аспарагиназы для химиотерапии лейкозов

1ГУ НИИ Биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича, РАМН, Москва 2НИИ Молекулярной медицины, ММА им. И.М. Сеченова, Москва

Введение. Острый лимфоластый лейкоз (ОЛЛ) - самое частое онкологическое заболевание в педиатрии. На его долю приходится более 30 % всех опухолей у детей. Ежегодно в России регистрируют до 4000 новых случаев этого заболевания. Одним из основных и незаменимых лекарственных препаратов при лечении лейкоза является ас-парагиназа штамма E.coli, которая вот уже более 30 лет применяется в мировой клинической практике. Однако современные протоколы химиотерапии ОЛЛ выдвигают новые требования к аспарагиназе, прежде всего подразумевая низкую токсичность нового препарата для организма человека. Поэтому поиск новых терапевтически эффективных аспарагиназ и разработка лекарственных препаратов на их основе - актуальная задача биомедицины.

Материалы и методы. Нами была идентифицирована новая ас-парагиназа из штамма Helicobacter pylori (HpA) путем поиска в основных современных базах данных нуклеотидных и белковых последовательностей. Фрагмент геномной ДНК, кодирующий предшественник HpA, был амплифицирован методом полимеразно-цепной реакции и клонирован в вектор для экспрессии HpA в клетках E.coli. Также нами была разработана простая и эффективная процедура очистки рекомбинантной аспарагиназы HpA, которая обеспечивает до 80% выхода гомогенного активного фермента.

В результате кинетических исследований HpA было установлено, что при физиологических условиях скорость гидролиза аспарагина составляет 100 МЕ/мг. Соответствующие равновесные константы реакции kcat и Км оказались равными 57 s 1 и 25 мкМ соответственно. Отсутствие у HpA глутаминазной активности определило уникальность данного фермента среди известных аспарагиназ. Это позволяет прогнозировать низкую токсичность HpA для организма человека, поскольку именно снижение уровня глутамина в крови и тканевых жидкостях является основной причиной тяжелых побочных эффектов аспарагиназной терапии.

Результаты. Исследования цитотоксической активности HpA показали, что фермент эффективно ингибирует рост клеток лейкоза человека. Антипролиферативная активность HpA имеет выраженную концентрационную зависимость. Наиболее чувствительными оказались клетки острого лимфобластного лейкоза линий Jurkat. Через 72 ч инкубации с 0,9 МЕ/мл HpA выживаемость не превышала 51% по сравнению с контролем. Аналогичные данные были получены для клеток ОЛЛ линии MOLT-4 (IC50= 1,5 МЕ/мл). Аспара-гиназа HpA также эффективно ингибировала пролиферацию клеток лимфомы Беркита Raji (IC50= 0,7 МЕ/мл). Эти результаты находятся в хорошем соответствии с литературными данными относительно цитотоксичности известных бактериальных аспарагиназ. Измеренные нами значения IC50 для аспарагиназы HpA сравнимы с соответствующими величинами для терапевтической аспарагиназы Escherichia coli. Кроме того, мы показали, что аспарагиназа HpA индуцирует в лейкозных клетках явно выраженные морфологические признаки апоптоза, такие, как конденсация хроматина, фрагментация ядра, формирование апоптотических телец.

Выводы. Полученные результаты позволяют прогнозировать высокую перспективность аспарагиназы Helicobacter pylori в качестве лекарственного препарата для химиотерапии лейкозов.

Н.Ю. Кульбачевская, О.И. Коняева, Е.Л. Членова,

Н.П. Ермакова, И.Б. Меркулова, Т.В. Абрамова,

\Л.М. Михайлова~~\

Безопасность комбинированного применения доксорубицина с цисплатином и терафталом

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Доклиническое изучение безопасности комбинированного применения доксорубицина (Dox) с цисплатином (DDP) и терафталом (ТФ) на мышах и крысах.

Материалы и методы. Исследования проведены на 200 мышах-самцах гибридах Fi (CBA x C57BI/6J) массой 20-25 г и 60 неинбред-ных крысах-самцах массой до 250 г. Препараты применяли по следующей схеме: Dox (10,0; ЭБЕВЕ Фарма; Австрия) 1-кратно внутривенно в диапазоне доз мышам от 5 до 20 мг/кг; крысам - от 5 до 15 мг/кг + одновременно последовательно DDP (цисплатин 50,0 ЭБЕВЕ Фарма; Австрия) 1-кратно внутривенно в диапазоне доз: мышам от 4 до 16 мг/кг; крысам от 4 до 12 мг/кг + через 1 ч - ТФ внутривенно однократно в эффективных терапевтических дозах: 50 мг/кг (мыши) и

5 и 10 мг/кг (крысы). Критериями оценки лекарственного взаимодействия DDP, Dox и ТФ стали изменения параметров «острой» токсичности: количества и сроков гибели животных, клинической картины интоксикации и поведенческих реакций, а также патологоанатомические изменения павших и умерщвленных в конце экспериментов животных (аутопсия). Расчет токсических доз произведен методом Литчфилда и Уилкоксона и методом Кербера.

Результаты. Проведенные исследования на мышах показали отсутствие токсического взаимодействия DDP, Dox и ТФ по критерию количественной токсичности: DDP - LD50=13,5 (12,8^ 14,2),

«DDP+Dox+ТФ» - LD50 =14,6 (12,3+16,9), Dox - LD50=10,5 (7,6+14,5), «Dox+DDP+ТФ» - LD50 =11,0 (8,7+13,9). Полученные результаты на крысах показали усиление токсичности комбинации «Dox+DDP+ТФ(10 мг/кг)» - LD50 =5,0 мг/кг (DDP - LD50=9,0 мг/кг, Dox - LD50=9,6 мг/кг). В комбинации «Dox+DDP+ТФ(5 мг/кг)» не отмечено усиления токсичности - LD50 = 8,4 мг/кг. При применении «Dox+DDP+ТФ» не отмечено изменений клинической картины интоксикации и поведенческих реакций у животных, характерных для препаратов, входящих в комбинацию. При сравнительном исследовании результатов аутопсии крыс, получавших комбинацию «Dox+DDP+ТФ» в диапазоне высоких токсических и летальных доз, обнаруживались более выраженные макроско-

пические изменения в сердце, почках, селезенке, чем при применении DDP или Dox в отдельности.

Выводы. ТФ не влияет на токсическое действие комбинации «Dox + DDP» как по количественным показателям токсичности, так и по результатам сравнительного патоморфологического исследования повреждающего действия указанных цитостатиков на органы и ткани животных.

Н.Ю. Кульбачевская, О.И. Коняева, Е.Л. Членова,

Н.П. Ермакова,|Л.М. Михайлова\

Безопасность комбинированного применения да-карбазина с цисплатином и терафталом

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Доклиническое изучение безопасности комбинированного применения дакарбазина (Dtic) с цисплатином (DDP) и терафталом (ТФ) на мышах.

Материалы и методы. Исследования проведены на 200 мышах-самцах гибридах Fi (CBA x C57BI/6J) массой 20-25 г. Препараты применяли по следующим схемам: 1) DDP (цисплатин 50,0 ЭБЕВЕ Фарма; Австрия) 1-кратно, внутривенно в диапазоне доз: от 4 до 16 мг/кг + Dtic (дакарбазин 100; Плева-Лахема, Чешская Республика) 1-кратно, внут-рибрюшинно в терапевтической дозе (ТД) - 200 мг/кг + через 1 ч - ТФ внутривенно однократно в ТД - 50 мг/кг. 2) Dtic - 1-кратно, внутри-брюшинно в интервале доз от 200 до 450 мг/кг + одновременно последовательно DDP 1-кратно, внутривенно в ТД - 4 мг/кг + через 1 ч - ТФ внутривенно, 1-кратно в ТД - 50 мг/кг. Критериями оценки лекарственного взаимодействия цитостатиков и ТФ стали изменения параметров «острой» токсичности: количества и сроков гибели животных, клинической картины интоксикации и поведенческих реакций. Расчет токсических доз произведен методом Литчфилда и Уилкоксона.

Результаты. Выявлено лекарственное взаимодействие Dtic с DDP и ТФ. При изучении 1-й схемы применения препаратов установлено, что совместное применение Dtic с ТФ усиливает токсичность DDP в 2 раза в комбинации «Dtic + DDP + ТФ». При исследовании 2-й схемы применения препаратов выявлено, что расчетные токсические дозы одного Dtic и в комбинации «Dtic + DDP + ТФ» практически одинаковы, то есть DDP не оказывает влияния на токсическое действие Dtic (см. таблицу).________________________________________________

Препараты ЛД10 (МПД) ЛД16 ДЦ50 ЛД84

DDP 11,3 (10,7+11,9) 11,8 13,5 (12,8+14,2) 15,5

Dtic (200 мг/кг) DDP ТФ (50 мг/кг) 6,2 (5,3+7,2) 6,6 7,8 (6,7+9,0) 9,5

Dtic 300 (277+324) 310 340 (315+367) 380

Dtic DDP (4 мг/кг) ТФ (50 мг/кг) 240(190+302) 270 310 (246+391) 360

Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости снижения ТД Dtic для мышей в указанной комбинации (до 100 мг/кг). Дальнейшее изучение безопасности комбинации «Dtic + DDP + ТФ» целесообразно только в случае химиотерапевтической эффективности названной комбинации препаратов при коррекции дозы Dtic.

А.В. Кучумова, Н.Н. Соколов, Ю.В. Красоткина Модификация рекомбинантной аспарагиназы pectobacterium atrocepticum полиэтиленгликолем

НИИ Биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, Москва Бактериальная аспарагиназа Pectobacterium antocepticum (PaA) является перспективным лекарственным препаратом для лечения различных видов лейкозов. Известно, что химическая модификация лекарственных терапевтических ферментов соединениями полиэти-ленгликоля молекулярной массой от 2 до 100 kDA позволяет снизить антигенность лекарственного препарата, увеличить его клиренс в крови, а также повысить стабильность при хранении. Цель работы -химическая модификация рекомбинантной аспарагиназы PaA моно-метиловым эфиром полиэтиленгликоль-п-нитрофенилкарбоната (mPEG-NPh). Модифицирующий реагент был синтезирован путем

присоединения монометилового эфира полиэтиленгликоля с n-нитрофенилхлорформатом в присутствии триэтиленамина. Для пе-гилирования PaA 10 мг лиофилизированного препарата аспарагина-зы растворяли в 20 мл 100 мМ боратного буфера, рН 9,5 и смешивали в различном молярном соотношении с mPEG-NPh. Реакционную смесь инкубировали в течение 24 ч при 25 °С и непрерывом перемешивании. После этого mPEG-PaA отделяли от низкомолекулярных компонентов, включая mPEG-NPh, с помощью гель-фильтрации на колонках PD10 с Sephadex G-25. Оптимизация условий реакции пегилирования позволила добиться высокого уровня модификации (более 10 молекул мПЭГ 5000 на 1 молекулу аспара-гиназы) и сохранения специфической активности фермента до 75 % от исходной. В настоящее время проводятся исследования цитоток-сической активности mPEG-PaA.

