Характеристика В2-лимфоцитов у пациентов с серопозитивным ревматоидным артритом суставной формы Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Иммунология. 2017; 38(4)

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-226-228

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

4. Shcherbina A.U., Kosacheva T.G., Rumyantsev A.G. Intravenous immunoglobulin in pediatric practice. Voprosy sovremennoy meditsiny. 2010; 9(4): 115—8. (in Russian)

5. Sizyakina L.P., Andreeva I.I. Compensatory reactions of the immune system when a defect of synthesis of antibody-agammaglobulinemia. Rossiyskii allergologicheskii zhurnal. 2016; 2: 15—18.

6. Khoreva M.V., Nikonova A.S., Pashchenko O.E. [et al.] Effector functions and expression of m-RNA receptors TLR 2 and TLR 4 analysis in peripheral blood mononuclear cells of patients with primary immunodeficiency. Rossiyskii immunologicheskii zhurnal. 2014; 8(3): 616—8. (in Russian)

7. Martynov A.I., Pinegin B.V., Pashchenkov M.V. Innate immunity as a system of protection against anthropogenic factor effects on the human organism. [Vrozhdennyy immunitet kak sistema zashchity ot vozdeystviya na organism cheloveka antropogennykh faktorov]. Moscow: Mittel press; 2014. (in Russian)

8. Khaitov R.M., Pinegin B.V., Yarilin A.A. Manual of Clinical Immunology. Diagnosis of diseases of the immune system: a guide for physicians. [Rukovodstvo po klinicheskoy immunologii. Diagnostika zabolevaniy immunnoy sistemy: rukovodstvo dlya vrachey]. Moscow: GEOTAR Media; 2009. (in Russian)

Поступила 17.11.16 Принята в печать 14.04.17

© СИЗЯКИНА Л.П., ХАРИТОНОВА М.В., 2017 УДК 616.132.2-089.86]-078.33

Сизякина Л.П., Харитонова М.В.

ХАРАКТЕРИСТИКА В2-ЛИМФОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ С СЕРОПОЗИТИВНЫМ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ СУСТАВНОЙ ФОРМЫ

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 344022, г Ростов-на-Дону, Россия

Представлены результаты анализа изменения экспрессии мембранных антигенов на В-лимфоцитах при серопо-зитивном варианте течения суставной формы ревматоидного артрита. Исследовали иммунофенотип В-клеток по экспрессии маркеров ранней активации, степень зрелости В-клеток, готовность к апоптозу, взаимодействия В- и Т-лимфоцитов. Показано увеличение степени экспрессии маркеров ранней активации, костимуляторных (CD40, CD86) молекул на В-клетках CD40 L-лиганда на Т-хелперах и увеличение количества наивных В-лимфоцитов.

Ключевые слова: ревматоидный артрит; В-лимфоциты; иммунофенотип; активационные маркеры; ко-

стимулирующие молекулы; клетки памяти. Для цитирования: Сизякина Л.П., Харитонова М.В. Характеристика В2-лимфоцитову пациентов с серопо-зитивнымревматоидным артритом суставной формы. Иммунология. 2017; 38(4): 226-228. DOI: http://dx.doi. org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-226-228

SizyakinaL.P., KharitonovaM.V.

CHARACTERISTICS OF B2 LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH SEROPOSITIVE RHEUMATOID ARTHRITIS ARTICULAR FORM

Federal State budget institution of higher education «Rostov State Medical University» of the Russian Federation Ministry of Health, 344022, Rostov-on-Don, Russia

The results of the analysis of changes in the expression of membrane antigen on B lymphocytes with seropositive variant flow joint forms of rheumatoid arthritis. Investigated the immunophenotype of B cells for the expression of the early activation markers, maturity B cell commitment to apoptosis, the interaction of B and T lymphocytes. The increase amount of expression of the early activation markers, co-stimulatory (CD40, CD86) molecules on B cells, CD40 L-ligand T-helpers increase in number and naive B lymphocytes

Keywords: rheumatoid arthritis; B cells; immunophenotype; activation markers; co-stimulatory molecules memory cells.

