CC BY
73
характер морфологических изменений слизистой оболочки толстого кишечника и генетический i полиморфизм il-1ra, il-1b, il-4, tnf-a у больных
1 с синдромом раздраженного кишечника
£ Сарсенбаева А. С., Иванова Е. Л., Бурмистрова А. Л., Дроздов И. В.
§ ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава РФ, Челябинск
| Иванова Екатерина Леонидовна
s 454048, г. Челябинск, ул. Блюхера, 5а, кв. 40
2 Тел. 8 (963) 475-20-88 E-mail: [email protected]
РЕЗЮМЕ
Целью данной работы было оценить взаимосвязь между вариантами течения СРК и их ассоциации с генетическим полиморфизмом и межгенными взаимодействиями генов цитокинов. Материал и методы. Выборка состояла из 81 больного, диагноз верифицировался согласно Римским критериям III. Генотипирование полиморфизма IL-1 Ra, IL-1b, IL-4, TNF=a осуществлялось методом ПЦР. Статистическая обработка: непараметрический анализ множественных сравнений, иерархический лог-линейный анализ. Установлена взаимосвязь клинических вариантов с морфологическими изменениями слизистой оболочки толстого кишечника, ассоциация между тендерными характеристиками больных с СРК и генетическим полиморфизмом цитокинов.
Ключевые слова: синдром раздраженного кишечника; вариабельность течения; генетический полиморфизм; гены цитокинов
SUMMARY
The aim of this study was to evaluate the presence or absence of a relationship between the variants of the course of IBS and their association with genetic polymorphisms of genes and intergenic interaction of cytokines.
Materials and methods. The sample consisted of 81 patients, the diagnosis was verified according to the criteria of the Rome III, were isolated psychopathological, morphological complications, extra-intestinal symptoms. Polymorphism genotyping IL-1Ra, IL-1 b, IL-4, TNFa performed by PCR. Statistical treatment are a non-parametric analysis of multiple comparisons, hierarchical log-linear analysis. It is found out the relation between the clinical variants with morphological changes of the mucous membrane of the large intestine, the association between gender characteristics of patients with IBS is established and with genetic polymorphisms of cytokines.
Keywords: irritable bowel syndrome; the variability course; genetic polymorphism; cytokine genes
CO ОЛ
Синдром раздраженного кишечника (СРК), иначе irritable bowel syndrome (IBS), — это распространенная биопсихосоциальная функциональная патология, диагностика которого основывается на клинической оценке устойчивой совокупности симптомов (Римские критерии I и II, III), относящихся к дистальным отделам кишечника, ограничена исключением симптомов «тревоги», органических заболеваний и необходимостью повторного пересмотра диагноза по результатам первичного курса лечения [1].
Актуальность проблемы СРК определяется следующими главными факторами: высокая распространенность, значительное снижение качества жизни пациентов, низкая эффективность лечения, высокие экономические затраты на лечение больных СРК [2].
Существующие на сегодняшний день данные свидетельствуют о генетической предрасположенности к развитию СРК, особое значение придается генетическому полиморфизму цитокинов. Результаты зарубежных исследований, посвященных изучению
полиморфизма генов цитокинов с мультифакторной патологией, крайне противоречивы [3].
Многообразие клинических проявлений и вариабельность течения СРК позволяют нам провести анализ множественных сравнений для выявления ассоциации между группами больных с различными вариантами морфологических изменений слизистой толстого кишечника СРК, что необходимо для формирования групп риска, выявления первопричины развития симптомокомплекса СРК.
Цель работы — изучить взаимосвязь между клиническими вариантами СРК, морфологическими проявлениями, гендерной характеристикой и генетическим полиморфизмом И-Ша, 1Ь-1Ь, И-4, ТОТ-а.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Обследован 81 человек русской этнической группы с диагнозом СРК. Пациенты находились на лечении в гастроэнтерологическом отделении Дорожной клинической больницы ОАО «РЖД» на станции Челябинск в период с 2001 по 2007 год. Для диагностики заболевания использовались Римские критерии II (1999) и III (2006). Распределение по полу среди больных было следующим: женщины — 58 (71,6%), мужчины — 23 (28,4%), что согласуется с литературными данными о преобладании женщин, больных СРК [2]. Средний возраст больных — 41,9 ± 1,3 года. Средний возраст начала заболевания составил 32,8 ± 1,4 года, длительность заболевания у большинства пациентов от 3 до 10 лет.