К.А. Лопатина1, Е.Н. Амосова1, П.С. Зориков2 Противоопухолевые свойства экстракта мака лесного весеннего (Hylomecon vernalis Maxim.) в эксперименте

1ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск 2Горнотаежная станция им. В.Л. Комарова ДВО РАН, Владивосток

Введение. Мак лесной весенний Hylomecon vernalis Maxim. (сем. Papaveraceae) содержит широкий набор алкалоидов: берберин, копто-зин, хелеритрин, хелиутин, хелирубин, сангвинарин, аллокриптопин, хелидонин, протопин, стилопин, тетрагидроберберин. Их количество колеблется от 0,06 % до 0,35 % в разных частях растения. Извлечения и настои из этого растения обладают гипотензивным, спазмолитическим, противовоспалительным, седативным действием. О противоопухолевых свойствах мака весеннего сведений нет.

Цель исследования. Изучение противоопухолевых свойств экстракта алкалоидсодержащего мака лесного весеннего, а также возможности использования его в качестве средства, повышающего эффективность химиотерапии циклофосфаном в эксперименте.

Материалы и методы. Карциному легких Льюис (LLC) и меланому В16 (В 16) мышам C57BI/6 перевивали внутримышечно по 4-

6х10б клеток в 0,1 мл физраствора. Аденокарциному Эрлиха (АКЭ) перевивали асцитической жидкостью по 7,5 х106 опухолевых клеток в 0,2 мл физраствора внутрибрюшинно мышам линии Balb/c. На модели LLC введения экстракта мака лесного весеннего в дозе 5 мл/кг начинали со 2-х или 6-х сут после трансплантации опухоли, меланому В16 начинали лечить с 7-х сут после перевивки и продолжали до конца эксперимента. Мыши с аденокарциномой Эрлиха получали экстракт в течение 8 сут, начиная со 2-х сут эксперимента. Циклофосфан (ЦФ) вводили мышам однократно внутрибрюшинно в дозе 125 мг/кг на 9-е сут (LLC), на 15-е сут (В16) и в дозе 100 мг/кг на 4-е сут (АКЭ) после перевивки. Вычисляли процент торможения роста опухоли, частоту и индекс ингибирования метастазирования, количество, площадь либо массу метастазов.

Результаты. Показано, что экстракт мака лесного весеннего, вводимый с 6-х сут после перевивки, тормозил рост LLC на 20 %; вводимый со 2-х сут - снижал площадь метастазов в 2,1 раза относительно контроля. Экстракт мака приводил к уменьшению объема опухолевых клеток в асците АКЭ в 2,8 раза по сравнению с контролем. Экстракт оказывал антиметастатическое действие у мышей с В-16: частота метастазирования снижалась до 20 % относительно 67 % в контроле; количество метастазов уменьшалось в 2,6 раза относительно нелеченных животных. Кроме того, извлечение из мака лесного повышало эффективность лечения циклофосфаном аденокарциномы Эрлиха.

Выводы. По-видимому, обнаруженные эффекты связаны с наличием в растительном сырье алкалоидов.

И.Б. Меркулова, Т.В. Абрамова, О.И. Коняева,

Н.Ю. Кульбачевская,\Л.М. Михайлова |

Доклиническое патоморфологическое исследование фталосенса-лио

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В лаборатории фармакологии и токсикологии НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН изучалась хроническая токсичность на собаках aталосенса-лио, 10 мг - оригинального лекарственного препарата для фотодинамической терапии злокачественных

новообразований, разработанного в ФГУП ГНЦ «НИОПИК» и МНИОИ им. П.А. Герцена.

Цель исследования. Оценка патоморфологических особенностей внутренних органов собак при многократном внутривенном применении фталосенса-лио (ФС) в опыте по изучению хронической токсичности в соответствии с требованиями ФК МЗ РФ.

Материалы и методы. В опыте использовали собак породы «английский бигл». Усыпление собак проводили на 1-е и 60-е сут после 10 ежедневных внутривенных введений ФС в лиофилизированной лекарственной форме в виде 0,2% раствора в 0,9% растворе хлористого натрия в суммарных дозах 100 мг/кг (ВТД=МПД) и 10 мг/кг (НТД). На аутопсии проводили макроскопическое исследование внутренних органов; фрагменты органов фиксировали в 10% формалине, подвергали гистологической обработке с заливкой материала в парафин и окраской срезов гематоксилином и эозином.

Результаты. Через 1 сут после прекращения введений ФС в ВТД и НТД отмечено выраженное диффузное окрашивание покровных тканей и внутренних органов в зеленый цвет. Частицы краски зеленого цвета (ФС) обнаруживались в макрофагах РЭС печени, лимфатических узлов, селезенки и стромы других органов. В почках и печени частицы краски обнаруживались и в паренхиматозных элементах. Включение ФС в клетки зависело от дозы. В почках и печени обнаруживались умеренные дистрофические и деструктивные изменения, коррелировавшие с величиной дозы ФС. В селезенке регулярно обнаруживались сидерофаги. В легких и тонком кишечнике фоновые воспалительные изменения усиливались после применения ФС в ВТД. ФС не вызывал патологических изменений в других органах. К 60-м сут сохранялось лишь окрашивание внутренних органов у собак, получивших ФС в ВТД. При этом отмечено повышенное по сравнению с 1-ми сут содержание клеток РЭС с частицами ФС в печени, лимфатических узлах, селезенке, строме почек, надпочечников, а также содержание частиц ФС, расположенных экстрацеллюлярно; в печени и почках сохранялись дистрофические и деструктивные изменения; в селезенке повышено число сидерофагов. После применения ФС в НТД частицы ФС обнаруживались лишь в печени - в клетках РЭС или экстрацеллюлярно. В печени и почках отмечены менее выраженные дистрофические изменения паренхиматозных элементов и признаки восстановления. В селезенке обнаруживались сидерофаги.

Выводы. Патоморфологическое исследование показало, что применение ФС в ВТД и НТД у собак вызывало дозозависимое накопление ФС в клетках РЭС и повреждение паренхиматозных элементов печени и почек, обратимость которых зависела от дозы ФС и сроков его воздействия.

Т.А. Митина, А.К. Голенков Сравнение эффективности терапии велкейдом в сочетании с сарколизином и монотерапии велкейдом у больных с резистентной и рецидивирующей множественной миеломой МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва

Цель исследования. Сравнение эффективности применения монотерапии велкейдом и велкейдом в сочетании с сарколизином у больных резистентной и рецидивирующей множественной миеломой.

Материалы и методы. Под нашим наблюдением находились 43 пациента с резистентной и рецидивирующей множественной миело-мой 3 ст. 23 пациента получали лечение велкейдом в режиме монотерапии - 6 циклов, по схеме велкейд 1,3 мг/м2 в/в струйно в 1-й, 4-й, 8й и 11-й дни с межкурсовым интервалом 10 дней.. Другая группа - 20 человек получала сочетанное лечение велкейдом и сарколизин в режиме велкейд 1,3 мг/м2 в/в струйно в 1-й, 4-й, 8-й и 11-й дни + сарко-лизин 10мг/м2 в/в капельно во 2-й день, причем в этой группе больных предлеченность велкейдом имелась у15 % пациентов. Иммуно-химическое исследование Р^ сыворотки и мочи проводили всем больным, за исключением иммунофиксации, которую определяли у отдельных больных для подтверждения полной ремиссии. Для оценки противоопухолевого действия использовали критерии ЕВМТ.

Результаты. После 6 циклов монотерапии велкейдом 23 больным ПО был зарегистрирован у 2 больных (8,7 %), ЧО у 11 (47,8 %), МО у

4 (17,4 %), НО у 6 (26,1 %), в том числе у 8,7 % больных прогрессирование заболевания. После 6 циклов лечения монотерапии велкей-

дом объективный ответ (ПО+ЧО) - 56,5 %. Во 2-й группе больных, получавших сочетанное лечение, ПО был получен у 15 % (3), ЧО - у 20 % (4), МО у 10 % (2), НО у 50 % (10), прогрессия отмечена в 1 наблюдении (5 %). После 6 циклов сочетанной терапии велкейдом и сарколизином объективный ответ составил 35 %.

Выводы. Таким образом, применение комбинации велкейда с сарко-лизином позволило получить большее число полных ответов (15 %), при этом отмечено уменьшение процента прогрессии заболевания.

А.В. Новик, Р.В. Орлова, И.А. Балдуева, С.А. Проценко, Т.Д. Михайличенко, А.И. Семенова, Г.М. Телетаева,

H.В. Тюкавина, В.М. Моисеенко Оценка факторов прогноза токсичности монотерапии рекомбинантным интерлейкином-2 (ИЛ-2) больных диссеминированной меланомой кожи

ФГУ НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий, Санкт-Петербург

Введение. ИЛ-2 используется у больных диссеминированной меланомой кожи и распространенным раком почки в низких и высоких дозах. Повышение дозы достоверно повышает эффективность и токсичность терапии. Целью нашего исследования была разработка критериев прогнозирования токсичности лечения.

Материалы и методы. У 106 больных (74 - меланома кожи, 31 -рак почки) проводилась монотерапия высокими дозами ИЛ-2 (>2 мг/сут, 51 больной) и низкими (<2 мг/сут, 55 больных) дозами ИЛ-2. Всего проведено 97 циклов терапии в низких дозах, 133 - в высоких. Оценивалось влияние параметров распространенности опухолевого процесса, пол, группы крови, содержание форменных элементов крови, лейкоцитарная формула, субпопуляций лимфоцитов и функциональные характеристики специфического и неспецифического звена иммунной системы на риск возникновения выраженных (3-4 ст.) осложнений.

Результаты. Метастатическое поражение легких и почек повышало риск развития выраженных сердечно-сосудистых осложнений (относительный риск (RR) 10,3 (95 % ДИ 1,3-81,1) и 1,17 (95 % ДИ

I,003-1,37) соответственно). Метастаитческое поражение кожи и отсутствие аллергических реакций в анамнезе снижало вероятность развития аритмий: RR 0,889 (95 % ДИ 0,792-0,998) и 0,134 (95% ДИ 0,021-0,839) соответственно. В многофакторном анализе при использовании высоких доз ИЛ-2 значимыми оказались площадь опухолевых <2000 мм2 (ОР 0,421; p=0,022), наличие пигмента в опухоли (ОР 0,408; р=0,008) и уровень CD3+ лимфоцитов (ОР 0,002; р=0,049). На основании показателей клинического, биохимического и иммунологического анализов крови можно с чувствительностью 57,1 % и специфичностью 95,7 % (общая точность 92,1%) прогнозировать возникновение сердечно-сосудистых осложнений 3-4-й степени при использовании монотерапии ИЛ-2.

Выводы. Использование доступных клинических и лабораторных параметров позволяет прогнозировать развитие серьезных осложнений терапии ИЛ-2 у больных с точностью до 92,1 %.