For citation: Sizyakina L.P., Kharitonova M. V. Characteristics of B2 lymphocytes in patients with seropositive rheumatoid arthritis articular form. Immunologiya. 2017; 38(4): 226-228. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-226-228

For correspondence: Maria Vladimirovna Kharitonova, head. immunological laboratory of the clinic of Rostov state medical University, postgraduate Department of clinical immunology and Allergology of the faculty of Rostov state medical University, E-mail: [email protected]

conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Acknowledgments. The study had no sponsorship.

Received 17.11.16 Accepted 14.04.17

введение

В последние годы значительно возрос интерес к изучению роли В-клеток в патогенезе аутоиммунных ревматических заболеваний (РЗ) — ревматоидного артрита (РА), си-

Для корреспонденции: Харитонова Мария Владимировна, зав. иммунологической лабораторией клиники РостГМУ, аспирант кафедры клинической иммунологии и аллергологии ФПК и ППС РостГМУ, E-mail: [email protected]

стемной красной волчанки (СКВ), системной склеродермии (ССД) и др. [1, 3].

По современным представлениям, В-лимфоциты принимают участие в развитии и поддержании адаптивного иммунитета и аутоиммунных нарушений не только в качестве предшественников эффекторных аутоантитело-продуцирующих плазматических клеток или В-клеток памяти, но и, как иммунорегуляторные клетки, способные презентировать антигены и индуцировать активацию Т-клеток, дифферен-цировку фолликулярных дендритных клеток, эктопический

Immunology. 2017; 37(4)

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-226-228

ORIGINAL ARTICLE

лимфонеогенез и синтез цитокинов [1, 2]. В зависимости от наличия мембранного CD5-антигена В-лимфоциты подразделяются на две субпопуляции клеток: CD5+ (В1-клетки), и CD5- (В2-клетки) [2]. Хотя точная функциональная роль CD5+ до конца еще не изучена, для этих молекул была показана физическая ассоциация с антигенспецифическим ре-цепторным комплексом как на Т-, так и на В-лимфоцитах, а также возможность модулировать передачу сигналов через этот комплекс [4]. В1-лимфоциты, будучи продуцентом «естественных» нормальных антител, способны участвовать в противоинфекционной защите, способствовать клиренсу продуктов апоптоза и распада клеток, а также синтезировать аутоантитела [3]. Их участие в аутоиммунных процессах и патогенетическая значимость дискуссионны. В2-лимфоциты характеризуются значительным разнообразием иммуногло-булиновых рецепторов и усилением их сродства к антигенам в процессе иммунного ответа, формируют клетки памяти и принимают активное участие в адаптивном иммунитете [3]. Взаимодействие CD40-молекулы на В2-лимфоцитах с CD40 L, экспрессирующегося на активированных Т-лимфоцитах CD4+, индуцирует развитие гуморального иммунитета, вызывая зависимую от Т-лимфоцитов пролиферацию и диффе-ренцировку В-лимфоцитов, образование В-клеток памяти, подавление апоптоза В-клеток, изотипическое переключение синтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами. С другой стороны, В2-лимфоциты способствуют активации аутореактивных Т-клеток, экспрессируя костимуляторные молекулы CD80/ CD86 и CD40 [5—7]. Однако их роль и функциональная активность при ревматоидном артрите во многом спорны.

