CC BY
19МАЙ -
ИЮНЬ 2 01 О
Рейтинговое голосование читателей
проводится на сайтах ФГУЗ РПОХБВ Роспотребнадзора www. rpohv.ru и журнала toxreview.ru.
Конкурс «Лучшая работа молодого ученого»
Лекарственная токсикология УДК 615.74
Панова Я.Е.
Пятигорская государственная фармацевтическая академия, Пятигорск
Химико-токсикологический анализ пароксетина в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Антидепрессант парок-сетин, обладающий высокой клинической эффективностью, при определенных условиях оказывает токсическое действие на организм. В связи с этим нами разработаны методики изолиро-
вания пароксетина из крови, его идентификация и количественное определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Данные методики могут быть включены в схему химико-токсикологического анализа проксетина.
Ключевые слова: пароксе-тин, химико-токсикологический анализ, кровь, высокоэффективная жидкостная хроматография, лабораторные животные (крысы).
Введение. Депрессия - это серьезная психическая патология с большим числом выраженных симптомов, от которой в мире ежегодно страдает примерно каждый четырнадцатый человек. Наиболее современные антидепрессанты - селективные ингибиторы обратного захвата серотонина. Из них можно выделить пароксетин, обладающий высокой клинической эффективностью [1]. Однако наряду с положительным терапевтическим эффектом препарат может оказывать токсическое действие на организм.
Пароксетин (под торговым названием «Паксил») входит в перечень наименований токсичных веществ, наиболее часто встречающихся при острых отравлениях [2].
Для установления причины отравления, выбора методов детоксикации, коррек-
ции схемы лечения важно контролировать содержание этого вещества в крови. В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы явилась разработка методик обнаружения и количественного определения пароксе-тина в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Материалы и методы исследования. Ранее было изучено одновременное влияние четырех факторов (природы органического растворителя, значения рН среды, наличия электролита и продолжительности экстракции) на процесс изолирования пароксетина из водных растворов [3], и были подобраны оптимальные условия изолирования: экстрагент - этилацетат, рН среды - 9, электролит - 5% раствор натрия хлорида. Продолжительность экстракции не оказывает существенного
влияния на выход изучаемого лекарственного вещества.
Поскольку пароксетин на 93-95% связывается с белками плазмы крови, в процессе разработки методики изолирования был использован кислотный и щелочной гидролиз. Выход изучаемого лекарственного вещества при использовании кислотного гидролиза оказался довольно высоким, поэтому в дальнейших исследованиях использовался данный вид гидролиза. В качестве объектов исследования использовали серию модельных смесей крови, содержащих определенное количество пароксети-на. Методика изолирования изучаемого лекарственного вещества сводилась к следующему: модельные пробы крови объемом 5 мл, содержащие пароксетин по 0,85, 1,2 и 2,0 мг (что соответствует токсическим дозам - 850, 1200
Токсикологический вестник
и 2000 мг), оставляли на сутки при комнатной температуре (18°С). Через сутки к модельным пробам крови (в шести повторностях) добавляли 25 мл 15% раствора кислоты хлороводородной. Полученную смесь нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 минут с воздушным холодильником. После проведенного гидролиза смеси охлаждали до комнатной температуры. К полученной жидкости добавляли 8 мл 50% раствора кислоты трихлоруксусной. Через 5-10 минут, после осаждения белковых веществ надосадоч-ную жидкость сливали и добавляли 30% раствор натрия гидроксида до рН среды 9, электролит - 5% раствор натрия хлорида и экстрагирова-
ли трехкратно этилацетатом (по 20 мл) в течение 5 минут. Полученные органические извлечения объединяли и выпаривали в токе теплого воздуха до сухого остатка. Сухой остаток растворяли в 10 мл спирта этилового и хрома-тографировали на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» производства ЗАО «ЭкоНо-ва» г. Новосибирск. Анализ проводили с использованием хроматографической колонки размером 2*75 мм, заполненной обращено-фазовым сорбентом РгопШЗй 120-5С18 АО. Подвижная фаза: элю-ент А - 0,1% раствор кислоты трифторуксусной, элюент Б - ацетонитрил,градиент от 10% элюента Б до 70% за 24
минуты, скорость потока -100 мкл/мин, аналитическая длина волны - 294 нм (соответствует максимуму поглощения пароксетина), время измерения - 0,18 сек, температура термостата колонки -350 С, объем пробы - 10 мкл. Параллельно проводили контрольный опыт.
Результаты и обсуждение. Идентификацию пароксети-на осуществляли по времени удерживания исследуемого лекарственного вещества (1 =16,5 ± 0,06 мин), величина
4 уд „ '
которой соответствовала времени удерживания его стандартного образца.