А.В. Новик, Р.В. Орлова, И.А. Балдуева, С.А. Проценко,

Т.Д. Михайличенко, А.И. Семенова, Г.М. Телетаева,

Н.В. Тюкавина, В.М. Моисеенко Оценка факторов прогноза эффективности монотерапии рекомбинантным интерлейкином-2 (ИЛ-2) больных диссеминированной меланомой кожи

ФГУ НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий, Санкт-Петербург

Введение. Применение ИЛ-2 в качестве терапии диссеминированной меланомы кожи позволяет достичь объективного ответа у 520 % больных в зависимости от выбранного режима. Рандомизированные исследования продемонстрировали возможность повышения выживаемости у отдельных групп больных, получающих лечение высокими дозами ИЛ-2, что сопровождалось значительным увеличением токсичности лечения. В настоящее время критерии отбора больных для применения этих режимов остаются неясными. Целью нашего исследования было разработка системы прогнозирования эффективности и токсичности ИЛ-2.

Материалы и методы. 48 больным меланомой кожи проводилось лечение с использованием монотерапии высокими дозами ИЛ-2 (>2 мг/сут), у 26 больных - лечение низкими дозами препарата (<2 мг/сут). Оценивались параметры распространенности опухолевого процесса, пол, группы крови, содержание форменных элементов крови, лейкоцитарная формула, субпопуляций лимфоцитов и функциональные характеристики специфического и неспецифического звена иммунной системы. Использовались методы однофакторного, многофакторного и дискриминантного анализа.

Результаты. В многофакторном анализе при использовании высоких доз ИЛ-2 значимыми оказались площадь опухолевых < 2000 мм2 (ОР 0,421; р=0,022), наличие пигмента в опухоли (ОР 0,408; р=0,008) и уровень CD3+ лимфоцитов (ОР 0,002; р=0,049). Данные клинического, биохимического и иммунологического анализов крови позволяли с точностью 81,3% прогнозировать эффект терапии и в 77,1% случаев правильно определить вероятность прогрессирования заболевания при использовании канонической линейной дискриминантной функции. У больных меланомой кожи, получавших низкие дозы ИЛ-2, в многофакторном анализе отмечено значение метастатического поражения костей (ОР 0,166 при его отсутствии; р=0,019), I группы крови (ОР 0,377; р=0,036) и уровня ^ G до лечения (ОР 6,192 при уровне менее 10 г/л; р=0,001) для прогнозирования общей выживаемости больных. Факторов прогноза непосредственного эффекта терапии не выявлено.

Выводы. Прогностические факторы различаются при использовании различных режимов терапии ИЛ-2. На основании лабораторных показателей и характеристик распространенности опухолевого процесса возможно выделить группы больных, получающих наибольшую пользу от использования каждого из режимов терапии.

Е.А. Огнерубова, С.И. Яровая, К.Г. Пузаков, И.А. Зайцева, Е.Ю. Пономарёва, Ю.Н. Потапов а-эпоэтин в лечении анемии у больных с генерализованным онкологическим заболеванием

Областной клинический онкологический диспансер, Воронеж

Задачи исследования. Оценить эффективность использования а-эпоэтина Эпрекс® в лечении анемии у генерализованных онкологических больных при проведении химиотерапии по схемам, включающим цисплатин.

Материалы и методы. В исследование включены 37 пациентов с генерализованным опухолевым процессом. Немелкоклеточный рак лёгкого был у 19 больных, мелкоклеточный рак легкого -у 10, рак желудка - у 8. Локализация вторичных изменений: печень, кости, лимфатические узлы, головной мозг. Средний возраст пациентов составил 58 лет, мужчин - 25, женщин - 12. Объективный статус по шкале ECOG - ВОЗ 0-1 балла был у 12 пациентов, 2 балла - у 17, 3 балла - у 8. Химиотерапия проводилась по схемам на основе цисплатина, включающим также этопозид, так-саны, гемзар, фторурацил (постоянная инфузия). У 12 пациентов да начала лечения наблюдалась анемия 1 балла, у 25 анемия 1-2 балла развилась в процессе лекарственного лечения. Средний уровень гемоглобина (Нв) до начала химиотерапии равнялся 106 г/л, к началу лечения Эпрексом® - 89 г/л. В среднем пациенты получили по 3 курса химиотерапии до начала использования а-эпоэтина. При этом объективный эффект достигнут у 21 человека, стабилизация - у 10, у 6 наблюдалось прогрессирование процесса. Эпрекс® вводили в дозе 10000 МЕ подкожно 3 раза в нед в течение 4 нед, после чего производили оценку эффективности и переносимости препарата. Критерием эффективности служило повышение уровня гемоглобина (Нв) до >120 г/л.

Результаты. На 5-й нед применения Эпрекс® у 23 пациентов (62%) был достигнут «целевой» уровень Нв. У 12 больных ко времени оценки эффекта он был выше 100 г/л. У 2 больных раком желудка наблюдалось прогрессирование анемии, что, вероятно, связано с особенностями данной локализации злокачественного новообразования. При использовании Эпрекса® клинически значимых побочных эффектов в виде гипертонических кризов, тромбофлебитов, болевого синдрома не наблюдалось.

Выводы. Использование а-эпоэтина Эпрекс® достаточно эффективно в лечении платино-индуцированной анемии у онкологических

больных и при этом не сопровождается значимыми побочными эффектами.

Е.Н. Павленко, Ю.Н. Соколов, С.А. Хрусталев, М.Я. Шашкина, И.Ж. Шубина, И.Р. Просалкова,

И.М. Лученко, А.В. Сергеев Фармацевтические и медико-биологические аспекты разработки препарата розолакрит ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Водные экстракты корня солодки (ЭКС) и плодов шиповника (ЭПШ) обладают широким спектром фармакологической активности, в том числе антиканцерогенными, антитоксическими, иммуномодулирующими, противовирусными и другими свойствами. Нами разработан новый препарат розолакрит на основе сухих ЭКС и ЭПШ.

Цель исследования. Разработать технологию производства сухих ЭКС и ЭПШ, обосновать оптимальный состав препарата розолакрит, разработать методы фарманализа и провести сравнительное изучение медико-биологических свойств отдельных компонентов и комплексного препарата.

Материалы и методы. Содержание глицерризиновой кислоты (ГК) в ЭКС и аскорбиновой кислоты (АК) в ЭПШ проверяли специально адаптированным спектрофотометрическим методом. Водные ЭКС и ЭПШ получали при различных температурных и временных режимах экстракции. Высушивание водных экстрактов осуществляли с помощью лиофилизации или на распылительной установке. Выбор режимов экстракции и сушки проводили, контролируя содержание в образцах ГК и АК, а также с учетом иммунотропной активности препаратов. Иммуномодилурующую активность образцов определяли по стандартным методикам на спленоцитах мышей ВАЬВ/с.

Результаты. Разработаны методы фарманализа ГК и АК в фитоэкстрактах на различных технологических этапах и в готовой лекарственной форме препарата. Выбраны оптимальные режимы экстракции КС и ПШ в зависимости от времени экспозиции и температуры экстрагента. Отработаны оптимальные режимы лиофилизации и высушивания на распылительной установке. На основании комплексных исследований установлено наилучшее соотношение ЭКС и ЭПШ в препарате розолакрит: основные фитокомпоненты рекомендуется использовать приблизительно в равных пропорциях. Изучены антимутагенные свойства отдельных экстрактов и комплексного препарата на их основе. Показано, что 2-недельное ежедневное введение рег os мышам ВDFl препарата розолакрит снижало число хромосомных аберраций в клетках костного мозга, индуцированных циклофосфаном, на 2030 % эффективнее по сравнению с отдельными экстрактами. Препарат розолакрит обладал более выраженной иммуномодулирующей активностью по сравнению с отдельными фитоэкстрактами. Ежедневное введение рег os мышам ВАЬВ/с препарата розолак-рит в дозах 10 и 25 мг/кг приводило к 2-3-кратному повышению пролиферативной активности спленоцитов и дополнительной индукции Т-киллеров в смешанной культуре лимфоцитов селезенки аллогенных мышей. Доказано наличие у препарата розолакрит антитоксических и антисупрессивных свойств, что проявлялось в коррекции иммунологических показателей, сниженных под влиянием противоопухелевого цитостатика аранозы.

Выводы. Разработана технология производства препарата розо-лакрит и доказано наличие у него более выраженных антимутаген-ных, иммуномодулирующих и антитоксических свойств по сравнению с ЭКС и ЭПШ.

С.И. Павлова1, А.В. Сергеев2, И.В. Гладков1, И.Г. Козлов1 Антипролиферативные свойства экстракта корня солодки и его компонентов

1ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет Росздрава, Москва

2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. К настоящему времени накоплены экспериментальные факты, подтверждающие способность биологически активных веществ растительного происхождения подавлять пролиферацию опухолевых клеток в различных моделях неоплазий.

Цель исследования. Изучение антипролиферативной активности экстракта корня солодки (ЭКС) и его основного тритерпенового гли-козида глицирризиновой кислоты (ГК) по отношению к опухолевой линии Р388.

Материалы и методы. Для оценки пролиферации клетки опухолевой линии Р388 засевали в лунки 96-луночного планшета и культивировали 24 ч в полной среде. После этого 40 мкл среды в лунках заменяли 20 мкл среды, содержащей 10 мкКи/мл 3Н-тимидина + 20 мкл тестируемого агента. Через 24 ч пролиферацию оценивали путем измерения радиоактивности включенного в ДНК 3Н-тимидина, результат выражали в процентах к контролю. Дополнительно оценивали «ранний» и «поздний» апоптоз методом проточной цитометрии после окраски флюоресцентными красителями.

Результаты. В условиях культуры ЭКС дозозависимо подавлял пролиферацию опухолевых клеток линии Р388 в диапазоне концентраций 2,0-200,0 мкг/мл (в пересчете на глицирризиновую кислоту), вплоть до полного подавления в максимальной концентрации на 95 % (р<0,05). ГК даже в соответствующих максимальных концентрациях не обладала антипролиферативным эффектом. Через 24 ч после внесения ЭКС в культуру опухолевых клеток в концентрации, максимально подавляющей пролиферацию, уровень «раннего» апоптоза составил 36,0±8,2 %, что более чем в 2 раза (р<0,05) был выше контрольных значений (16,0±4,1 %). Изучение «позднего» апоптоза показало, что при добавлении ЭКС в культуру почти половина клеток лимфолейкоза Р388 (47,43±8,2 %) находилась в апоптозе. Этот показатель был достоверно (р<0,05) выше контрольных значений (11,51±2,2 %). Возрастание апоптоза сопровождалось уменьшением тетра- и диплоидного пиков. Однако при внесении в культуру клеток Р388 эквивалентного количества ГК уровни «раннего» и «позднего» апоптоза не отличались от контрольных значений.

Выводы. Таким образом, выявленные данные позволяют предположить, что антипролиферативный и апоптогенный эффекты ЭКС не опосредуются тритерпеноидом глицирризиновой кислотой.