Таблица 1

Мембранные маркеры в2-лимфоцитов при серопозитивном варианте суставной формы ревматоидного артрита

Фенотип В2-лимфоцитов Больные РА, суставная форма, серопозитив-ный вариант Контрольная группа

Маркеры степени зрелости В2-

клеток

Наивные клетки

CD19+CD45RA+CD27-CD45+, % 7,9 ± 0,72* 5,65 ± 0,46

СВ19+СВ45КЛ+СВ27-СБ45+, -107л 0,24 ± 0,02* 0,17 ± 0,01

Зрелые В-клетки

CD3-CD19+CD45+, % 10,2 ± 0,80* 7,93 ± 0,45

CD3-CD19+CD45+, -107л 0,31 ± 0,02* 0,24 ± 0,01

Клетки памяти

CD19+CD45RЛ-CD27+, % 2,35 ± 1,1 2,4 ± 1,8

CD19+CD45RЛ-CD27+, -107л 0,07 ± 0,04* 0,072 ± 0,01

Индекс соотношения наивных 3,43 ± 0,6 2,36 ± 0,2

В2-клеток к В2-лимфоцитам

памяти, усл. ед.

Маркеры ранней активации

В2-клеток

CD19+CD23+CD45+, % 2,0 ± 0,26* 0,91 ± 0,14

CD19+CD23+CD45+, -107л 0,06 ± 0,02* 0,03 ± 0,002

CD19+CD25+CD45+, % 0,6 ± 0,13* 0,05 ± 0,01

CD19+CD25+CD45+, -107л 0,02 ± 0,001* 0,002 ± 0,0002

Маркеры апоптоза В2-клеток

CD19+CD95+CD45+, % 0,8 ± 0,13* 0,33 ± 0,03

CD19+CD95+CD45+, -107л 0,02 ± 0,001* 0,001 ± 0,0001

CD19+An+CD45+, % 0,9 ± 0,1* 0,50 ± 0,03

CD19+Лn+CD45+, -109/л 0,03 ± 0,001* 0,02 ± 0,003

Цель работы — изучение функциональных характеристик В-лимфоцитов с фенотипом CD3-CD19+CD45+ (В2-лимфоциты) при серопозитивном ревматоидном артрите суставной формы.

Материал и методы

Работу проводили на базе комплекса «Клиническая иммунология» Ростовского государственного медицинского университета. Обследовали пациентов (n = 33) с серопози-тивным вариантом суставной формы, средний возраст 53 ± 5 года, 2—3 степень активности, находившихся на стационарном лечении в терапевтическом отделении № 2 клиники РосГМУ Группу сравнения составили практически здоровые доноры (n = 10) в возрасте 40—50 лет.

Для исследования проводили забор периферической крови в утренние часы натощак (после получения информированного согласия пациента) в полипропиленовые пробирки, предварительно добавив в них гепарин (20 МЕ/мл крови).

Иммунологические методы исследования включали определение экспрессии следующих маркеров мембранных антигенов на В-лимфоцитах: зрелых В2 (CD19+CD5-CD45+), наив-ных В2 (CD19+CD45RA+CD27-CD45+), В2-клеток памяти (CD19+CD45RA-CD27+CD45+), маркеров ранней активации (CD19+CD23 +CD45, CD19+CD25+CD45+), костимули-рующие молекулы (CD19+CD40+CD45+, CD19+CD86+CD45+), готовность В-лимфоцитов к апоптозу (CD19+An+CD45 CD19+CD95+CD45+), а также взаимодействия Т-лимфоцитов с В-клетками (CD3+CD4+CD40L+CD45+), в реакции непрямой иммунофлюоресценции, с учетом результатов на проточном лазерном цитофлуориметре марки FC 500, производитель Beckcman Coulter (США), с использованием соответствующих однопараметрических моноклональных антител производства Beckman Coulter (США). Количественное определение иммуноглобулинов классов A, M, G в сыворотке крови проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини, с использованием коммерческих наборов производства «НПО «Микроген»» Минздрава России. Исследование циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводили методом селективной преципитации в ПЭГ

Математическую обработку полученных данных проводили с применением программы Statistica for Windows 7.0. Достоверность различий в группах оценивали с помощью непараметрических критериев Манна—Уитни и Вилкоксона, достоверным считали результаты при p < 0,05

результаты

При изучении количества В2-лимфоцитов отмечено увеличение как относительного 10,2 ± 0,80% (7,93 ± 0,45%), так

Таблица 2

Маркеры взаимодействия в- и Т-клеток при серопозитивном варианте суставной формы ревматоидного артрита

Показатель Больные РА, су- Контрольная

ставная форма, группа

серопозитив-

ный вариант

Примечание. Здесь и в табл. 2, 3: * — статистически достоверные различия со значениями контрольной группы прир < 0,05.

