CC BY
16
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
териям ACR (2000). У пятидесяти двух пациентов был верифицирован диагноз СД2, который был установлен за год и более до развития клинико-рентгенологических проявлений ОА. Группу пациентов с ОА и СД2 (n = 52) составили 10 мужчин и 42 женщины, средний возраст которых был 64±0,9 лет, длительность заболевания — 10,5±1,1 лет (ОА) и 5±0,5 лет (СД2). В группе сравнения обследованы больные с ОА без СД2 (n = 46) сопоставимые с основной группой по полу (7 мужчин и 39 женщин), возрасту (средний возраст 61±1,1) и длительности ОА (6,7±0,6 лет). Проведено определение уровня IL-6, IL-18, адипонектина, Acol2Ab, AGC в сыворотке крови с использованием ИФА. Функциональный статус и влияние ОА на уровень боли, общее состояние здоровья оценивались по шкалам KOOS,WOMAC Knee, VAS. Проведен анализ уровня депрессивных расстройств по индексу PHQ-9 и параметров качества жизни (КЖ) по шкале SF-36.
Результаты. При сравнении групп пациентов выявлены достоверные различия содержания в сыворотке крови IL-6 - р = 0,0006, IL-18 - p = 0,0012, Acol2Ab - p = 0,004, AGC — p = 0,005. В группе больных ОА и СД2 показана достоверная корреляционная взаимосвязь между сывороточным уровнем IL-6 и значениями болевого синдрома (VAS г = 0,3, p = 0,002), функционального статуса (KOOS ADL г = -0,2, p = 0,004; SF-PF г = -0,3, p = 0,01), параметрами КЖ (SF-VT г = -0,3, p = 0,01; SF-SF г = -0,2, p = 0,04), также между такими показателями как Acol2Ab и общим самочувствием по VAS (г = 0,5, p = 0,003). Среди пациентов с ОА, без СД2 найдены статистически значимые взаимосвязи между уровнем Acol2Ab в сыворотке крови и значениями болевого синдрома (SF-BP г = 0,5, p = 0,002) функционального статуса (WOMAC total г = -0,3, p = 0,004; KOOS sports г = 0,4, p = 0,002; SF-PH г = 0,5, p = 0,004) и параметрами качества жизни (SF-RP г = 0,4, p = 0,003). По другим изучаемым показателям в данных выборках статистически значимых взаимосвязей найдено не было.
Заключение. У больных ОА с СД2 и без выявлены достоверные различия уровня провосполительных цитокинов и маркеров деградации ВКМ хрящевой ткани ( IL-6, IL-18, Acol2Ab, AGC ) в сыворотке крови. Тяжесть коморбидной патологии проявляется в выраженных функциональных нарушениях, ускоренной прогрессии, ухудшении КЖ, наличии деструктивных форм ОА, что подтердждается высоким уровнем данных иммунологических показателей.
ИММУНОФЕНОТИП В-ЛИМФОЦИТОВ ПРИ СЕРОНЕГАТИВНОМ ВАРИАНТЕ ТЕЧЕНИЯ ВИСЦЕРАЛЬНОЙ ФОРМЫ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА
Харитонова М.В., Сизякина Л.П.
ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет», Ростов-на-Дону, Россия
Ревматоидный артрит (РА) — аутоиммунное системное заболевание, проявляющееся различными формами и вариантами течения заболевания (Насонов Е.Л., 2012). РА с системными появлениями — это высокоактивная, генерализованная форма болезни с клиническими проявлениями, такими как нейропатия, перикардит, плеврит, васкулит, поражение глаз (Насонов Е.Л., 2013). Несмотря на значительный прогресс в понимании иммунопатогене-за РА с внесуставными проявлениями и участия в нем множества клеток иммунной системы, остается в настоящее время дискуссионным вопрос об участии В-лимфоцитов с разными иммунофенотипами и процессов костимуля-торного взаимодействия Т и В-лимфоцитов в патогенезе данного заболевания. В связи с этим целью работы являет-
ся изучение иммунофенотипа В-клеток и процессов межклеточной кооперации при системных проявлениях РА.
Материалы и методы. Обследовано 10 пациентов с серонегативным вариантом висцеральной формы РА, в стадии обострения, 2-3 степень активности. Контрольную группу составили 10 практически здоровых доноров в возрасте 30-40 лет.
Иммунофенотип В-лимфоцитов изучали по экспрессии следующих мембранных антигенов на данных клетках: CD19+CD45RA+CD27-CD45+, CD19+CD45RA-CD27+CD45+, CD19+CD23+CD45, CD19+CD25+CD45+, CD19+HLA DR+CD45+, CD19+CD40+CD45, CD19+CD95+CD45+, в реакции непрямой иммунофлюорес-ценции, с учетом результатов на проточном лазерном ци-тофлуориметре. Уровень сывороточных иммуноглобулинов классов А,М^ оценивали в реакции радиальной иммуно-дифффузии в геле по Манчини. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом селективной преципитации в полиэтиленгликоле 6000 (ПЭГ). Для математической обработки полученных данных использовали программу Statistica 7.0. Достоверность различий в группах оценивали с помощью непараметрических критериев Ман-на—Уитни и Вилкоксона. Достоверными считались результаты при р < 0,05.
Анализ относительного количества зрелых В-клеток, у пациентов с внесуставными проявлениями РА, по сравнению с группой контроля выявил статистически достоверное их увеличение CD19+CD3-CD45+ (11,1±1,0 и 8,0±0,45% соответственно), однако при этом отмечается увеличение наивных В-лимфоцитов CD19+CD45RA+CD27-CD45+ (8,18±0,68 и 5,6±0,46%), тогда как В-клетки памяти CD19+CD45RA-CD27+ CD45+ не отличались от референтных значений. Отмечено увеличение экспрессии молекулы НЬА DR (9,78±0,38 и 7,39±0,41%) на мембране CD19+CD3-CD45+ клеток.