Н.В. Плявник, Г.А. Серебренникова Положительно заряженные алкильные глицеролипиды с потенциальными противоопухолевыми свойствами МИТХТ им. М.В. Ломоносова, Москва

Введение. В настоящее время все больше внимания уделяется новому типу модифицированных катионных глицеролипидов алкильного типа, что обусловлено их высокой биологической активностью, в частности, многие из них проявляют сильные противоопухолевые свойства. К настоящему моменту установлено, что на антинеопласти-ческую активность алкильных глицеролипидов большое влияние оказывает строение гидрофобного и гидрофильного доменов липидной молекулы. Выполненные нами исследования по синтезу бесфосфор-ных катионных глицеролипидов алкильного типа включали модификацию полярной «головки» путем введения различных короткоцепных заместителей. Полученные соединения позволят не только расширить круг поиска новых противоопухолевых агентов, но и выявить влияние структуры гидрофильного домена на антинеопластические свойства липида.

Материалы и методы. Исходным соединением в синтезе служил гас-1-октадецил-2-этил-3-(5-бромпентаноил)глицерин.

Результаты. Для присоединения к молекуле липида полярного домена проводили алкилирование имидазола и морфолина исходным бромидом. После хроматографической очистки с выходом 85 % были получены нейтральные липиды с полярной «головкой» гетероциклического типа. Кватернизация полученных третичных аминов различными короткоцепными алкилгалогенидами приводила к образованию соответствующих положительно заряженных глицеролипидов. Так действием на вышеуказанные амины ме-тилйодидом в метилэтилкетоне с выходом 70-72 % были получены катионные липиды с метильным заместителем в полярной «головке». Путем взаимодействия липида на основе имидазола с этилбро-мидом в метилэтилкетоне в присутствии №1 был синтезирован глицеролипид с этильным заместителем в катионном домене. Выход данного соединения составил 72 %. Кроме того, кватернизаци-ей 2-бромэтанолом в нитрометане в присутствии нами были

получены положительно заряженные липиды алкильного типа содержащие Р-гидроксиэтильный заместитель (выход 34-36 %).

Выводы. Таким образом, нами были получены катионные липиды, отличающиеся короткоцепными заместителями в полярном домене и обладающие потенциальными противоопухолевыми свойствами. Структура синтезированных соединений была подтверждена данными ^-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии. В настоящее время проводится изучение противоопухолевого эффекта полученных липидов.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований грант № 07-03-00632.

И.Р. Просалкова, М.Я. Шашкина, И.Ж. Шубина,

Е.Н. Павленко, И.М. Лученко, А.В. Сергеев Иммунофармакология природного каротин-токоферолового комплекса

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Плоды шиповника содержат большое количество биологически активных веществ и традиционно являются ценным сырьем для фармацевтической промышленности. Особого внимания заслуживает каротин-токофероловый комплекс (КТК), который в значительной степени обеспечивает антиканцерогенные, антитоксические, иммуномодулирующие и другие свойства плодов шиповника.

Цель исследования. Изучение фармакокинетики, антимутаген-ной и иммунотропной активности масляных экстрактов плодов шиповника (ЭПШ), полученных с помощью различных технологий.

Материалы и методы. Масляные ЭПШ получены традиционной диффузионной экстракцией с содержанием суммы каротиноидов (КР) до 200 мг%, с помощью СО2-экстракции (до 650 мг% по КР) и экстракцией хлористым метиленом (до 950 мг% по КР). Определение КР и ретиноидов в плазме крови и ткани печени проводили с помощью ВЭЖХ.

Результаты. Однократное введение per os мышам BALB/с или BDFi ЭПШ в дозе 50 мг/кг (по КР) приводило к резкому повышению уровня КР в плазме крови через 20 мин. с двумя пиками повышенной концентрации через 1 и 2 ч и постепенным снижением уровня КР в последующие 5 ч. Ежедневное введение мышам per os ЭПШ в дозе 10 мг/кг приводило через 2 недели к 2-4-кратному повышению уровня КР и токоферола в плазме крови и резкому повышению содержания КР и ретиноидов (ретинола, ретинилацетата и др.) в ткани печени. Фармакокинетика ЭПШ, полученных по различным технологиям, существенно не отличалась одна от другой. ЭПШ, полученные различными способами, обладали приблизительно одинаковой антимутагенной активностью при 2-недельном ежедневном введении per os мышам BDFi в дозе 10 мг/кг, что сопровождалось 30-40-процентным снижением числа хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, индуцированных циклофосфаном. Ежедневное введение per os мышам BALB/c ЭПШ в дозе 10 мг/кг в течение 4-6 нед приводило к 1,5-2,5-кратному повышению пролиферативной активности спленоцитов, трансформированных поликлональными митогенами или аллоантигенами и дополнительной индукции цитолитических Т-лимфоцитов (Т-киллеров) в смешанной культуре селезенки аллогенных мышей. Стимулирующий эффект сохранялся в течение 1,5-2 нед после прекращения введения препарата.

Выводы. Масляные ЭПШ, полученные по различным технологиям, обладают практически одинаковой антимутагенной и иммуномодулирующей активностью, что позволяет использовать их в равной степени для разработки новых лечебно-профилактических препаратов.

Т.Г. Разина, Е.П. Зуева, Е.Н. Амосова,

С.Г. Крылова, С.В. Корепанов Возможности использования растительных сборов в комплексной терапии злокачественных новообразований ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск

Введение. Основными методами лечения онкологических больных с распространенным опухолевым процессом являются химио- и лучевая терапия. Однако отсутствие избирательности действия, приводящее к токсическому влиянию на активно обновляющиеся клетки

организма, зачастую лимитирует лечение таких пациентов, приводя к снижению качества жизни, инвалидизации и даже смерти. Поэтому актуальным является поиск препаратов, снижающих токсические проявления специфического лечения опухолей и повышающих его эффективность.

Цель исследования. Изучение возможности использования растительных сборов в комплексной терапии злокачественных новообразований.

Материалы и методы. У беспородных линий СВА и С57В1/6 мышей с перевиваемыми аденокарциномой Эрлиха (АКЭ), карциномой легких Льюис (3ЬЬ) и меланомой В16 (В16) проведено определение показателей роста и метастазирования опухолей при использовании циклофосфана (ЦФ) в сочетании с растительными сборами, разработанными научно-практическим объединением «Алтайский краевой фитоцентр»: «Алфит-1 - утренний» (родиола, чага, солодка, крапива), «Алфит-2 - вечерний» (пион, чага, солодка, крапива), сбор № 1 (ромашка, подорожник, зверобой, тысячелистник, солодка, толокнянка, элеутерококк), сбор № 2 (укроп, толокнянка, элеутерококк). На пике лейкопении производился подсчет гемограмм, количества лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов в периферической крови животных.

Результаты. В экспериментах обнаружено, что реабилитационный сбор «Алфит» ингибирует рост АКЭ и 3ЬЬ у мышей, повышает антибластомный эффект ЦФ у животных с АКЭ, снижает гематотоксичность цитостатика, судя по количеству лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов в периферической крови, а также уменьшает гибель мышей.

Назначение мышам с 3ЬЬ фитосбора № 1 тормозит рост опухоли, приводя к закономерному снижению выраженности лейкоцитоза, при этом выявлена тенденция к ингибиции процесса мета-стазирования. Совместное использование фитосбора № 1 с ЦФ приводит к уменьшению массы 3ЬЬ. Применение этой схемы лечения снижает частоту метастазирования опухоли, что не отмечено у мышей, получавших только цитостатик; достоверно снижает массу легких с метастатическими узлами, обнаружена также тенденция к уменьшению таких показателей процесса диссеминации, как количество и площадь метастазов. Существенным является способность изучаемого сбора снижать выраженность лейкопении, возникающей после введения животным ЦФ. При лечении мышей линии С57ВЬ/6 с меланомой В-16 фитосбором № 1 выявлена тенденция к ингибиции роста опухоли и метастазов, как при изолированном применении, так и в сочетании с ЦФ.

Фитосбор № 2 тормозит рост АКЭ у беспородных мышей, повышает противоопухолевый и противометастатический эффект ЦФ у животных с АКЭ и 3ЬЬ. Положительным моментом является способность фитосбора № 2 уменьшать выраженность лейкоцитоза, сопровождающего развитие опухоли.

Выводы. Изучаемые растительные сборы тормозят рост перевиваемых опухолей мышей (АКЭ, 3ЬЬ). Совместное использование растительных сборов с циклофосфаном повышает эффективность терапии животных с опухолями (АКЭ, 3ЬЬ). Растительные сборы уменьшают гематотоксичность циклофосфана.

Н.Т. Райхлин1, И.А. Букаева1, С.Ш. Каршиева1,

В.Е. Небольсин2

Влияние дикарбамина на экспрессию Ag-ОЯОР-белков, регулирующих скорость клеточной пролиферации

]ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

2ОАО «Отечественные лекарства», Москва

Введение. Одной из структур клетки являются так называемые области ядрышковых организаторов (ОЯОР) где, в частности, расположены аргирофильные белки (Ag-ОЯОР-белки) В23/нуклеофозмин и С23/нуклеолин, которые регулируют скорость деления клеток и их дифференцировку. Параллельно изменению экспрессии Ag-ОЯОР-белков меняется скорость прохождения клетками клеточного цикла. Новый цитодифференцирующий агент дикарбамин фсг) вызывает перераспределение опухолевых клеток по фазам клеточного цикла и ингибирует рост некоторых экспериментальных опухолей. Представляет интерес выяснение роли Ag-ОЯОР-белков в механизме антипролиферативной активности Dcr в отношении клеток опухоли человека.

Цель исследования. Изучение влияния дикарбамина на скорость пролиферации клеток в п/к ксенографтах меланомы человека под контролем содержания Ag-ОЯОР-белков.

Материалы и методы. Использовали штамм меланомы человека Mel7 из Банка ГУ РОНЦ и бестимусных мышей-самок Balb/c nude собственного разведения. Дикарбамин (Dcr) вводили per os в дозе 4,5 мг/кг в течение 10 дней (n=10). В различные сроки после начала введения Dcr (1-3 сут) мышей умерщвляли, опухоли выделяли и подвергали гистохимическому исследованию. Для определения степени экспрессии аргирофильных белков ядрышек (Ag-ОЯОР-белков) использовали реакцию с нитратом серебра (Ploton D. et. al., 1986). Интенсивность экспрессии Ag-ОЯОР-белков оценивали по количеству образующихся ОЯОР гранул серебра. Одновременно контролировали размеры опухолевых узлов. Контрольные образцы опухоли получены от интактных мышей (n=10).

Результаты. Проведенное исследование позволило установить, что под влиянием Dcr размеры опухоли достоверно уменьшаются на 34-38 % и составляют на 3-и сут после лечения 142 [159^125] мм3 против контроля 216 [245^187] мм3, а на 5-е сут - 2753 [3146^2360] мм3 против 4471 [5279^3663] мм3 (p<0,05). Параллельно этому в опухолевых клетках происходит достоверное снижение экспрессии Ag-ОЯОР-белков в 2,0-2,5 раза (р<0,001).