Обследование пациентов проводилось по утвержденным Медико-экономическим стандартам Минздрава в соответствии с Приказом МЗ РФ № 125, 1998 год.
Контрольную группу представляли потенциальные доноры костного мозга ОГУП «Челябинская областная станция переливания крови»: 213 человек, из них мужчин — 119 (55,9%), женщин — 94 (44,1%). Средний возраст составил 34,6 ± 0,75 года. Этническая принадлежность больных СРК и здоровых лиц определялась согласно рекомендациям Международного Уоркшопа (1980, Лос-Анджелес, США).
ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМЫХ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ
В исследовании были использованы наборы для ти-пирования генов цитокинов Института химической биологии и фундаментальной медицины (ИХБФМ СО РАН). Детекция полученных ампликонов проводилась методом вертикального электрофореза в 8%-ном полиакриламидном геле.
Для исследования полиморфизма по одному нуклеотиду (8ОТ) в 5-й экзоне гена ГИЬ (положение +3953) использовали разновидность ПЦР — ПДРФ — анализ полиморфизма длины рестрик-ционных фрагментов. В основе метода лежит ПЦР, с последующей обработкой ампликонов ферментом
эндонуклеазой рестрикции Taq I при температуре +65 °С в течение 8 часов.
При гидролизе амплификационного фрагмента гена IL-1b выявлялось три фрагмента размерами 550, 146 и 404 п. н. Фрагмент 550 п. н. соответствует амплификационному фрагменту, не подвергнувшемуся гидролизу, что указывает на наличие аллеля IL-1b (+3953) Т, гомозиготное состояние обозначено m/m (сокращение от mutant — мутантный аллель).
При наличии аллеля C происходит разрезание ампликона на два фрагмента 146 и 404 п. н., гомозиготность по этому аллелю обозначена w/w (сокращение от wild — аллель дикого типа), а гетерозиготное состояние С/Т в данном исследовании обозначено как w/m [1; 5].
Для определения полиморфизма типа варьирующего числа тандемных повторов (VNTR) в гене IL-1Ra использовали ПЦР с праймерами, фланкирующими полиморфный регион в пределах второго интрона, в котором находится VNTR участка длиной 86 п. н.
В результате амплификации мы идентифицировали фрагменты ДНК размерами 438, 524, 610, и 696 п. н. соответственно с 2, 3, 4 и 5 копиями тандемных повторов [1; 5; 6]. Эти аллели были обозначены как 2R, 3R, 4R и 5R.
Для исследования VNTR IL-4 проводили ПЦР с праймерами, фланкирующими полиморфный регион в пределах 3-го интрона, в котором находится вариабельное количество тандемных повторов размером 70 н. п. В результате амплификации идентифицировали фрагменты ДНК размерами 255 и 325 н. п. соответственно с 2 и 3 копиями тандемных повторов. Эти аллели были обозначены как 2R и 3R [1].
Типирование SNPs в гене TNF-a — ПДРФ-анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов: амплификация с последующей обработкой ампликонов эндонуклеазами рестрикции NcoI (37 °С в течение 16 часов) для положения -308 (G/A), TaiI для положения -863 (65 °С в течение 8 часов).
СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА
В работе использовались стандартные иммуноге-нетические критерии: критерий х2 — для 1 степени свободы и выше, критерий хи-квадрат с поправкой Йетса на непрерывность применялся для одной степени свободы, когда абсолютные частоты были меньше 10, критерий Фишера использовался при абсолютных частотах меньше 5.
Оценка взаимосвязи между вариантами СРК, генетическим полиморфизмом исследуемых генов проводилась с использованием непараметрического анализа множественных сравнений (метод ANOVA Краскела — Уоллиса, медианный тест, в программе Statistica 6.0), позволяющего сопоставить три и более групп по одному количественному
Б >■
о
So
1_ ° ОД
<s ое
и о НУ
№ о О -
¡Г5
и га
L Б
га
ü ш
J S I-0 ш с га а ш
I-
о
OJ
сэ т
или порядковому признаку независимо от вида его распределения в группах.