Анализ показателей межклеточной кооперации выявил, что у пациентов с внесуставными появлениями РА было выявлено статистически значимое увеличение экспрессии костимулирующей молекулы CD19+CD40+CD45+ (9,59±0,65 и 7,02±0,42%) на В-лимфоцитах и CD40L лиганда на Т- хелперах CD3+CD4+CD45+ (0,66±0,15 % и 0,29±0,05%). При изучении функциональной активности В-клеток выявлено усиление экспрессии маркеров ранней активации CD19+CD23+CD45 (2,72±0,18 и 0,91±0,14%), CD19+CD25+CD45+ (0,31±0,01 и 0,05±0,01%), тогда как процессы элиминации активированных клеток характеризовались увеличением экспрессии рецептора CD19+CD95+CD45+ готовности к апоптозу (0,66±0,12 и 0,33 ±0,03% соответственно).
В гуморальном звене иммунной системы наблюдается статистически достоверное повышение содержания сывороточных иммуноглобулинов классов трех классов IgА (1,99±0,1 и 1,13±0,01 г/л), ^ (1,5 ±0,07 и 1,07±0,02 г/л), IgG (11,29±0,24 и 10,35±0,26 соответственно), что свидетельствует об интенсификации синтеза иммуноглобулинов.
Таким образом, у пациентов с висцеральным вариантом течения серонегативного РА выявлено увеличение наивных В-клеток и клеток с иммунофенотипом зрелых В-лимфоцитов, усилением экспрессии на них маркеров ранней активации и готовности к апоптозу. Анализ интенсивности процессов межклеточной кооперации выявил повышение экспрессии костимулирующей молекулы CD40L на Т-хелперах и CD40 на В- клетках, что обеспечивает усиление передачи сигнала через образовавшийся комплекс, что обуславливает более агрессивный характер течения серонегативного РА с системными проявлениями.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ТАБЛИЦА. ДЕЙСТВИЕ ГИДРАЛАЗИНА, SAM И ГЕНИСТЕИНА НА ИНВАЗИЮ И МИГРАЦИЮ ФСК БОЛЬНЫХ РА IN VITRO (К ТЕЗИСАМ ШНАЙДЕР М.А. И ДР.)
Контроль Миграция P Инвазия P
45,21 (4,63) 38,34 (7,37)
SAMe 25 мкг 39,15 (1,84) < 0,001 21,03 (4,2) < 0,001
100 мкг 38,79 (3,02) < 0,001 23,72 (4,51) < 0,001
Гидралазин 5 ммоль 38,88 (1,78) < 0,001 21,7 (3,67) < 0,001
20 ммоль 38,8 (1,72) < 0,001 22,34 (4,39) < 0,001
Генистеин 5 мкг 37,58 (1,6) < 0,001 16,88 (8,01) < 0,001
20 мкг 38,36 (1,7) < 0,001 21,94 (6,42) < 0,001
Примечание. Представлены средняя и стандартная ошибка средней процента мигрировавших клеток.
ВЛИЯНИЕ МОДУЛЯТОРОВ МЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК НА МИГРАЦИОННУЮ И ИНВАЗИВНУЮ СПОСОБНОСТЬ ФИБРОБЛАСТОПОДОБНЫХ СИНОВИАЛЬНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ IN VITRO
Шнайдер М.А., Ширинский В.С., Ширинский И.В., Калиновская Н.Ю.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск, Россия
Введение. Одним из ключевых свойств фибробласто-подобных синовиальных клеток (ФСК) больных ревматоидным артритом (РА) является способность к миграции и инвазии. Предполагается, что стабильно активированный деструктивный фенотип ФСК при РА обусловлен эпигенетическими изменениями, включая изменения в метилировании ДНК. Следовательно, перспективной терапевтической стратегией в лечении РА может быть использование модуляторов метилирования ДНК. В настоящее время существует недостаток данных, оценивающих влияние известных природных и синтетических модуляторов метилирования ДНК на миграцию и инвазию ФСК больных РА. Мы выдвинули гипотезу, что противоположно направленные модуляторы метилирования ДНК могут
либо увеличить, либо уменьшить миграционную и инва-зивную способность ФСК больных РА.
Цель. Оценить влияние гиперметилирующих ^-Аденозил^-метионина, генистеина) и гипометили-рующих (гидралазина) агентов на миграционную и инва-зивную способность ФСК больных РА in vitro.
Материалы и методы. ФСК были выделены из синовиальной ткани, полученной в ходе операции по замене сустава от 9 пациентов больных РА. Синовиоциты культивировали в присутствии хемоаттрактанта (5% эмбриональной телячьей сыворотки) и модуляторов метилирования ДНК: SAM (25, 100 мкг / мл), генистеина (5, 20 мкг / мл) или ги-дралазина (5, 20 ммоль / мл). Оценку миграционной и инва-зивной способности проводили с использованием Transwell 96 — луночных планшетов (модифицированные камеры Бойдена).
Результаты. В таблице представлены данные о влиянии гидралазина, SAM и генистеина на показатели инвазии и миграции ФСК больных РА. Все исследуемые модуляторы метилирования ДНК статистически значимо уменьшали показатель инвазии клеток на 55%, а показатель миграции клеток на 15%. Дозозависимого эффекта не отмечено.
Заключение. Таким образом, SAMe, гидралазин и гени-стеин уменьшают миграционную и инвазивную способность ФСК больных РА, вне зависимости от их модуляционных свойств ДНК. Вероятным объяснением этих эффектов является плейотропное действие этих соединений.