Экспрессия костимуляторных молекул на В2-лимфоцитах CD19+CD40+CD45+, % CD19+CD40+CD45+, -109/л CD19+CD86+CD45+, % CD19+CD86+CD45+, -107л Экспрессия лиганда на Т-хелперах CD4+CD40L+CD45+, % CD4+CD40L+CD45+, -107л

9,3 ± 0,74* 7,02 ± 0,42 0,3 ± 0,02* 0,12 ± 0,01 0,80 ± 0,14* 0,13 ± 0,01

0,02 ± 0,0002* 0,004 ± 0,001

0,8 ± 0,17* 0,02 ± 0,001*

0,29 ± 0,05 0,005 ± 0,002

Иммунология. 2017; 38(4)

DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-226-228

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Таблица 3

Показатели сывороточных иммуноглобулинов при серопозитив-ном варианте суставной формы ревматоидного артрита

Показатель Больные РА, суставная форма, серопозитивный вариант Контрольная группа

IgA, г/л 2,3 ± 0,1* 1,13 ± 0,01

IgM, г/л 1,4 ± 0,06* 1,07 ± 0,02

IgG, г/л 10,6 ± 0,25 10,35 ± 0,26

ЦИК, усл. ед. 119,0 ± 8,7* 65,15 ± 1,83

и абсолютного 0,31 ± 0,02Ч09/л (0,14 ± 0,0Ы09/л) содержания их в крови. Анализ соотношения наивных, зрелых и клеток памяти В2-лимфоцитов выявил увеличение количества наивных CD19+CD45RA+CD27-CD45+ и зрелых CD3-CD19+CD45+ клеток, тогда как количество клеток памяти CD19+CD45RA-CD27+CD45+ не отличалось от референтных значений. Данная взаимосвязь иллюстрирует индекс соотношения наивных В2-лимфоцитов к В2-клеткам памяти (табл. 1).

Оценивая функциональную активность В2-клеток, мы установили усиление экспрессии маркеров ранней CD19+CD23+CD45, CD19+CD25+CD45 активации (см. табл. 1).

На В2-лимфоцитах повышена экспрессия рецептора CD19+CD5-CD45+ готовности к апоптозу, что коррелирует с количеством апоптотирующих В-клеток в реакции с анек-синном — V (см. табл. 1).

Межклеточное взаимодействие В- и Т-клеток — важный компонент в поддержании процессов формирования В-клеточной аутотолерантности. Данный механизм реализуется через лиганд-рецепторное взаимодействие CD40 на В-лимфоцитах и CD40L на Т-хелперах и способствует проведению костимулирующего сигнала. Выявлено увеличение экспрессии на В2-лимфоцитах костимулирующих CD19+CD40+CD45+, CD19+CD86+CD45+ молекул. При этом отмечено увеличение относительного и абсолютного содержания Т-хелперов в крови 52,8 ± 1,94% (42,05 ± 0,29%), 0,96 ± 0,04Ч09/л (0,74 ± 0,02Ч09/л) и усиление экспрессии рецептора CD40L на них (табл. 2).

На высокую степень активности гуморального звена иммунной системы указывает также и значительное статистически достоверное повышение содержания сывороточных иммуноглобулинов классов ^А, IgM и ЦИК. При этом содержание IgG практически идентично аналогичному показателю контрольной группы, что указывает на существенное нарушение процессов межклеточной кооперации (табл. 3).

