CC BY
144
Медицинская иммунология 2001, Т. 3, № 3, стр 379-389
О 2001, СПб РО РААКИ
Обзоры
КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОГЕНЕТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ ЧЕЛОВЕКА
Смольникова М.В., Коненков В.И.
ГУ Институт клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск
Резюме. Приведены собственные и литературные данные о полиморфизме генов цитокинов и их рецепторов, механизмах регуляции экспрессии белковых продуктов генов цитокинов. Показано распределение аллельных вариантов генов цитокинов в различных популяциях, при трансплантации. Показаны ассоциации между вариантами генов цитокинов и предрасположенностью к инфекционным, аллергическим и аутоиммунным заболеваниям человека, восприимчивостью к заболеваниям, их тяжестью и течением. Представлены результаты сравнительного анализа распределения аллелей генов IL-4, IL-10 и TNF-a у здоровых лиц и ВИЧ-инфицированных пациентов.
Ключевые слова: цитокины, полиморфизм генов, ВИЧ-инфекция, ревматоидный артрит, бронхиальная астма.
Smolnikova М. V., Konenkov VI.
CLINICAL IMMUNOGENETICS OF HUMAN DISEASE
Abstract. The own and literary data on polymorphism of cytokines and their receptor genes, as well as regulatory mechanisms of the expression of protein products of these genes, have been presented. The distribution of allelic variants of the genes in various populations and in transplantation conditions has been shown. The associations between variants of the cytokine genes and predisposition to human infectious, allergic and autoimmune diseases, their course and severity have been shown. The results of the comparative analysis of allele distribution of genes IL-4, IL-10 and TNF-a in healthy and AIDS-affected persons have been presented. (Med.Immunol., 2001, vol.3, N3, pp 379-388)
Клинический исход многих заболеваний зависит от баланса продукции провоспалительных и противовоспалительных цитокинов [4,19,24,52]. Всё большее внимание в настоящее время посвящается изучению полиморфизма генов, влияющих на уровень экспрессии и, следовательно, на иммунный ответ [8,41,49].
Гены цитокинов и их рецепторов широко представлены на большинстве хромосом человека, они расположены на длинных и коротких плечах хромосом [14,16,33]. Результатом неконсервативных мутаций внутри кодирующих регионов генов могут являться потеря или изменение функций белковых молекул в связи с преобразованием их структуры. Молчащие мутации могут влиять на экспрессию белка, не затрагивая аминокислотной последовательности, например, могут изменять сплайсинг мРНК, стабильность мРНК и уровень транскрипции гена [4,11,13,14]. Полиморфизм внутри 5’- и З’-регулятор-ных последовательностей или интронов генов может
Адрес для переписки:
Смольникова Марина Викторовна,
Институт клинической иммунологии СО РАМН. 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцовская, 14,
ИКИ СО РАМН.
Тел.: (3832) 28-50-84, факс (383-2) 22-70-28.
E-mail: [email protected]
оказывать существенное влияние на транскрипцию путем изменения структуры сайтов связывания транскрипционных факторов внутри промоторов генов или структур энхансеров и сайленсеров внутри интронов [6,10].
Позитивная и негативная регуляция экспрессии и продукции цитокиновой мРНК, цитокинов и их рецепторов является характерным признаком большинства иммунных ответов в период заболевания [1,12]. С помощью изучения экспрессии генов in vitro делаются попытки определить генетическую основу межиндивидуальных различий в иммунном ответе путем определения взаимосвязи между индивидуальными полиморфными аллелями, или гаплотипа-ми генов цитокинов и экспрессией транскрипта in vitro. В настоящее время в исследованиях используют разнообразные методические подходы, в т. ч. измерение уровня мРНК цитокинов и их рецепторов; измерение уровня белкового продукта цитокинов или их рецепторов, экспрессируещегося в результате стимуляции клеток in vitro при культивировании с митогеном; изоляция индивидуальных аллелей промотора гена путем клонирования смежного описанному гену экспрессирующегося вектора, которая сопровождается последующей трансфекцией соответствующей клеточной линии и измерением экспрессии описанного белка [5,47,58].
Генетический анализ цитокинов при заболеваниях человека традиционно заключается в исследовании ассоциации случаев заболевания с тем или иным аллельным вариантом, при котором сравниваются частоты встречаемости аллелей в группах больных и здоровых доноров, а различия подвергаются статистическому анализу [11,25,37,57]. Ассоциация обычно выражается как относительный риск и показывает вероятность, с которой у индивидуума разовьется соответствующая патология, если он несет специфическую аллель, по сравнению с индивидом, у которого такая аллель или маркер отсутствуют. Подобные исследования имеют весьма скромные успехи в установлении причинно-следственных связей цитоки новых генов с заболеваниями, отчасти из-за трудности выбора возможных претендентов из большого числа генов-кандидатов и из-за слабого влияния любого отдельного гена на восприимчивость к заболеванию [4]. Трудность подбора хорошо рандомизированной группы контроля также создает дополнительное ограничение, увеличивая вероятность того, что потенциально положительная ассоциация будет биологически несущественной из-за смешивания популяций. Кроме того, даже когда группы больных и доноров хорошо согласованы, большинство исследований основывается на таком количестве наблюдений, которого бывает недостаточно для статистического подтверждения слабых или умеренных эффектов генов [15].
Другие подходы к выявлению ассоциаций между вариантами течения заболевания и полиморфизмом генов цитокинов или их рецепторов используют исследование разнообразия наследования изучаемых признаков в семьях. Они включают сканирование целого генома, используя анализ сцепления и метод идентичных по происхождению аллелей. Вместе с идентификацией специфичных хромосомаль-ных регионов, исследовании более точной локализации возникла нужда в развитии картирования неравновесного сцепления и тестирования неравновесной передачи с установлением наследственных гап-лотипов среди хромосом, ассоциированных с заболеваниями.
Одним из результатов взаимодействия ТЬ1-ТЬ2-клеток может быть преобладание одной или другой субпопуляции, что может непосредственно влиять на клиническое течение заболевания. Изолированное изучение полиморфизма того или иного цитокина или цитокинового рецептора, индивидуальные ассоциации с заболеваниями могут быть неинформативны, в то время как комбинации генотипов цитокинов часто служат предрасполагающими факторами восприимчивости к заболеванию или особенностей его клинического течения [7,35,51].