Выводы. Проведенное исследование показало, что одним из механизмов антипролиферативного действия Dcr на клетки опухоли человека является его способность снижать содержание Ag-ОЯОР-белков в них. Эти данные позволяют считать, что цитодифференцирующее действие на опухолевые клетки проявляется снижением скорости прохождения фаз клеточного цикла.

А.А. Ржанинова1 , Н.П. Ермакова2, И.Б. Меркулова2,

А.И. Мишин2,| Л. М. МихайловаН Исследование туморогенности культивированных хондробластов человека

}ЗАО «РеМеТэкс», Москва 2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Задачи исследования. Оценка способности культивированных человеческих хондробластов вызывать развитие опухолей и метастазов при подкожной имплантации иммунодефицитным животным.

Материалы и методы. В работе использованы 60 мышей линии С.В-17 SCID с врожденным иммунодефицитом и культуры хондроб-ластов межпозвоночных дисков от 5 взрослых доноров, криоконсер-вированные на 5-м пассаже. 50 животным опытных групп подкожно вводили 1х107 хондробластов в 0,2 мл бессывороточной среды. 10 мышам контрольной группы тем же путем и в том же количестве вводили суспензию клеток эмбриональной саркомы человека А204. На протяжении опыта места инокуляции клеток регулярно пальпировали и измеряли все подкожные образования. Животных контрольной группы наблюдали в течение 14 дней от начала эксперимента; половину животных опытных групп (по 5 мышей из каждой группы) наблюдали 21 день; остальных животных - 84 дня (12 нед). Всех животных подвергали аутопсии с гистологическим исследованием объемных образований, участков кожи, головного мозга, легких, сердца, печени, почек, селезенки и регионарных лимфатических узлов.

Результаты. У всех мышей контрольной группы в месте инокуляции сформировались подкожные опухоли, средний объем которых на 14-е сутки составил 38,4±10,2 мм3. Морфологически опухоли представляли собой низкодиффенцированные саркомы с атипичными хондроидными структурами. У большинства животных опытных групп в месте инокуляции пальпаторно определялись мелкие узелки хрящевой плотности, которые имели тенденцию к постепенной резорбции в ходе опыта. Морфологически трансплантаты характеризовались клеточным полиморфизмом и состояли преимущественно из фибробластов и макрофагов, лежащих в межуточном оксифильном веществе, а также небольшого количества хондробластов с признаками дегенерации и клеток, напоминавших хонд-роциты и располагавшихся в лакунах основного вещества. По периферии наблюдалось формирование фиброзной капсулы. На позднем сроке наблюдения отмечалась полная или частичная резорбция трансплантатов и замещение их фиброзной тканью. У 1 мыши в трансплантате обнаружена структура, напоминающая гиалиновый хрящ. Признаков инвазии окружающих тканей клетками трансплантата, а также клеточной атипии и митотической активности не наблюдалось ни в одном случае. При иссле-

довании внутренних органов и головного мозга животных опытных и контрольной групп метастатических поражений не обнаружено.

Выводы. Культивированные человеческие хондробласты не ту-морогенны при сроке наблюдения до 12 нед.

С.Г. Романова1, Г.А. Серебренникова1, А.А. Штиль2 Антинеопластические свойства бесфосфорного аналога эдельфозина -катионного глицеролипида с простой эфирной связью 1МИТХТ им. М.В. Ломоносова, Москва,

2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Коммерческий препарат эдельфозин (1-октадецил-2метил^п-глицеро-3-фосфохолин) является уникальным противоопухолевым агентом. Накапливаясь преимущественно в злокачественных клетках, он обладает цитостатическим и цитотоксическим действием, вызывая нарушения клеточного цикла и гибель клеток. Противоопухолевая активность алкильных глицеролипидов зависит от структуры гидрофобного и гидрофильного доменов липидной молекулы. В связи с этим для оптимизации противоопухолевых агентов этого химического класса актуально получение аналогов эдельфозина, отличающихся структурными доменами.

Материалы и методы. Нами разработан синтез бесфосфорных производных алкильных глицеролипидов (аналогов эдельфозина) с алифатическими (Н№диметилэтаноламин, ^^№№-тетраметилэтилендиамин) и гетероциклическими (пиридин, метилимидазол, метилморфолин) катионными «головками». Липиды получены на основе гас-1-октадецил-2-метил-3-(5-бромпентаноил) глицерина по реакции кватернизации соответствующих оснований в безводном метилэтилкетоне (в случае липида с пиридиниевой группой - в пиридине). Выход ключевых соединений составил 84 %. Все полученные липиды охарактеризованы масс-спектрометрическим и элементным анализом, а также спектрами *Н-ЯМР. Скрининг цитотоксичности новых соединений проводили на линии лейкоза человека К562.

Результаты. Наибольшую активность проявили 2 агента с катионными «головками», представленными пиридином и N,N-диметилэтаноламином. Цитотоксичность этих соединений не уступала таковой эдельфозина. Оба соединения вызывали апоптоз клеток линии К562 (по данным проточной цитофлуориметрии и электронной микроскопии) в микромолярных концентрациях. Соединение, содержащее пи-ридиниевую группу, вызывало гемолиз эритроцитов, тогда как у соединения с ^№диметилэтаноламином это побочное действие не проявлялось.

Выводы. По результатам работы планируется расширить спектр тестируемых соединений как с алифатическими, так и с гетероциклическими основаниями в полярном домене, а также повторить эксперимент с липосомальными формами липидов.

О.И. Саквина, Н.А. Оборотова, А.Ю. Барышников Направленная доставка противоопухолевых препаратов

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Одним из направлений улучшения эффективности лекарственной терапии опухолей является повышение избирательности действия противоопухолевых препаратов на опухолевые клетки. Это достигается или поиском новых таргентных препаратов, или созданием новых регулируемых транспортных систем уже хорошо известных противоопухолевых препаратов. С этой целью используются коллоидные системы, такие, как микрокапсулы, микросферы, наночастицы, жировые эмульсии, мицеллы, макромолекулярные комплексы и липосомы. Избирательность действия таких препаратов обеспечивается, с одной стороны, особенностями не-оангиогенеза в опухоли, а с другой - включением в эти препараты моноклональных антител или лигандов, способных специфически связываться с опухолевой клеткой, т.е. использован принцип таргентности.

Опухолевый ангиогенез характеризуется образованием эндотелия сосудов с порами размером 350-850 нм, так как эндометрий не успевает за ростом новых сосудов. Растворимый противоопухолевый препарат попадает в опухоль и выходит из нее, не накапливаясь. Наночастицы попадают в опухоль через поры в сосудах, застревают в ткани опухоли и там накапливаются, оказывая терапевтическое действие. Одним из основных факторов, определяющих эффективность накопление нанопрепаратов в опухоли, является размер носителя.

Активная избирательность накопления достигается с помощью моноклональных антител (МКА). В РОНЦ разработано большое количество МКА против дифференцировочных антигенов лейкоцитов человека и опухолеассоциированных антигенов, которые используются для создания иммунолипосом.

Н.А. Санина1, О.С. Жукова2, З.С. Смирнова2,

Л.М. Борисова2, М.П. Киселева2, С.М. Алдошин1 Противоопухолевая активность нитрозильных комплексов железа -нового класса доноров монооксида азота

1 Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка 2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Применение NO доноров как нового класса противоопухолевых агентов связано с важной ролью NO в процессе роста злокачественных опухолей. Показано, что монооксид азота изменяет уровень апоптоза опухолевых клеток, активность гена р53, неоангио-генез и действует на другие мишени. Однако известные синтетические NO-доноры различных классов не используются в качестве противоопухолевых препаратов, а применяются в онкологии для повышения эффективности химиотерапевтических средств или радиотерапии. В ИПХФ РАН впервые синтезированы стабильные при комнатной температуре в кристаллической форме нитрозильные комплексы железа семейства «g=2,03» с лигандами - аналогами пиридиновых и пуриновых оснований ДНК, которые являются синтетическими моделями активных центров нитрозильных [Fe-S] белков -природных «депо» NO.

Цель исследования. Оценить цитотоксическую и противоопухолевую активность нитрозильных комплексов железа.

Результаты. На опухолевых клетках человека различного гене-за (карцинома яичника SKOV3, миелолейкоз К562, карцинома молочной железы MCF7, немелкоклеточный рак легкого А549) выявлен антипролиферативный эффект нитрозильных комплексов железа. Процент торможения роста опухолевых клеток для 6 соединений составил 76-92 % в зависимости от природы лиганда и типа структуры (для цисплатина в тех же условиях эта величина составляет 84 %). 3 соединения из этого класса: тетранитрозильные биядерные комплексы железа с 2-меркапто-имидазол-илом (Im), 2-меркапто-бензтиазол-илом (Btz) и сульфидный комплекс (RSR) - были отобраны для испытаний in vivo на перевиваемых опухолях мышей: лимфолейкозе Р-388, аденокарциноме молочной железы Са-755, меланоме В16 и эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC). Соединения Im и Btz проявили статистически значимый, но кратковременный противоопухолевый эффект, равный 60-90% торможения роста опухолей (ТРО) Са-755 и LLC. Сульфидный комплекс RSR на Са-755 и LLC проявлял такой же по силе (ТРО=70-83 %), но более длительный терапевтический эффект, который сохранялся в течение 2 и 3 нед и вызывал увеличение продолжительности жизни опытных мышей на 27 % и 50 % соответственно.

Выводы. Проведенные исследования свидетельствуют о целесообразности продолжения дальнейшего изучения нитрозильных комплексов железа с целью создания противоопухолевого препарата в этом классе соединений.

В.Б. Сирота, Г.О. Олжатаева, К.Ж. Мусулманбеков Радиомодификация арглабином при лучевой терапии рака слизистой полости рта и глотки

Карагандинская государственная медицинская академия,

Казахстан

КГКП «Областной онкологический диспансер», Караганда, Казахстан

Задачи исследования. Оценка эффективности действия арглаби-на при лучевой терапии (ЛТ) больных раком слизистой полости рта и глотки (РСПР).

Материалы и методы. В исследование включены 27 больных РСПР от 33 до 72 лет: с I стадией - 6 больных, со II - 4, с III - 17. Лечение больных РСПР проводилось методом «слепой» рандомизации. В I группу вошли 16 больных, получивших ЛТ без радиомодификации. Во II группу включено 11 больных с ЛТ с арглабином. 5 пациентов имели цитологическое заключение: плоскоклеточный рак, у ос-

тальных - гистологическая верификация. 13 пациентов имели плоскоклеточный рак без ороговения, 7 - плоскоклеточный рак с ороговением, 2 - рак с распадом. ЛТ проводилась на аппарате «Рокус АМ» обычным фракционированием дозы по 2 Гр на первичную опухоль и области регионарного метастазирования в 2 этапа. На 1-м подводилась СОД 40 Гр, перерыв 2 нед до стихания лучевой реакции, на

2-м этапе СОД доводили до 64-66 Гр. Арглабин вводили внутривенно одномоментно медленно из расчета 5 мг/кг веса или 185 мг/м2 за 1020 мин до сеанса лучевой терапии ежедневно. Суммарная доза варьировала от 4000 до 8400 мг. Эффективность комбинированного лечения оценивается по стандартным критериям ВОЗ (1978) с использованием клинического, ультразвукового и эндоскопического методов исследования.