Обсуждение

Развитие иммунопатологического процесса при РА сопровождается дефектом В-клеточной толерантности и нарушением В-клеточной костимуляции Т-лимфоцитов, приводящей к синтезу аутоантител, индуцирует воспаление и деструкцию тканей организма [2].

Повышение экспрессии костимулирующей молекулы CD40L на Т-хелперах и CD40 на В-клетках обеспечивает усиление передачи сигнала через образовавшийся комплекс, что приводит к пролиферации и дифференцировке

В-лимфоцитов, образованию клеток памяти, аутореактив-ных В1-лимфоцитов, способных поддерживать постоянно пул низкоаффинных полиреактивных антител и нарушение процессов апоптоза в сторону его подавления [2]. Таким образом, при серопозитивном РА, несмотря на усиление экспрессии комплекса лиганд-рецептор, происходит нарушение передачи сигнала от В-клеток к Т-лимфоцитам, проявляющееся в увеличении образования наивных В2-лимфоцитов, что сопровождается увеличением синтеза иммуноглобулинов IgA, IgM. Наблюдается также нарушение процессов изоти-пического переключения иммуноглобулинов, что проявляется в отсутствии изменений в содержании иммуноглобулинов класса IgG (г/л) в сыворотке крови пациентов при серопозитивном РА. Данные процессы приводят к прогрессии течения заболевания.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Dorner T. Crossroads of B cell activation in autoimmunity: rationale of targeting B cells. J. Rheumatol. 2006; 33(Suppl. 77): 3—11.

2. Насонов Е.Л., ред. Анти-В-клеточная терапия в ревматологии: фокус на ритуксимаб. М.: ИМА-ПРЕСС; 2012.

3. Dorner T., Jacobi A.M., Lipsky P.E. B cells in autoimmunity. Arthr. Res. Ther. 2009; 11: 247.

4. Зурочка А.В., Хайдуков С.В. Проточная цитометрия в медицине и биологии. Екатеринбург: РИО УрО РАН; 2013.

5. Чепель Э.,Хейни М. Основы клинической иммунологии. 5-е изд. М.: ГЭОТАР-медиа; 2008.

6. Сизякина Л.П., Калашникова Т. А. Критерии прогноза эффективности терапии инфликсимабом пациентов с серопозитивным вариантом суставной формы ревматоидного артрита. Иммунология, аллергология, инфектология. 2011; 2: 20—5.

7. Сидорова Е.А. Королевство В-лимфоцитов. Медицинская иммунология. 2004; 3—5 (6): 176—85.

REFERENCES

1. Dorner T. Crossroads of B cell activation in autoimmunity: rationale of targeting B cells. J. Rheumatol. 2006; 33(Suppl. 77): 3—11.

2. Nasonov E.L. Anti-B-cell therapy in rheumatology: focus on rituximab. [Anti-V-kletochnaya terapiya v revmatologii: fokus na rituksimab]. Moscow: IMA-PRESS; 2012. (in Russian)

3. Dorner T., Jacobi A.M., Lipsky P.E. B cells in autoimmunity. Arthr. Res. Ther. 2009; 11: 247.

4. Zurotchka A.V., KhaydukovS.V. Flow cytometry in medicine and biology. [Protochnaya tsitometriya v meditsine i biologii]. Ekaterinburg: RIO UrO RAN; 2013. (in Russian)

5. Chepel E., Kheyni M. Essentials of clinical immunology. [Osnovy klinicheskoy immunologii]. 5-e Izd. Moscow: GEOTAR-media; 2008.

6. Sizyakina L.P., Kalashnikova T.A. Criteria for prediction of the effectiveness of infliximab therapy in patients with seropositive variant of the articular form of rheumatoid arthritis. Immunologiya, allergologiya, infectologiya. 2011; 2: 20—5.

7. Sidorova E.A. Kingdom b-lymphocytes. Meditsinskaya immunologiya. 2004; 3-5 (6): 176—85.

Поступила 17.11.16 Принята в печать 14.04.17