Результаты количественного определения пароксети-на в модельных пробах крови представлены в таблице 1.
Добавлено пароксетина, мг/5мл Метрологические характеристики
0,85 О = 73,43; Б О =1,7; А О = 4,38; 8 = 5,96%
1,00 О = 73,84; Б О = 1,68; А О = 4,31; 8 = 5,84%
1,20 О = 74,46; Б О = 1,66; А О = 4,27; 8 = 5,74 %
Таблица1
Результаты количественного определения пароксетина в крови (п=6)
Данные таблицы свидетельствуют о том, что разработанные методики анализа пароксетина позволяют идентифицировать и определять его количественное содержание в модельных пробах крови, содержащих токсические дозы исследуемого лекарственного вещества.
Кроме того, установлено, что с увеличением концентрации изучаемого лекарственного вещества в крови возрастает степень его экстракции и
уменьшается соответственно относительная погрешность анализа. Разработанная методика была апробирована на крови лабораторных животных. Экспериментальные исследования выполнялись в соответствии с правилами европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в эксперименте для научных целей.
Группе крыс (по 6 на каждую концентрацию) вводились перорально те же ток-
сические дозы пароксетина в пересчете на массу животных. Параллельно проводился контрольный опыт. Через 5 часов (время максимальной концентрации в плазме) собирали кровь и исследовали по разработанной методике. Идентификацию проводили по времени удерживания пароксетина. Установлено, что эндогенные соединения крови не мешают обнаружению пароксетина.
Таким образом, разработанные методики изолиро-
МАИ - ИЮНЬ 2010
вания пароксетина из крови, методики его идентификации и количественного определения могут быть использованы в их химико-токсикологическом анализе, как при острых, так и при смертельных отравлениях.
Выводы.
Предложены методики изолирования пароксетина из модельной пробы крови с выходом изучаемого лекарственного вещества около 74%.
Разработана методика идентификации и количественного определения парок-сетина в извлечениях из крови с помощью метода ВЭЖХ. Относительная погрешность составила не более 6%.
Разработанная методика апробирована на биологической пробе (крови) крыс, результаты которой свидетельствуют о возможности надежной диагностики отравления пароксетином.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Грибков О. В Наш тревожный век/О.Грибков// Новая аптека. -2007. - №4.- С. 2-3.
2. Приказ МЗ РФ № 460 от 29.12.2000 г. «Об утверждении учетной документации токсикологического мониторинга».
3. Панова Я.Е. Поиск оптимальных условий экстракции пароксетина из водных растворов / Я.Е.Панова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр./под ред. М.В.Гаврилина.
- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009.
- Вып. 64. - С. 319 - 320.
Panova Ya.Ye.
Chemical and toxicological analysis of paroxetine in blood by a method of high effective
liquid chromatography
State Pharmaceutical Academy of Pyatigorsk
Antidepressant paroxetine showing a high clinical effectiveness , can produce a toxic effect on the organism under certain conditions. In this connection methods for isolating paroxetine from blood, its identification and quantitative evaluation by the high effective liquid chromatography were developed. Those methods could be included in the scheme of chemical and toxicological analysis of paroxetine.
Материал поступил в редакцию 02.04.2010 г.
ХИМИЧЕСКАЯ mg s^ БЕЗОПАСНОСТЬ ^ ^ о-
Законодательство Китая по химическим веществам «Китайская версия РИЧ (REACH)»
В мая 2009г. в Китае были опубликованы предложения по законодательству, эквивалентному Европейскому регламенту РИЧ (REACH). Эти предложения, имеющие целью контролировать производство, импорт и использование химических веществ, аналогичны Регламенту EU REACH. Первоначальная редакция содержала очень мало обязательств в отношении рассматриваемых химических веществ в «изде-
лиях», в то время как изготовленные продукты рассматриваются в EU REACH, хотя, очевидно, что некоторые из наиболее опасных веществ будут в конце концов выведены из обращения в Китае, и это окажет влияние на ряд материалов, используемых в производстве, и возможно также на готовые изделия.
Китайское правительство опубликовало с изменениями законодательство 19 января 2010г., которое должно войти
в силу 15 октября 2010г. Этот недавно измененный регламент охватывает в основном химические вещества , а не изделия. Однако изменение от 2010г. включает теперь требования к новым химическим веществам, выделяемым из изделий в нормальных условиях использования. Это соответствует EU REACH, согласно которому регистрация химических веществ (> 1тонны) также требуется , если предусматривается их выделение.