Для анализа ассоциации комбинаций генотипов с предрасположенностью/устойчивостью к СРК применялся иерархический лог-линейный анализ, в котором рассчитывались критерий максимального правдоподобия С или х2МЬ и критерий Пирсона х2 и отклонения Фримана-Тьюки. Для оценки вероятности возникновения признака (заболевания или какой-то клинической характеристики) в зависимости от генетического варианта (аллеля, генотипа, комбинации генотипов) применялся критерий отношения шансов (ОЯ) с расчетом 95%-го доверительного интервала (С1) — отношение шансов в одной группе к шансам этого же событии в другой группе. Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р < 0,05, незначимыми при р > 0,10; для промежуточных значений р (0,05 < р < 0,10) обсуждали тенденцию к различиям [11].
Оценку ассоциации сочетаний генотипов исследуемых генов с вариабельностью СРК — трех-факторные взаимодействия проводили с помощью иерархического лог-линейного анализа.
На последнем этапе иерархического лог-линейного анализа достоверность различий в частотах встречаемости аллелей и генотипов для одной степени свободы рассчитывалась согласно Х2-критерию, критерию х2 с поправкой Йетса на непрерывность и точному двухстороннему критерию Фишера. Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р< 0,05, незначимыми при р > 0,10; для промежуточных значений р (0,05 < р < 0,10) обсуждали тенденцию к различиям.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
На первом этапе в качестве группирующего критерия были выбраны клинические варианты СРК (табл. 1). Преобладающим в клинической картине был синдром запора (58,1%), а морфологическими проявлениями поражения слизистой оболочки толстой кишки были изменения воспалительного характера (50,7%).
При этом была установлена статистическая зависимость клинического варианта СРК и морфологических изменений слизистой оболочки кишечника
Таблица 1
(X2 = 16,18, р = 0,001, 3 степени свободы). Как видно из рисунка, у больных СРК с запором преобладают воспалительные изменения слизистой кишечника, а в группе с неклассифицируемым вариантом СРК и смешанным вариантом СРК не были выявлены морфологические изменения слизистой оболочки кишечника.
Поиск ассоциации между генетическим полиморфизмом 1Ь-Ша, 1Ь-1Ь, 1Ь-4, ТОТ-а и вариабельностью течения осуществлялся также с использованием непараметрического анализа множественных сравнений. Отличительной особенностью больных СРК оказалось наличие ассоциации между генотипами 1Ь-1Ь и полом больных (метод Краскела — Уоллиса, Н = 8,25, 2 степени свободы, р = 0,016, медианный тест х2 = 8,36, 2 степени свободы, р = 0,0153). Данный факт реализуется в том, что у женщин, больных СРК отсутствуют носители гомозиготного генотипа по высокопродуктивному аллелю ТТ 1Ь-1Ь (0% У8 9,7%, p = 0,0129). Можно предположить, что носительство данного генотипа снижает вероятность развития СРК у женщин. Для генотипов других исследуемых генов не было установлено ассоциации с вариантами СРК.
ОЦЕНКА АССОЦИАЦИИ МЕЖГЕННЫХ И ВНУТРИГЕННЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ВАРИАБЕЛЬНОСТЬЮ ТЕЧЕНИЯ СРК
Из всех возможных взаимодействий нами были выбраны те, которые содержат генотипы 1Ь-1Ь, поскольку для него установлены статистически достоверные ассоциации с полом больных, а также SNP -863 С/А ТОТ-а, так как ранее нами было показано изменение частот его генотипов у больных СРК в сравнении с практически здоровыми лицами [8].
В ходе иерархического лог-линейного анализа межгенной комбинации 1Ь-1Ь (+3953С/Т) — ТОТ-а (-863С/А) установлена ассоциация с полом больных (С = 14,8; 8 степеней свободы, р = 0,07, тенденция), вероятно ведущее значение в этой комбинации принадлежит генотипам 1Ь-1Ь и одновременно отсутствие ассоциации с клиническими вариантами СРК и морфологическими изменениями слизистой оболочки толстой кишки.