Расовые группы имеют разное распределение аллелей генов цитокинов [24]. Например, показаны статистически достоверные различия между монго-
лоидами и европеоидами в распределении частот аллелей 1Ь-10 в позициях -1082 и -597 [42]. Существуют различия в распределении аллелей микросателлит 1Ь-10 и других генов у американцев четырех этнических групп: европеоидов, негроидов, монголоидов и мексиканцев [41].
В популяции Западной Шотландии изучено распределение трех одиночных замен в промоторном регионе гена 1Ь-6, в т. ч. А-594С, 0-570С, С-172С [26]. У шотландцев получено подобное европеоидам распределение частот аллелей А-594С и С-172С, а С-570С- подобное монголоидам и негроидам. Аллель -594А строго сцеплена с аллелью - 172С, а -594С- с -172С, обе эти комбинации сцеплены с аллелью -570С (частота встречаемости которой в популяции шотландцев составляет 95,9%).
В некоторых работах вышеупомянутые полиморфизмы 1Ь-6 обозначены как -598, -573 и -174 относ-тительно стартового сайта транскрипции [46]. В популяции негроидов частота аллеля -174С, ассоциированного с низкой активностью промотора и более низким содержанием 1Ь-6 в плазме, составляет лишь 4% (что более сходится с данными по афрокарибцам-5%), тогда как у шотландцев - 44,5%. Частота аллеля -598С у негроидов составляет примерно 95%, тогда как у шотландцев всего около 50%.
Показаны значимые различия в распределении аллельных вариантов полиморфизма З’-нетрансли-руемого региона 1Ь-12р40 в позиции 1188 в популяциях европеоидов и негроидов [20]. Этот новый генетический маркер может быть полезен в антропологических исследованиях и должен изучаться в группах больных аутоиммунными, аллергическими и инфекционными заболеваниями.
Среди популяций России получены данные по распределению частот аллелей мутации в области З’-конца гена 1Ь-4 у русских, таджиков, тувинцев и бурят. Обращает на себя внимание тот факт, что исследованные выборки по частотам аллелей С717С можно разделить на две группы. Первая из них характеризуется преобладанием аллеля С (русские и таджики), вторая - аллеля А (буряты и тувинцы) [1].
Тем не менее, различия в распределении отдельных аллелей не всегда обнаруживаются среди популяций, например, нет достоверных различий трех наиболее частых точечных мутаций в промоторе гена 1Ь-10 у англичан и поляков, в отличие от распределения НЬА-генотипов у тех же индивидов [33,50]. Расовые различия в распределении генотипов могут иметь функциональное значение и в дальнейшем рассматриваться в патогенезе заболеваний [2,40,59].
Определен ряд полиморфизмов в регуляторных генах цитокинов, связанных с уровнем продукции цитокинов, играющих важную роль в трансплантационных процессах. Например, описан случай острого отторжения при трансплантации сердца реципиенту, у которого постоянно регистрировался вы-
сокий уровень циркулирующего 1Ь-4. Исследуя генотипы цитокинов, можно выделить так называемую “толерантную” группу пациентов, у которых вероятнее всего трансплантация будет успешной [24,52].
Среди цитокинов в остром клеточном отторжении трансплантантов сердца, печени и почки главная роль принадлежит аллельным вариантам ТЫР-а-308, аллель А которого сцеплена с острым отторжением, в отличие от аллелей микросателлитных маркеров ТЫБ-а [56].
Известно, что наиболее важную роль в разрушении трансплантированных клеток играет 1Ь-2, который необходим для активации цитотоксических клеток, и 1РЫ-у, индуцирующий экспрессию продуктов генов МНС и повышающий активность АПК, лимфоцитов и макрофагов. Тем не менее, для 1Ь-2,1Ь-4 и 1Р1ч1-у не обнаружено строгой ассоциации между маркерными полиморфизмами их генов и острым отторжением. Показана ассоциация с острым отторжением почечного трансплантанта комбинации одного из аллелей гена 1ПЧ-у (12 СА-повторов в нитроне 1) и 1Ь-10 (-1082С) [24]. При остром отторжении трансплантанта почки полезен анализ полиморфных динуклеотидных повторов (микросателлиты ПЛО.С и ПЛО.И) в прогнозе исхода трансплантации [32].
Генотип ТСР-|31 (замена аминокислот в кодонах 10 и 25) четко ассоциирован с фиброзом и смертью у реципиентов трансплантанта легкого. Описывают ассоциацию аллеля А^25 с наличием или отсутствием склеротических изменений легкого до трансплантации, а также с развитием склероза трансплантанта. Существует строгая ассоциация аллеля гена ТСР-(31 с развитием коронарной болезни при пересадке. При трансплантации печени у реципиента с таким генотипом повышается частота реакции хронического отторжения. Из других цитокинов упоминается участие в развитии фиброза и реакции хронического отторжения легкого при наследовании аллеля геиа 1РЫ-у, определяющего высокий уровень его продукции [24].
Как уже отмечалось, изучив достаточное количество каидидатных генов, можно выделить определенные генетические профили полиморфных генов цитокинов. Например, индивиды с вариантами генов, отвечающими за высокую продукцию №N-7, высокое содержание гШР-а и низкое - 1Ь-10 и ТСР-(31, имеют ассоциацию с воспалительными процессами. Такие генотипы имеют функциональную важность, т. к. дают возможность объяснить индивидуальную восприимчивость ко многим аутоиммунным, инфекционным заболеваниям.
Многочисленные исследования полиморфных генов цитокинов проведены у больных ревматоидным артритом (РА) [9,23,27]. Описано 100% сцепление между полиморфизмом гена 1Ь-1а в промоторе (С-889Т) и полиморфным участком в пятом эк-
зоне (+4845). В группе больных эрозивным артритом содержание редкого аллеля 1Ь-1а2 повышено по сравнению с контрольной группой, а в группе больных неэрозивным артритом - снижено. Все признаки прогрессирования заболевания и общая деструкция были значительно ниже у пациентов, несущих аллель 1Ь-1а1, и выше у пациентов с аллелью 1Р-1а2. Полиморфизм гена П.-1а играет важную роль в патогенезе хронического полиартрита, а аллель 1Ь-1а2 является фактором риска для развития деструктивного артрита, его можно использовать в роли прогностического маркера этого заболевания.