Результаты. Полный регресс опухоли наблюдали в группе больных, получавших на фоне ЛТ арглабин, у 27,3 % пациентов; в группе больных, получавших ЛТ без арглабина, - у 12,5 %. Аналогичная картина наблюдалась при получении частичного ответа опухоли: в группе больных с арглабином - у 54,5 % пациентов, в группе без арг-лабина - у 18,8 %. У 68,8 % больных, получавших ЛТ без арглабина, отмечена стабилизация опухолевого процесса. Данные различия статистически не значимы и не сравнимы. При использовании арглабина при ЛТ не наблюдали анемии и агранулоцитоза, в то время, как при ЛТ без арглабина гематологические изменения проявились более рельефно: анемия в 6,2±3,4 %, лейкопения - в 12,5±4,6 %, агранулоцитоз - в 12,5±4,6 % случаев.

Выводы. Наблюдается общая положительная динамика ЛТ у больных РСПР, получавших при ДГТ арглабин. Необходимо отметить положительную субъективную оценку состояния больных при введении арглабина, что способствует улучшению качества жизни данных пациентов.

А.В. Соснов1, Р.Н. Карапетян1, А.Г. Корякова1,

С.В. Садовников1, И.Н. Станьков1 , А.В. Никитин1,

А.Э. Воронков1 А.А. Гах2

Разработка новых средств терапии

и профилактики рака предстательной железы

1 Исследовательский институт химического разнообразия, Химки, Московская область

2Oak Ridge National Laboratory, ORNL DOE, США

В рамках международного исследовательского проекта «Химиотерапия рака предстательной железы» (проект ИИХР-DOE-РОНЦ РАМН-МНТЦ №3548р) проводится разработка новых низкомолекулярных веществ для терапии РПЖ. Специалисты ORNL DOE провели компьютерный скрининг около 100 тыс. веществ. В результате было отобрано около 5 тыс. новых веществ, которые были тестированы в ИИХР (ингибирование пролиферации гормонорезистентных клеток РПЖ человека DU-145). В результате высокопроизводительного скрининга были найдены несколько серий активных веществ (несколько сот веществ), которые направлены на дальнейшие исследования.

Другим направлением проекта является исследование индивидуальных низкомолекулярных полифенолов, выделяемых из природного сырья, и их аналогов. Вещества данного типа обладают выраженным противоопухолевым, антиатеросклеротическим, антидиабетическим, антимикробным и антивирусным действием, способствуют снижению избыточного веса, а также замедляют процесс старения, что и определяет интерес к ним со стороны фармкомпаний и исследовательских центров. Полифенолы входят в состав коммерчески доступных пищевых добавок растительного происхождения, некоторые из этих веществ проходят клинические исследования в качестве потенциальных лекарств.

В рамках проекта отрабатываются химико-аналитические методы (GC/MS, HPLC и LC/MS) количественной оценки содержания некоторых полифенолов в доступном природном сырье (например, транс-резвератрола в продуктах переработки винограда), выявляются традиционные продукты питания, имеющие наиболее высокое содержание ценных полифенолов. Поскольку стоимость выделения чистых полифенолов из природных источников весьма высока, то проводится химический синтез веществ, наиболее востребованных на рынке, и оценивается рентабельность их синтетического получения.

Е.В. Тихонова

Усовершенствование доставки противоопухолевого препарата арглабин с использованием липосом

АО «Научно-производственный центр «Фитохимия», Караганда, Казахстан

Введение. Направленный транспорт химиотерапевтических препаратов к опухоли in situ в настоящее время является предметом многочисленных исследований. Один из способов достижения этой цели - разработка липосомальной лекарственной формы противоопухолевых препаратов. Липосомы существенным образом улучшают терапевтическую эффективность противоопухолевых препаратов и снижают токсичность по сравнению со свободными субстанциями. В настоящее время на мировом фармацевтическом рынке появилось несколько липосомальных противораковых препаратов, таких, как антрациклины дауномицин и доксо-рубицин, а также винкристин, аннамицин и третиноин; многие препараты находятся на последних стадиях клинических испытаний.

Цель исследования. Оценить возможность получения липосом с включением в них противоопухолевого сесквитерпенового лактона арглабина для обеспечения его направленной доставки.

Материалы и методы. Подобраны оптимальные условия для синтеза липосом, нагруженных арглабином, на основе соевого лецитина методом эмульгации с использованием эмульгатора, вспомогательных веществ, органических растворителей и ультразвуковой обработки эмульсии. Диаметр наночастиц измерен зондовым сканирующим электронным микроскопом «SOLVER PRO-M» (Япония).

Результаты. С увеличением концентрации эмульгатора поливинилового спирта при постоянной концентрации лецитина диаметр синтезируемых частиц уменьшается со 150 до 85 нм. Снижение концентрации лецитина ведет к существенному снижению диаметра синтезируемых наноразмерных липосом до 50 нм. При добавлении криопротектора £-(+)-лактозы отмечено уменьшение в разбросе диаметра частиц до 25 нм. Обработка эмульсионных смесей ультразвуком позволила получить однородные частицы диаметром до 100 нм с разбросом до 15 нм.

Выводы. Таким образом, нами получены новые липосомальные лекарственные формы противоопухолевого арглабина и изучено влияние концентраций лецитина, эмульгатора, вспомогательных веществ и ультразвуковой обработки на диаметр липосом.

Е.В. Удут, Е.Г. Скурихин, В.В. Жданов,

А.М. Дыгай, Е.Д. Гольдберг

Механизмы действия стимуляторов эритропоэза в условиях миелосупрессии, вызванной введением 5-фторурацила

ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск

Введение. Перспективными в коррекции нарушений, возникающих в системе эритрона в условиях продолжительной химиотерапии, являются препараты на основе рекомбинантных форм эритропоэтина, производные гликозаминогликанов, а также ноотропные препараты. Изучение механизмов их действия позволит разработать патогенетически обоснованные подходы к дифференцированному применению гемостимуляторов для лечения анемического синдрома. В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение механизмов действия различных по своей природе препаратов на эритропоэз в условиях цитостатической миелосупрессии.

Материалы и методы. Эксперименты выполнены на модели миелосупрессии, вызванной введением мышам линии CBA/CaLac 5-фторурацила (ФУ) в максимально переносимой дозе. Животные опытных групп получали дополнительно таблетки рекомбинантного человеческого эритропоэтина, оригинальный препарат сверхмалых доз антител к эритропоэтину (поэтам), экстракт шлемника байкальского (ЭШБ), либо N-ацетилнейраминовую кислоту (N-НК). На 3-16 сут после введения ФУ определяли показатели периферической крови, костномозгового кроветворения, содержание эритроидных клеток-предшественников в костном мозге, их пролиферативную активность, интенсивность дифференцировки, структурно-функциональную организацию костного мозга, тестировали уровни эритропоэтической активности в кондиционных средах от прилипающих и неприлипающих элементов ГИМ и в сыворотке крови.

Результаты. Выполненные эксперименты позволили установить, что при курсовом применении таблетированной формы рекомбинантного человеческого эритропоэтина высокие темпы деления и созревания эрит-роидных прекурсоров и секреторная активность клеток кроветворного микроокружения выступают основными механизмами, определяющими ускоренное восстановление содержания эритрокариоцитов в костном мозге и ретикулоцитов в периферической крови после назначения ФУ. Поэтам при введении ФУ активирует эритропоэз преимущественно за счет увеличения уровня эритропоэтической активности во фракции адге-зирующих нуклеаров и сыворотке крови. Стимуляция ЭШБ процессов регенерации эритроидного ростка кроветворения, угнетенного антиметаболитом, связана с возрастанием уровня гемопоэтических ростовых факторов в супернатантах миелокариоцитов. В условиях введения ФУ и N-НК наблюдается стимуляция пролиферативной активности эритроидных колониеобразующих единиц за счет возрастания уровня ЭПА в супернатантах миелокариоцитов.

Т.А. Федошчева1, А.В. Бережное2, Е.И. Федотова2,

В.П. Зинченко2, В.М. Ржезников3, Л.И. Голубовская3,

Н.Л. Шимановский1

Изучение цитотоксической активности андростенов и их нитропроизводных

]РГМУ, Москва

2Институт биофизики клетки РАН, Пущино 3ГУ ЭНЦРАМН, Москва

Введение. В последние несколько лет появилось немало указаний на возможность использования сочетанной терапии рака молочной (РМЖ) железы антиэстрогенами с дегидроэпиандростероном (ДГЭА). Преимущества комбинирования антиэстрогенов с ДГЭА заключаются в том, что ДГЭА метаболизируется в периферических тканях в андрогены, обладающие антипролиферативным действием в отношении клеток РМЖ. Кроме того, ДГЭА компенсирует недостаток андрогенов при старении. С целью создания соединений, обладающих цитотоксической и радиопро-тективной активностью, в ЭНЦ РАМН были синтезированы нитропроизводные андростенов - дегидроэпиандростерона нитрат (ДГЭАН), андро-стендиола нитрат (АЕДН); андростендиола динитрат (АЕДДН), представляющие собой нитропроизводные эндогенных андростенов дегидроэпиандростерона и андростендиола соответственно. В работе исследовано влияние андростенов и их нитропроизводных на жизнеспособность опухолевых клеток линий MCF-7 (РМЖ человека).

Цель исследования. Изучение цитотоксической активности анд-ростенов и их нитропроизводных и возможного механизма их действия.

Материалы и методы. Для оценки цитотоксической активности использовали МТТ-тест. Для изучения возможного механизма действия андростенов регистрировали измерения уровня цитозольного кальция в клетках, нагруженных флюоресцентным зондом Fluo-4 с помощью системы анализа изображение @Cell observer» (Carl Zeiss). Измерения кальция в ЭПР в суспензии клеток в присутствии хлортет-рациклина регистрировали с помощью микрофлюориметра.

Результаты. Цитотоксический эффект (подавление жизнеспособности) в отношении клеток MCF-7 выявлен для всех андростенов в концентрациях 10 7-10 5М. IC50 для соединений составляет 10 6-10

5М. Ряд по цитотоксической эффективности выглядит так: ДГЭА>АЕДДН > АЕДН > АЕД = ДГЭАН (Р<0,05).

ДГЭА оказывает более выраженное цитотоксическое воздействие на клетки MCF-7 по сравнению с его нитропроизводным, ДГЭАН (Р<0,05) и из ряда андростенов обладает наибольшим цитотоксиче-ским действием.

При изучении влияния андростенов на концентрацию ионов кальция в цитозоле ([Ca2+]i) клеток карциномы HEp-2 и асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ) было показано, что из всех андростенов только ДГЭА вызывает увеличение ([Ca2+]i), связанное с выходом Са2+ из эндоплазматического ретикулума (установлено с помощью ингибиторов тапсигаргина, FCCP).