При изучении полиморфизма генов цитокинов на первом этапе был проведен анализ распределения частот встречаемости аллелей и генотипов
КЛИНИЧЕСКИЕ ВАРИАНТЫ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У БОЛЬНЫХ СРК
Больные СРК, п = 81
Клинические варианты СРК п, % Характер морфологических изменений п, %
Диарея 16 (19,7%) Атрофические изменения 18 (22,2%)
Запор 47 (58,1%) Воспалительные изменения 41 (50,7%)
Неклассифицируемый, смешанный варианты 18 (22,2%) Нет изменений 22 (27,1%)
Зависимость морфологических изменений от клинического варианта СРК
35
30
25
20
15
10
5
s il) 0
CI
V
ц
п
m
! >
il) 35
т
^ 30
п
25
20
15
10
5
0
л
1 2 3
воспаление, атрофия, без изменений диарея, 16 человек
1 2 3
воспаление, атрофия, без изменений запор, 47 человек
Л
1 2 3
воспаление, атрофия, без изменений смешанный вариант, 8 человек
1 2 3
воспаление, атрофия, без изменений неклассифицируемый вариант, 10 человек
морфология
Варианты течения СРК и характер морфологических изменений слизистой оболочки толстого кишечника
Б >■
о
So
1_ о OS
<s ое
и о НУ
№ о
а -
F
и IB L Б
га
V Ü ш
Т
s
H
о ш с га а ш н
генов исследуемых цитокинов в группах больных СРК и условно здоровых лиц русской популяции Челябинской области. Частоты встречаемости аллелей и генотипов генов ^-Ша, ^-1Ь, IL-4, — 308С/А ТОТ-а не отличались между исследуемыми выборками. Различия были установлены только для частот аллелей и генотипов в точке -863 ТОТ-а (на уровне тенденции). Группа больных СРК характеризовалась сниженной частотой аллеля с заменой -863*А, связанного с повышением продукции TNFа [7] и повышенной частотой другого — частого аллеля -863*С (на уровне тенденции х2 = 3,23, p = 0,0722 для одной степени свободы), но по критерию отношения шансов (OR) такое перераспределение частот аллелей не имеет диагностической значимости ^ = 0,57, 95%СТ 0,3 - 1,06).
Больные СРК также отличались от условно здоровых лиц повышенной частотой генотипа -863 СС ТОТ-а (82,5% против 72,8%, х2 = 2,97, p = 0,0848 для одной степени свободы, на уровне тенденции), но как маркер предрасположенности к СРК данный генотип выступать, вероятно, не может, так как расчет критерия OR показал, что его доверительный интервал находится в диапазоне, захватывающем единицу: OR = 1,76, 95%СТ 0,92 - 3,39.
Таким образом, установленные изменения частот аллелей и генотипа СС полиморфного сайта -863 промоторной области гена ТОТ-а могут быть особенностью группы больных СРК, но значимости для формирования предрасположенности к заболеванию, скорее всего, не имеют.
Следующая задача в исследовании посвящена установлению наличия или отсутствия изменений в частотах встречаемости аллелей и генотипов генов цитокинов у больных СРК в зависимости от пола.
У женщин, больных СРК, выявлены следующие особенности:
— повышена частота аллеля 2R IL-1Ra (на уровне тенденции, х2 = 2,82, p = 0,093, OR = 1,54, 95%CI 0,93 - 2,5) за счет увеличения количества носителей гомозиготного генотипа 2r/2r (p = 0,09, OR = 2,64, 95%CI 0,88 - 7,9). Однако общий эффект взаимодействия между частотами аллелей и генотипов IL-1Ra и предрасположенностью к СРК у женщин оказался незначимым;
— установлен вклад +3953 SNP IL-1ß в предрасположенность к СРК у женщин (G = 6,64, df = 2, p = 0,036). Обнаружено, что статистически значимый эффект достигался за счет изменения частоты генотипа T/T (0% против 9,57% в контроле, р = 0,013);
— группа больных СРК характеризовалась повышенной частотой гетерозиготного генотипа -308G/A (33,9% против 20,21%, х2 = 3,57 p = 0,06, OR = 2,02, 95%CI 0,96 - 4,26) и пониженной частотой гомозиготного генотипа G/G -308 TNF-a (64,41% против 77,66%, х2 = 3,20 p = 0,07, OR = 0,52, 95%CI 0,25 - 1,08). Однако по критерию отношения шансов такое изменение частот не имело прогностического значения для расчета вероятности развития предрасположенности к СРК у женщин.
Частоты аллелей и генотипов IL-4, — 863 C/A TNF-a не различались между исследуемыми группами.