Полиморфизм гена 1Ь-1а (С-889Т) ассоциирован с ювенильным ревматоидным артритом (ЮРА) и с таким функциональным показателем, как повышенное СОЭ [39]. Показано повышенное распределение аллеля -889С в группе больных детей с ранним началом суставной формы ЮРА, в т. ч. с хроническим иридоциклитом. 1Ь-1а, или ген, для которого полиморфизм 1Ь-1а является маркером, может способствовать развитию ЮРА и глазных осложнений в этой группе.
Полиморфизмы генов 1Р-1(3 (С-511Т и замена в пятом экзоне), антагониста рецептора 1Ь-1 (количество тандемных повторов или УЫТИ во втором нитроне), 1Ь-4 (С-590Т и (2 или 3) 70 пн в третьем инт-роне) и 1Ь-10 (С-1082А) описывают как маркеры восприимчивости и тяжести течения РА [7]. Функциональное значение полиморфизма в третьем нитроне 1Ь-4 неизвестно, хотя количество ИР! аллеля (2 повтора 70 пн) у пациентов с РА статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой. Выдвигается гипотеза о возможном влиянии числа копий УЫТЯ па транскрипционную активность гена 1Ь-4, однако никаких доказательств этому пока нет. У больных РА существует определенное неравновесное сцепление между промоторным регионом гена 1Ь-4 и этим ИР1 аллелем. Можно также предположить, что аллели этих двух участков сотрудничают в построении транскрипционного фактора, но аллель -590Т ассоциирован с повышенной активностью 1Ь-4, что соотносится также с продукцией ^Е. Таким образом, замену -590С—>Т можно рассматривать как фактор увеличения продукции 1Ь-4 или активации Т-клеток, а сочетание аллелей ИР1 и -590Т - как важный генетический маркер РА.
Показано, что аллель С полиморфизма в 5’-флан-кирующем регионе гена 1Ь-6 (С-174С) у больных ювенильным хроническим артритом ассоциирован с пониженным уровнем 1Ь-6 в плазме, а генотип С/ С достоверно ниже в группе больных и может играть протективную роль против развития этого заболевания [18].
Микросателлит аб ТЫБ-а ассоциирован с РА - у больных с тяжелой формой заболевания частота этого аллеля выше [19]. Среди таких полиморфизмов гена ТЫР-а как -308, -238, -376, -163 и +70, указывают на ас-
социацию генотипа С-238А со сниженной прогрессией РА и отсутствием эрозий у больных [35]. В некоторой степени неравновесное сцепление между -238С и -308А аллелями дает право говорить, что данные по -238 полиморфизму подтверждают результаты, показывающие ассоциацию С-308А генотипа с большим числом эрозий при РА [30]. Генотип -238С/С указывает на предрасположенность к более тяжелому течению РА.
При системной красной волчанке доминирует продукция ТЬ2 цитокинов: продукция 1Ь-2,1Ь-12 и 1РЫ-у снижена, тогда как 1Ь-6 и 1Ь-10 повышена [55]. Присутствие Ие50 и А^551 аллельных вариантов гена рецептора 1Ь-4 достоверно ассоциировано с СКВ [7]. О полиморфизме гена 1Ь4И говорят как о важном критерии для развития СКВ, увеличивающем функцию рецептора, возможно, через индукцию роста ТЬ2 субпопуляции [28].
Среди описанных аллелей из З’-фланкирующе-го региона 1Ь-6 с большим количеством АТ-повто-ров с СКВ показана ассоциация аллеля 782 Ьр у европеоидов и негроидов, 808 Ьр и 820 Ьр у европеоидов, тогда как ассоциации полиморфизма С-174С с этим заболеванием ни у одной из этих рас нет [36].
У больных системной красной волчанкой уровень 1Ь-10 в циркуляции обычно выше, чем у здоровых доноров. Гаплотип —10820, -819С, -592С, ассоциированный с высоким содержанием 1Ь-10, может быть важен в развитии некоторых особенностей течения СКВ [35]. При изучении распределения полиморфизмов 1Ь-10 в популяции Южного Китая показана ассоциация аллелей -597А и -824Т и гаплотипа -1087А/-824Т/-597А с волчаночным нефритом [42]. Выдвигается гипотеза о том, что при повышенной продукции 1Ь-10 возникает избыточная выработка аутоантител, которые в виде свободно циркулирующих иммунных комплексов оседают в почках.
В группе больных рассеянным склерозом (РС) исследовали полиморфные участки генов 11.-13 (+3953 в пятом экзоне) и 1Ь-ША (УКТИ) [54]. Показана ассоциация комбинации 1Ь-ША аллель 2* / 1Ь-1[3 аллель 2 с тяжестью и прогрессированием заболевания, но не с восприимчивостью к РС. Эта ассоциация подтверждена при обследовании семей с больным ребенком и здоровыми родителями - указывается лишь сцепление описанных выше аллелей.
Аллель А5 (ассоциированная с низкопродуктивным фенотипом 1Ь-6) из микросателлитного полиморфного З’-фланкирующего региона 1Ь-6 ассоциирована с легким течением РС, тогда как наличие А6 или А9 аллелей ведет к ускорению начала заболевания у здорового человека [57]. При наличии аллеля А5 затягивается начало болезни Альцгеймера и уменьшается риск заболевания, что также описано и для СКВ. Хотя этиологии РС, СКВ и болезни Альцгеймера различны, их объединяет то, что дисрегу-ляция цитокинового ответа может ухудшать течение заболевания.
Параллельно хорошо описанным полиморфным участкам в положениях --238 и -308 TNF показано распределение G-376A у больных рассеянным склерозом и его ассоциация с восприимчивостью к РС. Т. к. описываемый полиморфизм лежит внутри регуляторного региона гена TNF, можно обозначить его как фактор восприимчивости к РС, также его можно использовать как генетический маркер для других полиморфизмов, расположенных недалеко от участка этого гена [17].
Описан полиморфизм ряда кандидатных генов цитокинов (IL-la, IL-13 и IL-1RA, которые кодируются соответственно как ILIA, IL1B и IL1RN), расположенных в кластере гена IL-1 на длинном плече 2 хромосомы, которые могут быть вовлечены в патогенез диабетической нефропатии (ДН). Аллель IL1RN ассоциирован с ДН. Описана ассоциация IL-1В*2 с восприимчивостью с ДН в популяции ирландцев [37].