Выводы. Нитропроизводные андростенов обладают меньшим ци-тотоксическим действием в отношении клеток рака молочной железы, чем их эндогенные аналоги. Наибольшим цитотоксическим действием обладает ДГЭА. Можно предположить, что ДГЭА способствует активации 1Р3-каскада, а другие андростены, изученные в работе, имеют, по-видимому, другой механизм действия.

Д.В. Филоненко, Н.В. Андронова, Е.В. Степанова,

Н.Т. Райхлин, Е.М. Трещалина, А.Ю. Барышников Разработка моделей для доклинического изучения таргетных препаратов (Her2, VEGF)

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Доклиническое изучение так называемых «таргетных» препаратов, направленных на определенные мишени, невозможно без исследований in vivo. С этой целью используются культуры клеток, адаптированные к росту in vivo, или штаммы опухолей, растущих в виде подкожных ксенографтов у имунодефицитных мышей, например, Нег2+ опухоли молочных желез и яичников. Для изучения так называемых антиангиогенных препаратов используют опухоли, клетки которых способны к продукции факторов роста сосудов, например, VEGF, CD31 и CD34. Наличие вышеуказанных моделей для изучения противоопухолевых препаратов является одним из основных условий современного доклинического исследования.

Цель исследования. Разработка моделей для доклинического изучения таргетных препаратов (Her2, VEGF).

Материалы и методы. Для получения Her2+ моделей опухолей человека использованы аденокарцинома яичника SKOV3, содержащая на своей поверхности до 8х105 рецепторов HER2/neu, и аденокарцинома молочной железы SKBR3, содержащая на своей поверхности до 1,6х106 рецепторов HER2/neu на клетку. Обе опухоли формируют подкожные ксенографты у nude мышей-самок Balb/c nude 8-10 нед массой тела 18-21 г собственного разведения. Для получения VEGF+ модели использована меланома В16, п/к трансплантированная изогенным мышам-самкам BDF1. Контроль наличия маркеров на поверхности клеток опухолей осуществлялся по стандартным методикам in vitro и in vivo при многократном пассировании.

Результаты. Показано, что подкожные ксенографты SKOV3 и SKBR3 Her2+ по скорости роста (короткий латентный период и длинная экспоненциальная фаза) и размерам опухолевых узлов пригодны для экспериментальной оценки моноклональных антител, блокирующих рецептор HER2/neu. Результаты ИГХ-исследования показали резко выраженную реакцию на основные маркеры неоангиогене-за CD31, CD34 и VEGF в меланоме В16 на большой площади среза опухоли (51-59 %), наибольшую активность имеет VEGF.

Выводы. Штаммы SKOV3, SKBR3 и меланома В16 могут быть использованы для доклинического изучения противоопухолевых препаратов, направленных на Her2 и VEGF.

А.А. Фильченков1, М.П. Завелевич1, Н.М. Храновская2 Бетулиновая кислота

как индуктор каспазо-зависимого апоптоза в клетках лимфобластного лейкоза человека

1 Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии НАН Украины, Киев 2Институт онкологии АМН Украины, Киев

Среди многочисленных агентов, способных индуцировать апоптоз или дифференцировку лейкозных клеток, особое внимание привлекают соединения природного происхождения, в частности, растительные тритерпеноиды. Между тем внутриклеточные мишени их действия пока остаются малоизвестными. Показано, что бетулиновая кислота проявляет противоопухолевую активность в отношении клеток различных солидных опухолей. Однако активность этого соединения в отношении лейкозных клеток исследована значительно меньше.

В данной работе изучены эффекты бетулиновой кислоты (Sigma, США), связанные с индукцией апоптоза в перевиваемых клетках линии МТ-4 острого лимфобластного лейкоза человека. В качестве стандартного индуктора апоптотической гибели клеток использовали противоопухолевый препарат вепезид (Brystol-Myers Squibb SpA, Италия). Уровень апоптоза и распределение клеток по фазам клеточного цикла определяли с помощью проточной цитометрии. Активную форму каспазы-3 выявляли с помощью ФИТЦ-конъюгированных моноклональных антител (клон С92-605, Becton Dickinson Biosciences, США).

Показано, что бетулиновая кислота вызывает дозозависимое замедление роста клеток МТ-4 с выраженным цитотоксическим эффектом в концентрации 30 мкг/мл на 2-е сут культивирования, что сопровождается

появлением до 25% гиподиплоидных клеток. Индукция апоптоза не связана с выраженным перераспределением по фазам клеточного цикла, хотя в дозах меньших, чем 30 мкг/мл, отмечается некоторое увеличение субпопуляции клеток в фазе G0/G1. Вместе с тем инкубация с вепезидом приводит к остановке клеточного цикла в фазе G0/G1 (до 75 % клеток). При развитии апоптоза под действием бетулиновой кислоты отмечается дозозависимая активация каспазы-3 в обработанных клетках (до 40 %).

Таким образом, бетулиновая кислота ингибирует пролиферацию клеток лимфобластного лейкоза человека в условиях их культивирования in vitro. Рост-ингибирующий эффект этого вещества сопровождается появлением активной формы каспазы-3 и апоптотической гибелью лейкозных клеток.

Т.Ю. Хричкова, В.Е. Гольдберг, М.Г. Матяш,

В.А. Шаталова

Гематологическая токсичность адриабластина и таксотера при их сочетанном применении у больных раком молочной железы

ГУ НИИ фармакологии, ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, Томск

Введение. В работе изучались токсические эффекты сочетанного применения таксотера с адриабластином в отношении системы крови больных раком молочной железы (РМЖ) и механизмы их развития.

Материалы и методы. В ходе работы были обследованы 49 больных РМЖ III-IV стадий, получавших химиотерапию по схеме, включающей адриабластин с таксотером. Определение общих показателей периферической крови и костного мозга производили стандартными гематологическими методами. Клонирование клеток-предшественников гранулоцито-поэза (КОЕ-Г) и эритропоэза (КОЕ-Э) из неприлипающих кариоцитов костного мозга осуществляли в полувязкой питательной среде на основе метилцеллюлозы. Интенсивность дифференцировки гемопоэтических предшественников определяли по величине индекса созревания. Пролиферативную активность оценивали методом клеточного самоубийства.

Результаты. Проведенные нами исследования показали, что общее количество лейкоцитов (ОКЛ) у пациентов уменьшилось более, чем в 2 раза уже после 1-го курса химиотерапии. Уменьшение ОКЛ в большей степени было обусловлено снижением содержания сегментоядерных ней-трофилов в периферической крови. В то же время нами было зафиксировано отсутствие статистически значимых изменений содержания эритроцитов и концентрации гемоглобина на протяжении всего периода наблюдения. Анализ стернальных пунктатов в процессе ХТ показал наличие компенсаторных сдвигов в кроветворной ткани, более выраженных со стороны гранулоцитарного ростка кроветворения. Так, наблюдалось достоверное возрастание содержания незрелых и зрелых нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге по сравнению с исходным уровнем, что явилось следствием активации в ходе ХТ как процессов пролиферации, так и дифференцировки клеток-предшественников гранулоцитарного ряда с параллельным увеличением их числа в костном мозге. Аналогичная динамика имела место и в отделе эритроидных прекурсоров.

Выводы. Полученные данные о механизмах, лежащих в основе изменений в системе крови под влиянием изученной схемы химиотерапии, во многом объясняют достаточно хорошую переносимость препаратов, что особенно актуально в связи с расширяющимся диапазоном применения таксансодержащих режимов цитостатического лечения.

А.Р. Чочиева

Экспериментальное обоснование применения индольных соединений капусты в химиопрофилактической практике

Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Владикавказ

Введение. Согласно данным ряда эпидемиологических исследований диета, обогащенная овощами семейства крестоцветных, может иметь существенное значение в профилактике возникновения злокачественных новообразований ряда локализаций.

Цель исследования. Изучение влияния биологически активной добавки «Broccoli» на возникновение новообразований молочной железы, индуцированных у крыс М-метил-М-нитрозомочевиной (МНМ).

Материалы и методы. Опыты проведены на 45 крысах-самках линии Вистар массой 100-120 г, которых содержали при естественном све-

товом режиме и свободном доступе к воде и пище. Опухоли молочной железы индуцировали путем подкожных 5-кратных интрамаммарных инъекций химического канцерогена МНМ. Животные были разделены на

2 группы: 25 крыс 1-й группы служили контролем и получали только канцероген; 20 крыс 2-й группы получали 4 раза в неделю одновременно с канцерогеном с пищей пищевую добавку «Broccoli» (HECHT-PHARMA, Франция; капсулы по 400 мг, содержащие 79,5 % порошка брокколи). Продолжительность опыта составила 36 нед. Выживших животных умерщвляли передозировкой эфирного наркоза. Всех павших и забитых животных подвергали аутопсии.

Результаты. Подкожное интрамаммарное введение МНМ индуцировало у крыс развитие ОМЖ, морфологически верифицированных как аденокарциномы. Метастазирования не было. Ко времени обнаружения 1й опухоли показатели выживаемости животных в контрольной группе составили 88 %, в опытной - 95 %. 1-е пальпируемые опухоли у крыс контрольной группы были обнаружены на 105-й день после 1-й инъекции канцерогена. У опытных животных 1-я пальпируемая опухоль возникла несколько позже - на 119-й день эксперимента. К концу эксперимента неопластические изменения были зарегистрированы у 20 из 22 (90,9 %) животных контрольной группы и у 10 из 19 (52,6 %) животных опытной группы. Ко времени завершения опыта в контрольной группе выживаемость составила 9,09 %, в опытной группе - 84,2 % (p<0,05). Средний латентный период развития опухолей в группе, получавшей в качестве пищевой добавки порошок брокколи, составил 200,2±15,2 дней против 154±8,9 в контрольной группе (p<0,005). Средняя продолжительность жизни животных с ОМЖ в контрольной группе была равна 31,8±2,5 дня и значительно уступала аналогичным показателям в опытной группе: 61,2±12,6 дня в группе с брокколи (p<0,005).

Выводы. Результаты настоящего эксперимента и анализ данных литературы о широком спектре фармакологической активности соединений семейства крестоцветных свидетельствуют о перспективности использования данной БАД в качестве химиопрофилактического агента.

М.Я. Шашкина, А.В. Сергеев,

М.В. Максимова, Н.А. Хабарова Химико-фармацевтическое и медико-биологическое изучение каскорутола

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Создание препаратов на основе компонентов естественной защитной системы организма для применения в комплексной терапии онкологических больных.

Материалы и методы. Использовали сырье и материалы, соответствующие требованиям ГФХІ, ГОСТ, ТУ; общепринятые современные методы в фармации, фармакологии, иммунологии. Экспериментальные исследования проводили на мышах ВDFl и Balb/с. Влияние каскорутола (КРТ) на противоопухолевую активность цитостатиков оценивали в системе in vitro на модели опухоли яичника человека ^aOV), трансплантированной под капсулу почки мышам линии ВDFl.