Несмотря на то что группа мужчин, страдающих СРК, по численности была значительно меньше группы женщин, анализ распределения частот встречаемости аллелей и генотипов генов цитоки-нов у условно здоровых и больных СРК мужчин позволил выявить различия в частотах встречаемости
m
аллелей и генотипов 1Ъ-Ша и гомозиготного генотипа по редкому аллелю -308 А/А ТОТ-а. У мужчин, страдающих СРК, чаще встречался генотип -308 А/А ТОТа (9,09% против 0,84%, р = 0,064, ОЯ = 11,8, 95%С1 0,99 - 139,2), но общий эффект оказался значим на уровне тенденции.
Более информативными оказались различия в распределении частот встречаемости аллелей 5 и генотипов 1Ь-Ша. У мужчин, страдающих СРК, 5 были снижены частоты аллеля 2Я и его гетерози-ё готного генотипа 4К./2К. по сравнению с контролем. г Согласно критерию отношения шансов носитель° ство аллеля с 2-кратным повтором уменьшает веро-I ятность возникновения СРК по сравнению с носи* тельством других аллелей 1Ь-Ша (ОЯ = 0,38, 95% С1 I 0,15 - 0,94), но только в гетерозиготном состоянии | вместе с аллелем 4Я (ОЯ = 0,31, 95% С10,097 - 0,97).
Таблица 2
В свою очередь, присутствие аллеля 4Я в гомозиготном состоянии повышает вероятность развития СРК у мужчин: для носительства аллеля 4Я коэффициент ОЯ составил 2,4, 95% С11,012 - 5,62, для генотипа 4Я/4Я — ОЯ = 3, 95% С1 1,09 - 8,27.
Таким образом, анализ групп больных с учетом половой принадлежности позволил установить маркеры предрасположенности к СРК среди исследуемых генов цитокинов для женщин и мужчин, тогда как при объединении в общую выборку установленные различия нивелировались.
Одновременно была предпринята попытка анализа ассоциации межгенных и внутригенных взаимодействий генов цитокинов у больных СРК с помощью иерархического лог-линейного анализа, в ходе которого установлены следующие особенности, представленные в табл. 2 и 3.
КОМБИНАЦИИ 8ОТ8 -308 G/A -863 C/A TNF-A У БОЛЬНЫХ СРК
Варианты сочетания генотипов Пациенты с СРК Группа контроля Достоверность различий
TNFa -308 TNFa -863 80 % 213 %
AA aa 0 0 0 0 —
AA ca 0 0 0 0 —
AA cc 3 3,75 3 1,40845 р = 0,3531
GA aa 0 0 0 0 —
GA ca 5 6,25 6 2,8169 0,98, р = 0,3225
GA cc 19 23,75 45 21,1268 0,15, р = 0,7028
GG aa 0 0 3 1,40845 р = 0,5629
GG ca 9 11,25 49 23,0047 4,35, р = 0,0371 ОЯ = 0,57, 95%СТ 0,19 - 0,91; ЯЯ = 0,49, 95% С10,25 - 0,95
GG cc 44 55 107 50,2347 0,82, р = 0,3666
Таблица 3
OJ
m
КОМБИНАЦИИ SNPS -308 G/A TNF-A +3953 С/Т IL-1B У БОЛЬНЫХ СРК
Варианты сочетания генотипов Пациенты с СРК Группа контроля Достоверность различий
IL-1b TNFa -863 80 % 213 %
TT AA 0 0 0 0
TT CA 0 0 4 1,88 р = 0,5777
TT CC 3 3,75 10 4,69 р = 1,0000
CT AA 0 0 2 0,94 р = 1,0000
CT CA 9 11,25 16 7,51 0,62, р = 0,4320
CT CC 19 23,75 58 27,23 0,36, р = 0,5465
CC AA 0 0 1 0,47 р = 1,0000
CC CA 5 6,25 35 16,43 4,29, р = 0,0384 ОЯ = 0,34, 95% С10,13 - 0,9
CC CC 44 55 87 40,85 4,71, р = 0,0299 ОЯ = 1,8, 95% С11,05 - 2,98
Как показал иерархический логлинейный анализ (табл. 2 и 3), предрасполагающая роль для развития заболевания характерна для комбинаций генотипов: ТОТа -3080/0 — -863 С/А (11,25% У8 23,0% х2 = 4,35, р = 0,0371, OR = 0,57, 95%С1 0,19 - 0,91),
^-1Ь +3953 С/С--863С/С ТОТ-а (55% У8 40,85%,
X2 = 4,71, р = 0,0299, OR = 1,8, 95% С11,05 - 2,98) и сочетание ^-1Ь +3953 С/С--863С/А ТОТ-а снижает
вероятность развития СРК (6,25% У8 16,43 х2 = 4,29, р = 0,0384, OR = 0,34, 95%С1 0,13 - 0,9), ведущее значение в данных комбинациях отводится гетерозиготному генотипу -863С/А ТОТ-а.