Немало исследовательских работ соединяют в себе два подхода изучения полиморфных генов и их влияние на патологические процессы. Так, например, измеряя LPS-стимулированную продукцию TNF параллельно с определением генотипа этого цитоки-на, показано, что у индивидов с гетерозиготным вариантом А/G в позиции -308 продукция моноцитами выше, чем при G/G гомозиготном варианте [51]. Хотя различия недостаточны для того, чтобы определить их как биологически важные. Для варианта А/А описывают ассоциацию с инсулин-зависимым диабетом (ИЗД).
Значительные отличия от контроля в распределении полиморфного числа динуклеотидных СА-повторов в первом интроне INF-у наблюдались в группе больных инсулин-зависимым диабетом японской популяции [3]. Аллели 3 и 6 чаще встречаются у больных пациентов, при этом генотип 3/6 более информативен, чем отдельно взятые аллели. Так, у больных с ранним началом заболевания в анамнезе частота этого генотипа значительно выше, чем у других групп больных. Т.о. регион гена INF-y является важным маркером развития ИЗД и участвует в патогенезе этого заболевания.
Вполне закономерно, что гены цитокинов - особенно привлекательные кандидаты для рассмотрения их ассоциаций с астматическим и аллергическим воспалением. Известно, что IL-4, активируя IL-4R, участвует в индуцировании продукции IgE В-клетками. Резюмируя многие исследования, посвященные обнаружению генов предрасположенности к атопии и астме, выявлено несколько кандидатных генов внутри участка хромосомы 5q31-33, включающего промотор IL-4 [38].
Комплексно изучалось влияние полиморфизма кандидатных генов IL-4, IL-9 и TGF-(3 на развитие атопии и астмы [53]. Показано, что замены в -590 С-»Т IL-4, -345 A—>G IL-9 и TGF-(3 -509 С^Т пред-
ставляют собой связанные с атопией промоторпые полиморфизмы. Причем если увеличенная продукция IL-4 (в присутствии -590Т аллеля) и IL-9 (в присутствии -345G аллеля) является предрасполагающим фактором к развитию заболевания, то TGF-P (в присутствии -509С аллеля) является про-тективным фактором и регулирует продукцию про-воспалительных и иммунорегуляторных цитокинов в воздухоносных путях здоровых людей.
Описано характерное повышение содержания аллеля -590Т IL-4 в японской популяции. Наследование этого аллеля ведет к повышенной предрасположенности к атопическому дерматиту и астме [29,45].
В связи с важностью в астматических процессах IL-13, наряду с IL-4, первые исследования полиморфизмов его гена были проведены в группе больных аллергической астмой. Показана точечная замена в промоторном участке гена IL-13 в позиции С-1055Т [34,48]. Найдена ассоциация генотипа Т/Т (частота у больных 13%, у здоровых- 2%, р=0,002) с астмой и увеличенной продукцией этого цитокина. Таким образом, наличие данного генотипа предрасполагает к развитию аллергической астмы.
У больных астмой также полиморфизм С-571 А IL-10, три варианта гена TGF-(31 и один TGF-(32 ассоциированы с повышенным уровнем IgE [21].
При исследовании вариабельного числа тандемных повторов в IL-1RA показано, что частота встречаемости аллеля А2 выше у пациентов, страдающих от тяжелого сепсиса. Надо отметить, что эта аллель ассоциирована с высокой продукцией IL-1RA. Функциональные аспекты регулирования транскрипции с помощью ядерных факторов построения внутри нитронов до конца неясны. Аллель IL-1[3A2, которая ранее описана как связанная с повышенным уровнем IL-ip, не расценивается как генетический маркер плохого прогноза при тяжелом сепсисе. Напротив, аллель IL-1RA может способствовать восприимчивости к сепсису, а, совпадая с гомозиготным вариантом TNFB2, указывает на больных с высоким риском тяжелого системного воспаления [16].
То, что в процессе элиминации инфицированных гепатоцитов во время острого вирусного гепатита В важно участие TNF-a и IFN-y, а также, что точечные замены G—> А в позициях -308 и -238 промотора гена TNF-a влияют на экспрессию его белка, привело к исследованию данных полиморфизмов у больных гепатитом В. Показано повышенное содержание варианта -238А у пациентов с хронической формой гепатита В по сравнению с острой инфекцией и контролем, т.о. этот аллель является предрасполагающим к развитию хронического ВГВ [22].
Аллельные варианты гена TNF-a как потенциальные кандидаты развития и прогрессирования ВИЧ-инфекции, переходе ее в стадию СПИД пристально изучаются еще и потому, что доказаны ассоциации
некоторых гаплатипов HLA с исходом ВИЧ. TNF-a играет важную роль в развитии ВИЧ-инфекции посредством усиления вирусной репликации, этот процесс происходит через активацию NF-kB. Генетические различия в экспрессии гена TNF-a могут влиять на вирусную нагрузку in vivo и, следовательно, на способность ускорять прогрессию заболевания [6]. При детальном изучении группы ВИЧ-инфицированных: медленно- (отсутствие стадии СПИД более 8 лет после документированной серокоиверсии) и быстропрогрессирующих (клинические признаки СПИДа развились за 8 лет) подгрупп не показаны различия в распределении аллельных вариантов между ними. Хотя и акцентируется внимание на том, что единственная гомозигота по -308А аллели (высокая продукция цитокина) обнаружена в быстропрогрессирующей группе, эти данные можно оспорить, т. к. выборки не соотносимы по численности -в этой группе обследовано 29 индивидов, а в другой-115 [30,31].
При изучении распределения полиморфных а, Ь, end микросателлит TNF-a показано, что частота встречаемости аллеля с2 достоверно выше у медленнопрогрессирующих (содержание CD4 > 400 х 106/1 > 6 лет) пациентов (61%), чем у быстропро-грсссирующих(СВ4<200х10(’/1 за нятилетний срок) (15%), в контрольной группе этот аллель встречается с частотой 45%. Таким образом, на данный период времени описана единственная строгая ассоциация полиморфизма гена цитокина (с2 аллель TNF-а) со скоростью прогрессии ВИЧ [30].
В японской популяции аллель Т в участке С-590Т промотора гена IL-4 ассоциирована с повышенным содержанием IL-4 и, соответственно, с повышенным уровнем IgE, а также ведет к переключению фенотипа ВИЧ-1 с несинцитийобразующего на синцитий-образующий, что способствует прогрессированию ВИЧ [43].