Результаты. Разработан антиоксидантный комплекс КРТ в форме драже. Использование оригинальных технологических приемов позволило получить препарат, содержащий лабильные субстанции (бета-каротин, аскорбиновая кислота, а-токоферилацетат, рутин), стабильный при хранении в течение 2 лет. Разработана альтернативная форма КРТ в капсулах. Исследуется стабильность ее при 3 температурных режимах. Технология драже и капсул апробирована в опытнопромышленных условиях. Получено разрешение на применение драже в качестве БАД. Организован промышленный выпуск драже на ОАО холдинг «ЭДАС». В эксперименте КРТ проявлял высокую иммуномодулирующую активность, как сообщалось ранее. Частично или полностью он снимал иммунодефицитное состояние мышей Balb/с, вызванное аранозой (200 мг/кг х 4). КРТ снижал в 2 раза и более количество хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, индуцированных циклофосфаном (200 мг/кг) и аранозой (500 мг/кг). В комбинации с аранозой КРТ усиливал торможение роста трансплантированных опухолей, а в некоторых случаях вызывал регрессию их на 64 %.

Выводы. КРТ перспективен для включения в схемы комплексного лечения больных для снижения побочного действия противоопухолевой терапии, коррекции иммунодефицитного состояния, норма-

лизации антимутагенной, антиоксидантной защитной системы организма.

А.И. Шихлярова, Е.П. Коробейникова, Г.Я. Марьяновская,

Л.П. Барсукова, Т.П. Протасова, С.А. Зинькович

Оценка компенсаторного влияния метода интраоперационной аутогемохимиотерапии на функциональное состояние регуляторных систем организма больных раком легкого

ФГУ «РНИОИРосмедтехнологий», Ростов-на-Дону

Задачи исследования. Изучить особенности биоэлектрической активности мозга и динамику электрокожного сопротивления в биологически активных точках стандартного, модифицированного нами измерительного профиля по методу электроакупунктуры Р.Фолля (ЭАФ) больных раком легкого (РЛ) на этапах хирургического лечения, включающего интраоперационную аутогемохимиотерапию (ИО АГХТ).

Материалы и методы. Были обследованы в динамике 45 мужчин, больных РЛ. В основную группу (с использованием ИО АГХТ) были включены 24 пациента, в контрольную - 21. Инкубировали химиопрепараты с аутокровью по стандартной методике. Для регистрации ЭЭГ применяли анализатор электрической активности мозга «Энцефалан-131-01». Для проведения замеров по методу ЭАФ использовали рефлексодиагностический комлекс «Риста-ЭПД».

Результаты. Было показано, что хирургическое лечение РЛ в сочетании с ИО АГХТ приводит к нормализации зонального распределения альфа-ритма ЭЭГ в 44 % случаев, снижению на 56 % высокоамплитудной активности в бета-диапазоне и достоверным (р<0,05) усилением пространственной синхронизации между центральной и височной зонами левого полушария. В процессе тестирования состояния органов и систем по методу ЭАФ было выявлено, что через 2 нед после операции с использованием ИО АГХТ изучаемые показатели оставались весьма стабильными. В контрольной группе больных, напротив, наблюдалось достоверное возрастание процентного содержания резких асимметрий в общем измерительном профиле (р<0,05), а также увеличение на 34 % количества пациентов с асимметриями на КИТ гипоталамуса.

Выводы. Установлено, что хирургическое лечение рака легкого в сочетании с ИО АГХТ оказывает выраженное компенсаторное влияние на функциональное состояние как корковых, так и подкорковых структур центральной нервной системы.

А.Е. Щекотихин1, В.А. Глазунова2, Л.Г. Деженкова1,

А.А. Штиль2, М.Н. Преображенская1 Новые нафтоиндолдионы, вызывающие гибель клеток с множественной лекарственной устойчивостью

1ГУНИИНА им Г.Ф. Гаузе РАМН, Москва 2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Ранее мы разработали методы синтеза производных аналогов антрациклинонов, в частности, 4,11-дигидроксинафто[2,3-/]индол-5,10-диона и показали высокую цитотоксичность соединений этого класса. Продолжая поиск соединений, преодолевающих множественную лекарственную устойчивость (МЛУ) опухолевых клеток, мы обнаружили, что нафтоиндолдионы, содержащие в положении 3 остаток 3-аминопирролидина, вызывают гибель резистентных клеток.

Цель исследования. Поиск производных нафто[2,3-/]индол-5,10-диона, преодолевающих МЛУ, опосредованную Р-гликопротеином (Pgp), и идентификация внутриклеточных мишеней активных соединений.

Материалы и методы. Цитотоксичность соединений для клеток дикого типа (L1210/0, К562 и НСТ116) и сублинии К562/4 с МЛУ, обусловленной экспрессией Pgp, определяли в MTT-тесте, активность топоизомеразы I определяли с помощью набора Topo I kit (To-poGen, US). IR (индекс резистентности) - отношение IC50 для сублинии К562/4 к IC50 для линии K562.

Результаты. Переаминированием 3-диметиламинометил-4,11-дигидроксинафто[2,3-/]индол-5,10-диона циклическими диаминами синтезирована серия новых 3-замещенных 4,11-дигидроксинафто[2,3-

f] индол-5,10-дионов. Исследование цитотоксичности полученных нафтоиндолдионов показало, что производные с 3-аминопирролидином в боковой цепи обладают высокой цитотоксичностью, близкой к таковой доксорубицина или превосходящей его. Важную роль в преодолении МЛУ играет стереохимия диамина. Так, производные 3-(£)-аминопирролидина менее активны для резистентной сублинии K562/4 с экспрессией Pgp (IR1=1,5-3), чем для родительской линии К562. Аналогичные производные R-ряда оказались более активны для клеток K562/4 (IC5o=0,4±0,1 мкМ, IR=0,5), чем для линии К562, и по цитотоксичности превосходят доксорубицин (IC5o=8,8±0,1 мкМ, IR=10). Изученные производные в микромоляр-ных концентрациях оказались способны ингибировать релаксацию топоизомеразой I суперскрученной ДНК.

Выводы. Обнаружена серия производных нафтоиндолдионов с новыми свойствами, важными для терапии опухолей. Наиболее активные соединения, в частности, 3-{[(3.К)-3-аминопирролидинил]метил}-4,11-дигидрокси-1Н-нафто[2,3-/]индол-5,10-дион, способны преодолевать Pgp-зависимую МЛУ и ингибировать топоизомеразу I.

Работа выполнена при поддержке грантами РФФИ №06-03-32233-а и РФФИ-TNSC№я07-03-92000-ННС-а.

Н.П. Яворская1, И.С. Голубева1,

Д.В. Овчинников2,\Е.Н. ГлибинЛ

Сравнительное изучение противоопухолевой активности амидов 9-ксантон-2- и 4 карбоновых кислот, содержащих в амидных группах фрагменты аза 18-краун-6

1ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

2Государственный Технологический институт, Санкт-Петербург

Введение. При изучении краун-соединений производных актино-цина нами показано, что природа катионоидного центра и его расположение относительно интеркалирующей структуры - факторы, оказывающие существенное влияние на противоопухолевые свойства и на токсичность исследуемых соединений. Значение имеет также размер полости в краун-фрагменте (1, 2).

Цель исследования. Выяснение влияния на противоопухолевую активность и токсичность взаимного расположения катионоидного центра аза-18-краун-6 и интеркалирующего гетероцикла 9-ксантон-4 карбоновой кислоты.

Задачи исследования. Сравнительное изучение противоопухолевой активности 9-ксантон-4 карбоновой кислоты, содержащей в амидных группах фрагменты аза-18-краун-6, разобщенные с хромофором ксантона двумя (соед.1) и пятью (соед.2) метиленовыми группами (фрагменты аминокислот бета-аланина и эпсилон капроновой кислоты).

Материалы и методы. Исследования выполнены на перевиваемых солидных моделях опухолевого роста мышей - аденокарциноме молочной железы Са755 и раке легкого Льюис (LLC) по стандартным методикам. Лечение начинали через 48 ч после перевивки. Препараты готовили ex tempore. Режим лечения: 50 мг/кг внутрибрюшинно 5-

кратно с интервалом 24 ч. Критерием эффективности служили: торможение роста опухоли (ТРО) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ) мышей по сравнению с контролем.

Результаты. Соединения 1 и 2 сразу после окончания лечения тормозят рост Са 755 на 83 % и 52 %, а на 8-12 дни наблюдения на 57 % и 35 % соответственно. Оба соединения вызывают непосредственный эффект на раке легкого ЬЬС: торможение роста опухоли в пределах 59-61 % с сохранением эффекта только до 8-го дня. Аналогичные результаты получены при лечении животных соединением, которое мы использовали как позитивный контроль (фрагмент аза-18-краун-6, присоединенный к хромофору амидной связью): ТРО в пределах 52-68 % с сохранением эффекта до 8-го дня.

Выводы. Все изученные соединения обладают умеренной противоопухолевой активностью. Удаление краун-фрагмента (аза-18-краун-6) от хромофорной части молекулы (ксантона) остатками аминокислот не оказывает влияния на противоопухолевую активность изученных соединений.

Работа выполнена в рамках гранта РФФИ №05-03-32028-а.

И.В. Ярцева, Е.В. Игнатьева, Л.Г. Гатинская, Б.С. Кикоть Валидация метода количественного определения аранозы в субстанции

ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Араноза - высокоэффективный отечественный противоопухолевый препарат, применяющийся при лечении меланомы кожи.

Метод количественного определения аранозы в субстанции основан на измерении объема азота, образующегося при обработке препарата избытком разбавленной щелочи. Валидация метода проведена по параметрам: правильность и воспроизводимость, точность, селективность, линейность результатов. Оценку правильности и воспроизводимости методики проводили на 9 образцах препарата, определяя стандартное отклонение, доверительный интервал определения и относительную ошибку результата, которые составили 8 = 0,40; Ах = 0,32; £ = 0,32 % (Р= 95 %) соответственно. Численное значение коэффициента Стьюдента, рассчитанное по результатам анализа, Хх =1,85. Табличное значение коэффициента Стьюдента X (95 %, 9) = 2,31, т.е. Хх < X (95 %, 9), что позволяет считать, что метод свободен от систематических ошибок. Селективность метода обеспечивается свойством, присущим только аранозе, которое заключается в том, что при действии разбавленных щелочей араноза легко и количественно вступает в реакцию внутримолекулярного карбамоилирования с образованием К*,О3-карбонил-а-Ь-арабино-пиранозиламина и азота. Селективность метода подтверждена анализом 6 модельных смесей, в которых содержание аранозы составляло от 60 до 100 %. Метод линеен: коэффициент корреляции равен 0,985 и все определенные значения лежат на прямой, проходящей через 0.

Таким образом, проведенная валидация волюмометрического метода количественного определения аранозы показала, что метод позволяет получать достоверные результаты без систематической ошибки, обладает высокой селективностью, точностью и воспроизводимостью.