Как правило, в патогенез генноопосредованных заболеваний вовлекается много разных функционально взаимосвязанных генов той или иной локальной генной сети. Наряду с главными генами, провоцирующими начало болезни, всегда присутствуют другие, второстепенные, в том числе многочисленные гены-модификаторы, фенотипические эффекты которых во многом определяются средо-выми факторами. К таким генам относятся гены воспаления, в частности гены цитокинов. Их идентификация, выявление характера функциональных поломок на уровне локальных генных сетей, особенностей ген-генных взаимодействий при муль-тифакторной патологии являются важными задачами постгеномной информатики и персонализированной медицины.
Расширение спектра исследуемых генов может повысить информативность индивидуальных прогностических критериев предрасположенности к синдрому раздраженного кишечника.
ВЫВОДЫ
1. У больных с синдромом раздраженного кишечника выявлены воспалительные изменения слизистой оболочки толстого кишечника (х2 = 16,18, р = 0,00).
2. Установлены маркеры предрасположенности к СРК среди генов цитокинов в зависимости от гендерной принадлежности: доказаны роль +3953 БОТ в предрасположенности к СРК у женщин (С = 6,64, 4/ = 2, р = 0,036): у мужчин, больных СРК выявлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов ^-Ша и гомозиготного генотипа по аллелю -308 А/А ТОТ-а и носительство аллеля 4Я/4Я ^ = 3, 95%С11,09 - 8,27).
3. Сочетание ^-1Ь +3953 С/С — -863С/А ТОТ-а снижает вероятность развития СРК (6,25% У8 16,43 х2 = 4,29, р = 0,0384, ОЯ = 0,34, 95%С1 0,13 - 0,9), ведущее значение принадлежит гетерозиготному генотипу -863С/А ТОТ-а.
Б >■
о
So
1_ о OS
<s ое
и о НУ
№ о О -
¡Г5
и га
L Б
га
й <и J S I-0 <и с га а ш
I-
ЛИТЕРАТУРА
1. Клинические рекомендации. Гастроэнтерология / под ред.
В. Т. Ивашкина. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 182 с.
2. Соловьева, Г. А. Синдром раздраженного кишечника: от патогенеза и диагностики к лечению / Г. А. Соловьева // Внутр. мед. -2007. — № 2. [р/д http://www.mif-ua.com/archive/article/524].
3. Ortiz-Lucas, M. Irritable bowel syndrome immune hypothesis. Part two: the role of cytokines / M. Ortiz-Lucas, P. Saz-Peiro, J. J. SebastianDomingo // Rev. Esp. Enferm. Dig. — 2010. — Vol. 102. — P. 711 - 717.
4. Климушева, Т. А. Синдром раздраженного кишечника глазами психиатра / Т. А. Климушева // РЖГИ. — № 4. — 2008. — С. 82 - 86.
5. Сташкевич, Д. С. Вклад полиморфизма генов цитокинов IL-1RA, IL-1B, TNFA, IL-10 в вариабельность течения синдрома раздражен-
ного кишечника / Д. С. Сташкевич, Е. Л. Иванова, А. Л. Бурмистро-ва // Вестник ЧелГУ. Биология. — Челябинск, 2013. — № 7 (298). — С. 18 - 20.
6. Sokal R. R., Rolf F. J. Biometry: the principles and practice of statistics in biological research. — N. Y.: Freeman & Co, 1995. — 850 p.
7. Шептулин, А. А. Новое в изучении проблемы синдрома раздраженного кишечника / А. А. Шептулин, С. Ю. Кучумова // РЖГГИ — 2009. — № 4. — С. 81 - 85.
8. Бурмистрова, А. Л. Распределение аллелей и генотипов генов основных цитокинов у больных синдромом раздраженного кишечника / А. Л. Бурмистрова, Е. Л. Иванова, Д. С. Сташкевич, Т. А. Суслова // Аллергол. и иммунол. — 2009. — Т. 10, № 2. — С. 262.
m m