Для IL-16 недавно описан полиморфизм в промоторном участке гена в позиции Т-295С. Обследованы ВИЧ-инфицированные пациенты в двух азиатских популяциях- японской и тайской. И хотя об IL-16 говорят как о супрессоре репликации ВИЧ, не наблюдалось различий в частоте аллелей этого цитокина между здоровыми донорами и инфицированными индивидами в обеих популяциях [44].
Нами получены данные, показывающие изменение соотношения распределения аллельных вариантов трех изучаемых цитокинов: IL-4 (С-590Т), IL-10 (С-597А) и TNF-a (G-308A) между ВИЧ-инфици-рованными пациентами и здоровыми донорами. У ВИЧ-инфицированных пациентов отмечается ряд отклонений в частоте сочетаний аллельных вариантов генов цитокинов, связанных с появлением Т/Т гомозиготного варианта гена IL-4 (RR=4,61), А/А гомозиготного варианта гена IL-10 (RR=2,36), не обнаруженных среди здоровых лиц, и отсутствии
гомозиготного А/А варианта гена ТИБ-а (1111=-12,25), выявленного среди здоровых лиц. Среди ВИЧ-инфицированных лиц почти в четыре раза чаще выявлен АД} вариант гена ТЫБ-а (1111=4,67), повышение которого обусловлено снижением частоты обоих гомозиготных вариантов (табл. 1).
Выявлены межполовые различия в характере распределения генотипов цитокинов среди здоровых доноров. Если среди женщин наблюдается почти двукратное преобладание С/С генотипа 1Ь-4 (Ш1=3,45; р=0,0435), то среди мужчин наблюдается инверсия в распределении этого признака с преобладанием гетерозиготного варианта (11К=-2,25). Для гена 11.-10 показано четырехкратное преобладание варианта С/С у мужчин (1^11=16,0; р=0,0109), тогда как у женщин различие выражено не так резко (1111=3,45; р=0,0435). У мужчин показано отсутствие А/С варианта генотипа ТЫР-а, встречающегося в группе женщин. Существенные межполовые отличия в распределении генотипов также определены между исследованными нами группами. Так, характерное для здоровых мужчин преобладание гетерозиготного С/Т варианта гена 1Е-4 (индекс стимуляции 1,5) меняется на преобладание С/С (ИС=0,76) варианта у ВИЧ-инфицированных, а характерное для здоровых мужчин преобладание С/С варианта
гена И.-10 (ИС=4,0) и СД} (ИС=100,0) варианта гена ТОТ-а существенно снижено среди ВИЧ-инфи-цированных мужчин (ИС=2,1 для гена П.-10 и ИС=2,69 для гена ТЫР-а). Среди здоровых и ВИЧ-инфицированных женщин сохраняется стабильный уровень соотношения вариантов генов всех трех цитокинов, за исключением редких гомозиготных вариантов (табл. 2).
Соотношение аллельных вариантов генов оказывает влияние на темп прогрессирования ВИЧ, характеризующееся скоростью перехода заболевания от стадии к стадии своего развития. Для благоприятного замедленного варианта течения заболевания характерны более выраженные различия в соотношении генотипов 1Ь-4,1Е-10 и ТЫР-а, тогда как для группы пациентов с быстропрогрессирующим течением характерно более равномерное изменение соотношения аллельных вариантов этих цитокинов (табл. 3). Индивидуальными прогностическими критериями быстрого варианта развития СПИД являются наличие у инфицированного человека генотипов С/Т или Т/Т для гена 1Е-4 (1111=1,24 и 1111=1,63 соответственно), генотипов С/С и А/А для гена 1Ь-10 (Ш1=1,94 и Ш1=1,58 соответственно) и генотипа А/С для гена ТЫР-а (Ш1=2,92). Суммарный прогностический коэффициент неблагоприят-
Табл.1. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕНОТИПОВ ЦИТОКИНОВ СРЕДИ ЗДОРОВЫХ И ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ НАСЕЛЕНИЯ РОССИИ
Генотип ІІ.-4 ІИ0 ТИР-а
С/С сд ТД с/с А/С А/А Є/Є АДЗ А/А
Здоровые (п=30) 56,7 43,3 0* 70,0 30,0* 0* 90,0 6,7* 3,3*
ВИЧ-инфицированные (п=120) 54,2 39,2 6,6 65,7 СО о со -X- 3,3* 75,8+ 24,2*+ 0*
Примечание: Здесь и далее * - р < 0,05 по сравнению с генотипом С/С 01.-4, 11.-10) или с генотипом й/й (ТЫЯ-а), + - р J 0.05 по сравнению с контролем.
Табл.2. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕНОТИПОВ ЦИТОКИНОВ СРЕДИ ЗДОРОВЫХ И ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ НАСЕЛЕНИЯ РОССИИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПОЛА
Генотип ІІ.-4 II--10 Т^-а
С/С сд тд С/С А/С А/А Є/6 АДЗ А/А
Здоровые (п=30)
Мужчины ((1=10) 40,0 60,0 0* 80,0 20,0* 0* 100,0* 0* * 0*
Женщины (п=20) 65,0 35,0* 0* 65,0 35,0* 0* 85,0 10,0* 5,0*
ВИЧ-инфицированные (п=120)
Мужчины (п=85) 52,9 40,0* 7,1* 67,1 31,7* 1,2* 72,9 + 27,1* + 0*
Женщины (п=35) 60,0 34,3* 5,7* 62,9 28,5* 8,6* 80,0 20,0* 0*
Примечание: *- р < 0,05 по сравнению с ВИЧ-инфицированными мужчинами.
Табл.З. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕНОТИПОВ ЦИТОКИНОВ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СКОРОСТИ ПРОГРЕССИИ ЗАБОЛЕВАНИЯ
IL-4 IL-10 TNF-a
Генотип C/C с/г т/г C/C А/С A/A G/G A/G A/A
Медленная (n=42) 57,1 35,7* 7,2* 59,5 38,1 2,4* 81,0 19,0* 0*
Быстрая (n=27) 48,2 40,7* 11,1* 74,1 22,2* 3,7* 59,3 + 40,7 + 0*
Табл. 4. СПОНТАННАЯ И СТИМУЛИРОВАННАЯ ПРОДУКЦИЯ IL-4 В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГЕНОТИПА (пкг/мл)
Генотип С/С с/т тд
Здоровые (n=20)
Спонтанная 559,536 ± 186,372 396,856 ± 185,987 _
Стимулированная 723,964 + 218,512 944,789 ± 198,891 -
P 0,596 0,038 -
ИРИ 1,736 ± 1,106 0,696 ± 0,352 -
ВИЧ-инфицированные (n=19)
Спонтанная 1036,199 ± 218,197 613,368 ± 129,523 1988,7
Стимулированная 1775,098 + 230,595 1439,266 ± 221,717 877,8
Р 0,041 0,012 -
ИРИ 2,096 ± 0,632 3,965 + 1,332
ного быстропрогрессирующего варианта ВИЧ-ин-фекции по анализу трех полиморфизмов генов ци-токинов для индивида может составить 8,6, что соответствует 68% вероятности реализации прогноза.
При рассмотрении ассоциаций определенного генотипа 1Ь-4 с его продукцией мононуклеарными клетками показано, что здоровые индивиды с генотипом С/С отличаются от лиц с генотипом С/Т более высокой спонтанной продукцией 1Ь-4 при меньшей способности активировать его продукцию в ответ на стимуляцию СопА. Мононуклеарные клетки с и гомо- и с гетерозиготным генотипом 1Ь-4 ВИЧ-инфицированных пациентов отличаются более высокой спонтанной продукцией 1Ь-4 при сохраняющейся тенденции к более высокому уровню продукции клетками с генотипом С/С. Сохраняется и более высокая степень увеличения продукции интерлейкина для клеток с генотипом С/Т (индекс стимуляции 2,34; р=0,012) по сравнению с клетками пациентов с генотипом С/С (индекс стимуляции 1,71; р=0,041) (табл. 4).
Расширение перечня анализируемых полиморфизмов генов цитокинов может существенно увеличить информативность индивидуальных прогностических критериев, что позволит прогнозировать предрасположенность человека к развитию заболеваний, характеру их течения, а значит, своевременно и эффективно проводить профилактику заболеваний и их лечение. Перспективно также сочетать новые данные по иммуногенетике цитокинов с имеющимися данными по иммуногенетике гистосовме-
стимости ввиду важности роли продуктов этих генов в иммунопатологии. В перспективе возможна и генотерапия, направленная на усиление функции аллелей генов с низкой продуктивностью и подавление транскрипции высокоактивных вариантов.
Список литературы
1. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б. Роль генов интерлейкинов и их рецепторов в формировании предрасположенности к атопической бронхиальной астме // Бюлл. Эксп. Биол. Мед.- 1999.-Т.127.-Прил.1,-
С.3-6.
2. Abraham L.J., Kroeger К.М. Impact of the -308 TNF promoter polymorphism on the transcriptional regylation of the TNF gene: relevance to disease. //J Leukocyte Biology.-1999.-Vol.66.-P.562-566.
3. Awata Т., Matsumoto C., Urakami T„ Hagura R., Amemiya S., Kanazawa Y. Association of polymorphism in the interferon gamma gene with IDDM. // Diabetologia.-1994.-Vol.37.-P.l 159-1162.
4. Bidwell J., Keen L., Gallageher G„ Kimberly R., Huizinga Т., McDermott M.F., OksenbergJ., McNicholl J., Pociot F., Hardt C., D’Alfonso S. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases // Genes and Immunity. -1999.-Vol.l.-P. 3-19.
5. Borish L., Mascali J.J., Klinnert M„ Leppert М., Rosenwasser L.J. SSC polymorphisms in interleukin genes // Hum Mol Genet.-1994.-Vol.3.-P.1710
6. Brinkman B.M.N., Huizinga T.W.T., Kurban S.S., van der Velde E.A., Schreuder G.M., Hazes J.M.,
Breedveld F.C., Verweij C.L. Tumor necrosis factor-alpha gene polymorphism in RA: association with susceptibility to, or severity of, disease? // British J of Rheumatology -1997.-Vol.36.-P.516-521.
7. Cantagrel A., Navaux F., Loubet-Lessonlie P., Nourhashemi F., Enault G., Abbal M., Constantin A., Laroche M., Mazieres B. IL-lbeta, IL-1 receptor antagonist, IL-4, and IL-10 gene polymorphisms // Arthritis and Rheumatism.-1999.-Vol.42.-P.1093-1100.
8. Cork M.J., Crane A.M., Duff G.W. Cytokine gene polymorphisms in alopecia areata. // Dermatologic clinics.- 1996. -Vol. 14.-P. 333.
9. Crawley E., Isenberg D., Woo P. Interleukin-10 promoter polymorphism and lupus nephritis: comment on the article by Mok et al. // Arthritis and Rheumatism.-1999.-Vol. 42.-P.591.
10. D’Alfonso S., Rampy M., Rolando V., Giordano M., Momigliano-Richiardi P. New polymorphism in the IL-10 promoter region. // Genes and Immunity.-2000.-Vol.l.-P. 231-233.
11. Eskdale J., Gallagher G. A polymorphic dinucleotide repeat in the human IL-10 promoter // Immunogenetics.-1995.-Vol.42.-P. 444-445.
12. Eskdale J., Keijsers V., Huizinga T., Gallagher G. Microsatellite alleles and single nucleotide polymorphisms (SNP) combine to form four major haplotype families at the human interleukin-10 (IL-10) locus//Genes and Immunity.-1999.-Vol.l.-P. 151-155.
13. Eskdale J., Kube D., Gallagher G. A second polymorphic dinucleotide repeat in the 5” flanking region of the human IL-10 gene // Immunogenetics.-1996.-Vol.45.-P.82-83.
14. Eskdale J., Kube D., Tesch H., Gallagher G. Mapping of the human IL10 gene and characterization of the 5’ flanking sequence // Immunogenetics.-1997.-Vol.46.-P.120-128.
15. Eskdale J., McNicholl J., Wordsworth P., Jonas B., Huizinga T., Field M., Gallagher G. IL-10 microsatellite polymorphisms and IL-10 locus alleles in RA susceptibility // The Lancet.-1998.-Vol.352,-P.1282-1283.
16. Fang X.M., Schroder S., Hoeft A., Stuber
F.Comparison of two polymorphisms of the IL-1 gene family: IL-1 receptor antagonist polymorphism contributes to susceptibility to severe sepsis / /Critical Care Medicine. -1999.- Vol.27.-P.1330-1334.
17. Fernandez-Arquero M., Anoyo R., Rubio A., Martin C., Vigil P., Conejero L., Figueredo M.A., de la Concha E.G. Primary association of a TNF gene polymorphism with susceptibility to MS // Neurology.-
1999,- Vol.53.-P. 333.
18. Fishman D., Faulds G. Jeffery R., Mohamed-Ali V., Yudkin J.S., Humphries S., Woo P. The effect of novel polymorphisms in the IL-6 gene on IL-6 transcription and plasma IL-6 levels, and an association with Systemic- Onset Juvenile Chronic Arthritis // J Clin Invest.-1998,-Vol 102.-P. 1369-1376.
19. Hajeer A.H., Worthington J., Silman A.J., Oilier W.E. Association of TNF microsatellite polymorphisms with HLA-DRB1*04- bearing haplotypes in RA patients //Arthritisand Rheumatism. -1996.- Vol.39.-P.1077-ll 14.
20. Hall M.A., McGlinn E., Coakley G., Fisher S.A., Boki K., Middleton D., Kaklamani E., Moutsopoulos H., LoughranT.P.Jr., Oilier W.E., Panayi G.S., Lanchbury J.S. Genetic polymorphism of IL-12 p40 gene in immune-mediated disease // Genes and Immunity.-
2000. Vol. 1.-P.219-224.
21. Hobbs K. Interleukin-10 and transforming growth factor-beta promoter polymorphisms in allergies and asthma // Am J Respir Crit Care Med. - 1998,-Vol. 158.-P. 1958-1962.
22. Hohler T., Kruger A., Gerken G., Schneider P.M., Meyer zum Buschenefelde K.H., Rittner C. A tumor necrosis factor- alpha promoter polymorphism is associated with chronic hepatitis B infection // Clin Exp Immunol.-1998.-Vol. 111.-P.579-582.
23. Huang D., Cancilla M.R., Morahan G. Complete primary structure, chromosomal localisation, and definition of polymorphisms of the gene encoding the human interleukin-12 p40 subunit // Genes and Immunity.-2000-Vol.l.-P. 515-520.
24. Hutchinson I.V., Pravica V., Hajeer A., Sinnott P.J. Identification of high and low responders to allografts / / Rev Immunogenetics. - 1999.-Voll.-P.323-333.
25. John S., Turner D., Donn R., Sinnot P., Worthington J., Oilier W„ Hutchinson I., Hajeer A. Two novel biallelic polymorphisms in the IL-2 gene // Eur J Immunigenetics. 1998.-Vol.25.-P.419-420.
26. Jordanides N., Eskdale J., Stuart R„ Gallagher
G. Allele associations reveal four prominent haplotypes atthe human interleukin-6 (IL-6) locus // Genes and Immunity.-2000-Vol.l.- P.451-455.
27. Jouvenne P., Chaudhary A., Buchs N., Giovine F.S., Duff G.W., Miossec P. Possible genetic association between IL-1 a gene polymorphism and the severity of chronic polyarthritis // Eur Cytokine Netw.-1999.-Vol.l0.-P.33-36.
28. Kanemitsu S., Takabayashi A., Sasak; Y., Kuromaru R., Ihara K., Kaku Y., Sakai K., Hara T. Association of IL-4 receptor and IL-4 promoter gene polymorphisms with SLE // Arthritis and Rheumatism. -1999,- Vol.42.-P. 1298-1300.
29. Kawashima T., Noguchi E., Arinami T., Yamakawa-Kobayashi K., Nakagawa H., Otsuka F., Hamaguchi H. Linkage and association of an IL-4 gene polymorphism with atopic dermatitis in Japanese families //J Med Genet.-1998.-Vol.35.-P. 502-504.
30. Khoo S.H., Pepper L., Snowden N., Hajeer A.H., Vallely P., Wilkins E.G., Mandal B.K., Oilier W.E. TNF c2 microsatellite allele is associated with the rate of HIV disease progression//AIDS.-1997.-Vol. 11.-P.423-428.
31. Knuchel M.C., Spira T.J., Neumann A.U., Xiao L., Rudolph D.L., Phair J., Wolinsky S.M., Koup R.A.,
Cohen O.J., Folks T.M., Lai R.B. Analysis of a biallelic polymorphism in the TNF-alpha promoter and HIV type
1 disease progression. // AIDS Res Hum Retroviruses.-
1998.-Vol. 14.-P.305-309.
32. Kobayashi T., Yokoyama I., Hayashi S. Genetic polymorphism in the IL-10 promoter region in renal transplantation // Transplant Proc.- 1999,- Vol.31,-P.755-756.
33. Koss K, Satsangi J., Fanning G.C., Welsh K.I., Jewell
D.P. Cytokine (TNF-a, LT-a and IL-10) polymoq^hisms in inflammatoiy bowel diseases and normal controls: differential effects on production and allele frequencies // Genes and immunity.- 2000.-Vol.l.-P. 185-190.
34. Kraan P., van Veen A., Boeije LCM., et al. An IL-13 promoter polymorphism associated with increased risk of allergic asthma // Genes and Immunity.-1999,-Vol.l.-P.61-65.
35. Lazarus M., Hajeer A.H., Turner D., Sinnott P., Worthington J., Oilier W.E., HutchinsonI.V. Genetic variation in the interleukin 10 gene promoter and systemic lupus erythematosus //J Rheumatol.-1997,-Vol.24.-P.2314-2317.
36. Linker-Israeli M., Wallace D.J., Prehn J., Prehn J., Michael D., Honda M„ Taylor K.D., Paul-Labrador M., Fischel-Ghodsian N., Fraser P.A., Klinenberg J.R. Association of IL-6 gene alleles with systemic lupus erythematosus (SLE) and with elevated IL-6 expression // Genes and Immunity.-1999.-Vol.l.-P.45-52.
37. Loughrey B.V., Maxwell A.P., Fogarty D.G., Middleton D„ Harron J.C., Patterson C.C., Darke C., Savage D.A. An IL-1B allele, which correlates with a high secretor phenotype, is associated with diabetic nephropathy // Cytokine. -1998.-Vol.l0.-P.984-988.
38. Marsh D.J., Neely J.D., Breazeale D.R., Ghosh B., Freidhoff L.R., Ehrlich-Kautzky E., Schou C., Krishnaswamy G., Beaty T.H. Linkage analysis of IL4 and other chromosome 5q31.1 markers and total serum immunoglobulin E concentrations // Sciense.-1994.-Vol.264.-P. 1152-1156.
39. McDowell T.L., Symons J. A., Ploski R., Forre O., Duff G.W. A genetic association between juvenile rheumatoid arthritis and novel IL-1 alpha polymorphism // Arthritis and Rheumatism.-1995.- Vol.38.-P. 333.
40. McGuire W„ Hill A.V.S., Allsopp C.E.M., Greenwood B.M., Kwiatkowski D. Variation in the TNF-a promoter region associated with susceptibility to cerebral malaria // Nature.-1994,-Vol.371 .P.508-511.
41. Mehrain R., Quismorio F.P., Strassmann G. Synergistic effect between IL-10 and bcl-2 genotypes in determining susceptibility to SLE // Arthritis and Rheumatism.-1998.-Vol.41.-P.596-562.
42. Mok C.C., Lanchbury J.S., Chan D.W., Lau C.S. IL-10 promoter polymorphism in Southern Chinese patients with SLE // Arthritis and Rheumatism. -1998.-Vol.41.-P.1090-1095.
43. Nakayama E.E., Hoshino Y., Xin X., Liu H., Goto M., Watanabe N., Taguchi H., Hitani A., Kawana-
Tachikawa A., Fukushima M., Yamada K., Sugiura W., Oka S.I., Ajisawa A., Sato H., Takebe Y., Nakamura T., Nagai Y., Iwamoto A., Shioda T. Polymorphism in the interleukin-4 promoter affects acquisition of human immunodeficiency virus type 1 syncytium-inducing phenotype //J Virol.-2000,-Vol.74.-P.5452-5459.
44. Nakayama E.E., Wasi C., Ajisawa A., Iwamoto A., Shioda T. A new polymorphism in the promoter region of the human interleukin-16 (IL-16) gene // Genes and Immunity.-2000.-Vol. 1.-P.293-294.
45. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T., Takeda K., Yokouchi Y., Kawashima T., Yanagi H„ Matsui A., Hamaguchi H. Association asthma and IL-4 promoter polymorphism of Japanes // Clin Exp Allergy.-1998.-Vol.28.-P.449-453.
46. Osiri M., McNicholl J., Moreland L.W., Bridges
S.L. Jr. A novel single nucleotide polymorphism and five probable haplotypes in the 5'- flanking region of the IL-6 gene in African-Americans // Genes and Immunity.-
1999.-Vol. 1.-P. 166-167.
47. Ota N., Nakajima T., Takeuchi T., Shirai Y., Emi M. A highly polymorphic CA repeat marker at the interleukin-11 locus // Genes and Immunity.-1999.-Vol.l.-P.159-160.
48. Pantelidis P., Jones M.G., Welsh K.I., Taylor A.N., du Bois R.M.Identification of four novel interleukin-13 gene polymorphisms // Genes and Immunity.-2000.Vol.l.-P.341-345.
49. Perrier S., Coussediere C., Dubost J.J., Albuisson
E., Sauvezie B. IL-1 receptor antagonist gene polymorphism in Sjogren’s syndrome and rheumatoid arthritis // Clin Immunopathology.- 1998. -Vol.87.-P.309-313.
50. Pociot F., Veijola R., Johannesen J., Hansen P.M., Lorenzen T., Karlsen A.E., Reijonen H., Knip M., NerupJ. Analysis of an interferon-gamma gene (IFNG) polymorphism in Danish and Finnish insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) patients and control subjects. Danish Study Group of Diabetes in Childhood // J Interferon Cytokine Res.-1997.-Vol.l7.-P.87-93.
51. Pociot F., Wilson A.G., NerupJ., Duff G.W. No independent association between a TNF-a promoter region polymorphism and insulin-dependent diabetes mellitus// EurJ Immunol.-1993.-Vol.23.-P.3043-3049.
52. Pravica V., Asderakis A., Perrey C., Hajeer A., Sinnott P.J., Hutchinson I. V. In vitro production of IFN-y correlates with C A repeat polymorphism in the human IFN-ygene // EurJ of Immunogenetics. -1999-Vol.26.-P.l-3.
53. Rosenwasser L.J. Promoter polymorphism in the candidate genes, IL-4, IL-9, TGF-betal, for atopy and asthma // Int Arch Allergy Immunol.-1999.- Vol.118.-P. 268-270.
54. Schrijver H.M., Crusius J.B.A., Uitdehaag B.M.J., Garcia Gonzalez M.A., Kostense P.J., Polman C.H., Pena A.S. Association of IL-1 beta and IL-1 receptor
antagonist genes with disease severity in MS // Neurology. -1999,- Vol.52.-P. 333.
55. Tagore A., Gonsalkorale W.M., Pravica V., Hajeer A.H., McMahon R., Whorwell P.J., Sinnott P.J., Hutchinson I.V. Interleukin-10 (IL-10) genotypes in inflammatory bowel disease //Tissue Antigens-1999.-Vol.54.-P.386-390.
56. Turner D.M., Williams D.M., Sankaran D., Lazarus M., Sinnott P.J., Hutchinson I.V. An investigation of polymorphism in the IL-10 gene promoter // Eur J Immunogenet. - 1997,- Vol.24,-P.l-8.
57. Vandenbroeck K., Fiten P., Ronsse I., Goris A., Porru I., Melis C., Rolesu M., Billiau A., Marrosu M.G.,
Opdenakker G. High-resolution analysis of IL-6 minisatellite polymorphism in Sardinian multiple sclerosis: effect on course and onset of disease // Genes and Immunity. - 2000. - Vol.l. - P. 460-463.
58. Wilson A.G., di Giovine F.S., Blakemore A.I., Duff G.V. Single base polymorphism in the human tumour necrosis factor alpha (TNF alpha) gene detectable by Ncol restriction of PCR product // Hum Mol Genet. - 1992. - Vol.l. - P.353.
59. Yoshida A., Ishii A., Leafasia J.L., Zhou D., Chen Y., Tang L., Lie C., Qiu D., Ohmae H., Ohta N. Polymorphism of the TNFA gene in Melanesian and East- Asian populations // Immunogenetics. - 1998. -Vol.47. - P.497-498.
поступила в редакцию 15.05.2001 принята к печати 21.06.2001
